专利名称：组合物和使用collajolie的方法
发明
背景技术：
领域本发明通常涉及药物组合物和方法，更具体地，涉及增加移植的胶原蛋白材料活性的持续时间的组合物和方法。
背景技术：
胶原蛋白是哺乳动物中最丰富的蛋白质之一，代表多达30％的人体干重(参见L.C.Junqueira和J.Carneiro，Basic Histology，第4版，LangeMedical Publications，Los Altos，Calif.，1983，第89-119页)。胶原蛋白为皮肤，毛发和指甲提供强度和柔性，并且还是肌肉，腱，软骨，韧带，关节和血管的主要和基本成分。
胶原蛋白可以在由几种不同细胞类型生产的至少五种不同天然存在形式中发现。I型胶原蛋白是最丰富形式的胶原蛋白，并可以在整个身体中发现。它由成纤维细胞，成骨细胞，成牙本质细胞，和成软骨细胞生产，并且可以在骨，牙本质，真皮，和纤维软骨中发现。II型胶原蛋白是由成软骨细胞生产，并且主要可以在软骨中发现。III型胶原蛋白是由平滑肌成纤维细胞，网状细胞，神经膜细胞，和肝细胞生产。它的主要功能是保持器官结构，并且可以在平滑肌，神经内膜，动脉，子宫，肝，脾，肾，和肺组织中发现。
IV型胶原蛋白主要被认为涉及支持和过滤，并可以在上皮和内皮基层和基底膜中发现。V型胶原蛋白在胎膜，血管，和胎盘基底膜中发现。
已经提议将胶原蛋白用于各种医疗应用的治疗中，包括例如整容外科，关节炎，皮肤再生，移植，器官置换，和对创伤和烧伤的治疗(参见例如美国专利6,309,670，5,925,736，5,856,446，5,843,445，5,800,811，5,783,188，5,720,955，5,383,930，5,106,949，5,104,660，5,081,106，4,837,379，4,604,346，4,485,097，4,546,500，4,539,716，和4,409,332)。
然而胶原蛋白已经呈现几个与医疗应用相关的问题。例如，在移植中，含有杂质的胶原蛋白制剂是有效的免疫原，其可以激发炎症发应。类似地，非人类形式的胶原蛋白如牛胶原蛋白已经与可以导致疤痕组织和粘连形成，和瞬时的低度发热的慢性细胞炎症反应相关。另外，可移植的胶原蛋白的持续时间是有限的，要求在规则基础上重复操作。
本发明公开新的组合物，装置和方法，其用于延长基于胶原蛋白的植入物的活性，并另外提供其它相关优势。
发明概述简而言之，本发明提供用于延长基于胶原蛋白的植入物活性的组合物和方法。在各种医疗方法中将基于胶原蛋白的生物材料用于提供结构和支持，所述医疗方法包括用于美容目的的皮肤注射(皱纹，疤痕，外形缺陷)，用于处理失禁的尿道周膨胀剂，和在血管穿刺操作后产生止血的血管“塞”。尽管极其有效，胶原蛋白植入物具有短持续时间的体内活性，因为材料被由白细胞和邻近植入物的结缔组织细胞(成纤维细胞)释放的降解酶(主要是胶原蛋白酶和其它基质金属蛋白酶)快速分解。结果是必须在频繁的时间间隔重复胶原蛋白植入操作以保持功能活性。
已经开发各种天然存在和合成产生的分子用于抑制胶原蛋白酶活性的其它目的(例如治疗恶性肿瘤，关节炎和其它疾病)(共同称为“基质金属蛋白酶抑制剂”或“胶原蛋白酶抑制剂”)。本发明描述结合胶原蛋白和抑制胶原蛋白酶活性的化合物的组合物，以生产具有增强的体内耐久性的、基于胶原蛋白的植入物(“Collajolie”)。特别优选的化合物或因子抑制MMP-1，MMP-8，MMP-13，和/或NEAP-14活性。适于本发明使用的MMPI的代表性实例包括TIMP-1，四环素，强力霉素，二甲胺四环素，巴马司他，马立马司他，RO-1130830，CGS 27023A，BMS-275291，CMT-3，索利司他，伊洛马司他，CP-544439，普啉司他，PNU-1427690，SU-5402和托卡特。
这里，在本发明的一个方面提供包含胶原蛋白和MMPI的组合物。在某些实施方案中MMPI是基质金属蛋白酶的组织抑制剂(例如TIMP-1，TIMP-2，TIMP-3，或TIMP-4)。在其它实施方案中，MMPI是四环素，或其类似物或衍生物(例如二甲胺四环素或强力霉素)；异羟肟酸酯(例如巴马司他，马立马司他，或托卡特)；或RO-1130830，CGS 27023A，CMT-3，索利司他，伊洛马司他，CP-544439，普啉司他，PNU-1427690，SU-5402，或BMS-275291。在其它实施方案中胶原蛋白是I型或II型胶原蛋白。在还有其它实施方案中此处提供的组合物可以包含其它化合物或组合物，包括例如凝血酶和/或染料。在另外的实施方案中，组合物可以以适于人类施用的方式灭菌。
在本发明的某些方面，提供制备这里描述的组合物的方法，其包含混合胶原蛋白和这里描述的一种或多种MMPI的步骤。在有关实施方案中，这些方法可以另外包含掺和染料或凝血酶的步骤。在另外的实施方案中，组合物可以被灭菌。
在本发明的其它方面，上述组合物可以用于治疗和/或预防各种医学疾病。例如，在本发明的一个方面提供用于修复和/或增大皮肤或组织的方法，其包括将上述组合物注射到皮肤或组织中。在各种实施方案中，该组合物可以注射到唇中以便矫正或增强唇，或注射到皮肤中(例如脸中以便矫正疤痕或消除皱纹)。
在本发明的其它方面，提供用于治疗或预防尿失禁的方法，其包含向患者施用上述组合物。在某些实施方案中，组合物可以在尿道周或经尿道施用。
在本发明的还有的其它方面，提供用于密封外科手术位点的方法，其包含向患者施用上述组合物的步骤。这种外科手术位点的代表性实例包括血管进入位点(例如可以将密封剂用作血管密封剂)。
在另一方面，本发明提供制备collajolie的方法，其包含掺和胶原蛋白和至少一种MMPI。在特定的实施方案中，制备含有至少两种MMPI的collajolie。在某些实施方案中，胶原蛋白是I型或II型胶原蛋白。在其它实施方案中，MMPI是基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)，如TIMP-1，TIMP-2，TIMP-3或TIMP-4。在还有的其它实施方案中，MMPI是四环素，或其类似物或衍生物，如二甲胺四环素或强力霉素。在还有的另一实施方案中，MMPI是异羟肟酸酯如巴马司他，马立马司他，或托卡特。在其它实施方案中，MMPI是RO-1130830，CGS-27023A或BMS-275291。在另外的实施方案中，MMPI是多肽抑制剂，如金属蛋白酶成熟酶的抑制剂。在另外的实施方案中，MMPI是基于巯基的化合物。在其它实施方案中，MMPI是具有结构(I)的二膦酸酯 其中R’和R”独立地是氢，卤素如氯，羟基，任选取代的氨基，任选取代的硫代基，或任选取代的烷基，链烷基(alkanyl)，链烯基，炔基，烷二基(alkyldiyl)，alkyleno，杂烷基，杂链烷基，杂链烯基，杂炔基(heteroalkanyl)，杂烷二基，heteroalkyleno，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基。在其它实施方案中，在与胶原蛋白掺和前，所述MMPI首先与至少一种聚合物掺和。在有关实施方案中，聚合物是生物可降解的，如白蛋白，明胶，淀粉，纤维素，葡聚糖，多糖，血纤蛋白原，聚(酯)，聚(D，L丙交酯(lactide))，聚(D，L-丙交酯(lactide)-共-乙交酯)，聚(乙交酯)，聚(e-己内酯)，聚(羟基丁酸酯)，聚(烷基碳酸酯)，聚(酐)，或聚(原酸酯)，及其共聚物和混合物。在另一实施方案中，上述制备collajolie的任何方法另外包含将所述混合物灭菌的步骤。
经参考下列详细描述和附图
后本发明的这些和其它方面将变得明显。另外，在此列举各种参考文献，其更详细地描述某些方法或组合物(例如化合物，蛋白质，载体，和它们的生产等)，并因此全部在本文引用作为参考。当参考PCT申请时还应理解基本的或引用的美国申请也全部在本文引用作为参考。
发明详述在阐明本发明之前，阐明某些下文将使用的某些术语的定义可能有助于理解本发明。
“胶原蛋白”在本文中是指这里描述或引用的所有形式的胶原蛋白，包括已经加工或修饰的那些。代表性的实例包括I型和II型胶原蛋白。胶原蛋白可以从人或动物来源制备，或者可以使用重组技术生产。
“基质金属蛋白酶抑制剂”或“MMPI”是指抑制基质金属蛋白酶活性的化合物，试剂或组合物。MMP抑制剂(“MMPI”)的代表性实例包括金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMPs)(例如TIMP-1，TIMP-2，TIMP-3，或TIMP-4)，α2-巨球蛋白，四环素类(例如，四环素，二甲胺四环素和强力霉素)，异羟肟酸酯(例如巴马司他，马立马司他和托卡特)，螯合剂(例如EDTA，半胱氨酸，乙酰半胱氨酸，D-青霉胺，和金盐)，合成的MMP片段，琥珀酰巯嘌呤，膦酸酰胺化物(phosphonamidate)，和异羟肟酸。
除非另外指出，在此列举的任何浓度或百分比范围应当理解为包括范围内的任何整数及其分数，如整数的的十分之一和百分之一的浓度。在本文中“约”或“基本上包含”意指平均值±15％。
I.胶原蛋白胶原蛋白是皮肤，软骨，骨，和结缔组织的主要成分，并且以几种不同类型或形式存在，I，II，III和IV型最常见。胶原蛋白典型地从天然来源，如牛骨，软骨或生皮中分离。通常将骨脱脂，压碎，干燥和脱矿质以提取胶原蛋白。与此形成对比，通常将牛软骨或生皮剁碎和用除了胶原蛋白酶以外的酶消化(以便去除污染蛋白质)。还可以从人体组织(患者自己的或供体组织)中或通过重组方法制备胶原蛋白。
在本发明的某些实施方案中，优选胶原蛋白是作为无免疫活性的无菌组合物制备的。它们可以是可溶的(例如，可商购的Vitrogen100胶原蛋白溶液)，或为重组的原纤维atelopeptide胶原蛋白，例如Zydem胶原蛋白植入物(ZCI)。
公开含有胶原蛋白的组合物，装置，和/或传递该组合物和装置的专利的代表性实例包括美国专利4,164,559，4,424,208，4,140,537，4,563,350，4,582,640，4,642,117，4,743,229，4,776,890，4,795,467，4,888,366，5,035,715，5,162,430，5,304,595，5,324,775，5,328,955，5,413,791，5,428,022，5,446,091，5,475,052，5,523,348，5,527,856，5,543,441，5,550,187，5,565,519，5,580,923，5,614,587，5,616,689，5,643,464，5,693,341，5,744,545，5,752,974，5,756,678，5,786,421，5,800,541，5,807,581，5,,823,671，5,874,500，5,895,833，5,936,035，5,962,648，6,090,996，6,096,039，6,111,165，6,165,489，6,166,130，6,280,727，6,312,725，和6,323,278。
II.基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂金属蛋白酶(MMP)是一组天然存在的依赖于锌的酶，其与胞外基质大分子的分解和更新有关。迄今已经鉴定超过23种金属蛋白酶，并且已经概括地分类成胶原蛋白酶，溶基质素，明胶酶，弹性蛋白酶和基质溶素(matrilysin)的酶家族。金属蛋白酶来源于多种细胞类型，包括嗜中性白细胞，单核细胞，巨噬细胞和成纤维细胞。
MMP是涉及胶原蛋白体内分解和正常更新的主要的酶。尽管许多MMP能够分解包括胶原蛋白的几种结缔组织成分，对胶原蛋白具有最高特异性的酶来自胶原蛋白酶家族(例如MMP-1，MMP-8，MMP-13和MMP-14)。金属蛋白酶活性在体内天然地受称为“金属蛋白酶组织抑制剂”或“TIMP”的抑制剂家族所抑制，该抑制剂与金属蛋白酶的活性区域结合而使它无活性。酶活性和抑制之间的自然平衡调节生理条件下胞外基质的代谢速率。
测量MMP抑制的测定在本领域中容易已知，并且包括例如下列各项Cawston T.E.，Barrett A.J.，“A rapid and reproducible assay for collagenaseusing[14C]acetylated collagen，”Anal.Biochem.351961-1965(1963)；Cawston T.E.，Murphy G，“Mammalian collagenases，”Methods in Enzymology80711(1981)；Koshy P.T.J.，Rowan A.D.，Life P.F.，Cawston T.E.，“96-well plate assays for measuring collagenase activity using(3)H-acetylated collagen，”Anal.Biochem.99340-345(1979)；Stack M.S.，Gray R.D.，“Comparison of vertebrate collagenase and gelatinase using a newfluorogenic substrate peptide，”J.Biol.Chem.2644277-4281(1989)；和Knight C.G.，Willenbrock F.，Murphy G.，“A novel coumarin-labelled peptidefor sensitive continuous assays of the matrix metalloproteinases，”FEBS Lett296263-266(1992)。在本发明上下文中，MMPI优选具有mM至nM(10-3至10-9)的抑制浓度(IC)。
当将胶原蛋白作为治疗方法的一部分植入时，它也逐渐被来自MMP家族的酶所代谢直至它被完全再吸收。由于胶原蛋白植入物的酶促降解导致的这种结构完整性的逐渐丧失导致功能活性的丧失，其导致植入失败和最终需要随后再干预。在延长胶原蛋白植入物活性的努力已经集中在交联胶原蛋白植入物以便减缓酶促降解。本发明描述将能够抑制MMP活性的一种试剂或多种试剂结合到胶原蛋白植入物中，以便倾斜生理平衡有利于胶原蛋白保存。本发明与诸如设计来增加胶原蛋白植入物保留时间的胶原蛋白交联策略相容，并可以结合使用。
因为MMP的病理性生产已经与多种在临床上重要的疾病过程如肿瘤转移和慢性炎症疾病如骨关节炎和类风湿性关节炎的进展相关，已经开发许多天然存在和合成的试剂来抑制MMP活性。不令人惊讶地，MMP活性的调节是体内重要的和高度调节的过程。结果在导致MMP生产的途径中存在许多位点可以开发能够抑制MMP合成或活性的分子。以下更详细地描述能够抑制MMP活性的试剂类型。
简短地，多种细胞因子(例如TNF-α，IL-1，FGF和其它)能够刺激导致MMP生产的途径。这些细胞因子的抑制剂，其抑制它们的细胞受体，已经证明在某些情形下抑制MMP合成，并将适用于本发明。在与它的细胞受体结合后，对MMP生产的刺激引发生产多种第二信使和细胞信号分子例如jun激酶，JKK等)-这些分子的抑制也可以减少MMP的生产。MMP基因的转录中涉及多种转录因子(例如c-fos，c-jun，NFκ-B，c-myc)，这些转录因子的抑制剂和它们的产物(例如AP-1蛋白质)也能够减少转录的MMP的量并可以用于本发明的目的。类似地，抑制MMP基因本身(例如基因敲除)或MMP RNA(例如反义，核酶，四环素，强力霉素，二甲胺四环素)可以用于本发明以减少胶原蛋白植入物周围区域中的活性MMP酶的量。
另外，在它们已经从细胞分泌以后可以抑制金属蛋白酶的功能和活性。因为MMP从细胞中作为无活性的前体蛋白(称为前-MMP)分泌，其随后通过高度特异性的酶促裂解(由酶如纤溶酶，肥大细胞蛋白酶，组织蛋白酶G，血浆激肽释放酶和其它催化)转变成活性酶，可以抑制MMP从它的无活性至活性状态的转变(由此维持它在无活性形式中)。还可以将负责MMP从它的无活性至活性状态的转变的酶的抑制剂用于本发明。最后，可以通过几种机制如螯合它的锌金属活性中心直接抑制活化的MMP的功能(例如EDTA，半胱氨酸，乙酰半胱氨酸，D-青霉胺，和金盐；异羟肟酸酯如巴马司他，马立马司他，托卡特，放线酰胺素，Matylystatins；膦酸抑制剂；膦酸酯；膦酸酰胺化物；硫醇类和硫二亚胺(sulfodiimine)，其与催化锌形成单齿配位体；与催化锌配合形成二齿配位体的羧酸酯；琥珀酰巯基酮和巯基醇)。这些化合物在抑制MMP活性方面非常有效，并将特别用于本发明目的。一种重要类别的MMPI通过与MMP结合，导致无活性复合体的形成来发挥它们的作用。这些化合物，称为金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)如TIMP-1，TIMP-2，TIMP-3，和TIMP-4能够抑制几乎所有MMP的活性。尽管任何一种TIMP都适于本发明目的，特别优选TIMP-1(较小程度上TIMP-2)，因为它具有抑制胶原蛋白酶的最高特异性。还应注意任何增加TIMP生产的化合物将倾斜平衡有利于胶原蛋白保存并且可以用于本发明。还有其它抑制剂通过抑制MMP与它的底物结合起作用(如合成的MMP片段，合成的胶原蛋白片段)，并且还可以单独或与其它MMPI结合用于本发明目的)。本领域技术人员应当清楚不管抑制的具体抑制机理，任何能够抑制MMP酶的生产、活化或酶功能的物质将是用于本发明目的的理想物质。
MMPI的代表性实例包括放线酰胺素(3-[[1-[[2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]氨基甲酰基]-辛酰-异羟肟酸]；溴代环腺苷一磷酸；N-氯牛磺酸；巴马司他，也称为BB-94；CT1166，也称为N1{N-[2-(吗啉代磺酰基氨基)-乙基]-3-环己基-2-(S)-丙酰胺基}-N4-羟基-2-(R)-[3-(4-甲基苯基)丙基]-琥珀酰胺(Biochem.J.308167-175(1995))；雌氮芥(雌二醇-3-二(2-氯乙基)氨基甲酸酯)；二十碳五烯酸；马立马司他(BB-2516)；matlystatin-B；肽酰异羟肟酸如pNH2-Bz-Gly-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH(Biophys.Biochem.Res.Comm.1991442-1446(1994))；N-膦酰烷基二肽如N-[N-((R)-1-膦酰丙基)-(S)-亮氨酰基]-(S)-苯丙氨酸-N-甲酰胺(J Med Chem.37158-169(1994))；原儿茶醛(3，4-二羟基苯甲醛)；Ro-31-7467，也称为2-[(5-溴-2，3-二氢-6-羟基-1，3-二氧代-1H苯基[de]异喹啉2-基)甲基](羟基)-[氧膦基]-N-(2-氧代-3-氮杂环十三烷基)-4-甲基戊酰胺；四环素如(4-(二甲基氨基)-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-3，6，10，12，12a-五羟基-6-甲基-1，11-二氧代-2-并四苯氨甲酰)，强力霉素(α-6-脱氧-5-羟基-四环素)二甲胺四环素(7-二甲氨基-6-二甲基-6-脱氧四环素)，和甲烯土霉素(6-亚甲基氧基四环素)；三氟乙酸盐(J.Med Chem.364030-4039(1993))；和基于1，10-菲咯啉(o-菲咯啉[4-(N-羟基氨基)-2R-异丁基-3S-(硫戊-2-基硫甲基)-琥珀酰]-L-苯丙氨酸-N-甲酰胺羧基烷基氨基的化合物，如N-[1-(R)-羧基-3-(1，3-二氢-2H-苯并[f]异氮杂茚-2-基)丙基]-N’，N”-二甲基-L-亮酰胺。
其它代表性的MMPI包括例如螯合剂(EDTA，半胱氨酸，乙酰半胱氨酸，D-青霉胺，和金盐)，二(二氧代哌嗪)(参见美国专利5,866,570，Liang等)，neovastat(抑制MMP-9，和MMP-12的明胶分解和弹性蛋白分解活性，参见美国专利6,168,807 Aeterna Laboratorie)；KB-R7785(AkzoNobel)；伊洛马司他(Glycomed/Ligand；美国专利5,892,112)；RPR-122818(Aventis)solimastat(British Biotech，WO 99/25693)，BB-1101，BB-2983，BB-3644(British Biotech)；BMS-275291(参见Rizvi等，Proceedings of the1999 AACR NCI EORTC International Conference“#726“A Phase I，safetyand pharmacokinetic trial of BMS-275291，a matrix metalooproteinaseinhibitor(MMPI)，in patients with advanced or metastatic cancer”)，D-1927，D-5410，CH-5902，CH-138(Celltech)；CMT-3，dermostat(CollaGenex-美国专利5,837,696)；DAC-MMPI(ConjuChem)；RS-1130830和RS-113-080(Hoffmann-La Roche)；GM-1339(Ligand)；GI-155704A(GlaxoSmith Kline)；ONO-4817(ONO)；AG-3433，AG-3088，prinomastat(Agouron；美国专利5,753,653)，CP-544439(Pfizer；美国专利6,156,798)；POL-641(Polifarma)；SC-964，SD-25 90，PNU-142769(Pharmacia；WO 97/32846)，SU-5402(Pharmacia；WO 98/50356)；PGE-2946979，pGE-4304887(Procter & Gamble)；纤维酶(fibrolase)-偶联体(Schering-AG)；EF-13(Scotia-Pharrnaceuticals)；S-3304(Shionogi)；CGS-25015和CGS-27023A(Novartis)，XR-168(Xenova)，和RO 1130830(Fisher等，219 American Chemical Society National Meeting，San Francisco，CA，3月26-30日，2000年，“ORGN 830“Synthesis of RO1130830，a Matrix Metalloproteinase InhibitorEvolution of a ResearchScheme to Pilot-Plant Production”)。其它的MMPI在美国专利4,235,885；4,263,293；4,276,284；4,297,275；4,367,233；4,371,465；4,371,466；4,374,765；4,382,081；4,558,034；4,704,383；4,950,755；5,270,447，6,294,694，和6,329,550中描述。
以下更详细讨论的MMPI各类代表性的实例包括(1)基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)；(2)四环素，(3)异羟肟酸酯，(4)合成的MMP片段(例如肽抑制剂)，(5)基于巯基的化合物，和(6)二膦酸酯。
1.基质金属蛋白酶的组织抑制剂基于它们抑制金属蛋白酶的能力，彼此间的结构相似性，形成二级结构中重要二硫键的12个半胱氨酸，和与金属蛋白酶的金属离子相互作用的VIRAF基序的存在，将基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)分类。已经描述TIMP的核酸和氨基酸序列TIMP-1(Docherty AJP等(1985)Nature 31866-69)，TIMP-2(Boone TC等(1990)Proc Natl Acad Sci 872800-2804；Stetler-Stevenson W G等(1990)J Biol Chem 26513933-38)，和TIMP-3(Wilde C G等(1994)DNA Cell Biol 13711-18；Apte等，“The GeneStructure of Tissue Inhibitor of Metalloproteinases”(TIMP)-3 and Its InhibitoryActivities Define the Distinct TIMP Gene Family)；(还参见，Boone T.C.，等，“cDNA cloning and expression of a metalloproteinase inhibitor related totissue inhibitor of metalloproteinases，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA，872800-2804(1990年4月)，Freudenstein，mRNA of bovine tissue inhibitor ofmetalloproteinaseSequence and expression in bovine ovarian tissue，BiochemBiophys.Res.Comm.，171250-256(1990)，美国专利5,643,752和6,300,310)。
TIMP-1是30kD的蛋白质，并且是最常见表达的TIMP分子。它含有作为糖结合位点的两个天冬酰胺残基，一个在环1中，一个在环2中(Murphy和Docherty，上述)。另外，仅含有分子的前三个环的截短形式的TIMP-1能够抑制MMP。尽管TIMP-1是比TIMP-2更好的间质胶原蛋白酶抑制剂(Howard E W等(1991)J Biol Chem 26613070-75)，23kDTIMP-2分子是最有效的明胶酶A和B的抑制剂。TIMP-3是抑制胶原蛋白酶1，溶基质素，和明胶酶A和B的21kD蛋白质(Apte S.S.等(1995)J BiolChem 27014313-18)并且可以用有丝分裂剂诱导(Wick等(1994).J BiolChem 26918953-60)。
如上所述，四种TIMP分子中任何一种能够抑制几乎所有迄今鉴定的MMP的活性，并适合于本发明的目的。然而，TIMP-1，其具有对胶原蛋白酶的最高特异性，将被特别优选结合到胶原蛋白植入物中。
2.四环素类四环素是一类最初因为它们作为抗生素的应用已知的类似物和衍生的化合物。许多四环素类，包括四环素，强力霉素，二甲胺四环素和其它已经被证明抑制MMP的生产和活性。尽管确切机制还不完全理解，MMP抑制可以通过下调MMP的表达和/或翻译后通过螯合锌金属活性位点发生。考虑到它们的广泛应用和低毒性，这些化合物将特别有效用于结合到胶原蛋白植入物中。
四环素家族的母体化合物具有下列通用结构 多环核可以编号如下 四环素，以及5-OH(氧四环素)和7-Cl(氯四环素)衍生物存在于自然中并且是众所周知的抗生素。其它四环素类包括例如阿匹四环素，四环林，羟甲金霉素，去甲金霉素，强力霉素，乙胺双四环素，胍哌甲基四环素，赖甲四环素，甲葡四环素，mepycyhcline，二甲胺四环素，甲烯土霉素，青四环素，piacycline，吡甲四环素，和去甲去氧四环素。
还可以修饰四环素类以使它们保持它们与抗生素四环素的结构关系，但通过化学修饰使它们的抗生素活性基本上或完全减小。化学修饰的四环素(CMT)的代表性实例包括例如，CMT-1(4-去(二甲氨基)-四环素)，CMT-2(四环素腈)，CMT-3(6-去甲基-6-去氧-4-去(二甲氨基)四环素)，CMT-4(7-氯-4-去(二甲氨基)四环素)，CMT-5(四环素吡唑)，CMT-6(4-羟基-4-去(二甲氨基)四环素)，CMT-7(4-去(二甲氨基)-12α-去氧四环素)，CMT-8(6-去氧-5α-羟基-4-去(二甲氨基)四环素)，CMT-9(4-去(二甲氨基)-12a-去氧基脱水-四环素)，和CMT-10(4-去(二甲氨基)二甲胺四环素)。
四环素类(包括四环素衍生物)的代表性实例在以下各项中描述美国专利3,622,627，Blackwood等；3,846,486，Marcus；3,862,225，Conover等；3,895,033，Murakami等；3,901,942，Bernard等；3,914,299，Muxfeldt；3,925,432，Gillchriest；3,927,094，Villax；3,932,490，Fernandez；3,951,962，Murakami等；3,983,173，Hartung等；3,991,111，Murakami等；3,993,694，Martin等；4,060,605，Cotti；4,066,694，Blackwood等；4,081,528，Armstrong；4,086,332，Armstrong；4,126,680，Armstrong；4,853,375，Krupin等；4,918,208，Hasegawa等；和5,538,954，Koch等。(通常参见，Mitscher，L.A.，The Chemistry of Tetracycline Antibiotics，ch.6，Marcell Dekker，New York，1978)。
四环素衍生物的另外实例在以下各项中描述美国专利4,666,897，Golub等，4,704,383，McNamara等，4,904,647，Kulcsar等，4,935,412，McNamara等，5,223,248，McNamara等，5,248,797，Sum等，5,281,628，Hlavka等，5,326,759，Hlavka等，5,258,371，Golub等，5,308,839，Golub等，5,321,017，Golub等，5,326,759，5,401,863，Hlavka等，5,459,135，Golub等，5,530,117，Hlvaka等，5,563,130，Backer等，5,567,693，Backer等，5,574,026，Backer等，5,698,542，Zheng等，5,773,430，Simon等，5,834,450，Su，5,843,925，Backer等，5,856,315，Backer等，6,028,207，Zheng等，6,143,161，Heggie等和6,165,999，Vu，以及PCT出版物WO 99/33455，WO99/37306，WO 99/37307，WO 00/18353和WO 00/28983。
3.异羟肟酸酯另一类抑制MMP的化合物是异羟肟酸酯(或异羟肟酸)。尽管MMP抑制的确切机制不明确已知，认为这些化合物主要通过与酶中的锌金属活性位点相互作用发挥它们的作用(例如通过以二齿的方式与催化锌配位而采取三角双锥体几何构型)。已经合成多种异羟肟酸酯并在数种疾病状态下试验，具有混合临床结果。然而，考虑到它们对MMP的选择性活性和它们极好的安全性和耐受性，这些试剂将特别优选用于结合到胶原蛋白植入物中以增强植入物的耐久性。
异羟肟酸酯(或异羟肟酸)具有下面表示通用结构 其中A是HN(OH)-CO-或HCO-N(OH)-；R1是C2-C5烷基；R2是天然α氨基酸的特征基团，其可以被保护，条件是R2不是H或甲基；R3是H，NH2，OH，SH，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基氨基，C1-C6烷硫基，芳基(C1-C6烷基)，或氨基(C1-C6烷基)，羟基(C1-C6烷基)，巯基(C1-C6烷基)或羧基(C1-C6烷基)，其中氨基，羟基，巯基或羧基可以被保护，可以将氨基酰化或将羧基酰胺化；R4是H或甲基；R5是H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基(C1-C6烷基)，二(C1-C6烷氧基)亚甲基，羧基，(C1-C6烷基)羰基，(C1-C6烷氧基)羰基，芳基甲氧基羰基，(C1-C6烷基)氨基羰基或芳基氨基羰基；并且R6是H或甲基；或者R2和R4一起形成基团(CH2)n，其中n是4-11的整数；或R4和R5一起形成环丙烷，和这些异羟肟酸酯化合物的药用盐，其为酸性或碱性。在这点上，参见例如EP-A-0236872。
其中R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基，苄基，羟基苄基，苄氧基苄基，(C1-C6烷氧基)苄基或苄氧基(C1-C6烷基)；A是(CHR3-CHR4)或(CR3＝CR4)基团；R3是氢，C1-C6烷基，苯基或苯基(C1-C6烷基)；并且R4是H或C1-C6烷基，苯基(C1-C6烷基)，环烷基或环烷基(C1-C6烷基)。在这点上，参见例如EP-A-0214639。
其中R1是氢或羟基，R2是氢或烷基，R3是C3-C6烷基，R4是氢，烷基，-CH2Z，其中Z是任选取代的苯基或杂芳基，或者R4是基团C(HOR8)R9，其中R8是氢，CH2Ph的烷基，其中Ph是任选取代的苯基，并且R9是氢或烷基；并且R5是氢或烷基。在这点上，参见例如EP-A-320118。
其中R1是氢，烷基或任选取代的芳基，R2是氢或芳基如CO烷基或COZ，其中Z是任选取代的芳基；R3是C3-6烷基，R4是氢，烷基，-CH2R10，其中R1是任选取代的苯基或杂芳基，或者R4是基团C(HOR11)R12，其中R11是氢，烷基或CH2Ph，其中Ph是任选取代的苯基，并且R12是氢或烷基；并且R5是氢，烷基或基团C(HR13)COR14，其中R13是氢，或烷基，并且R14是羟基，烷氧基，或-NR6R7，其中R6或R7中的每一个是氢或烷基，或者R6和R7和它们结合的氮原子一起形成5-，6或7元环，环中含有任选的氧或硫原子或者另外任选的氮原子，其任选地被烷基取代。在这点上，参见例如EP-A-0322184。
其中R1和R2独立地为H，烷基，烷氧基，卤素或CF3，R3是H，酰基，如CO烷基或COZ，其中Z为任选取代的芳基，或基团RS，其中R是有机残基这样RS提供一个体内可裂解的二硫键；R4是C3-C6烷基，R5是H，烷基，-CH2R10，其中R10是任选取代的苯基或杂芳基，或基团C(HOR11)R12，其中R11是氢，烷基或CH2Ph，其中Ph是任选取代的苯基，并且R12是氢或烷基；R6是氢，烷基或C(HR13)COR14，其中R13是氢，或烷基，并且R14是羟基，烷氧基，或-NR7R8，其中R7或R8中的每一个是氢或烷基，或者R7和R8和它们结合的氮原子一起形成5-，6或7元环，环中含有任选的氧，硫或任选取代的氮原子；X是(CH2)n，其中n为0，1，或2；并且Y是CH2。在这点上，参见例如EP-A-358305。
其中，R是氢，C1-C6烷基或任选取代的苄基，R1是氢或C1-C6烷基，R2是C3-C6烷基，R3是氢，烷基，-CH2Z，其中Z是任选取代的苯基或杂芳基，或者R3是基团C(HOR7)R8，其中R7是氢，烷基或CH2Ph，其中Ph是任选取代的苯基，并且R8是氢或烷基；R4是-CH2-(CH2)nOR5，-CH2-(CH2)nOCOR6或-CH(R9)COR10，其中n是1-6的整数；R5，R6和R9是氢或C1-C6烷基；并且R1是羟基或O(C1-C6烷基)或NR5R6，其中R5和R6可以连接形成杂环；或者R3和R4连接一起成为(CH2)m，其中m是4-12的整数。在这点上，参见例如EP-A-0401963。
其中R1是H，C1-C6烷基，苯基，噻吩基，取代的苯基，苯基(C1-C6)烷基，杂环基，(C1-C6)烷基羰基，苯甲酰甲基或取代的苯甲酰甲基；或者，当n为0时，R1表示SRx，其中Rx表示下式基团 R2是H，C1-C6烷基，C1-C6链烯基，苯基(C1-C6)烷基，环烷基(C1-C6)烷基或环烯基(C1-C6)烷基；R3是氨基酸侧链或C1-C6烷基，苄基，(C1-C6烷氧基)苄基，苄氧基(C1-C6烷基)或苄氧基苄基；R4是H或C1-C6烷基；R5是H或甲基；n是0，1或2；并且A表示C1-C6烃链，其任选地被一个或多个C1-C6烷基，苯基或取代的苯基取代；和它们的盐和N-氧化物。在这点上，参见例如PCT国际出版物WO90/05719。
其中R1是H，C1-C6烷基，C2-C6链烯基，苯基，苯基(C1-C6)烷基，C1-C6烷硫基甲基，苯硫基甲基，取代的苯硫基甲基，苯基(C1-C6)烷硫基甲基，或杂环硫基甲基或者R1表示-SRx，其中Rx表示下列基团 R2表示氢原子，或C1-C6烷基，C1-C6链烯基，苯基(C1-C6)烷基，环烷基(C1-C6)烷基，或环烯基(C1-C6)烷基；R3表示氨基酸侧链或C1-C6烷基，苄基，(C1-C6)烷氧基苄基，苄氧基(C1-C6)烷基，或苄氧基苄基；R4表示氢原子，或甲基；n是1-6的整数；并且A表示基团-NH2，取代的无环胺或杂环碱；或其盐和/或N-氧化物和/或(当化合物是硫代化合物时)亚砜或砜。在这点上，参见例如PCT国际出版物WO09/05716。
其中R1是H，C1-C6烷基，C1-C6链烯基，苯基，苯基(C1-C6)烷基，C1-C6烷硫基甲基，苯硫基甲基，取代的苯硫基甲基，苯基(C1-C6)烷硫基甲基或杂环硫基甲基；或者R1表示-S-Rx，其中Rx表示下列基团 R2表示氢原子，或C1-C6烷基，C1-C6链烯基，苯基(C1-C6)烷基，环烷基(C1-C6)烷基，或环烯基(C1-C6)烷基；R3表示氨基酸侧链或C1-C6烷基，苄基，(C1-C6)烷氧基苄基，苄氧基(C1-C6)烷基或苄氧基苄基；R4表示氢原子或甲基；R5表示基团(CH2)，A；或R4和R5一起表示以下基团 Q表示CH2或CO；m是1-3的整数；n是1-6的整数；A表示羟基，(C1-C6)烷氧基，(C2-C7)酰氧基，(C1-C6)烷硫基，苯硫基，(C2-C7)酰氨基或N-吡咯烷酮基团；或其盐和/或N-氧化物和/或(当化合物是硫代化合物时)亚砜或砜。在这点上，参见例如PCT国际出版物WO91/02716。
其中R1是H，C1-C6烷基，苯基，取代的苯基，苯基(C1-C6烷基)，或杂环基；或者R1是ASOnR7，其中A表示C1-C6烃链，其任选地被一个或多个C1-C6烷基，苯基或取代的苯基取代，n是0，1，或2，并且R7是C1-C6烷基，苯基，取代的苯基，苯基(C1-C6烷基)，杂环基，(C1-C6烷基)芳酰基，噻吩基或苯甲酰甲基；R2是氢，C1-C6烷基，C1-C6链烯基，苯基(C1-C6烷基)或环烷基(C1-C6烷基)；R3和R4选自氢，卤素，氰基氨基，氨基(C1-C6)烷基，氨基二(C1-C6)烷基，氨基(C1-C6)烷酰基，氨基苯甲酰甲基，氨基(取代的)苯基，氨基酸或其衍生物，羟基，氧基(C1-C6)烷基，氧酰基，甲酰基，羧酸，氨甲酰基，羧基(C1-C6)烷基酰胺，羧基苯基酰胺，羧基(C1-C6)烷基，羟基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基或酰氧基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基羧酸，或(C1-C6)烷基羧基(C1-C6)烷基；或R3是OCH2COR8和R4是氢，其中R8是羟基，C1-C6氧基烷基，C1-C6氧基烷基苯基，氨基，C1-C6氨烷基，C1-C6氨基二烷基，C1-C6氨烷基苯基，氨基酸或其衍生物；或者R3是OCH2CH2OR9并且R4是氢，其中R9是C1-C6烷基，C1-C6烷基苯基，苯基，取代的苯基，(C1-C6烷基)酰基，或苯甲酰甲基；或者R3是OCH2CN并且R4是氢；R5是氢或C1-C6烷基，或(C1-C6)烷基苯基；R6是氢或甲基；或其盐。在这点上，参见例如PCT国际申请PCT/GB92/00230。
在美国专利5,872,152中提及的两种优选用于本发明的化合物是[4-(N-羟基氨基)-2R-异丁基-3S-噻吩基硫甲基]琥珀酰]-L-苯基丙氨酸-N-甲酰胺，其具有以下结构 和[4-(N-羟基氨基)-2R-异丁基-3S-苯硫基甲基]琥珀酰]-L-苯基丙氨酸-N-甲酰胺，其具有下列结构 如在此用于描述含有异羟肟酸部分的MMP抑制剂，下列术语具有指示的含意。术语“C1-C6烷基”是指含有1-6个碳原子的直链或支链烃基，其中例举的烷基是甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，新戊基和己基。术语“C1-C6链烯基”是指含有1-6个碳原子并且含有至少一个或多个双键的直链或支链烃基，当适用时所述双键中的每一个为E或Z立体化学，其中该术语包括例如α，β-不饱和亚甲基，乙烯基，1-丙烯基，1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基，并且其中在优选实施方案中C1-C6链烯基是C2-C6链烯基。术语“C3-C6环烷基”是指含有3-6个碳原子的脂环族基团，其中例举的环烷基是环丙基，环丁基，环戊基和环己基。术语“C4-C6环烯基”是指含有4-6个碳原子并且另外含有一个或多个双键的脂环族基团，其中例举的环烯基是环戊烯基，环己烯基，环庚烯基和环辛烯基。术语“卤素”是指氟，氯，溴或碘。术语“氨基酸侧链”是指在下列R或S氨基酸中与-CH(NH2)(COOH)部分连接的特征侧链甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，甲硫氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，赖氨酸，组氨酸，精氨酸，谷氨酸和天冬氨酸。
异羟肟酸酯的代表性实例和合成异羟肟酸酯的方法在以下各项中详细描述美国专利4,599,361，4,720,486，4,743,587，4,996,358，5,183,900，5,189,178，5,239,078，5,240,958，5,256,657，5,300,674，5,304,604，5,310,763，5,412,145，5,442,110，5,473,100，5,514,677，5,530,161，5,643,964，5,652,262，5,691,382，5,696,082，5,700,838，5,747,514 5,594,006，5,763,621，5,821,262，5,840,939，5,849,951，5,859,253，5,861,436，5,866,717，5,872,152，5,902,791，5,917,090，5,919,940，5,932,695，5,962,521，5,962,529，6,017,889，6,022,898，6,028,110，6,093,798，6,103,739，6,124,329，6,124,332，6,124,333，6,127,427，6,218,389，6,228,988，和6,258,851。代表性的外国和国际申请和出版物包括EP-A-0231081，EP-A-0236872，EP-A-0274453，EP-A-0489577，EP-A-0489579，EP-A-0497192，EP-A-0574758，和EP-A-0575844，以及WO90/05716，WO 90/05719，WO 91/02716，WO 92/09563，WO 92/17460，WO92/13831，WO 92/22523，WO 93/09090，WO 93/09097，WO 93/20047，WO93/24449，WO 93/24475，WO 94/02446，WO 94/02447，WO 94/21612，WO94/21625，WO 94/24140，WO 94/25434，WO 94/25435，和WO 99/06361。许多异羟肟酸酯也容易从各种商业来源获得。
4.多肽抑制剂在本发明的其它方面基质金属蛋白酶的多肽(包括多肽衍生物)抑制剂可以用来延伸胶原蛋白的持续时间和效用。多肽抑制剂的代表性实例包括在美国专利5,300,501，5,530,128，5,569,665，5,714,491，和5,889,058中公开的那些。
5.基于巯基的化合物还可以将基于巯基的化合物用作MMPI。代表性的实例包括巯基酮和巯基醇化合物如美国专利5,831,004，5,840,698，和5,929,278中描述的那些；巯基硫化物如在美国专利5,455,262中描述的那些。
6.二膦酸酯二膦酸酯是与无机焦膦酸有关的化合物(通常参见H.Fleisch，Endocr.Rev.，19(1)80-100(1998)；还参见，H.Fleisch，Bisphosphonates in BoneDiseaseFrom the Laboratory to the Patient(1997，第3版)。The ParthenonPublishing Group，纽约和伦敦)。通常二膦酸酯具有下列结构 其中取代基R’和R”独立地表示氢或卤原子，羟基，任选取代的氨基或任选取代的硫代基或任选取代的烃残基。在一方面，R’和R”之一是羟基，氢或氯。
二膦酸酯代表性实例包括例如阿仑特罗((4-氨基-1-羟基亚丁基)二磷酸)；氯屈磷酸(二氯甲烷二膦酸)；羟乙磷酸酯((1-羟基亚乙基)二膦酸)；氨羟二磷酸((3-氨基-1-羟基亚丙基)二膦酸)；risedronate([-羟基-2-(3-吡啶基)亚甲基]二膦酸)；tiludronate(([(4-氯苯基)硫代]-亚甲基)二膦酸)；zolendronate；[1-羟基-3-(甲基-戊氨基)-亚丙基]二膦酸酯(BM21.0955)；[(环庚基氨基)亚甲基]二膦酸酯(YM175)；1-羟基-3-(1-吡咯烷基)-亚丙基]二膦酸酯(EB-1053)；[1-羟基-2-(1H-咪唑)-1-基]亚乙基]二膦酸酯(CGP 42′446)和(1-羟基-2-咪唑-[1，2-a]吡啶-3-基-亚乙基)二膦酸酯(YM 529)。
二膦酸酯的代表性实例在美国专利5,652,227和5,998,390中描述。
7.MMP的组合在本发明的某些实施方案中，可以使用多于一种MMPI(例如两种或多种MMPI可以组合使用)。协同的MMPI包括例如四环素和二膦酸酯(参见例如美国专利5,998,390和6,114,316)。同样可以使用MMPI的其它组合，包括例如在不同阶段抑制MMP的MMPI(例如异羟肟酸酯和四环素)。
III.制剂如上所述，胶原蛋白是纤维状蛋白，其可以从天然来源获得或重组生产。描述基于胶原蛋白的组合物和制备该组合物的方法的美国专利的代表性实例包括美国专利6,166,130，6,051,648，5,874,500，5,705,488，5,550,187，5,527,856，5,523,291，4,582,640，4,424,208，和3,949,073。
可以以多种方法制备本发明的MMPI组合物。例如，可以将MMPI直接溶解在胶原蛋白溶液中。如果MMPI在胶原蛋白溶液中稳定，含有胶原蛋白和MMPI的组合物可以在单一应用装置中制备。如果MMPI在胶原蛋白溶液中在相当长的时间内不稳定，可以将组合物制备成两组分系统，其中在即将使用前将组分混合。
本发明的MMPI组合物还可以通过将MMPI因子放置在载体中来生产。载体的代表性实例可以包括聚合物和非聚合物载体(例如脂质体或基于维生素的载体，并且可以是生物可降解的或非生物可降解的。生物可降解的组合物的实例包括白蛋白，明胶，淀粉，纤维素，葡聚糖，多糖，血纤蛋白原，聚(酯)，[例如聚(D，L丙交酯)，聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)，聚(乙交酯)，聚(e-己内酯)，及其共聚物和混合物]聚(羟基丁酸酯)，聚(烷基碳酸酯)，聚(酐)，或聚(原酸酯)，(通常参见Illum，L.，Davids，S.S.(编辑)“Polymers in controlled Drug Delivery”Wright，Bristol，1987；Arshady，J.，Controlled Release 171-22(1991)；Pitt，Int.J.Pharm 59173-196(1990)；Holland等，J.Controlled Release4155-0180(1986))。非生物可降解的聚合物的代表性实例包括环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物[Pluronic聚合物-BASF]，EVA共聚物，硅橡胶，聚(甲基丙烯酸酯)基聚合物和聚(丙烯酸酯)基聚合物。特别优选的聚合物载体包括聚(D，L-乳酸)低聚体和聚合物，聚(L-乳酸)低聚物和聚合物，聚(羟基乙酸)，乳酸和羟基乙酸的共聚物，聚(己内酯)，聚(戊内酯)，聚酐，己内酯和/或乳酸，和/或羟基乙酸与聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇的共聚物及其混合物。
可以以多种形式配制聚合物载体，包括例如棒状装置，球丸，片或胶囊(参见例如Goodell等，Am.J.Hosp.Pharm.431454-1461(1986)；Langer等，“Controlled release of macromolecules from polymers”；in Biomedicalpolymers，Polymeric materials and pharmaceuticals for biomedical use，Goldberg，E.P.，Nakagim，A.(编辑)Academic Press，第113-137页，1980年；Rhine等，J.Pharm.Sci.69265-270(1980)；Brown等，J.Pharm.Sci.721181-1185(1983)；和Bawa等，J.Controlled Release 1259-267(1985))。可以将MMPI因子通过封闭在聚合物基质中连接，或通过共价键结合，或包囊在微囊中。在本发明的某些优选实施方案中，MMPI组合物以非胶囊制剂如微球粒(大小为数纳米至数微米)，膏，不同大小的线，膜和喷雾剂提供。
优选地，本发明的MMPI组合物(其在某些实施方案中包含一种或多种MMPI因子，和聚合物载体)以适合于预期用途的方式配制。在本发明的某些方面，MMPI组合物应当是生物相容的，并在数日至数月的期间内释放一种或多种MMPI因子。例如，提供“速释”或“快释(burst)”MMPI组合物，其在7-10天的期间内释放大于10％，20％或25％的MMPI因子(例如四环素)。在某些实施方案中该“速释”组合物应当能够释放化学治疗水平(当适用时)的期望MMPI因子。在其它实施方案中，提供“低释放”MMPI组合物，其在7-10天的期间内释放小于5％(w/v)的MMPI因子。另外，本发明的MMPI组合物应当优选稳定几个月并能够在无菌条件下生产和保持。
在本发明的某些方面，MMPI组合物可以配制为约0.050nm至约500μm之间的任何大小，其取决于具体应用。例如，当用于美容组织增大的目的时(如以下讨论)，通常优选将MMPI组合物配制为约0.1至约100μm，优选约0.5至约50μm，最优选约1至约25μm的微球粒。备选地该组合物还可以作为溶液施用，其中MMPI溶解在胶束中。胶束的组合物本质上可以是聚合的。最优选的用作聚合胶束的聚合组合物是MePEG和聚(D，L-丙交酯)的共聚物。备选地该组合物还可以作为溶液施用，其中将MMPI包封在脂质体中(参见上文)。备选地还可以将该组合物作为溶液施用，其中将MMPI包封在乳状液或微乳的油相中。
还可以以各种“膏”或凝胶形式制备本发明的MMPI组合物。例如，在本发明的一个实施方案中，提供在一个温度(例如大于37℃的温度，如40℃，45℃，50℃，55℃，60℃)下为液体而在另一温度(例如周围体温，或任何低于37℃的温度)下为固体或半固体的MMPI组合物。本文公开的该“热膏(thermopastes)”可以容易地制备。
以下在实施例中更详细地描述结合如上所述的那些MMPI因子的代表性实例。
在本发明的另一方面，提供适于包含和释放疏水化合物的聚合物载体，该载体包含结合碳水化合物，蛋白质或多肽的疏水化合物。在某些实施方案中，聚合物载体含有或包含一种或多种疏水化合物的区域，袋(pocket)，或颗粒。例如，在本发明的一个实施方案中，可以将疏水化合物掺入到包含疏水化合物的基质中，接着将基质掺入到聚合物载体中。在这点上可以使用多种基质，包括例如碳水化合物和多糖如淀粉，纤维素，葡聚糖，甲基纤维素，和透明质酸，蛋白质或多肽如白蛋白，胶原蛋白和明胶。在备选实施方案中，疏水化合物可以包含在疏水核中，该疏水核包含在亲水壳中。例如，如以下实施例所述，可以将紫杉醇结合到具有亲水壳的疏水核(例如聚D，L乳酸-PEG或MePEG聚集体)中。
1.胶原蛋白-MMP前药在本发明的某些方面，MMPI组合物可以以这样的方式配制即将MMPI共价连接到在具体应用中使用的胶原蛋白上。可以将MMPI直接或通过接头分子(例如聚乙二醇)连接到胶原蛋白上。一旦将胶原蛋白-MMP前药系统导入/或施用到期望位点，在仍与胶原连接的时候MMPI可以抑制MMP，或者在它已经从胶原裂解(水解和/或酶促裂解)后它可以抑制MMP。
对于TIMP，可以将异双官能交联剂(例如硫代-EMCS[Pierce])用于将TIMP共价结合到胶原蛋白上。更明确地，TOMP可以与硫代-EMCS反应，由此顺丁烯二酰亚胺基团与包含在TIMP序列中的半胱氨酸的-SH基团反应。活化的TIMP然后可以与胶原蛋白溶液反应。然后可以将胶原蛋白-TIMP偶联体用于组织增大应用。
2.另外的组合物在本发明的某些实施方案中，可以进一步修饰这里提供的胶原蛋白/MMPI组合物以便增强它们的效用。例如，在一个实施方案中可以加入染料或其它着色剂以增强胶原蛋白/MMPI组合物的显色。染料或着色剂可以是永久的或短暂的(例如亚甲蓝)。在其它实施方案中，可以将帮助凝结的化合物或因子(例如凝血酶)加入到本文所述的组合物中。
IV.临床应用1.皮肤注射已经开发多种可注射的胶原蛋白产品用于软组织增大以矫正面部疤痕，减少脸纹和增大唇部。明确地，显示将该植入物用于治疗各种外形缺陷，包括(但不限于)矫正痤疮疤痕，来自疾病或创伤的萎缩，眉间皱纹，鼻唇沟，或鼻成形术、皮肤移植术或其它外科手术以后的缺陷和其它软组织缺陷。
将几种可商购的产品用于该目的，包括Zyderm I(3.5％牛胶原蛋白盐水，含有0.3％利多卡因)，Zyderm II(6.5％牛胶原蛋白)，Zyplast(McGhanMedical Corporation；3.5％与戊二醛交联的牛皮肤胶原蛋白，其分散在含有0.3％利多卡因的磷酸盐缓冲生理盐水中)和Fibrel(Serono Labs-明胶，ε-氨基-己酸和盐水的组合，其在注射前与患者的血浆以1∶1比率组合)。其它基于胶原蛋白的可注射产品，包括来源于非牛或人源的的那些，也可以用于本实施方案。
不幸地，因为植入物被宿主结缔组织细胞和炎症细胞移居(colonize)，这些细胞产生金属蛋白酶，如随时间过去分解胶原蛋白植入物的胶原蛋白酶，所以经常需要重复的“修整”操作。单独或在持续释放的制剂中含有金属蛋白酶抑制剂(MMPI)的可注射胶原蛋白(如上所述)将导致植入物增加的耐久性和减少随后重复注射的数量。
尽管上述金属蛋白酶抑制剂中的任何一种可以适合于加入到皮肤胶原蛋白注射液中，特别优选下列各项TIMP-1，四环素，强力霉素，二甲胺四环素，巴马司他；，马立马司他；，Ro-1130830，CGS 27023A，BMS-275291，CMT-3，索利司他，伊洛马司他，CP-544439，普啉司他，PNU-1427690，SU-5402，和托卡特。
不管所用的制剂，将以下列方法进行装载MMPI的胶原蛋白注射液的施用。在施用材料之前，患者应当已经完成两个皮肤试验(分2周进行)以检测变态反应。如果这些测试是阴性的，装载MMPI的注射液可以施用于患者。使用冷冻的预装载注射器，其具有细规格的针头(30或32规格)，含有不超过309cc的植入物材料。将患者以坐姿放置，台面向后稍微倾斜。可以将局部利多卡因和/或丙胺卡因用于麻醉。将针头与皮肤成一角度插入并推进至表皮组织。将足量植入物材料挤出以修复软组织外形缺陷。在装载MMPI的Zyderm的情形中，需要矫正过度(注射多于最终需要的材料)，因为注射材料的相当一部分在注射后数小时内消散。将装载MMPI的Zyplast典型地用于矫正更深的条纹并被更深地注射到皮肤中。因为该材料更刚性，无需矫正过度。
如上所述，可能需要随后的修整注射以保持最大矫正。然而，装载金属蛋白酶抑制剂的胶原蛋白注射剂将比它未装载的对应物持续时间更长，将提供长时间的矫正和减少重复注射的需要。
注射材料的总量取决于被矫正的外形缺陷的位置；然而，对于基于胶原蛋白的产品注射材料的总量不应超过33cc。在每cc剂量的基础上将描述下列装载MMPI的组合物。
a.装载马立马司他的胶原蛋白皮肤注射剂优选的组合物是0.001％-30％马立马司他每cc(即按重量计1μg-30mg马立马司他)胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-1.5％马立马司他(即10μg至1.5mg)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中传递的总剂量将不超过45mg(或小于确定的耐受良好的50mg日单剂量)。在一个实施方案中，将0.001-30％马立马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生材料在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
b.装载巴马司他的胶原注射剂优选的组合物是0.001％-30％巴马司他(即按重量计1μg-30mg巴马司他)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-5％(即10μg至5mg按重计)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中传递的总剂量将不超过150mg巴马司他(或小于确定的耐受良好的300mg/m2单剂量)。在一个实施方案中，将高度不溶性的巴马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
c.装载强力霉素的胶原蛋白皮肤注射剂优选的组合物是0.001％-30％强力霉素(按重量计1μg-30mg强力霉素)每cc可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-3％(按重量计10μg至3mg强力霉素)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中施用的总剂量将不超过90mg(或小于耐受良好的100mg的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％强力霉素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
d.装载四环素的皮肤胶原蛋白注射剂优选的组合物是0.001％-30％四环素(按重量计1μg-30mg四环素)每cc可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-30％四环素(按重量计10μg至30mg四环素)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中施用的总剂量将不超过900mg(或小于耐受良好的1g的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
e.装载二甲胺四环素的表皮胶原蛋白注射剂优选的组合物是0.001％-30％二甲胺四环素(按重量计1μg-30mg二甲胺四环素)每cc可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-6％二甲胺四环素(按重量计10μg至6mg二甲胺四环素)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中施用的总剂量将不超过180mg(或小于耐受良好的200mg的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％二甲胺四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
f.装载托卡特的表皮胶原蛋白注射剂优选的组合物是0.001％-30％托卡特(按重量计1μg-30mg托卡特)每cc可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-5％托卡特(按重量计10μg至5mg托卡特)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中施用的总剂量将不超过150mg。在一个实施方案中，将0.001％-30％托卡特装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
2.尿失禁可注射胶原蛋白经常用于治疗尿失禁。下述实施方案详述装载金属蛋白酶抑制剂的胶原蛋白产品的组合物和它们在治疗该常见医学疾病中的应用方法。
简短地，失禁或尿不自主的遗失，是一种常见医学疾病，其在他们生命某时影响20％女性和1-2％男性。最常见形式的尿失禁是压力性尿失禁，或响应导致腹内压力增加的活动(如喷嚏，咳嗽或拉紧(straining))的无意漏尿。这在膀胱内压力(膀胱内的压力)超过尿道中的压力时发生，在无逼肌(膀胱肌)收缩下从膀胱将尿压迫至尿道中。几种疾病被认为导致压力性尿失禁，包括(1)膀胱颈下降和内部尿道spincter出腹部外。
(2)由于外伤，外科手术，分娩或恶性肿瘤导致的内部尿道spincter障碍。
矫正措施主要旨在通过外科手术或非外科手术方法支持腹腔的尿道和膀胱颈。第二种方法涉及使用尿道填充剂(包括胶原蛋白)，其设计来增加尿道压力和减少尿失禁。
尽管在处理压力性尿失禁中已经大量成功地使用尿道周和经尿道的胶原蛋白注射，由于胶原蛋白植入物有限的耐久性大多数病例要求多于一种的治疗。使用基于MMPI胶原蛋白注射可以维持植入物的活性和减少随后尿道周和经尿道注射的需要和频率。
可获得几种可商购的基于胶原蛋白的产品用于治疗压力性尿失禁。Contigen(通过CR Bard获得的35mg/ml的分散在磷酸盐缓冲生理盐水中的纯化的牛皮戊二醛交联的胶原蛋白)广泛用作填充剂。其它基于胶原的可注射产品，包括来源于非牛，人或重组来源的那些，也可以用于该实施方案。使用Contigen，交联胶原在约12周内开始降解，并在10-19个月内完全降解。尽管在治疗后刚开始显示他们失禁的改善的百分比为58-100％，胶原蛋白再吸收导致在大多数患者中在上述时间间隔内需要重复操作。在本发明中，将MMPI加至基于胶原蛋白的持续释放形式的注射剂中，以降低植入物降解的速率和延长它的体内活性超过单独胶原蛋白所看到的(例如在大多数患者中一贯地大于1年，在相当比例的其它患者中超过2年)。
经尿道技术不管使用的制剂，以下列方式施用装载MMPI的胶原蛋白经尿道注射。在施用材料之前，患者应当已经完成两个皮肤试验(隔2周进行)以检测变态反应。如果这些测试是阴性的，装载MMPI的胶原蛋白注射可以施用于患者。使用冷冻的一次性使用的预装载注射器，其具有细规格的针(23规格经尿道注射针，带稳定套管)，含有2.5ml植入物材料。将患者以进行膀胱石切除术位放置并将10ml 2％利多卡因注射到尿道中以麻醉。在女性中，用膀胱镜观察膀胱颈。通过膀胱镜的注射孔，在4点钟的位置以锐角，在离膀胱颈1-1.5cm远将针插入膀胱粘膜的正下方平面。然后用膀胱镜与尿道长轴平行推进针直至它正好位于膀胱颈粘膜的下面。将装载MMPI的胶原蛋白缓慢注射到该位点。然后在8点钟的位置重复该操作。可以将亚甲蓝或其它无毒着色剂加入植入物以帮助注射剂的显色。
尿道周注射装载MMPI的胶原蛋白的尿道周注射也可以用于治疗失禁。如上所述，在施用材料之前，患者应当已经完成两个皮肤试验(隔2周进行)以检测变态反应。如果这些测试是阴性的，装载MMPI的胶原蛋白注射可以施用于患者。使用冷冻的一次性使用的预装载注射器，其具有细规格的针(尿道周注射针)，含有2.5ml植入物材料。将患者以进行膀胱石切除术位放置并将10ml 2％利多卡因注射到尿道中以麻醉，用膀胱镜观察膀胱颈(在男性中尿道也可以通过耻骨上的膀胱镜方法观察尿道)。将针经阴道或在耻骨上插入与尿道紧邻和侧面的区域。当它到达膀胱颈附近的适当位置时(如膀胱镜观察和如上所述)，将装载MMPI的胶原蛋白缓慢注射到该位点。可以将亚甲蓝或其它无毒着色剂加入植入物以帮助注射剂的显色。
尽管可能的任何负载MMPI的胶原蛋白注射可以适于经尿道或尿道周治疗失禁，特别优选MMPI如TIMP-1，四环素，强力霉素，二甲胺四环素，巴马司他，马立马司他，Ro-1130830，CGS 27023A，BMS-275291，CMT-3，索利司他，伊洛马司他，CP-544439，普啉司他，PNU-1427690，SU-5402，和托卡特。下列组合物理想地适合于用作尿道填充剂a.装载马立马司他的胶原蛋白尿道周/经尿道注射剂优选的组合物是0.001％-30％马立马司他每cc(即按重量计1μg-30mg马立马司他)胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-1.5％马立马司他(即10μg至1.5mg)每mL胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在2.5ml治疗中传递的总剂量将不超过45mg(或小于确定的耐受良好的50mg日单剂量)。在一个实施方案中，将0.001-30％马立马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生材料在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
b.装载巴马司他的胶原蛋白尿道周/经尿道注射剂优选的组合物是0.001％-30％巴马司他(即按重量计1μg-30mg巴马司他)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-30％(按重量计10μg至30mg)每mL胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在2.5cc治疗中传递的总剂量将不超过75mg巴马司他(或小于确定的耐受良好的300mg/m2单剂量)。在一个实施方案中，将0.001-30％的巴马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
c.装载强力霉素的胶原蛋白尿道周/经尿道注射剂优选的组合物是0.001％-30％强力霉素(按重量计1μg-30mg强力霉素)每mL可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-3％强力霉素(10μg至3mg强力霉素按重计)每mL胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在2.5mL治疗中施用的总剂量将不超过75mg(或小于耐受良好的100mg的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％强力霉素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
d.装载四环素的胶原蛋白尿道周/经尿道注射剂优选的组合物是0.001％-30％四环素(按重量计1μg-30mg四环素)每mL可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-30％四环素(按重量计10μg至30mg四环素)每mL胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在2.5mL治疗中施用的总剂量将不超过75mg(或小于耐受良好的1g的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
e.装载二甲胺四环素的胶原蛋白尿道周/经尿道注射剂优选的组合物是0.001％-30％二甲胺四环素(按重量计1μg-30mg二甲胺四环素)每cc可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-6％二甲胺四环素(按重量计10μg至6mg二甲胺四环素)每cc胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在30cc治疗中施用的总剂量将不超过180mg(或小于耐受良好的200mg的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％二甲胺四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
f.装载托卡特的表皮胶原蛋白尿道周/经尿道注射剂优选的组合物是0.001％-30％托卡特(按重量计1μg-30mg托卡特)每mL可注射的胶原蛋白/盐水悬浮液。特别优选的剂量是0.01-5％托卡特(按重量计10μg至5mg托卡特)每mL胶原蛋白/盐水悬浮液。因此，在2.5mL治疗中施用的总剂量将不超过75mg。在一个实施方案中，将0.001％-30％托卡特装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
3.外科封闭剂胶原蛋白已经广泛用作外科封闭剂；特别是作为血管封闭剂以停止在进入血管的股穿刺后的流血和在外科手术中的止血。
作为许多常规医疗方法如使用斯腾特移植物的模冠状动脉血管造影术，脑血管造影术，冠状动脉血管成形术，冠状动脉展伸，脑血管动脉瘤修复，腹动脉瘤修复和几种其它方法中一部分，股动脉的套管插入术是获得进入血管系统的初始步骤。对于许多这些适应症，必须将较大的装置导入股动脉，需要动脉上的“中断”方法。一旦该干涉已经完成和导管套取出，经常难以填塞从骨刺位点的流血(特别是因为许多患者在抗凝剂治疗)。已经开发基于胶原蛋白的血管封闭剂用于应用在穿刺位点以“封闭”伤口和引发动脉切开术的愈合。这可以使患者更块地行走和预防严重的并发症，如血肿形成，或在严重情况下出血和大量失血。当通过绷带控制流血无效或不可能时，止血的胶原蛋白封闭剂也用于在外科手术期间作为止血的辅助密封血管，骨和组织的外膜(外部的)或切割表面。这些产品用于心血管，全身，肝和整形外科的外科手术操作。
可商购几种基于胶原蛋白的封闭剂，包括VasosealTM(由Datascope生产)和CoStasisTM(由Cohesion Technologies生产)。生产装载MMPI的基于胶原蛋白的封闭剂将延长胶原蛋白植入物的活性和允许在植入物的再吸收前的完全愈合过程。这可能在控制外科手术流血中特别有用，在外科手术流血中在手术后不可以容易地接近血管修复位点。
VasosealTM是用于股动脉穿刺修复的胶原蛋白“栓塞(plug)”试剂盒的实例。简短地，在去除血管操作套管之前，使用插管器将动脉切开术-定位器插入套管。在动脉被压迫的情形下，一旦将动脉切开术定位器正确地移动到位点，去除操作套管和插管器。将组织扩张器推进到定位器之上并将套管推进到扩张器上，以使套管位于动脉切开术的位点的外表面之上；然后移去定位器和扩张器。将胶原蛋白药筒(含有80-100mg纯化的牛胶原蛋白栓塞)插入套管并将胶原蛋白栓塞注射到动脉穿刺伤口上(可能需要2次注射)。以完全相同的方式使用装载MMPI的股动脉封闭剂，但仍保持在长于允许完全愈合发生的位置，这样减少了后来再出血的风险。以下提供装载MMPI的胶原蛋白的栓塞制剂的实例。
CoStasisTM是可喷雾的液体，是基于胶原蛋白的止血的外科手术封闭剂的实例，其将受益于MMPI的加入(参见例如美国专利5,290,552，5,614,587，5,744,545，5,786,421，5,936,035，6,096,309，和6,280,727)。为了使用该系统，收集患者自己的血浆并吸入与连接装置连接的注射器。将胶原蛋白悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)注射器连接到连接器的另一部分。连接装置混合胶原蛋白/凝血酶注射器的内容物和患者血浆注射器的内容物。牛凝血酶将自体血纤蛋白原转化成血纤蛋白，其在胶原蛋白的存在下形成胶原蛋白/血纤蛋白凝胶基质，附着在出血位点。然后将混合物通过注射器喷雾在出血位点。如上所述将MMPI作为胶原蛋白/凝血酶悬浮液的成分加入。装载MMPI的胶原蛋白封闭剂将在其中可能需要长期止血直至组织愈合发生的外科手术操作中有最大效用。
a.装载马立马司他的胶原蛋白外科手术封闭剂优选的组合物是0.001％-30％马立马司他每mL(即按重量计1μg-30mg马立马司他)胶原蛋白/凝血酶悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)。特别优选的剂量是0.01-10％马立马司他(即10μg至10mg)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液。因此，在5.0ml治疗中传递的总剂量将不超过50mg(或等于确定的耐受良好的50mg日单剂量)。在一个实施方案中，将0.001-10％马立马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白/凝血酶悬浮液中，以便产生材料在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
b.装载巴马司他的胶原蛋白外科手术封闭剂优选的组合物是0.001％-30％巴马司他(即按重量计1μg-30mg巴马司他)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)。特别优选的剂量是0.01-30％(按重量计10μg至30mg)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液。因此，在5mL治疗中传递的总剂量将不超过150mg巴马司他(或小于确定的耐受良好的300mg/m2单剂量)。在一个实施方案中，将0.001-30％的巴马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白/凝血酶悬浮液中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
c.装载强力霉素的胶原蛋白外科手术封闭剂优选的组合物是0.001％-20％强力霉素(按重量计1μg-30mg强力霉素)每mL可注射的胶原蛋白/凝血酶悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)。特别优选的剂量是0.01-20％强力霉素(按重量计10μg至20mg强力霉素)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液。因此，在5mL治疗中施用的总剂量将不超过100mg(或等于耐受良好的100mg的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-20％强力霉素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白/凝血酶悬浮液中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
d.装载四环素的胶原蛋白外科手术封闭剂优选的组合物是0.001％-30％四环素(按重量计1μg-30mg四环素)每mL可注射的胶原蛋白/凝血酶悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)。特别优选的剂量是0.01-30％四环素(按重量计10μg至30mg四环素)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液。因此，在5mL治疗中施用的总剂量将不超过150mg(或小于耐受良好的1g的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白/凝血酶悬浮液中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
e.装载二甲胺四环素的胶原蛋白外科手术封闭剂优选的组合物是0.001％-30％二甲胺四环素(按重量计1μg-30mg二甲胺四环素)每mL可注射的胶原蛋白/凝血酶悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)。特别优选的剂量是0.01-20％二甲胺四环素(按重量计10μg至20mg二甲胺四环素)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液。因此，在5mL治疗中施用的总剂量将不超过100mg(或小于耐受良好的200mg的日剂量)。在一个实施方案中，将0.001％-30％二甲胺四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白/凝血酶悬浮液中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
f.装载托卡特的表皮胶原蛋白外科手术封闭剂优选的组合物是0.001％-30％托卡特(按重量计1μg-30mg托卡特)每mL可注射的胶原蛋白/凝血酶悬浮液(在40mM CaCl2缓冲液中的20mg/mL牛胶原蛋白和至少300U/ml牛凝血酶)。特别优选的剂量是0.01-10％托卡特(按重量计10μg至10mg托卡特)每mL胶原蛋白/凝血酶悬浮液。因此，在5mL治疗中施用的总剂量将不超过50mg。在一个实施方案中，将0.001％-30％托卡特装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白/凝血酶悬浮液中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
g.装载马立马司他的胶原蛋白股穿刺封闭剂优选的组合物是0.001％-10％马立马司他(即按重量计1μg-30mg马立马司他)每剂量胶原蛋白(80-100mg胶原蛋白栓塞)。特别优选的剂量是0.01-10％马立马司他(即10μg至10mg)每个胶原蛋白栓塞。在一个实施方案中，将0.001-10％马立马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生材料在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
h.装载巴马司他的胶原蛋白股穿刺封闭剂优选的组合物是0.001％-30％巴马司他(即按重量计1μg-30mg巴马司他)每剂量胶原蛋白(80-100mg胶原蛋白栓塞)。特别优选的剂量是0.01-30％(按重量计10μg至30mg)每个胶原蛋白栓塞。在一个实施方案中，将0.001-30％的巴马司他装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
i.装载强力霉素的胶原蛋白股穿刺封闭剂优选的组合物是0.001％-20％强力霉素(按重量计1μg-30mg强力霉素)每剂量胶原蛋白(80-100mg胶原蛋白栓塞)。特别优选的剂量是0.01-20％强力霉素(按重量计10μg至20mg强力霉素)每个胶原蛋白栓塞。在一个实施方案中，将0.001％-20％强力霉素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
j.装载四环素的胶原蛋白股穿刺封闭剂优选的组合物是0.001％-30％四环素(按重量计1μg-30mg四环素)每剂量胶原蛋白(80-100mg胶原蛋白栓塞)。特别优选的剂量是0.01-30％四环素(按重量计10μg至30mg四环素)每个胶原蛋白栓塞。在一个实施方案中，将0.001％-30％四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
k.装载二甲胺四环素的胶原蛋白股穿刺封闭剂优选的组合物是0.001％-30％二甲胺四环素(按重量计1μg-30mg二甲胺四环素)每剂量胶原蛋白(80-100mg胶原蛋白栓塞)。特别优选的剂量是0.01-20％二甲胺四环素(按重量计10μg至20mg二甲胺四环素)每个胶原蛋白栓塞。在一个实施方案中，将0.001％-30％二甲胺四环素装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
l.装载托卡特的表皮胶原蛋白股穿刺封闭剂优选的组合物是0.001％-30％托卡特(按重量计1μg-30mg托卡特)每剂量胶原蛋白(80-100mg胶原蛋白栓塞)。特别优选的剂量是0.01-10％托卡特(按重量计10μg至10mg托卡特)每个胶原蛋白栓塞。在一个实施方案中，将0.001％-30％托卡特装载于PLGA微球粒或其它基于聚合物的微球粒中，其再装载于胶原蛋白中，以便产生药物在数日至数月期间内的持续释放。任何来源的可注射胶原蛋白(例如牛，人，或重组体；交联或未交联的)将适合于与上述组合以生产期望的终产品。
对于本领域技术人员应当容易明显的是任何上述MMPI，或其衍生物或类似物可以用来在不背离本发明精神和范围下产生上述组合物的变体。
实施例实施例1胶原蛋白的制备胶原蛋白来源从新鲜杀死的兔子上去皮。削刮去除的皮肤，通过锐剥离脱脂并切割成2cm2正方形。将皮肤正方形在环境温度下冷冻干燥24小时，然后在固体CO2的帮助下在磨机中磨碎以产生粉末。
溶解通过加入粉状的材料至0.5M乙酸溶液中制备粉状皮肤的悬浮液，以使皮肤浓度为5g干重皮肤/升。将悬浮液冷却至10℃。将新鲜制备的胃蛋白酶溶液(在10ml 0.01 N HCl中0.5g)加入皮肤悬浮液并在偶尔搅拌下将混合物在10℃下温育5天。
胃蛋白酶去除在酶处理后，通过加入5ml Tris碱和用3N NaOH在4℃下将pH调整至7.0将混合物中剩余的胃蛋白酶变性。将30g NaCl搅拌到混合物中以保持溶液中的胶原蛋白。在4小时后，在30,000g下将混合物离心30分钟以去除沉淀的胃蛋白酶。
纯化通过加入另外140g NaCl将酶促处理的胶原蛋白从上清液中沉淀。搅拌溶液并允许在4℃下静置4小时。在30,000g下将沉淀的胶原蛋白离心出来30分钟。将获得的胶原蛋白沉淀再悬浮在200ml去离子水中。加入0.5N乙酸使终体积为一升。通过加入50g NaCl，允许溶液在4℃下静置5小时和在30,000g下离心30分钟从该溶液中沉淀胶原蛋白。
灭菌将胶原蛋白沉淀再悬浮在200ml蒸馏水中，转移到灭菌的透析管中并针对50体积的1N乙酸透析72小时。然后将胶原蛋白针对50体积0.001N乙酸透析24小时，在该期间更换溶液3次。然后通过将透析管放置在层流细菌屏障中的无菌吸水巾上浓缩透析溶液直至浓度达到12-15mg胶原蛋白/ml溶液。然后将浓缩的溶液针对50体积的0.001N乙酸透析24小时。然后将胶原蛋白溶液在4℃下贮存在无菌小瓶中。
加入聚合促进剂至浓缩物在即将使用前在4℃下将缓冲盐溶液(NaCl 2.5mM/l，NaHPO40.1mM/l，pH7.4)以10∶1(胶原蛋白∶缓冲液)的体积∶体积的比率加入胶原蛋白溶液，并将缓冲的浓缩物转移至冷却的(4℃)注射器。对于特定的应用(例如美容组织增大)，缓冲盐溶液还可以包含0.3-1％(w/v)局部麻醉药(例如利多卡因)。
实施例2使用W/O/W方法制备装载TIMP-1的微球粒具体地，将100mg 50/50PLGA聚合物(IV＝0.15)加入12mL二氯甲烷。向其中加入800μL磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液或PBS中的TIMP-1(浓度典型地为1-10mg/mL)。然后将该混合物均化(在6,000rpm下20秒)。一旦形成该溶液被分散到100mL 1.0％聚乙烯醇(PVA)水溶液并立即均化(在8,000rpm下40秒)以形成水包油包水复合乳剂。在这些条件下形成多分散的微粒(大多数大小小于10微米)。然后通过蒸发缓慢去除溶剂并通过离心收集微球粒。用去离子水洗涤(5次)颗粒并然后在干冰/丙酮浴中冷冻，冷冻干燥过夜以产生白色自由流动的微球粒粉末。
使用上述方法使用85/15 PLGA(IV＝0.68)制备具有更长降解曲线的微球粒。
上述方法还可以用于制备包含TIMP-2，TIMP-3和TIMP-4的微球粒。
实施例3使用W/O/W方法制备装载四环素的微球粒除了使用盐酸四环素以外，以类似于以上实施例所述的方法制备装载四环素的微球粒。
实施例4使用W/O/W方法制备装载强力霉素的微球粒除了使用盐酸强力霉素以外，以类似于以上实施例所述的方法制备装载强力霉素的微球粒。
实施例5使用W/O/W方法制备装载二甲胺四环素的微球粒除了使用盐酸二甲胺四环素以外，以类似于以上实施例所述的方法制备装载二甲胺四环素的微球粒。
实施例6使用水包油的方法制备装载巴马司他的微球粒PVA溶液制备在1000ml烧杯中，加入1000ml蒸馏水和100g PVA(Aldrich 13-23K，98％水解)。将2寸的搅拌棒放置在烧杯中。将悬浮液加热至75-80℃，同时搅拌。一旦PVA完全溶解(形成澄清溶液)，将PVA溶液(w/v)冷却至室温并通过注射器内嵌滤器过滤。
用巴马司他制备PLGA溶液称量100mg巴马司他和900mg PLGA(50/50，IV＝0.15)并转移至20ml闪烁管中。将10mL HPLC级别的二氯甲烷(DCM)加入小瓶以溶解PLGA和巴马司他。将样品放置在轨道振荡器(装置4)上直至聚合物和巴马司他溶解。
直径小于25μm的微球粒的制备将100ml 10％PVA溶液转移至400ml烧杯中。使用双面胶带将烧杯固定竖立。将3-叶片搅拌棒放置在烧杯中并调整至高于烧杯底部约0.5cm的高度。开始将搅拌器电动机(来自Fisher Scientific的Dyna-Mix)开启至2.5。在搅拌期间将10ml PLGA/巴马司他溶液倒入PVA溶液。将搅拌速度逐渐增加到5的固定值。持续搅拌2.5-3.0小时。将获得的微球粒过滤通过2个金属筛(53μm(顶部)和25μm(底部))至100ml烧杯中以便去除任何大尺寸的物质。在过滤同时用蒸馏水洗涤微球粒。离心(1000rpm，10min.)在滤液中收集的微球粒以沉淀微球粒。使用巴斯德移液管去除上清液并用100ml蒸馏水再悬浮沉淀。将该过程重复另外2次。
将洗涤的微球粒转移至玻璃容器中。通过用少量蒸馏水(20-30ml)漂洗烧杯完成转移。用Parafilm密封容器并放置在-20℃的冷藏箱中过夜。然后使用冷冻干燥机将冷冻的微球粒溶液冷冻干燥约3天。将干燥微球粒转移至20ml闪烁管中并保藏在-20℃。然后通过用至少2.5Mrad钴-60(Co-60)x-射线照射将微球粒最终灭菌。
实施例7使用水包油方法制备装载马立马司他的微球粒除了使用马立马司他而不是巴马司他以外，以类似于以上实施例所述的方法制备装载马立马司他的微球粒。
实施例8使用水包油方法制备装载托卡特的微球粒除了使用托卡特而不是巴马司他以外，以类似于以上实施例所述的方法制备装载托卡特的微球粒。
实施例9制备含有胶束巴马司他的胶原蛋白溶液制备聚合物在0.5％w/w辛酸亚锡的存在下使用DL-丙交酯和甲氧基聚(乙二醇)[MePEG 2000]通过主(bulk)开环聚合合成聚合物。
简短地，用Irrigation USP的无菌水洗涤和漂洗反应玻璃器皿，在37℃下干燥，接着在250℃下去热原至少1小时。称量MePEG 2000和DL-丙交酯(分别为240g和160g)并使用不锈钢漏斗转移至圆底烧瓶。将2-寸Teflon包被的磁力搅拌棒加入到烧瓶中。将玻璃塞用于密封烧瓶，其然后浸入预热的油浴直至颈部。使用温度控制的电炉将油浴保持在140℃。在MePEG和DL-丙交酯已经融化和到达140℃，将2mL 95％辛酸亚锡(催化剂)加入烧瓶。在加入后立即剧烈振荡烧瓶以确保迅速混合，并然后返回至油浴。在加热和搅拌下允许反应进行6小时。然后将液态聚合物倒入不锈钢托盘，覆盖并留在通风橱中过夜(约16小时)。聚合物在盘中凝固。使用Parafilm密封盘顶部。将密封的含有聚合物的托盘放置在-20℃±5℃的冷藏箱中0.5小时。
然后从冷藏箱中去除聚合物并转移至玻璃贮藏瓶并保存在2-8℃。
胶束巴马司他(巴马司他/聚合物基质)的制备用Irrigation USP的无菌水洗涤和漂洗反应玻璃器皿，在37℃下干燥，接着在250℃下去热原至少1小时。首先，制备磷酸盐缓冲液，0.08M，pH7.6。将缓冲液以每小瓶1mL的体积分散。在90℃下加热小瓶2小时以干燥缓冲液。然后将温度升至160℃并将小瓶干燥另外3小时。
在搅拌和加热下将聚合物以10％w/v的浓度溶解在THF中。然后将聚合物溶液在3000rpm下离心30分钟。将上清液倒出并放置。加入另外的THF以沉淀，并在3000rpm下第二次离心30分钟。将第二次的上清液和第一次的上清液合并。称量巴马司他和然后加入上清液合并。用THF将溶液变成期望的终浓度，制备含有1.1％巴马司他的9.9％聚合物溶液。
为了制备终产品小瓶的分批显影，将胶束巴马司他以每小瓶1mL的体积分散到含有干燥磷酸盐缓冲液的小瓶中。将小瓶放置在50℃真空烘箱中。将真空保持在-80kPa，小瓶保持在烘箱中过夜(15-24小时)。用贴有Teflon的灰色丁基塞子塞好小瓶并用铝封密封。使用2.5Mradγ-射线照射将巴马司他/聚合物基质灭菌。每个小瓶含有约11mg巴马司他，99mg聚合物，和11mg磷酸盐。将小瓶贮存在2℃至8℃直至组建。
胶束巴马司他/胶原蛋白凝胶的制备在无菌生物安全柜中，将2ml无菌盐水加入含有约11mg巴马司他，99mg聚合物和11mg磷酸盐的小瓶(如上制备)。通过将小瓶放置在37℃水浴中约30分钟，间歇搅拌，将小瓶的内容物溶解在2mL无菌盐水中。使用无菌的1mL注射器，从小瓶吸出1mL胶束巴马司他溶液的等分试样并注射到29mL胶原蛋白凝胶中。混合样品以产生胶束巴马司他在胶原蛋白凝胶中的均匀溶液。然后将样品装载到1mL注射器中用于体内实验。
实施例102组分胶束试剂盒的制备冷冻干燥胶束巴马司他的制备如下制备经与含有胶原蛋白的水性介质组建后能够形成胶束的固体组合物简短地，在不锈钢烧杯中将41.29g MePEG(MW＝2,000g/mol)与412.84g 60∶40 MePEG聚(DL-丙交酯)二嵌段共聚物(参见上面提供的实施例)组合，在矿物油浴中加热至75℃，并通过架空的搅拌浆叶搅拌。一旦获得澄清液体，将混合物冷却至55℃。向混合物加入45.87g巴马司他在四氢呋喃中的200ml溶液。以约40ml/min加入溶剂并在55℃下将混合物搅拌4小时。在搅拌该时间后，将液体组合物转移至不锈钢盘中并放置在强迫通风的50℃烘箱中约48小时以去除残留的溶剂。然后将组合物冷却至室温并允许固化形成巴马司他-聚合物基质。
通过在1600ml水中合并237.8g磷酸二钠七水合物，15.18g磷酸二氢钠一水合物来制备磷酸盐缓冲液。向磷酸盐缓冲液，加入327g巴马司他-聚合物基质并搅拌2小时以溶解固体。在获得澄清溶液以后，用另外的水将体积调整至2000ml。用15ml该溶液的等分部分装满小瓶并冷冻干燥，其是通过冷却至-34℃，保持5小时，在减压至小于0.2mm Hg同时加热至-16℃，保持68小时，在保持低压同时加热至30℃，接着保持另外20小时。结果是能够组建形成澄清胶束溶液的冷冻干燥的基质。
2组分试剂盒的制备将40mg冷冻干燥的胶束巴马司他材料称入加盖的1mL注射器中。更换柱塞并使用热封机将注射器密封在塑料袋中。使用2.5Mradγ-射线照射将样品灭菌。在即将应用前，打开含有无菌冷冻干燥材料的塑料袋并连接至双联注射器连接器(供应商，cat#)。将含有2mL 3.5％牛胶原蛋白(95％I型和5％III型)的注射器连接到双联注射器连接器的剩余末端。将含有胶原蛋白材料的注射器的柱塞推入以便将胶原蛋白材料转移至含有胶束材料的注射器中。将材料从一个注射器传递至另一个直至获得均匀溶液。然后将材料转移至原来含有胶原蛋白的注射器中。将该注射器从连接器分离并将30规格的针连接至注射器。材料现在准备待用。
实施例112组分胶束试剂盒的制备将40mg冷冻干燥的胶束巴马司他材料称入加盖的1mL注射器中。更换柱塞并使用热封机将注射器密封在塑料袋中。使用2.5Mradγ-射线照射将样品灭菌。在即将应用前，打开含有无菌冷冻干燥材料的塑料袋并连接至双联注射器连接器。将含有2mL 3.5％牛胶原蛋白(95％I型和5％III型)的注射器连接到双联注射器连接器的剩余末端。将含有胶原蛋白材料的注射器的柱塞推入以便将胶原蛋白材料转移至含有胶束材料的注射器中。将材料从一个注射器传递至另一个直至获得均匀溶液。然后将材料转移至原来含有胶原蛋白的注射器中。将该注射器从连接器分离并将30规格的针连接至注射器。材料现在准备待用。
实施例12脂质体制剂MLV脂质体在50mL圆底烧瓶中将总共100mg卵磷脂酰胆碱(Avanti Polar Lipids)和胆甾醇(Sigma)[5∶1摩尔比]加入到5mL二氯甲烷中。一旦溶解，将3mg巴马司他加入溶液。使用rotavap在低度真空下去除溶剂。在真空下将类脂-药物混合物干燥过夜。将5mL 0.9％NaCl溶液加入干燥的类脂-药物混合物。使用rotavap和37℃的水浴装置将溶液缓慢旋转1小时。当将5％麦芽糖加入0.9％NaCl组建溶液时，将样品在丙酮干冰中冷冻和冷冻干燥以产生固体产品。
根据所需的具体剂量，将一定量的冷冻干燥的微球粒巴马司他材料(如上所述制备)称入加盖的1mL注射器中。更换柱塞并使用热封机将注射器密封在塑料袋中。使用2.5Mradγ-射线照射将样品灭菌。在即将应用前，打开含有无菌冷冻干燥材料的塑料袋并连接至双联注射器连接器。将含有3.5％牛胶原蛋白(95％I型和5％III型)的注射器连接到双联注射器连接器的剩余末端。将含有胶原蛋白材料的注射器的柱塞推入以便将胶原蛋白材料转移至含有胶束材料的注射器中。将材料从一个注射器传递至另一个直至获得均匀溶液。然后将材料转移至原来含有胶原蛋白的注射器中。将该注射器从连接器分离并将30规格的针连接至注射器。材料现在准备待用。
SUV脂质体通过将样品放置在超声波浴(45℃)中10分钟将上面制备的脂质体尺寸减小。用将溶液从不透明的乳状溶液转变成透明的蓝色溶液。将该溶液用作或冷冻干燥以生产固体产品。固体产品可以用于以类似上述方法制备胶原蛋白溶液。
从上面应当理解尽管为了举例说明本文已经描述本发明的具体实施方案，可以不背离本发明精神和范围进行各种改进。因此，除了后附权利要求以外本发明不受限制。
权利要求
1.一种组合物，其包含胶原蛋白合至少一种金属蛋白酶抑制剂(MMPI)。
2.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)。
3.按照权利要求2的组合物，其中所述TIMP是TIMP-1或TIMP-2。
4.按照权利要求2的组合物，其中所述TIMP是TIMP-3或TIMP-4。
5.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是四环素，或其类似物或衍生物。
6.按照权利要求5的组合物，其中所述MMPI是四环素。
7.按照权利要求6的组合物，其中所述四环素是二甲胺四环素或强力霉素。
8.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是异羟肟酸酯。
9.按照权利要求8的组合物，其中所述异羟肟酸酯是巴马司他，马立马司他，或托卡特。
10.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是RO-1130830，CGS-27023A或BMS-275291。
11.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是多肽抑制剂。
12.按照权利要求11的组合物，其中所述多肽抑制剂是金属蛋白酶成熟酶的抑制剂。
13.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是基于巯基的化合物。
14.按照权利要求1的组合物，其中所述MMPI是具有结构(I)的二膦酸酯 其中R’和R”独立地是氢，卤素，羟基，任选取代的氨基，任选取代的硫代基，或任选取代的烷基，链烷基，链烯基，炔基，烷二基，alkyleno，杂烷基，杂链烷基，杂链烯基，杂炔基，杂烷二基，heteroalkyleno，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基。
15.按照权利要求14的组合物，其中所述MMPI是R’和R”是羟基，氢，或氯的二膦酸酯。
16.按照权利要求1的组合物，其包含至少两种MMPI。
17.按照权利要求16的组合物，其中所述至少两种MMPI包含四环素，或其类似物或衍生物和二膦酸酯。
18.按照权利要求16的组合物，其中所述至少两种MMPI包含四环素或其类似物或衍生物，和hydroxymate。
19.一种组合物，其包含胶原蛋白，至少一种金属蛋白酶抑制剂(MMPI)，和至少一种聚合物。
20.权利要求19的组合物，其中所述聚合物是生物可降解的。
21.权利要求19的组合物，其中所述生物可降解的聚合物选自白蛋白，明胶，淀粉，纤维素，葡聚糖，多糖，血纤蛋白原，聚(酯)，聚(D，L丙交酯)，聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)，聚(乙交酯)，聚(e-己内酯)，聚(羟基丁酸酯)，聚(烷基碳酸酯)，聚(酐)，或聚(原酸酯)，及其共聚物和混合物。
22.权利要求19的组合物，其中所述聚合物是非生物可降解的，其中所述非生物可降解的聚合物选自环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物，乙烯乙酸乙烯酯共聚物，硅橡胶，聚(甲基丙烯酸酯)基聚合物和聚(丙烯酸酯)基聚合物。
22.权利要求20的组合物，其中所述聚合物是棒，球丸，片或胶囊的形式。
23.权利要求20的组合物，其中所述聚合物是微球粒，膏，热膏，线，膜或喷雾剂的形式。
24.权利要求1的组合物，其中所述MMPI通过封闭在聚合物基质中，通过共价键合，或通过包囊与聚合物相联系。
25.权利要求1的组合物，其中所述MMPI直接或通过接头与胶原蛋白共价连接。
26.权利要求25的组合物，其中与胶原蛋白连接的所述MMPI通过化学裂解或酶促裂解共价键而释放。
27.权利要求19的组合物，其另外包含基质，其中将所述MMPI掺入到基质中，所述基质选自碳水化合物，多糖，淀粉，纤维素，葡聚糖，甲基纤维素，透明质酸，多肽，白蛋白，胶原蛋白和明胶。
28.按照权利要求1的组合物，其中所述胶原蛋白是I型或II型。
29.按照权利要求19的组合物，其中所述胶原蛋白是I型或II型。
30.按照权利要求1至29中任何一项的组合物，其中所述组合物是无菌的。
31.按照权利要求1至29中任何一项的组合物，其另外包含凝血酶或染料。
32.按照权利要求1至29中任何一项的组合物，其另外包含药用稀释剂，载体或赋形剂。
33.一种用于修复或增大皮肤或组织的方法，其包含将按照权利要求30的组合物注射到皮肤或组织中。
34.按照权利要求33的方法，其中所述注射是注射到唇中。
35.按照权利要求33的方法，其中所述注射是注射到脸上的皮肤中。
36.一种用于治疗或预防尿失禁的方法，其包含向患者施用按照权利要求30的组合物，以便治疗或预防所述尿失禁。
37.按照权利要求36的方法，其中在尿道周施用所述组合物。
38.按照权利要求37的方法，其中经尿道施用所述组合物。
39.一种密封外科手术位点的方法，其包含向患者施用按照权利要求30的组合物。
40.按照权利要求39的方法，其中所述位点是接近血管区域。
41.一种制备collajolie的方法，其包含掺和胶原蛋白和至少一种MMPI。
42.按照权利要求41的方法，其中所述胶原蛋白是I型或II型胶原蛋白。
43.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)。
44.按照权利要求43的方法，其中所述TIMP是TIMP-1或TIMP-2。
45.按照权利要求43的方法，其中所述TIMP是TIMP-3或TIMP-4。
46.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是四环素，或其类似物或衍生物。
47.按照权利要求46的方法，其中所述MMPI是四环素。
48.按照权利要求47的方法，其中所述四环素是二甲胺四环素或强力霉素。
49.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是异羟肟酸酯。
50.按照权利要求49的方法，其中所述异羟肟酸酯是巴马司他，马立马司他，或托卡特。
51.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是RO-1130830，CGS-27023A或BMS-275291。
52.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是多肽抑制剂。
53.按照权利要求52的方法，其中所述多肽抑制剂是金属蛋白酶成熟酶的抑制剂。
54.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是基于巯基的化合物。
55.按照权利要求41的方法，其中所述MMPI是具有结构(I)的二膦酸酯 其中R’和R”独立地是氢，卤素，羟基，任选取代的氨基，任选取代的硫代基，或任选取代的烷基，链烷基，链烯基，炔基，烷二基，alkyleno，杂烷基，杂链烷基，杂链烯基，杂炔基，杂烷二基，heteroalkyleno，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基。
56.按照权利要求55的方法，其中所述MMPI是R’和R”是羟基，氢，或氯的二膦酸酯。
57.按照权利要求41的方法，其包含至少两种MMPI。
58.按照权利要求41的方法，其中在与胶原蛋白掺和前将所述MMPI首先与至少一种聚合物掺和。
59.权利要求58的方法，其中所述聚合物是生物可降解的。
60.权利要求59的方法，其中所述生物可降解的聚合物选自白蛋白，明胶，淀粉，纤维素，葡聚糖，多糖，血纤蛋白原，聚(酯)，聚(D，L丙交酯)，聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)，聚(乙交酯)，聚(e-己内酯)，聚(羟基丁酸酯)，聚(烷基碳酸酯)，聚(酐)，或聚(原酸酯)，及其共聚物和混合物。
61.权利要求41的方法，其另外包含将所述混合物灭菌的步骤。
全文摘要
本发明提供了包含胶原蛋白和至少一种金属蛋白酶抑制剂的组合物以及制备和使用其的方法。
文档编号A61L31/04GK1610564SQ02826373
公开日2005年4月27日 申请日期2002年12月30日 优先权日2001年12月28日
发明者W·L·亨特, D·M·格雷维特, P·M·特雷科斯, A·迈蒂 申请人:血管技术国际有限公司