补髓生血颗粒及其制备方法

专利名称：补髓生血颗粒及其制备方法
所属领域；本发明涉及一种补髓生血颗粒及其制备方法。
背景技术：
再生障碍性贫血是一种迄今病因未十分明了，且对人类健康危害较大的造血系统疾病。少数病例发病虽然与药物、化学物质、电离辐射及病毒感染等有关，但大多数病例病因仍不十分清楚。Mothlerr等综合11家报道共302例病人中属原发性者占78.5％，而国内陈东丰等综合3057例病人中属原发性者占74％，可见关于原发和继发再障发生比例各家报道不同。现有文献报告，至少有近百种药物被认为和再障发病有关。报道较多的是氯霉素、保泰松、解热镇痛药、磺胺类和抗疟药等。殷德厚等对牡丹江地区三个再障发病调查结果表明，再障发病与药物有关者占45％，其中与氯霉素有关者占31％.Lssaragrisil等对多种药物包括噻秦类利尿药、驱虫药、磺胺类药、抗惊厥类药物、口服避孕药的使用与再障发病的关系进行了研究，结果表明再障的发生与使用噻嗪利尿药、驱虫药有明显关系，也与磺胺类药物的使用有关，使用此三类药物者发病率为9-12/106，但与非激素类抗炎药物、抗惊厥药、口服避孕药无关。氯霉素在1948年问世，1952年便有氯霉素导致再障的报道。林果为等调查发现患者有服用氯霉素史者发生再障的危险性为对照组的6倍，特别是发病前半年内有服用史者，其发生再障危险性为对照组的33倍，氯霉素剂量超过6克发生再障的危险性为对照组的12倍。服用保泰松后发生再障危险为对照组的3～4倍。服用含氨基比林和非那西丁的复方制剂则为对照组的3倍。美国医学会(AMA)药物副作用登记处进行统计724例再障患者中，其中321例AA与服用氯霉素有关，39例为服用保泰松所致。张锐发等应用病例对照研究法对158例再障碍的发病因素作了专门调查分析，结果提示土霉素、四环素及解热镇痛药等与再障的发病无明显关系。综上所述，氯霉素、四环素等药物是引起再障的危险因素，但并不是说这些因素必然引起再障，不过我们根据这些发病因素并考虑到接触这些药物到发病的时间间隔，可达到预防之目的。许多化学物质如苯类化合物、油漆、某些农药杀虫剂等都具有对骨髓毒性作用。现已明确，各种形式的电离辐射均可致再障。许多病毒感染与再障发生也有关，其中病毒性肝炎相关性再障最为多见。

发明内容
本发明的目的是提供一种有促进骨髓细胞增殖分化、提高病人免疫机能、改善骨髓造血的微环境状态的补髓生血颗粒及其制备方法。本发明的另一个目的是提供一种有效提取并制成补髓生血颗粒的制备方法。本发明的目的是通过以下方式实现的本发明为一种补髓生血颗粒，该药物组分的重量配比是熟地黄2000-3000g，山萸肉1000-2000g，枸杞子1500-2500g，淫羊藿2000-3000g，黄芪4500-5500g，鸡血藤1500-2500g，白花蛇舌草1500-2500g，鹿茸200-300g，红参1000-2000g，丹参2500-3500g，茯苓1500-2500g。孙伟正教授自60年代就开展再障的临床与实验研究，积累了丰富的经验，补髓生血颗粒剂是以孙伟正教授为学科带头人之宝贵经验的结晶。它汇集着孙教授从医30多年来的宝贵心血。补髓生血颗粒剂经临床中不断应用，并得以发展，目前补髓生血颗粒剂经课题组人员从不同角度、不同层次上对其疗效机理进行了深入研究，并取得了可喜的成果。与已知治疗再障的再障生血片比较，其近期或远期疗效皆好于再障生血片(P＜0.01)。与目前对再障治疗效果较好的西药相比，不但克服了单纯西药作用途径单一或毒副作用大之缺点，而且还避免了价格之昂贵之弊病，广为患者所接受。补髓生血颗粒依据″肾主骨生髓″″精血互化″理论为组方原则。方中熟地黄性味甘微温，归肝肾经，能滋阴补肾，填精益髓。现代药理研究发现，地黄具有刺激骨髓、增加红细胞、血红蛋白及升高血小板的作用。新近研究发还发现生、熟地黄还可促进血虚动物骨髓造血细胞CFU-E、BFU-E的增殖。另有人报道地黄具有明显的免疫增强作用。山萸肉性味酸涩微温，归肝肾经，能补益肝肾。现代药理研究表明山萸肉对免疫功能有调节作用。对巨噬细胞的吞噬功能有促进作用。此外，山茱萸对环磷酰胺及放疗引起的小鼠白细胞减少有明显升高作用。枸杞子性味甘平，归肝肾经，能补益肝肾。现代药理研究表明枸杞子对免疫功能减退有调节作用。另有人报道枸杞子含有丰富的微量元素，如铁、锌、锰等。也有人研究发现枸杞多糖能提高小鼠骨髓BFU-E、CFU-E水平，能升高网织红细胞数，增强集落刺激因子活性。淫羊藿性味甘温，归肝肾经，能补肾壮阳，强筋骨。现代药理研究该药能改善肾虚病人T细胞比值，增强网状内皮系统的吞噬功能。有人对小鼠腹腔注射淫羊藿水浸膏0.5，对机体免疫功能有促进作用。有人以单味淫羊藿离子静电导入为主治疗再障5例，近期疗效非常好。巴戟天性味甘辛微温，归肝肾经，能补肾阳，壮筋骨。现代药理研究该药有促肾上腺皮质激素样作用。还有人研究巴戟天能抑制小鼠胸腺萎缩，升高白细胞之功能。鹿茸味甘、咸、性温。归肝肾经。能温肾壮阳、生精益血、强筋补髓。现代药理研究发现鹿茸所含多种氨基酸和活性物质对人体有强壮作用，且能提高受损骨髓的醛缩酶等的活性，能改善阳虚状态下能量代谢低下的病理变化。有人研究还发现鹿茸精能促进骨髓造血机能，提高外周血红细胞，白细胞、血红蛋白水平。用鹿茸血酒每次10ml，每日3次口服，治疗再生障碍性贫血、慢性苯中毒引起的血液病，血象及临床症状均获得好转。此外。鹿茸还具有明显的抗脂质过氧化作用。增强SOD活性，提高其捕捉氧自由基能力。红参是人参蒸制后的干燥品，味甘、微苦，性微温，归心、肺、脾经，能大补元气。现代药理研究表明红参中含麦芽醇(Mat01)具有抗氧化作用。人参对骨髓造血功能有保护和刺激作用，能使贫血动物红细胞、白细胞及血红蛋白量增加。当骨髓受到抑制时，人参增加外周血细胞的作用更为明显。人参皂甙和人参总皂甙对小鼠骨髓多潜能干细胞具有明显的促进作用，能促进红系、粒系、巨核系组成的混合集落形成。给贫血患者每天服用人参提取物(人参皂甙)，不但能增强骨髓造血功能，而且能改善病人的全身倦怠、食欲不振、眩晕、心悸等症状。黄芪味甘，性微温。归脾、肺经。能补气以生血。现代药理研究证明黄芪可明显促进造血功能，使用以当归、黄芪合用组成当归补血汤或单用黄芪均能明显提高失血性贫血小鼠红细胞、血红蛋白数。丹参味苦、性微寒、归心、肝经，能活血凉血，祛瘀生新。现代药理研究丹参有抗脂质过氧化和清除自由基作用。有人研究表明丹参注射液能显著提高红细胞、心、肝、肾中SOD活性，显著降低血清、心、肝、肾中LPO含量。还有人进行试验观察丹参对甲皱微循环的改变，结果丹参可使管袢轮廓清晰度、管袢数目及长度均增加，血流速度加快。鸡血藤味苦、甘，性温，归肝经。能补血行血，舒筋活络。现代药理研究发现鸡血藤有升高红细胞、白细胞和血红蛋白的作用。有人用含鸡血藤的″补血灵糖浆″制剂治疗小儿营养不良性贫血76例，取得一定疗效。白花蛇舌草味苦、甘，性寒；，归胃、大肠、小肠经。能清热解毒。现代药理研究白花蛇舌草能明显增强机体白细胞吞噬白色葡萄球菌的能力。也有人报道本品在较低剂量下，确能增强小鼠的体液免疫细胞免疫功能。综上所述，仅是从单味药的药理作用分析了其作用可行性。我们知道单药有效单体的药代参数并不能完全代表或反映含该成分的有效中药复方的药代参数。要想真正明晰补髓生血颗粒的全方综合疗效还必须深入研究其组方配伍规律。中医认为慢性再障发病关键为肾虚，方中熟地黄、山萸肉、枸杞子补肾填精，滋阴养血。巴戟天、淫羊藿、鹿茸补肾助阳，益髓养血。红参大补元真之气，黄芪补气而生血。值得一提的是补髓生血颗粒还依据其阴阳互根″孤阴不生，独阳不长″的原理，在补肾阴同时酌加补肾阳之品，在补肾阳同时还适加滋肾阴之药。补髓生血颗粒还注意到慢性再障沉痼难解缠绵难愈，久病入络的病理变化，因而在补肾的基础上还适当配用了丹参、鸡血藤等活血之品。另外，本方还酌加部分解毒之品，使其方更有其新意。综合分析上方，不难发现本方治疗充分体现了补肾、活血、解毒三法。我们认为补肾填精能够增加造血干细胞数量；提高机体免疫力，也即″五脏元真通畅，人即安和″。解毒是解除致病邪气对骨髓的侵害。活血化瘀也即清除邪正相争产生的病理性瘀积之物，改善造血微环境，以达以通为用之目的。本发明经过黑龙江中医药大学附属医院血液内科对111例再障的疗效研究和215例再障的生存率及远期疗效的观察，总有效率为79.35％，临床治愈率为28.83％，五年生存率达88％，远期疗效为71.64％。
本发明所述的一种补髓生血颗粒的制备方法是将熟地黄、山萸肉、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、黄芪、鸡血藤、白花蛇舌草、茯苓加水煎煮三次，每次加水10倍量，煎煮2.5小时，合并滤液，滤液浓缩至1∶0.5，搅拌下加入95％乙醇使含醇量达70％，放置过夜，滤过得到滤液A备用，另取鹿茸、红参、丹参，加70％乙醇回流提取2次，每次3小时，合并滤液得到滤液B，将滤液B提取液与滤液A合并，水浴回收乙醇，并浓缩至相对密度1.30(80℃热测)的浸膏，加处约1000g糊精，混匀制成软材，过14目筛制粒，80℃烘干，整粒，分装即得，每袋约15g颗粒。该制备方法中，因鹿茸、红参为贵重药物，需要单提，其有效成分类激素及人参皂甙对乙醇溶解度较好，故可用乙醇回流提取，而丹参既含有水溶性成分，又合有脂溶性成分，如丹参酮IIA系主要活血化瘀之成分，对醇溶解度好，对水溶解不好，而其水溶性成分亦可溶于乙醇，故可选用乙醇回流提取。以上三味药均可用乙醇提取，故将三者合并用乙醇提取，以减少工艺过程。其提取条件采用正交设计法加以考察确定。在考察中采用三因素三水平的正交设计表，考察指标采用人参总皂甙的提取量，测定方法采用5％香草醛冰酯溶液显色后比色测定，最后提取工艺确定为70％乙醇回流提取2次，每次3小时。由于熟地黄等九位药材有效成分基本上对水都有较好的溶解度，所以将其共煎，用水提取，为缩小成品的体积，又采取了乙醇净化措施。加入可溶性糊精，是为了避免制剂中加入过多的糖分而不利于诸如糖尿病人的服用。
具体实施例方式本发明为一种补髓生血颗粒，该药物组分的重量配比是熟地黄2000-3000g，山萸肉1000-2000g，枸杞子1500-2500g，淫羊藿2000-3000g，黄芪4500-5500g，鸡血藤1500-2500g，白花蛇舌草1500-2500g，鹿茸200-300g，红参1000-2000g，丹参2500-3500g，茯苓1500-2500g。在本实施例中为熟地黄2500g，山萸肉1500g，枸杞子2000g，淫羊藿2500g，黄芪5000g，鸡血藤2000g，白花蛇舌草2000g，鹿茸250g，红参1500g，丹参3000g，茯苓2000g。
将熟地黄、山萸肉、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、黄芪、鸡血藤、白花蛇舌草、茯苓加水煎煮三次，每次加水10倍量，煎煮2.5小时，合并滤液，滤液浓缩至1∶0.5，搅拌下加入95％乙醇使含醇量达70％，放置过夜，滤过得到滤液A备用，另取鹿茸、红参、丹参，加70％乙醇回流提取2次，每次3小时，合并滤液得到滤液B，将滤液B提取液与滤液A合并，水浴回收乙醇，并浓缩至相对密度1.30(80℃热测)的浸膏，加处约1000g糊精，混匀制成软材，过14目筛制粒，80℃烘干，整粒，分装即得，每袋约15g颗粒。
结合实施例对本发明的有益技术效果进一步说明如下1.本发明的的制备工艺简捷易行，能保证组方中各种药材有效成份最大程度地提取出来，适于规模化生产，有良好的社会效益和经济效益。
2.本发明经鉴定证实各有效成份能得以最大程度保留，为该药的临床疗效提供有力保障，同时经毒理学和药效学研究，证实该药使用安全，无毒副作用，可在临床推广应用。
3.在病理学研究中，通过对实验性小鼠再生障碍性贫血的治疗，发现补髓生血颗粒能改善骨髓细胞超微结构，提高骨髓红细胞中内质网的含量，加强细胞解毒功能，恢复核膜结构，对DNA正常代谢起到保护作用。同时提高骨髓造血微环境中上皮样细胞数量，起到支持骨髓造血功能的作用。
4.在对慢性再生障碍性贫血患者红细胞免疫功能影的研究中，发现补髓生血颗粒有改善CAA患者免疫功能的作用，表现在CAA患者疗后R-C3bR、RICR、RNCR、RFER和补体C3均明显升高，而升高的RFIR和CIC在疗后也明显回落。同时疗前升高的IFN-o、TNF-α水平回落到正常水平。
5.实验研究表明，CAA骨髓造血细胞存在细胞凋亡明显特征，在琼脂糖凝胶电泳图上可见到典型DNA梯形构形，这提示CAA确实存在造血细胞过度凋亡现象。
6.对补髓生血颗粒治疗前后CAA造血细胞进行凋亡相关基因表达(bax、C-myc)、原位末端标记凋亡细胞阳性百分率及流式细胞仪Sub-G期百分率检测，并与对照组进行对比后发现疗后C-myc阳性百分率与对照组无显著性差异(P＜0.05)，补髓生血颗粒能不同程度下调凋亡细胞阳性百分率、bax基因阳性表达率以及下调Sub-G期百分率(P＜0.01)，治疗后与对照组比较有显著性差异(P＜0.01、P＜0.05)，这进一步揭示了补髓生血颗粒有明显抑制CAA细胞凋亡的作用。
权利要求
1.一种补髓生血颗粒，其特征是该药物组分的重量配比是熟地黄2000-3000g，山萸肉1000-2000g，枸杞子1500-2500g，淫羊藿2000-3000g，黄芪4500-5500g，鸡血藤1500-2500g，白花蛇舌草1500-2500g，鹿茸200-300g，红参1000-2000g，丹参2500-3500g，茯苓1500-2500g。
2.如权利要求1所提供的一种补髓生血颗粒的制备方法，其特征是将熟地黄、山萸肉、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、黄芪、鸡血藤、白花蛇舌草、茯苓加水煎煮三次，每次加水10倍量，煎煮2.5小时，合并滤液，滤液浓缩至1∶0.5，搅拌下加入95％乙醇使含醇量达70％，放置过夜，滤过得到滤液A备用，另取鹿茸、红参、丹参，加70％乙醇回流提取2次，每次3小时，合并滤液得到滤液B，将滤液B提取液与滤液A合并，水浴回收乙醇，并浓缩至相对密度1.30(80℃热测)的浸膏，加处约1000g糊精，混匀制成软材，过14目筛制粒，80℃烘干，整粒，分装即得，每袋约15g颗粒。
全文摘要
本发明涉及一种补髓生血颗粒及其制备方法，该药物组分的重量配比是熟地黄2000－3000g，山萸肉1000－2000g，枸杞子1500－2500g，淫羊藿2000－3000g，黄芪4500－5500g，鸡血藤1500－2500g，白花蛇舌草1500－2500g，鹿茸200－300g，红参1000－2000g，丹参2500－3500g，茯苓1500－2500g。本发明经过黑龙江中医药大学附属医院血液内科对111例再障的疗效研究和215例再障的生存率及远期疗效的观察，总有效率为79.35％，临床治愈率为28.83％，五年生存率达88％，远期疗效为71.64％。
文档编号A61P7/00GK1471956SQ0313246
公开日2004年2月4日 申请日期2003年6月27日 优先权日2003年6月27日
发明者孙伟正 申请人:孙伟正