专利名称：防治母畜不孕症的中药灌注液的制作方法
技术领域：
本发明一种防治母畜不孕症的中药灌注液，定名为新型中药促孕灌注液，属于防治母畜子宫内膜炎、卵巢静止和持久黄体性不孕症的新型中兽药。
二、技术背景母畜不孕症，在各种母畜有很高的发生率，造成巨大的经济损失。尤其是奶牛的不孕症成为影响奶牛业发展的一大障碍，也是奶牛业经营亏损的重要原因，成为一个主要的世界性经济问题。调查结果表明，由子宫内膜炎引起的不孕症所占的比例最高，其次是卵巢静止和持久黄体。
对于子宫内膜炎的治疗，西兽医主要应用抗生素类和防腐消毒类药物进行子宫冲洗和灌注。这种方法虽有疗效，但须反复使用。而且，药物的刺激会使一些母畜出现疼痛、努责、废食、发热和生产能力下降等现象。同时，频繁使用抗生素会导致某些细菌产生抗药性，不但治疗效果越来越差，而且导致抗菌素的用量越来越大。长期使用抗生素又会增加畜产品中的残留量，带来食品安全问题。
对卵巢静止和持久黄体性不孕症的治疗，西兽医主要采用激素疗法。Braun认为，激素方法很难达到预期效果，在发情周期的不同阶段和卵巢发生囊肿时，垂体前叶对促性腺激素的反应有显著差异。雌激素类药品虽然对中枢神经及生殖道有直接兴奋作用，可以引起母畜表现明显的外表发情征象，但对卵巢无刺激作用，不能引起卵泡发育及排卵；促性腺激素虽然可以促进卵泡发育和排卵，但对卵泡发育波产生不好的环境，使黄体期缩短，发情表现弱或不发情。
再者，激素的毒副作用也不可忽视。Meredith认为，激素制剂已广泛用于治疗不发情，但只是在刺激静止卵巢方面有作用，如卵巢有功能的时候，应用激素就会产生有害的影响。对牛长期应用雌激素或者一次用量过大，可以引起卵泡囊肿或慕雄狂，有时可以引起卵巢萎缩或发情周期停止，甚至使骨盆韧带及其周围组织松弛，而导致阴道或直肠脱出。Refsal研究发现，注射雌二醇或重复注射ACTH可诱发成年不泌乳奶牛的卵巢囊肿，孕酮可引起母犬的子宫蓄脓。
第三，给家畜应用激素制剂，也易造成畜产品中的激素残留。国外已有实验证明，乳、肉类等畜产品中含有一定量的激素时，会危害人类的健康，如己烯雌酚有致癌的危险。国家已明文规定限制某些激素在食品动物中使用。
本课题组1987年研制成功中药促孕灌注液，每1000ml含益母草400g、淫羊藿400g、红花200g。见《中国兽药典·二○○○年版二部》第394页。该药治疗牛马卵巢静止和持久黄体性不孕症效果较好，而且克服了西药的诸多弊端。但其不足之处在于不能治疗子宫内膜炎，而子宫内膜炎又是不孕症中发病率最高的疾病。
发明内容
技术问题 本发明针对现有技术中急需绿色药品和原促孕灌注液治疗范围较窄、不能治疗子宫内膜炎的问题，提供一种既能治疗和预防母畜子宫内膜炎、又能治疗卵巢静止和持久黄体的新型中药促孕灌注液。达到药效可靠，无毒副作用，无药残，保障食品安全的目的。
技术方案 一种防治母畜不孕症的中药灌注液，其特征在于，每1000ml药液的处方量药材为黄柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，红花200g，硼砂100g，元明粉100g。
生产每1000ml药液的工艺流程为用水提醇沉法。将前四味药材饮片，加10倍水煎煮两次，每次1小时，合并煎液，过滤，将滤液浓缩，加入酒精使含醇量达到75％(体积比)，沉淀，抽滤，回收乙醇，加入蒸馏水稀释至1000ml，冲入硼砂、元明粉，搅拌溶解，静置沉淀24小时，精滤，分装，高压灭菌。
有益效果1996～1998年，本研究室在江苏省96农业科技重点攻关项目的资助下开始研究，根据中兽医学理论和不孕症的病理，以原促孕灌注液为基本方，添加善清下焦湿热的黄柏、消肿止痛的硼砂和元明粉组成新方，通过反复比较、调整处方配比，研制成功新型促孕灌注液。新型促孕灌注液既保留了原促孕灌注液的催情促孕效果和其他优点，又增加了防治子宫内膜炎的功效，取得一药能治三种(子宫内膜炎、卵巢静止和持久黄体)发病率最高的不孕症的效果。
药效试验证明(表1～表3)，新型促孕灌注液治疗奶牛子宫内膜炎的总有效率达97.3％、受胎率70.3％，与抗菌素和氯前列烯醇的疗效接近；治疗母猪子宫内膜炎的效果更好，且比用西药疗程短、费用低；预防母猪子宫内膜炎能显著降低发病率、缩短发情间隔；治疗奶牛卵巢静止、持久黄体性不孕症效果确实。推广验证结果表明(表4)，该药对黄牛、猪、犬、羊等母畜的产后乏情和屡配不孕症也有较好的疗效，并能提高猪、犬的产仔率。药理试验证实，该药具有较强的抑菌作用，以杀灭子宫内病原微生物；能适度兴奋子宫，以促进子宫的净化、复原；能调节生殖内分泌激素的平衡，以加速炎症的消退；正是三种作用的协同，形成消炎促孕之功效。
本发明已通过江苏省新兽药审评，与现有技术相比，优点如下1.与原促孕灌注液相比，该药的治疗范围扩大，既能治疗和预防母畜子宫内膜炎、又能治疗卵巢静止和持久黄体，对母畜不明原因的产后乏情和屡配不孕症也有较好的疗效，达到一药多用，有效地防治多种不孕症。
2.与同类西药相比，该药剂由纯中药制成，无毒副作用，无药残隐患，符合绿色药品要求，保障动物源食品安全，而且功效好，治疗费用低；生产无三废，对环境无污染，符合绿色环保的要求。
3.与其他给药方式相比，该药通过宫腔灌注法给药，作用更直接，给药较方便，对动物不会产生不良应激反应。
综上所述，本发明达到了专利中所要求的创新性、科学性和实用性的标准。
具体实施例方式
新型中药促孕灌注液每1000ml药液的处方量药材为黄柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，红花200g，硼砂100g，元明粉100g。
生产每1000ml药液的工艺流程为用水提醇沉法。将前四味药材饮片，加10倍水煎煮两次，每次1小时，合并煎液，过滤，将滤液浓缩，加入酒精使含醇量达到75％(体积比)，沉淀，抽滤，回收乙醇，加入蒸馏水稀释至1000ml，冲入硼砂、元明粉，搅拌溶解，静置沉淀24小时，精滤，分装，高压灭菌。
(一)新型中药促孕灌注液(简称新促孕液)药效试验1.新促孕液治疗奶牛子官内膜炎试验试验方法 按家畜产科学诊断标准，选择子宫分泌物呈粘液脓性或脓性，直肠检查子宫膨大或敏感性差，卵巢硬小或有黄体，发情迟缓或虽发情但屡配不孕，综合诊断为急、慢性子宫内膜炎者列入试验。先后选择47头病牛进行4批对照试验，实验组37头，按直肠把握法每次向子宫内灌注新促孕液30～50ml，隔天用药1次，连用3次为一疗程。对照组10头，分别为空白对照(不用任何药物)2头、等体积生理盐水灌注对照3头、等体积长效抗菌剂(新型氧四环素，江西民星兽药厂生产)灌注对照2头和氯前列烯醇(上海市计划生育科学研究所产品)0.2mg肌肉注射对照2头，用药者均与实验组同步。在每次灌药前先抽取少量子宫分泌物观察其肉眼变化(并进行细菌计数佐证疗效)，同时直肠检查卵巢、子宫的状态。以后连续观察3个情期，记录发情配种受孕情况。按以下标准综合判定其临床疗效。
最终有效(/痊愈并受孕)用药后病牛子宫粘液变清，子宫位置、大小和敏感性恢复正常，卵巢活动，黄体消退，明显发情，经配种后在3个情期内受胎。
临床痊愈临床症状显著改善，发情明显，配种，但因其他疾病或条件的影响在3个情期内未能受胎。
总有效率＝最终有效率+临床痊愈率无效临床症状无明显改善，或休情时间超过3个情期。
试验结果 实验组37头，用药后子宫粘液和子宫的大小、位置、敏感性较快恢复正常，卵巢活动，有黄体的一般在用药1～2次后消退，发情配种。37头病牛痊愈并受胎26头，占70.3％；临床痊愈10头，占27.0％，总有效率97.3％(子宫分泌物细菌计数结果证实细菌数很快下降动近零)。空白对照组2头均无效。生理盐水对照组3头(用药前症状稍轻，生产单位为减少损失)，用药后2头无效、1头临床痊愈。抗菌素对照组3头，用药后2头痊愈并受胎、1头临床痊愈。氯前列烯醇对照组2头，用药后痊愈并受胎、临床痊愈各1头。由此表明新促孕液对奶牛子宫内膜炎有较好的疗效，与抗菌素和氯前列烯醇接近。(表1)。
2.新促孕液治疗母猪子宫内膜炎试验试验方法 动物选自连云港市禽蛋开发公司种猪场3～5胎次经产种母猪，品种有二花脸、新梅山、纯长白、长约克。选择子宫分泌物呈粘液脓性或脓性，并有明显的全身症状(体温升高，少食或不食)的12头病猪列入试验。随机分出9头为实验组，每次向子宫内灌注新促孕液10～15ml，隔天灌药一次，连用三次为一疗程。
给药方法将试验猪前低后高保定，用0.1％新洁尔灭溶液清洗外阴后，将消毒后的橡皮导管插入子宫颈内，用无菌注射器抽取新促孕液10～15ml，接上导管注入子宫，然后注入适量生理盐水以冲洗注射器和导管中残留的药液。然后抽出导管，堵住猪外阴部让其站立活动5分钟以上，使药液充分充满子宫腔，最后解除保定。
3头为对照组，按本地区常规方法用西药治疗，即先用0.3％高锰酸钾溶液冲洗子宫，排尽消毒液后，灌入青霉素320万单位、链霉素200万单位，隔两天冲洗、灌药一次，同时每天两次肌肉注射青霉素800万～1200万单位、链霉素600万～800万单位，逐日观察症状的变化，比较两组康复时间和治疗成本。
试验结果 12头子宫内膜炎病猪治疗前体温在38.7～40.8℃之间，少食或不食；其中4头子宫分泌物呈粘液脓性，8头呈脓性。实验组9头用中药灌注一次后症状明显减轻，体温下降到38.5～39.5℃，停食者开始吃食，少食者食量增加；子宫分泌物开始减少、性状改善。用药两次后2头病猪康复，疗程3天；其余7头体温基本恢复正常，食量增加，子宫分泌物很少。用药三次后病猪全部康复，疗程5天。9头病猪均在康复后17～48天内发情、配种，总有效率100％，其中7头均在一情期受胎，受胎率77％。西药对照组3头随着用药次数的增加症状逐步减轻，共子宫冲洗、抗菌素灌注2次，肌肉注射抗菌素5天，6～7天后康复，疗程6～7天，其中2头在一情期受胎，受胎率66％(表2)。从治疗成本来看，用中药花费15元左右，西药需70元左右。由此可见，新促孕液对子宫内膜炎有较好的疗效，且比西药治疗疗程缩短，省时省力省钱。
3.新促孕液预防母猪子官内膜炎的效果观察试验方法 选择上一胎次有发情延迟和子宫内膜炎病史的12头母猪，于产后12小时第一次灌药，以后隔天灌药一次，连续给药三次，观察用药后子宫内膜炎的发生率、发情间隔(分娩至发情时间)和受孕情况，并与自身上一胎次的发病率和发情间隔进行比较。
试验结果 预防给药的12头母猪，仅1例在用药一次后出现子宫内膜炎症状，但此例经后两次用药结束后迅速康复；而往常本地母猪产后子宫内膜的发病率大多在25％以上，可见新促孕液能够明显降低子宫内膜炎的发病率，有较好的预防子宫内膜炎的效果。12头母猪前一胎次的发情间隔在16～130天，平均50.75±34.57天；用药后的发情间隔除1头延长4天外，其余11头均缩短到10～49天，总平均缩短到24.7±12.58天；后者较前者极显著(P＜0.01)提前，平均提前26.58±27.88天。对黑猪，一般可提早10～15天；而对纯长白猪或长约杂交一代，提前效果尤为明显，最好的可提早94天。12头母猪均在一情期配种受孕，受胎率100％。表明新促孕液能够显著缩短母猪的发情间隔，具有显著的催情促孕效果(表3)。
4 新促孕液治疗奶牛卵巢静止、持久黄体的效果验证选择4头空怀、乏情8～9个月的卵巢静止病牛和3头空怀8～10个月、乏情4～10个月的持久黄体病牛，按促孕灌注液的治疗方案给予新促孕液，即一次向子宫内灌注新促孕液30～50ml，观察10天未见发情者再灌注1～2次，记录配种受孕情况，验证新促孕液治疗奶牛卵巢静止、持久黄体的疗效。
试验结果 4头卵巢静止病牛用药后均发情配种受孕。其中2头仅用药1次，分别在用药后第4、6天发情；1头用药2次，在第二次用药后第5天发情，这3头经配种后在第一情期受胎；另1头用药4次，在第四次用药后40天发情，第一情期配种后出现返情，再次配种后在第二情期受胎。3头持久黄体病牛用药前空怀8～10个月，分别乏情4、8、10个月，均用药2次，分别在用药后第6、10、18天发情，经配种后均在第一情期受胎。此结果表明，新促孕液对卵巢静止、持久黄体的疗效亦较确实。
(二)推广验证新促孕液研制期间，先后在江苏、安徽等地试用验证。据98年3月到98年9月反馈资料表统计，用新促孕液治疗各种经产母畜不孕症244例，其中奶牛87头，黄牛35头，猪113头，羊4只，犬7只。牛的受胎率在75％以上，猪的受胎率稍高于牛(部分结果见表4)。其中有用其他药治疗近3年未愈的脓性子宫内膜炎病牛、连配3次未孕的母猪，用新促孕液治疗后均治愈。有三个单位反映能明显提高猪和犬的产仔率。
此后，应用户要求，该药在广东省农科院种猪场、宁夏巴浪湖农场、四川成都凤凰山奶牛场、安徽濉溪县兽医院、南京农业大学种公牛站、江苏无锡市兽医站、常州、江阴、苏州等地进一步试用示范，普遍反映效果可靠。
(三)新型中药促孕灌注液药效总结经过临床试验和多年多点推广验证，证明新型中药促孕灌注液药效可靠、适应症较广、适用母畜种类较多，既能治疗和预防母畜子宫内膜炎，又能治疗卵巢静止和持久黄体，治疗奶牛子宫内膜炎的总有效率达97.3％、受胎率70.3％，与抗菌素和氯前列烯醇的疗效接近；治疗母猪子宫内膜炎的效果更好，且比用西药疗程短、费用低；预防母猪子宫内膜炎能显著降低发病率、缩短发情间隔；对奶牛的卵巢静止和持久黄体性不孕症、以及黄牛、猪、犬、羊等母畜的产后乏情和屡配不孕症也有较好的疗效，并能提高猪、犬的产仔率。本药剂经过多年的示范应用，其效果得到了各地使用者的肯定。
表1 新促孕液治疗奶牛子宫内膜炎的疗效
表2 新促孕液治疗猪子宫内膜炎的疗效
*第一次用药当天记为d0，以后类推，第二、三次用药分别在d2、d4。
表3 母猪产后预防灌注新促孕液前后两胎次的发情间隔(天)
*与用药前相比P＜0.01。
表4. 98年3月到98年9月部分反馈资料表统计
权利要求
1.一种防治母畜不孕症的中药灌注液，其特征在于，每1000ml药液的处方量药材为黄柏600g，益母草500g，淫羊藿500g，红花200g，硼砂100g，元明粉100g。
2.权利要求1所述一种防治母畜不孕症的中药灌注液的制备方法，其特征在于，将前四味药材饮片加10倍水煎煮两次，每次1小时，合并煎液，过滤，将滤液浓缩，加入酒精使含醇量达到75％(体积比)，沉淀，抽滤，回收乙醇，加入蒸馏水稀释，冲入硼砂、元明粉，搅拌溶解，静置沉淀24小时以上，精滤，分装，高压灭菌。
全文摘要
本发明为一种防治母畜不孕症的中药灌注液，定名为新型中药促孕灌注液。组分药主要有黄柏，益母草、淫羊藿、红花、硼砂和元明粉等。临床试验证明，本方治疗奶牛子宫内膜炎的总有效率97.3％，受胎率70.3％，与抗菌素和氯前列烯醇的效果接近；治疗母猪子宫内膜炎的效果更好，且比用西药疗程短、费用低；预防母猪子宫内膜炎，能显著降低发病率、缩短发情间隔；对奶牛的卵巢静止和持久黄体性不孕症、以及黄牛、猪、犬、羊等母畜的产后乏情和屡配不孕症也有较好的疗效，并能提高猪、犬的产仔率。该药无毒副作用，无食品安全隐患，符合绿色药品要求，已通过江苏省新兽药审评。
文档编号A61P15/08GK1544004SQ20031010627
公开日2004年11月10日 申请日期2003年11月13日 优先权日2003年11月13日
发明者胡元亮, 张宝康, 刘家国, 刘建礼, 宋大鲁 申请人:南京农业大学