用于降低胆固醇的组合物的制作方法

专利名称：用于降低胆固醇的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于降低胆固醇和治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的含有茶黄素类化合物、茶红素类化合物(thearubigins)、或者它们的混合物的组合物。特别地，本发明直接针对的是通过给予抗高脂血和/或抗高胆固醇有效量的茶黄素类化合物、茶红素(thearubigin)、或者它们的混合物以降低哺乳动物胆固醇或治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的方法。理想的组合物含有惰性的可接受的稀释剂或载体以及活性成分，该活性成分选自茶黄素、茶黄素的没食子酸酯或它们的混合物，其中茶黄素和茶黄素的没食子酸酯从茶叶中得到。
背景技术：
因为高脂血症和高胆固醇血症以及心血管疾病之间存在着已知的联系，因此人们在降低、治疗或调节体内胆固醇水平方面的追求是持续不断的。一个普及的药物，Lipitor，是处方指定的降低高脂血人脂质含量的药物。尽管有Lipitor的成功，但是人们仍希望找到一种可广泛得到的天然的可替换的处方药。
鉴于此，已有建议称茶的摄入可能有利于治疗或预防心血管疾病。绿茶叶(已采摘)中含有被认为是儿茶素的无色的多酚类化合物。绿茶叶中四种主要的儿茶素是表儿茶素(EC)和表没食子儿茶素(EGC)以及这些儿茶素的没食子酸酯(有一个没食子酸(GA)残基)、表儿茶素-3-没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)。据信这些儿茶素对降低血胆固醇和减少低密度脂蛋白是有用的，尽管临床数据证明作用较小。
在氧化发酵绿茶叶生产红茶的过程中(例如通过固态发酵生产红茶叶或者通过淤浆发酵生产红茶提取物)，儿茶素类化合物经氧化生物转化，从醌转化成被认为是茶黄素类化合物(TF)的二聚化合物以及被认为是茶红素类化合物(TR)的更高分子量的化合物。TF和TR使红茶浸液及其产品呈现橙色和棕色，而且对已制得的茶起收敛和赋形作用。TR的分子量比TF大，颜色比TF深。氧化聚合反应是由存在于叶子中的多酚氧化酶和/或过氧化物酶介导的生化氧化作用和活性种的化学反应的组合反应。TF包含茶黄素以及相关的没食子酸酯的衍生物(茶黄素的没食子酸酯)现在已经发现从茶中得来的茶黄素类化合物，而且特别是茶黄素以及茶黄素的没食子酸酯在治疗高脂血症和高胆固醇血症方面是有用的。相应地，含有抗高血脂症和抗高胆固醇血症有效量的选自于茶黄素以及茶黄素的没食子酸酯的茶黄素类化合物的组合物相信可以提供一个Lipitor和其他处方药的天然替代物。

发明内容
本发明的范围仅由所附的权利要求书所定义，而且在任何程度上都不会被概述中的陈述所影响。作为介绍，一种治疗哺乳动物中高脂血症和/或高胆固醇血症的方法包括给予哺乳动物抗高脂血症和/或抗高胆固醇血症有效量的茶黄素类化合物、茶红素类化合物、以及它们的混合物。在这点上本发明构思了一个抑制胆固醇的合成和/或减少胆固醇进而治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的方法。
在本发明的第二方面，提供了一种用于治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的中性药物组合物，该组合物包含抗高脂血症和/或抗高胆固醇血症有效量的茶黄素类化合物、茶红素类化合物、以及它们的混合物。该组合物可进一步包含中性药物可接受的稀释剂或载体。
人们相信茶红素类化合物可能对治疗高脂血症和/或高胆固醇血症有用。由此，人们相信茶红素类化合物可被单独使用或与茶黄素类化合物联合用于治疗高脂血症和/或高胆固醇血症。
在本发明的另一方面，提供了一种用于治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的药盒，它包含抗高脂血症和/或抗高胆固醇血症有效量的茶黄素类化合物、茶红素类化合物或者它们的混合物。特别地，茶黄素类化合物选自茶黄素、茶黄素的没食子酸酯或它们的混合物。


图1表示在肝细胞胆固醇释放反应中HepG2细胞对茶黄素类化合物和Lipitor的剂量特异反应。
图2表示在肝细胞胆固醇释放反应中HepG2细胞对茶黄素、茶黄素的没食子酸酯、茶黄素类化合物以及儿茶素的剂量特异反应。
具体实施例方式
现在已经发现从茶中得到的茶黄素类化合物在治疗高脂血症和/或高胆固醇血症时是有效的。相应地，在本发明一个方面，提供了一种治疗哺乳动物中高脂血症和/或高胆固醇血症的方法，包括给予哺乳动物抗高脂血和/或抗高胆固醇血症有效量的茶黄素类化合物、茶红素类化合物以及它们的混合物。在这方面，我们提供了一种用于治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的组合物，该组合物包含有效量的茶黄素类化合物、茶红素类化合物以及它们的混合物。
术语“茶黄素类化合物”集中描述了那些通过具有二或三羟基化的B环的茶叶儿茶素类的酶氧化和和缩合作用产物形成的化合物。例如，术语“茶黄素类化合物”包括茶黄素及其没食子酸衍生物，也就是茶黄素的没食子酸酯。术语“茶黄素的没食子酸酯”包含式[I]的这些化合物 其中R1，R2，R3各自是OH或式[A]的化合物 理想的茶黄素的没食子酸酯包括式[II]的这些化合物
其中R1和R2各自是OH或式[A]的化合物。
更理想的茶黄素的没食子酸酯包括式[III]的化合物 其中R1和R2各自是OH或式[A]的化合物。更理想的茶黄素的没食子酸酯是茶黄素-3-没食子酸酯。
式[I]的茶黄素类化合物含有多个不对称碳原子中心，因此它们能以各种不同的立体异构形式存在。例如，连在茶黄素四羟基吡喃环的手性的2-和3-位置的取代基可以具有彼此相对的以及相对于连接在茶黄素别处的其他手性中心的其他取代基的顺式-或反式-的立体化学。相应地，除非具体标明，式[I]的茶黄素类化合物包括所有可能的旋光纯单个立体异构体及其所有可能的混合物。
一个理想的方法包括给予抗高脂血症和/或抗高胆固醇血症有效量的茶黄素类化合物。更理想地，该方法包括给予抗高脂血症和/或抗高胆固醇血症有效量的茶黄素类化合物，它选自于茶黄素、茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3′-没食子酸酯、茶黄素-3，3′-二没食子酸酯以及它们的混合物，其中茶黄素类化合物从茶中得到。
茶红素类化合物是那些比茶黄素类化合物更广度地氧化和聚合的化合物，它们有很宽的分子量范围，并且其特性未被充分描述。一个建议的结构如下所示 其中R1，R2和R3各自是OH或式[A]的化合物。
据信茶红素类化合物可能在治疗高脂血症和/或高胆固醇血症时有效。相应地，本发明一方面可以包括提供治疗高脂血症和高胆固醇血症有效量的茶红素类化合物。本发明也构思了茶红素类化合物可以单独使用或与茶黄素类化合物，特别是从茶提取得到的茶黄素和茶黄素的没食子酸酯联用。
如上所注明的，茶黄素类化合物和茶红素类化合物理想地是从茶中得到。在本发明的说明书和权利要求中所用的术语“茶”并不限于任何特定类型的茶，而是指通常从茶叶例如新鲜茶叶、未发酵的茶叶、半发酵的茶叶、普通级的绿茶、速溶绿茶，以及红茶中获得的材料。相应地，在本说明书和权利要求中所用的术语“茶”就是指从茶树(Camellia sinsensis)或普洱茶(Camellia assamica)以及它们的混合物中得到的材料。
据信任何为本领域熟练人员所知的从茶中获取或得到茶黄素类和/或茶红素类化合物的适宜的方法都是可以使用的。在这点上，获取或得到的方法包括以任一适宜的方式将茶黄素类和茶红素类化合物分离出来。茶黄素类和/或茶红素类化合物可以从Nashai商业得到，而且据信茶黄素类和茶红素类化合物可以某种方式(控制儿茶素到茶黄素的氧化以及限制儿茶素到茶红素的氧化)从绿茶中得到。
本发明考虑茶黄素类和茶红素类化合物可以任一适合于向哺乳动物提供有效量的化合物的方式给药。相应地，根据本发明，所有适合于经口给予药物或中性药物的口服剂型都可考虑使用。根据本发明，所使用的代表性的口服剂型包括但不限于丸剂、胶囊、凝胶胶囊、凝胶片剂、饮料、口香糖、咀嚼片、锭剂、粘性凝胶、糖锭剂、牙膏、牙植入片、含嗽凝胶、嗽口剂等等及其组合。目前优选的口服剂型包括丸剂、胶囊、凝胶胶囊、凝胶片剂、咀嚼片以及糖锭剂。
药物或中性药物组合物可以例如片剂或胶囊的形式存在，片剂或胶囊可用药学上或中性药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂例如粘合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)以常规方法制备。片剂可以本领域所熟知的方法包衣。
用于口服给药的组合物也可以做成活性化合物的控释剂型。由此，本发明的活性化合物可以配制成分散态微粒的控释粉末，该分散态微粒可以容易地配制成液体的形式。缓释粉末包含含有活性成分的粒子和任选地带有至少一种无毒聚合物的赋形剂。
粉末可分散或混悬于液态载体中并且在有效期内保持其缓释特性。这些分散体或混悬体既有化学稳定性而且有稳定的溶解速率。该粉末可包含含有聚合物的赋形剂，其中的聚合物可以是可溶的、不可溶的、可渗透的、不可渗透的或可生物降解的。聚合物可是多聚物或共聚物。聚合物可以是天然或合成的聚合物。天然聚合物包括多肽(例如，玉米蛋白)、多糖(例如，纤维素)以及海藻酸。
如果希望的话，本发明的组合物可以置于包装物或分散装置中，该装置可以包含一个或多个含活性成分的单位剂型。包装物可以含有例如金属或塑料衬底，比如泡罩。包装物或分散装置可以附有给药说明本发明还提供了实施本发明治疗方案的药盒。该药盒包含一个或多个含有以药物或中性药物可接受的形式存在的治疗或预防有效量的茶黄素类和/或茶红素类化合物的容器。本发明的小瓶或药盒中的茶黄素类或茶红素类化合物可为药物或中性药物可接受的溶液形式，例如，与灭菌生理盐水、葡萄糖溶液、或缓冲溶液、或其他药物和中性药物的可接受的灭菌液体相结合的形式。说明书可以打印(例如，打印在纸上)和/或提供在一种电子可读的介质(例如软盘、CD-ROM、DVD-ROM、压缩软盘、录像带、录音带以及其他等等)中。可替换地，说明书可以通过指导使用者上因特网网站(例如，药盒的生产商和经销商指定的网站)和/或通过电子邮件来提供。
在本发明的一个方面，本发明组合物可以被用作治疗高脂血症和/或高胆固醇血症的食品或营养品的添加剂。在这方面，活性茶黄素类和/或茶红素类化合物在此处所描述的条件下的每日总剂量的范围通常为1mg至800mg，以均分剂量非肠道或口服给药。活性茶黄素类或茶红素类化合物的优选的每日总剂量为25mg到400mg。
在另一个实施方案中，可以被用作食品添加剂的缓释制剂的每日总剂量为1mg到800mg活性茶黄素类和/或茶红素类化合物，一天给药两次(例如早晚各一次)，每次剂量0.5mg到400mg。该剂型和组合物可以包含前述任一种形式和组合物。在优选的实施方案中，制剂是片剂、胶囊、凝胶或液体可溶解的粉末。
下面的实施例说明但不限制本发明。
实施例实施例I按照Dashti，N.等人在《脂质研究杂志(J.Lipid Res.)》第28卷第423-436页(1987年)和Mohammadi，A.，等人在《动脉硬化、血栓、血管生物学(Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.)》，第185期第783-793页(1998年)中描述的步骤，以HepG2肝细胞作为模型研究对胆固醇合成的抑制。Lipotor在甲醇/缓冲液中制备以溶解阿托伐他汀(Atorvastatin)，即Lipotor中的活性成分(40mg活性成分/600mg片)。分泌的胆固醇和胆固醇酯的量应用荧光指示剂AmplexRed从醋酸盐饱和的肝细胞培养基中检测。图1显示肝细胞对茶黄素和作为参照的Lipotor的剂量特异性反应，由图可知，在相同的重量基础上茶黄素类似或稍好于Lipotor。注意Lipotor所使用的重量含6.7％的活性成分(阿托伐他汀/每片)。相应地，很明显0.05mg/ml的茶黄素可以达到30％的抑制效应，这相当于0.2mg/ml含有0.014mg/ml阿托伐他汀的Lipotor。
实施例II在实施例I中用过的相同的胆固醇抑制模型用于检测茶黄素类化合物，包括茶黄素和茶黄素的没食子酸酯对胆固醇的合成抑制。表I表示用于测试的原料和份量
表I

绿茶提取物含有22％的茶黄素类化合物，其中60％是茶黄素-3，3′-二没食子酸酯；30％是茶黄素-3-没食子酸酯；以及10％是茶黄素。绿茶提取物还包含57.3％的儿茶素，其中45％是表没食子儿茶素没食子酸酯；3.5％是儿茶素；以及未确定的剩余成分。图2显示了肝细胞对测试原料的剂量特异性反应。出人意料地发现茶黄素-3-没食子酸酯提供了大部分的胆固醇抑制活性。
前面已经提供了详细描述和实施例作为解释和说明，并非有意限制附加的权利要求的范围。目前优选的实施方案中在此处的很多变化对本领域的普通熟练人员来说是显而易见的，而且在附加的权利要求和它们的等价物的保护范围之内。
权利要求
1.一种用于减少哺乳动物中的胆固醇的组合物，含有有效量的茶黄素类化合物。
2.权利要求1的组合物，其中茶黄素类化合物选自于茶黄素、茶黄素的没食子酸酯、以及它们的混合物。
3.权利要求2的组合物，其中茶黄素的没食子酸酯选自于茶黄素单没食子酸酯、茶黄素二没食子酸酯以及它们的混合物。
4.权利要求2的组合物，其中茶黄素的没食子酸酯选自于茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3′-没食子酸酯、茶黄素-3，3′-二没食子酸酯以及它们的混合物。
5.权利要求2的组合物，其中茶黄素的没食子酸酯是茶黄素-3-没食子酸酯。
6.权利要求1至5的组合物，其中茶黄素类化合物从茶中得到。
7.权利要求6的组合物，其中茶黄素类化合物的量的范围为1mg至800mg。
8.一种用于治疗哺乳动物高脂血症的组合物，它含有一种有效量的抗高脂血症的化合物，其选自于茶黄素、茶黄素的没食子酸酯以及它们的混合物。
9.权利要求8的组合物，其中茶黄素的没食子酸酯选自于茶黄素单没食子酸酯、茶黄素二没食子酸酯、以及它们的混合物。
10.权利要求8的组合物，其中茶黄素的没食子酸酯选自于茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3′-没食子酸酯、茶黄素-3，3′-二没食子酸酯、以及它们的混合物。
11.权利要求8的组合物，其中茶黄素的没食子酸酯是茶黄素-3-没食子酸酯。
12.权利要求8至11的组合物，其中茶黄素类化合物从茶中得到。
13.权利要求12中的组合物，其中抗高脂血症的化合物的量的范围为1mg至800mg。
全文摘要
一种治疗哺乳动物中胆固醇水平升高、高脂血症和/或高胆固醇血症的方法，包括给予有效量的茶黄素类化合物，茶红素类化合物以及它们的混合物。茶黄素类化合物包括茶黄素和茶黄素的没食子酸酯，特别是那些从茶中得到的。没食子酸酯包括茶黄素－3－没食子酸酯、茶黄素－3′－没食子酸酯、以及茶黄素－3，3′－没食子酸酯。
文档编号A61K36/82GK1498616SQ20031012033
公开日2004年5月26日 申请日期2003年11月4日 优先权日2002年11月4日
发明者H·罗-施密德特, J·B·罗夫斯, H 罗-施密德特, 罗夫斯 申请人:通达商业集团国际公司