专利名称：抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物技术领域的抗体制剂的制备方法，具体是一种抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法。
背景技术：
仔猪以腹泻为主的肠道细菌性传染病的病原主要为肠毒性大肠杆菌(ETEC)和沙门氏菌。特点发病急、流行广、死亡率高，严重阻碍养猪业的发展。生产上主要使用大肠杆菌多价基因工程苗和沙门氏菌苗免疫经产母猪，通过初乳保护仔猪免遭侵害，但效果较差。治疗采用抗菌药物，易使消化道正常菌群受到破坏或产生耐药性菌株，同时由于致害因子主要为肠毒素，治疗效果不佳。自1992年Yokoyama等发现卵黄抗体能治疗仔猪大肠杆菌性腹泻以来，卵黄抗体已广泛应用于消化道疾病的防治中。卵黄中的IgY耐消化道屏障，性质稳定。
经对现有技术的文献检索发现，中国发明专利申请号03117507，发明名称抗仔猪黄痢白痢病原菌卵黄抗体及其制备和应用，公开号1438246，该专利已研制出了抗仔猪黄痢、白痢病原菌的卵黄抗体，但是需将卵黄抗体提纯后使用，并为单一制剂。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法，使其利用大肠杆菌多价基因工程苗和自制的沙门氏菌疫苗通过多次免疫，剂量呈梯度增加，获得高效价的特异性卵黄抗体，将具有生物活性的复合卵黄抗体制备成成本低、活性高、利于保存和使用的制剂。
本发明是通过以下技术方案实现的，首先制备沙门氏菌疫苗，然后利用大肠杆菌K88、K99、987P多价基因工程苗和制备的沙门氏菌疫苗通过强化免疫，剂量呈2n-1(n为免疫次数序号)梯度增加，前后三次，每次间隔10天，最后一次免疫后10天收获高免卵。无菌获取卵黄，用0.01M无菌磷酸盐缓冲液稀释、0.5％羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸盐处理，抽滤液喷雾干燥，将粉剂封装保存。其IgY的得率达90％以上，活性不受任何影响。
所述的制备沙门氏菌疫苗，具体如下分离猪致病性沙门氏菌，在肉汤中培养48小时，按0.4％加入甲醛，37℃作用24小时，经无菌检验后，按1∶1比例与无菌油相混合乳化后即为沙门氏菌疫苗。
本发明的基本原理是利用家禽作为生物反应器生产各类生物活性物质。当供试鸡进行免疫后产生特异性抗体，血液中的抗体逐渐进入卵黄并蓄积。该抗体稳定，动物口服后能抵抗胃酸的破坏，活性物质封闭胃肠道中的特异性病原入侵受体或直接中和特异性病原体或毒素，从而达到预防和治疗的目的。
本发明具有显著的有益效果，由上述疾病引起的仔猪腹泻，可直接给仔猪饲喂本发明制备的产品，治愈率可达90％以上；也可添加于饲料中用于预防细菌性腹泻。该方法成本低，见效快，无副作用，不会产生耐药性菌株。
具体实施例方式
以下提供本发明实施例饲养清洁级经产蛋鸡，第一次先免疫大肠杆菌K88、K99、987P多价基因工程苗和自制的沙门氏菌疫苗疫苗1头份。间隔10天进行第二次免疫，免疫剂量均为2个头份。免疫10天后进行第三次免疫，免疫剂量均为4个头份。第三次免疫结束后10天，经卵黄抗体效价测定后(平板凝集试验效价达1∶40以上)收集免疫卵，无菌获取卵黄，用0.01M无菌磷酸盐缓冲液稀释、0.5％羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸盐处理，抽滤液喷雾干燥，将粉剂封装保存。其IgY的得率达90％以上。
对仔猪由于本病引起的腹泻，可直接饲喂本发明产品用于治疗，每天二次口服制剂，连用1周，能有效控制仔猪腹泻或引起的死亡，腹泻的治愈率90％以上，或作为仔猪饲料的添加剂用于预防，或用于治疗仔猪腹泻的药物中。
权利要求
1.一种抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法，其特征在于，首先制备沙门氏菌疫苗，然后利用大肠杆菌K88、K99、987P多价基因工程苗和制备的沙门氏菌疫苗通过强化免疫，剂量呈2n-1梯度增加，前后三次，每次间隔10天，最后一次免疫后10天收获高免卵，无菌获取卵黄，用无菌磷酸盐缓冲液稀释、羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸盐处理，抽滤液喷雾干燥，将粉剂封装保存。
2.根据权利要求1所述的抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法，其特征是，所述的制备沙门氏菌疫苗，具体如下分离猪致病性沙门氏菌，在肉汤中培养48小时，按0.4％加入甲醛，37℃作用24小时，经无菌检验后，按1∶1比例与无菌油相混合乳化后即为沙门氏菌疫苗。
3.根据权利要求1所述的抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法，其特征是，所述的无菌磷酸盐缓冲液为0.01M。
4.根据权利要求1所述的抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法，其特征是，所述的羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸盐为0.5％。
全文摘要
一种生物技术领域的抗仔猪细菌性疫病复合卵黄抗体制剂的制备方法，首先制备沙门氏菌疫苗，然后利用大肠杆菌K
文档编号A61P31/12GK1651083SQ200410084559
公开日2005年8月10日 申请日期2004年11月25日 优先权日2004年11月25日
发明者徐建雄, 刘永德, 叶陈梁 申请人:上海交通大学