防治番茄早疫病的生防菌株及其应用的制作方法

防治番茄早疫病的生防菌株及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种防治番茄早疫病的生防菌株及其应用，属于植物保护【技术领域】。防治番茄早疫病的生防菌株，其分类命名为地衣芽孢杆菌（Bacillus?licheniformis）XGY13-2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC?NO.8974；XGY13-2菌株在发酵培养液于30℃180rpm摇床振荡培养8-9d，制备得到生防菌剂，活菌总浓度为1×109-1×1010CFU/mL，稀释50-200倍后在番茄种植时浸种处理，或者在移栽时进行灌根处理，对番茄早疫病的防效在68.05%。
【专利说明】防治番茄早疫病的生防菌株及其应用

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种防治番茄早疫病的生防菌株及其应用，属于植物保护【技术领域】， 专用于番茄早疫病的生物防治。

【背景技术】
[0002] 番茄是一种重要的蔬菜作物，其适应范围广，广泛分布于世界各地，被列为全世界 产量最高的30种农作物之一。其产量高，营养丰富，富含维生素类和糖类，既可生食又可 做加工之用，因而深受人们喜爱。番茄早疫病是由茄链格孢菌JAeraaria (E11 & Mart) Jones et Grout侵染导致的常发病害，是世界性土传病害，为番爺的主要病害之一。 在美国、澳大利亚、以色列、印度、希腊等地发病率都很高，严重时可使产量损失35-78%。70 年代后期，80年代以来在我国黑龙江、吉林、山东、河北、山西、广东、广西、湖北、江苏、上 海、浙江、湖南和四川等大部分地区普遍发生，危害年趋严重，成为露地、保护地番茄生产中 的重要病害。该病可以引起落叶、落花、落果和断枝，对产量影响很大，严重时可以使产量损 失50%以上，而且因果实内含有毒素，会使人体患有血液病，影响人体健康。番茄早疫病给 人们生产和健康带来了不可低估的影响。
[0003] 目前番茄早疫病的防治主要依赖化学药剂，但易造成环境和食品的污染，同时也 易诱发病原菌的抗药性，而关于番茄早疫病害的生物学防治，国内目前仅仅局限于拮抗 微生物实验室简单的筛选工作。在国外已登记的数百种生物农药目录中，只有 QWT713对番茄早疫病害有一定的防治作用。
[0004] 当前，农业已进入一个新的发展阶段，面临着结构调整、产业升级、生态环境治 理、提高产品质量安全性和市场竞争的严峻挑战，生物防治是植物病虫害防治必不可少的 措施，也迫切需要开发并商业化生产对番茄早疫病防效良好的生物农药。


【发明内容】

[0005] 针对现有技术中没有对番茄早疫病有较高防效的生防制剂的现状，提供开发一种 防治番茄早疫病的单一生防菌菌株及其应用，该菌剂对这种重要土传病害的防效可以达到 60%以上。
[0006] 本发明采用的技术方案为： 一种防治番茄早疫病的生防菌株，其分类命名为地衣芽孢杆菌UaciBm XGY13-2,于2014年3月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编 100101 菌种保藏号为 CGMCC N0. 8974。
[0007] 所述防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应用。
[0008] 所述的防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应用，将防治番茄早 疫病的生防菌株按1%(ν/ν)的接种量接种于发酵培养液中，于30°C 180 rpm摇床振荡培 养8-9d，制备得到生防菌剂，然后浸种或者灌根使用。
[0009] 所述生防菌剂中活菌总浓度为1 X 109 -1 X 101° CFU/mL。
[0010] 所述发酵培养液为：蔗糖2g/L、玉米粉20g/L、黄豆粉10g/L、磷酸氢二钾0. 5g/L、 七水硫酸镁0. 2g/L、酵母膏0. 4g/L、碳酸钙lg/L、氯化铁0. 005g/L。 toon] 上述生防菌剂在防治番茄早疫病方面的应用方法为：得到的生防菌剂稀释 50-200倍后在番茄种植时浸种使用至少半小时，或者在移栽时以每亩9升进行灌根处理。
[0012] 有益效果 本发明的优点和积极效果表现在：本发明是专门针对番茄早疫病开发的生防制剂。本 发明有利于番茄的无公害生产，减少甚至替代其他化学农药的使用，节省农民开支。提高番 茄的产量和品质，促进农民增收。
[0013] 温室实验表明：该菌制剂能显著降低番茄早疫病的发生。该菌剂可以稀释50-200 倍后在番茄种植时浸种处理幼苗，或者在移栽时灌根处理。在温室条件下对于番茄早疫病 的防效可以达到68.05%。

【具体实施方式】
[0014] 实施例1防治番茄早疫病的生防菌株的筛选方法 防治番茄早疫病的生防菌株，地衣芽孢杆菌XGY13-2,为 2013年在江苏南京病田土壤中分离得到，筛选过程如下： 于2013年7月，在江苏省南京市溧水区番茄早疫病发病严重的地块采集样品。采用 五点采样法，每点间隔至少10 m。每点收集三株健康植株的根围土，带回实验室进行分离。
[0015] 称取根围土 3 g，分别加入到27 mL灭菌水中（含灭菌玻璃珠)，180 rmp摇 床振荡0.5 h，静置5 min，得到ΚΓ1稀释液，吸取上清液0.1 mL依次稀释，分别取 10_4ΚΓ6三个梯度0. 1 mL涂LB平板，28° C培养48 h，选取菌落数在50300之 间的平板，计数并且挑取所有菌落，纯化，_70°C，40 %甘油保存备用。
[0016] 用LB平板活化分离纯化的菌株，牙签挑取处于生长盛期的菌落点于含青枯病原 菌的YGPA平板上，每板5点，间距相等，30°C培养48 h，观察并且记录结果，分别量取 额颃菌内径以及额颃圈外径。根据内外径之差划分为三个等级1 一3mm, 3一6mm, 6mm以上。 其中LB平板培养基的配方为：酵母粉5g/L、胰蛋白胨10g/L、氯化钠10g/L。
[0017] 按照平板拮抗活性、蛋白酶活性、几丁质酶活性、纤维素酶活性、葡聚糖酶活性以 及产嗜铁素活性，采用赋值法，选择出综合得分较高菌株，通过温室试验最终筛选出防治效 果最好的XGY13-2。
[0018] 实施例2菌株鉴定 防治番茄早疫病的生防菌株，地衣芽孢杆菌/icAmi/biTBidXGYU-〗的生 理生化特性为：革兰氏阳性杆菌，0. 6?0. 8 X 1. 5?3. 0微米，细胞形态和排列呈杆状、单 生。芽孢形态：产生近中生的椭圆状芽孢，孢囊稍膨大。菌落形态：菌落粗糙，不透明，粘着， 扩展。明胶液化，淀粉水解，V.P.试验阳性，柠檬酸盐利用。培养特性：在肉汁培养基上的菌 落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h后菌落直径为3mm培养基：Nutrient Agar (营养肉汁琼脂）：蛋白胨5 g，牛肉膏30 g，NaCl 5 g，琼脂15 g，蒸馏水1L，调pH 7· 0-7. 2。
[0019] 实施例3 XGY13-2生防菌剂的制备
【权利要求】
1. 一种防治番茄早疫病的生防菌株，其分类命名为地衣芽孢杆菌 XGY13-2,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保 藏号为 CGMCC NO. 8974。
2. 权利要求1所述防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应用。
3. 根据权利要求2所述的防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应用， 其特征在于：将防治番茄早疫病的生防菌株按1% (v/v)的接种量接种于发酵培养液中，于 30°C 180 rpm摇床振荡培养8-9d，制备得到生防菌剂，稀释后浸种或者灌根使用。
4. 根据权利要求3所述的防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应用， 其特征在于：所述的生防菌剂中活菌总浓度为IX 1〇9 -IX 101° CFU/mL。
5. 根据权利要求3所述的防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应 用，其特征在于：所述发酵培养液为：蔗糖2g/L、玉米粉20g/L、黄豆粉10g/L、磷酸氢二钾 0. 5g/L、七水硫酸镁0. 2g/L、酵母膏0. 4g/L、碳酸钙lg/L、氯化铁0. 005g/L。
6. 根据权利要求3所述的防治番茄早疫病的生防菌株在防治番茄早疫病方面的应用， 其特征在于：所述稀释倍数为5(Γ200倍。
【文档编号】A01N63/00GK104087541SQ201410336914
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月16日 优先权日:2014年7月16日
【发明者】张磊, 晏枫霞, 韩先旭, 卢魏魏 申请人:南京新果园生态农业科技有限公司