生物防治链霉菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物防治链霉菌及其应用。本发明的生物防治链霉菌，命名为链霉菌Lnu-12(Streptomyces sp.lnu-12)，保藏编号为CCTCC NO：M2014554。本发明采用平板对峙法，检测Lnu-12对多种植物病原菌具有拮抗作用，其中对瓜类枯萎病菌抑制作用最强，抑菌带平均宽度达到19～21mm，对番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌有很强的抑制作用，抑菌带宽分别为15mm和17mm，对辣椒根腐病菌有一定的抑制作用，抑菌带宽13mm，链霉菌Lnu-12在大棚蔬菜土传病害的生物防治中具有很好的应用前景。CCTCC NO：M20145542014.11.06
【专利说明】生物防治链霉菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物【技术领域】，特别涉及一种具有高效、广谱的抗多种植物病害病 原菌的链霉菌菌株及其应用。
[000引本发明所称的生物防治链霉菌，命名为链霉菌Lnu-12 (Str^tomyces sp. lnu-12)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物保藏中也保藏，保藏编号为CCTCC NO ：M20145540
【背景技术】
[0003] 利用化学药剂防治害虫的方法，是目前农作物防治害虫的最常用方法，然而化学 农药的过量使用所引起的环境污染和人畜安全问题已成为全球高度关注热点，是人类可持 续发展战略的实施亟待解决的问题。近年来，符合环保、健康、持续发展理念的生物农药开 发已成为解决上述难题的主要手段，生物防治作为植物病害防治的一项重要措施，已引起 人们的高度重视。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种绿色环保，高效、广谱的抗多种植物病害病原菌的生 物防治链霉菌。
[0005] 本发明的另一目的是提供链霉菌Lnu-12在抑制植物病原菌中的应用。
[0006] 本发明的生物防治链霉菌，命名为链霉菌Lnu-12(Streptomyces sp. lnu-12)， 已于2014年11月6日，在武汉中国典型培养物保藏中也保藏，保藏编号为CCTCC NO: M2014554。
[0007] 本发明的链霉菌Lnu-12,是从沈阳市东陵区蔬菜大棚±壤中分离筛选而得。将± 壤样品稀释1〇5,利用高氏一号培养基，采用常规的平板划线分离法进行分离培养，挑取放 线菌单菌落，编号备用，筛选而得。
[000引 1、链霉菌Lnu-12形态特征：
[0009] Lnu-12在商氏一号培养基上生长良好，图1为Lnu-12在光学显微镜IOOX下的抱 子丝和气生菌丝形态，气生菌丝发达，多分枝；抱子丝多为直或波曲形，无紧密螺旋；抱子 呈圆形、卵圆形。图2为Lnu-12在高氏一号培养基上培养特征（正面），图3为Lnu-12在 高氏一号培养基上培养特征（反面），图2和3显示在菌落边缘无吸水斑，无可溶性色素产 生。均符合链霉菌属的特征。
[0010] 2、Lnu-12生理生化特性：
[0011] 明胶液化、过氧化氨实验、纤维素水解、卵磯脂酶实验均呈阳性；牛奶凝固与腺化、 淀粉水解、MR实验、硫化氨实验、色氨酸分解实验、硝酸盐还原实验均为阴性；可利用葡萄 糖、果糖、木糖、乳糖、淀粉、藏糖、半乳糖、纤维二糖作为碳源生长，生理生化反应特性与淀 粉链霉菌一致。
[001引 3、链霉菌Lnu-12的16S rDNA序列分析方法：
[0013] (I)链霉菌Lnu-12的DM提取采用反复冻融法，W此为模板进行PCR扩增。
[0014] (2) PCR 引物：正向引物 BSF8/27 ;5' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3';
[00巧]反向引物 BSR1541/1522 ;5' -AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'。
[0016] (3)PCR引物由上海生物工程有限公司合成。
[0017]
【权利要求】
1. 一种生物防治链霉菌，其特征在于：命名为链霉菌Lnu-12 (Streptomyces sp.lnu-12)，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO :M 2014554。
2. 权利要求1所述的链霉菌Lnu-12在抑制植物病原菌中的应用。
3. 如权利要求2所述的应用，其特征在于方法如下：将链霉菌Lnu-12于发酵培养基中 发酵，将发酵上清液稀释50倍后，以喷洒的方式施用于已患有植物病原菌的植物叶片上。
4. 如权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述的植物病原菌是：辣椒根腐病菌 (Pepper Root Rot)、番爺叶霉病菌（Cladosporium fulvum)、番爺早疫病菌（Alternaria solani)、舌甘瓜枯萎病菌（Fusariwn oxysporum)、西瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. niveum)、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum)。
【文档编号】A01P3/00GK104357369SQ201410691633
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月25日 优先权日:2014年11月25日
【发明者】朱春玉, 张茂盛, 佘晓双, 郑甜甜, 潘思明, 刘宏生 申请人:辽宁大学