专利名称：一种雅龙果叶子提取物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药，具体说是一种雅龙果叶子提取物的应用。
背景技术：
高血压是最常见的心血管疾病，我国1991年对15岁以上94万人进行抽样调查，高血压患病率为11.26％，与1979-1980年相比，10年间患病率增加25％。另据流行病学调查显示，我国高血压目前正以每年新增300万人的速度发展，仅上海地区就有120万名患者，且有继续增加的趋势。高血压人群已日益成为现代都市人的一大健康杀手，应引起我们足够的重视。
高血压的发病与肾素-血管紧缩素系统有着密切的相关性[文献1Schricker，K.，Holmer S.，Hamann m.，Riegger G.，Kurtz A..Interrelationbetween renin mRNA levels，rennin secretion，and blood pressure in two-kidney，one clip rats.Hypertension 1994，24157-162.]。高血压蛋白酶-血管紧缩素系统(Renin-angiotension system，RAS)作为体内血液环境的中心枢纽已经为人们所重视。血管紧缩素转换酶(Angiotensin I-convertingenzyme，ACE)为RAS系统最重要的调节枢纽。在体内，ACE可以将血管紧缩素I(Angiotensin I)转化为促进血管收缩的血管紧缩素II(Angiotensin II)，从而造成血压升高；同时ACE又使舒缓激肽(Bradykinin)分解，使其失去促进血管舒张的作用，具有高血压的生理症状。
ACE抑制剂在多种心血管疾病，如充血性心脏病，心肌梗塞，糖尿病肾病及肾功能障碍等疾病的治疗中也发挥一定的作用。特别是ACE的抑制剂一卡托普利(captopril)和依那普利(enalapril)可以阻止ACE的活性，从而降低自发型大鼠(Spontaneously hypertensive rats，SHR)和高血压病人的血压。
21世纪被称作是食用天然药物的时代。通过摄取天然产物，进行预防疾病，可以达到维持健康长寿的目的。正是基于此我们对雅龙果叶子进行了系统的研究，发现其具有抑制ACE活性的作用。
雅龙果Yacon(Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)原产于南美安第斯地区的一种植物，块根和叶子是维持人类长寿和健康非常有益的健康食品。由于其块根部分含有大量多酚，果寡糖和纤维素，具有抗氧化防衰老，促进肠蠕动，防止便秘功能等功能，在欧美日备受重视，并有大量的市场需求。现已成功引进这种植物，资源极为丰富，同时我们对雅龙果叶子进行了活性研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种雅龙果叶子提取物的应用，其具有显著抑制ACE活性的效果、植物体生物利用率高。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种雅龙果叶子提取物的应用，该提取物用于制备抑制血管紧缩素I转换酶活性的药物、保健食品或食品添加剂。
所述提取物由如下方法制得将雅龙果叶子(新鲜的或干燥的均可)用丙酮、甲醇或乙醇的水溶液进行回流提取，减压除尽溶剂，回收溶剂；或将雅龙果叶子用水溶液进行煮沸提取，得具有抑制ACE(血管紧缩素I转换酶)活性的植物提取物。
丙酮(或甲醇、乙醇)-水溶液的体积浓度最好为0.5-70％。丙酮(或甲醇、乙醇)水溶液的体积通常为叶子重量的1-100倍，提取时间越长，叶子中活性部分的溶出率越高，考虑到提取的效率，提取时间一般以0.5-5小时为适宜；水溶液的体积通常为叶子重量的1-100倍，提取时间越长，叶子中活性部分的溶出率越高，考虑到提取的效率，提取时间一般以0.1-3小时为适宜。
通过应用现代药理实验方法对中国产雅龙果(Smallanthus sonchifoliusPoepp.& Endl.)叶子不同溶剂提取部分的活性进行筛选，发现其水，丙酮(甲醇或乙醇)-水溶液的提取物部分均具有显著抑制ACE活性的作用；上述提取物部分可以作为治疗和预防高血压疾病的药物、保健食品或食品添加剂；也可以作为治疗和预防心血管疾病(如充血性心脏病、心肌梗塞)的药物、保健食品或食品添加剂。
所述提取物可与辅料混合制成各种剂型的药物；如丸剂、散剂、片剂、膏剂、粉剂、针剂、水剂、颗粒剂、注射剂等各种剂型的药物；保健食品形态可以是液体的比如像清凉饮料，乳酸饮料，调味品，作为添加剂，比如加入到面食类，果冻，冰淇淋，腌制品，火腿，点心等。
所述药物在使用时，可采取经口腔或非经口腔的给药方式；其中，非经口腔的方式为皮下、静脉注射或肛肠给药；所述静脉注射，其注射液为生理盐水，葡萄糖，稳定剂，防腐剂，悬浮剂或乳化剂。
本发明具有如下优点1.植物体生物利用率高，效果显著。本发明用含水的有机溶剂溶液进行加热回流提取或水溶液进行煮沸提取，雅龙果叶子的活性部分溶出率高(提取率为23-48.3％)；其提取物具有较为显著的抑制ACE活性的作用。(从实施例1可以看出50％丙酮-水提取物具有抑制ACE活性的作用，其抑制率达到50％(EC50值)时的提取物浓度为53mg/ml)。
2.原料来源广泛，安全性高。我国现已成功引进雅龙果(Yacon，Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)，在辽宁等省试种成功。实验所用雅龙果均为中国辽宁省产，因而资源极为丰富；本发明的提取物来自于天然植物，作为药物或是保健食品对人体无毒害等副作用，且提取物水溶性较好，可以提高在体内的生物利用度，具有可生产性。
3.发展前景广阔。本发明通过实验研究中国种植雅龙果叶子各提取液部分的抑制ACE活性，为新的降血压药物的研究与开发提供一定的理论依据；在本发明基础上，可进一步对雅龙果叶子降压活性部分进行分离纯化，寻找其中降低血压的活性成分(单体)，探寻其降血压活性机制，并将活性单体化合物作为先导化合物进行化学、生物合成或结构修饰，来设计开发出更高效的治疗高血压药物，应用范围广。
4.意义深远。本发明雅龙果叶子提取物具有显著抑制ACE的活性，它不仅对于高血压的治疗或保健具有一定的作用，而且对于其它心血管疾病，如充血性心脏病，心肌梗塞，糖尿病肾病及肾功能障碍等疾病的治疗均有功效。因此，对该提取物药物活性的深入研究和开发利用意义深远。
图1为雅龙果叶50％丙酮提取物不同浓度对ACE的抑制作用(Fig.1The inhibition rate on angiotensin I convening enzyme of 50％ acetone extractfrom yacon leaves)。
图2为雅龙果叶水提取物不同浓度对ACE的抑制作用(Fig.2Theinhibition rate on angiotensin I converting enzyme of H2O extract from yaconleaves)。
具体实施例方式
实施例1取30g雅龙果叶子加入300ml 50％丙酮-水(v/v)，回流提取2h，除尽溶剂，得浸膏8.5g。取850mg提取物(相当于3g生药)溶于10ml水中，过滤。然后依次取出0.4，0.6，0.8，1.0ml，用水分别定容至1ml。按照文后所附的测定方法，测得其提取物不同浓度时对ACE抑制率，并由表中曲线查得抑制率达到50％(EC50值)时的提取物浓度为53mg/ml(相当于187mg生药/ml)。
雅龙果叶子50％丙酮提取物不同浓度对ACE的抑制作用见图1。
由图1可以看出丙酮(甲醇或乙醇)-水溶液的提取物部分均具有显著抑制ACE活性的作用，其作用效果呈现计量依赖关系。
实施例2取100g中国种植雅龙果(Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)叶子用500ml 70％丙酮-水溶液加热回流提取3h，减压除尽溶剂，得提取物23g。按照文后所附的测定方法，测得其提取物不同浓度时对ACE抑制率，由曲线查得抑制率达到50％(EC50值)时的提取物浓度为77mg/ml。
实施例3取10g雅龙果(Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)叶子用1000ml0.5％丙酮-水溶液加热回流提取0.5h，减压除尽溶剂，得提取物3.9g。按照文后所附的测定方法，测得其提取物不同浓度时对ACE抑制率，由曲线查得抑制率达到50％(EC50值)时的提取物浓度为50mg/ml。
实施例4取30g雅龙果(Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)叶子用300ml水溶液煮沸提取2h，冷冻干燥后得提取物11.4g。取557mg提取物(相当于1.5g生药)溶于10ml水中，过滤。然后依次取出0.4，0.6，0.8，1.0ml，用水分别定容至1ml。按照文后所附的测定方法，测得其提取物不同浓度时对ACE抑制率，由曲线查得抑制率达到50％(EC50值)时的提取物浓度为48mg/ml(相当于129mg生药/ml)。
雅龙果叶子水提取物不同浓度对ACE的抑制作用见图2。
由图2可以看出水溶液的提取物部分均具有显著抑制ACE活性的作用，其作用效果呈现计量依赖关系。
实施例5取30g雅龙果(Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)叶子用3000ml水溶液煮沸提取0.5h，冷冻干燥后得提取物12.0g。
实施例6取30g雅龙果(Smallanthus sonchifolius Poepp.& Endl.)叶子用3000ml水溶液煮沸提取3h，冷冻干燥后得提取物14.5g。
实施例7取20g中国种植雅龙果新鲜叶子用2000ml 70％甲醇加热回流提取0.1h，减压下除尽甲醇，得提取物6.5g。
实施例8取20g中国种植雅龙果干燥的叶子用1000ml 0.5％甲醇加热回流提取0.5小时，减压下除尽甲醇，得提取物7.2g。
实施例9取20g中国种植雅龙果新鲜叶子用80ml 70％乙醇加热回流提取3小时，减压下除尽乙醇，得提取物6.0g。
实施例10取30g中国种植雅龙果干燥的叶子用3000ml 0.5％乙醇加热回流提取1小时，减压下除尽乙醇，得提取物14.2g。
附实施例1～10的ACE抑制活性的测试过程如下1.Sigma公司购买的ACE，用22mmol硼酸缓冲液(pH 8.3)溶解，使它成为60毫单位每毫升的溶液作为酶溶液。
2.Sigma公司购入的Hip-His-Leu(Hippuryl-L-histidyl-L-leucine)用上述的硼酸缓冲液溶解，配成浓度7.6mmol的底物溶液。
3.取10μl待测样品于0.5ml的离心管中，加入30μl ACE，37℃下反应5min。
4.之后加入50μl上述的Hip-His-Leu底物溶液，充分混合，37℃下反应30min。
5.用10μl 10％的TFA终止反应。
6.由ACE作用底物分解得到的马尿酸通过下面的HPLC条件来定量。
HPLC的测定条件色谱柱Hypersil BDS 5μ，C 18(I.D.4.6×250mm)，流动相甲醇-水-三氟乙酸-冰乙酸＝30∶70∶0.1∶0.05(调pH 3.0-3.3)，流速1ml/min，检测波长228nm。
ACE抑制率计算公式抑制率＝(A-B)/A×100(％)，公式中A为不含抑制剂的马尿酸液相峰面积，B为含抑制剂的马尿酸液相峰面积，50％的抑制率浓度用EC50来表示。
上述测试方法，参照文献(文献2Ondetti MA，Rubin B，Cushman DW.Design of angiotensin-converting enzymenew class of orally activeantihypertensive agents.Science 1971；196441-444.)，并调整实验试剂用量进行抑制ACE活性测试。
权利要求
1.一种雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于该提取物用于制备抑制血管紧缩素I转换酶活性的药物、保健食品或食品添加剂。
2.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述提取物由如下方法制得将雅龙果叶子用丙酮、甲醇或乙醇的水溶液进行回流提取，回收溶剂；或雅龙果叶子用水溶液进行煮沸提取，得具有抑制血管紧缩素I转换酶活性的植物提取物。
3.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述丙酮、甲醇或乙醇水溶液的体积浓度为0.5-70％。
4.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述丙酮、甲醇或乙醇水溶液的体积为叶子重量的1-100倍，提取时间为0.5-5小时。
5.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述水溶液的体积为叶子重量的1-100倍，提取时间为0.1-3小时。
6.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述抑制血管紧缩素I转换酶活性的药物、保健食品或食品添加剂为治疗和预防高血压疾病的药物、保健食品或食品添加剂。
7.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述抑制血管紧缩素I转换酶活性的药物、保健食品或食品添加剂为治疗和预防心血管疾病的药物、保健食品或食品添加剂。
8.根据权利要求1所述雅龙果叶子提取物的应用，其特征在于所述提取物可与辅料混合制成各种剂型的药物。
全文摘要
本发明涉及生物医药，具体说是一种雅龙果叶子提取物的应用，该提取物用于制备抑制血管紧缩素I转换酶活性的药物、保健食品或食品添加剂。本发明的优点为发展前景广阔；对该提取物药物活性的深入研究和开发利用意义深远；植物体生物利用率高，效果显著；原料来源广泛，安全性高。
文档编号A61P9/12GK1772014SQ200410087508
公开日2006年5月17日 申请日期2004年11月10日 优先权日2004年11月10日
发明者谭成玉, 胡建恩, 赵静玫, 王焕弟, 杜昱光, 白雪芳 申请人:中国科学院大连化学物理研究所