专利名称：一种甲鱼保健胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明属于保健食品制剂及其制造技术领域，尤其属于一种以甲鱼为主要原料的保健胶囊及其制备方法。
背景技术：
甲鱼，营养丰富，食味鲜美，并具增强人体活力，促进健康等功效，历来深受消费者欢迎。鳖肉及提取物能提高人体免疫，促进新陈代谢，增强抗病能力，并可改善大脑功能，增强记忆力，防治大脑功能衰退，故对体弱者和老年人来说，能有效地提高人体免疫力并预防老年性痴呆症。因此近年来，甲鱼养殖业发展较快，养殖规模不断扩大，单一的作为名菜简单食用既严重制约了甲鱼的生产发展，又未能充分利用甲鱼全身油、壳、骨等所含有的营养药用价值，迫切需要加大开展甲鱼深加工及综合利用的研究。甲鱼的开发途径主要有方便食品、保健营养医疗食品、生物工程深加工以及甲鱼保健食品复方制剂等产品。中药是我国的国宝，根据古代医学观点和现代科学研究证实，甲鱼身体的各个部位都有医药功能，如能应用现代科学技术，按照国际标准大力开发甲鱼类保健品，前景将十分广阔。以往国内、外围绕甲鱼的开发虽已申请了一批专利，例如ZL专利号91101134.X，JP 61-47505等均是以甲鱼提取液或粉为主要原料，另添加蜂密、蛋白等组成的滋补保健品为主；目前市场上能见到的甲鱼类开发产品，也主要是以提高免疫力为主的保健类食品，如纯甲鱼粉、甲鱼保健饮料、甲鱼酒、龟鳖丸等；存在加工粗浅，功能单一等问题。
发明内容
本发明的目的是针对上述存在不足，提供一种以甲鱼粉为主要原料，配伍DHA微胶囊，银杏叶提取物与乳酸锌，具有提高人体免疫力与改善记忆力双重功能，服用方便，效果显著的甲鱼保健胶囊；本发明的另一目的是提供该产品的制备方法。
本发明对原料的选择是基于以下的技术原理与疗效性能甲鱼，又名鳖，性寒，味咸，其肉、头、血、胆、脂肪、卵及背甲皆可药用。据现代研究表明，甲鱼中含有丰富的蛋白质、维生素、亚油酸，即使大量摄入也不会使体内胆固醇的水平升高，并有助于防治动脉硬化、心脏病及脑血管意外，具有提高人体免疫力、促进血管末梢循环，提高内脏活动能力，促进新陈代谢、增强抗病能力、养颜美容并延缓衰老等功效。
DHA，系甲鱼油所含的高度不饱和脂肪酸，化学名称为二十二碳六烯酸(以下均简称为DHA)，在我国被称作“脑黄金”，存在于脑细胞的线粒体、突触体和微粒体中，与这些细胞器的功能密切有关，可改善大脑功能，增强记忆力和提高智商，延缓大脑萎缩，修复脑神经的受损和破坏，防治大脑功能衰退。国内外多数研究表明，随着年龄的增长，神经细胞脱落增多，学习能力下降，因此，摄取一定量DHA对哺乳动物神经发育和学习行为会产生有益影响，延缓学习记忆的下降，是预防老年性痴呆的一种有效措施。
银杏叶提取物，其主要有效成分为黄酮类和内酯类，国内、外大量基础和临床研究表明，这些有效成分对多种不同动物种类、动物模型及人体均有明显的促智作用，国外临床上大量使用银杏叶提取物治疗老年性脑功能障碍、脑伤后遗症等，疗效显著。它使病人的反应加快，记忆改善，症状好转。我国上海中医学院、安徽医科大学相继用银杏叶黄酮做了类似的试验，也取得了几乎相同的结果。
微量元素锌，参于人体100多种酶的活动，是酶活性所必须的元素之一，它对核酸、蛋白质合成、氨基酸的新陈代谢及很多酶素系统具有重要的生理功能和营养作用。儿童营养性缺锌可表现为食欲不振、个子矮小、智力发育不全，老年人缺锌，易衰老，动作呆滞等。上海市疾病预防控制中心营养与食品安全科高围溦等进行“锌对D-半乳糖诱导的衰老小鼠学习和记忆行为的影响”的研究表明，补锌可以有效改善缺锌引起的学习和记忆能力下降，提高获取学习记忆和保持记忆能力。
本发明目的通过以下具体技术方案来实现一种甲鱼保健胶囊，该胶囊的组分与各组分的重量份配比为甲鱼粉 10-15DHA微胶囊 5-10银杏叶提取物 1-3乳酸锌 0.3-0.5其中，DHA微胶囊含DHA≥10％，银杏叶提取物含总黄酮≥15％，乳酸锌纯度98-103％，其中锌含量为22.65％。
所述的甲鱼保健胶囊，其优化的组分与各组分的重量份配比为甲鱼粉12，DHA微胶囊10，银杏叶提取物2，乳酸锌0.4。
一种甲鱼保健胶囊的制备方法，按以下步骤工艺制备而成(1)甲鱼粉的制备鲜活甲鱼清洗，宰杀，剖腹，去内脏，切成块在-198℃低温中冷冻并粉碎后，再进行冷冻干燥至水分≤5％，备用；(2)DHA乙酯化提取新鲜甲鱼油采取真空脱水处理，使其水分含量在0.1％以下；将真空脱水的甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠按重量体积比0.5-2Kg∶0.5-1.5L∶0.01-0.05Kg称量备料，先把脱水甲鱼油加热至50℃-75℃，在搅拌下缓慢加入无水乙醇与氢氧化钠，在恒温下反应1-4小时，然后用15％的盐水洗涤，洗去皂脚和其他不溶物，得到甲鱼油乙酯，将其放入-20℃冰箱中过夜，过滤、除去沉淀，即为DHA提取物；提取中用薄层层析法判断乙酯化率，确定最佳提取工艺。
(3)DHA提取物纯化将尿素溶于无水乙醇至饱和溶液，另将DHA提取物与无水乙醇按体积比1∶1混合，两液分别加热到70℃，按体积10-22∶0.8-1.5将尿素-乙醇饱和液缓慢加入到DHA提取物-乙醇溶液中，恒温下搅拌至溶液澄清，室温下持续搅拌2-5小时，所得溶液放入-20℃冰箱中过夜，冷却结晶，离心得上清液，加10％盐酸至PH2-3，加适量水充分洗涤，除去尿素，分离有机相，水洗至中性，加无水硫酸钠脱水干燥或真空脱水干燥，蒸去溶剂，上述包合工艺操作1次或2次后混合，得高度不饱和脂肪酸DHA，其纯度达75％以上。
(4)DHA微胶囊的制备以精制玉米蛋白粉为囊材，DHA与精制玉米蛋白粉按重量份1∶3-5配比，先加入少量蒸馏水润湿精制玉米蛋白粉，再加入DHA和按总重量1.5-2.5％的乳化剂单甘酯、蔗糖酯或吐温-80，搅拌，研磨，-20℃冰箱中冷藏静置过夜，喷雾干燥，醚洗后得DHA微胶囊，备用；(5)按产品比例将DHA微胶囊、银杏叶提取物、乳酸锌加入到甲鱼粉中，混合均匀；(6)胶囊填充，抛光，成品检验，包装将步骤(5)混合物灌入药用明胶硬胶囊，抛光机抛光，检验合格后包装即成产品。
所述DHA乙酯化提取的最佳工艺为甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠的重量体积比为1Kg∶0.75L∶0.03Kg，在65℃条件下回流提取2小时。
所述DHA提取物纯化的最佳工艺条件为尿素-无水乙醇饱和溶液与DHA提取物-无水乙醇溶液比为15∶1，反应时间3小时，包合次数1次。
本发明的有益效果，一是充分利用了甲鱼全身肉、油、壳、骨等营养药用资源，尤其是废弃物甲鱼油在最佳的提取条件下有较高的乙酯化率，采用尿素包合法纯化，其高度不饱和脂肪酸(DHA)纯度可以达到75％以上，高度不饱和脂肪酸得率可达6％；二是本发明在充分利用甲鱼药用资源的同时，合理添加了银杏叶提取物与乳酸锌，组合后食用安全并增强了对动物或人体免疫力及改善记忆力的功能(见试验例)；三是本法生产成本低廉，操作简单，并适用于大批量生产，既为产量日增的甲鱼生产开辟了一条新的开发利用途径，又为体弱者和老年人群长期方便服用，易于吸收，增强人体免疫力及改善记忆力提供了一只理想的双功能保健产品，具有广阔的应用前景。
具体实施例方式
通过以下实施例和试验例将对本发明的制备与动物试验及人体临床效果作进一步的具体说明。
本发明所采用的甲鱼和甲鱼油 杭州中得保健食品有限公司甲鱼场生产；银杏叶提取物 宁波双林中药饮片厂生产 含总黄酮≥15％；乳酸锌郑 州瑞普生物工程公司生产 纯度98-103％，其中锌含量为22.65％。
尿素(脲)宁波化学试剂厂生产含量不低于99％。
氢氧化钠、无水乙醇、无水硫酸钠等试剂均为国产分析纯试剂。
实施例1(甲鱼保健胶囊制备1)(1)甲鱼粉制备称取鲜活甲鱼10公斤，经清洗，宰杀，剖腹，去内脏，切成块在-198℃低温中冷冻，粉碎机粉碎后，再进行冷冻干燥至水分≤5％，备用；(2)DHA的乙酯化提取从宰杀场称取废弃甲鱼油3公斤，采取真空脱水处理，必须使其水分含量控制在0.1％以下；将脱水甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠按重量体积比1Kg∶0.75L∶0.03Kg称量备料；先把脱水甲鱼油加热至65℃，在搅拌下缓慢加入无水乙醇与氢氧化钠，在恒温下反应2小时，然后用15％的盐水洗涤，洗去皂脚和其他不溶物，得到甲鱼油乙酯，将其放入-20℃冰箱中过夜，过滤、除去沉淀，即为DHA提取物；(3)DHA提取物纯化将尿素溶于无水乙醇至饱和液，另将DHA提取物与无水乙醇按体积比1∶1混合，两液分别加热到70℃，按体积15∶1将尿素-无水乙醇饱和液缓慢加入到DHA提取物-无水乙醇溶液中，恒温下搅拌至溶液澄清，室温下持续搅拌3小时，所得溶液放入-20℃冰箱中过夜，冷却结晶，离心得上清液，加10％盐酸至PH2-3，加适量水充分洗涤，除去尿素，分离有机相，水洗至中性，加无水硫酸钠脱水干燥或真空脱水干燥，蒸去溶剂，即得高度不饱和脂肪酸DHA，其纯度达75％以上；(4)DHA微胶囊的制备以精制玉米蛋白粉为囊材，DHA与精制玉米蛋白粉按重量份1∶4配比，先加入少量蒸馏水润湿精制玉米蛋白粉，再加入DHA和按总重量2％的乳化剂单甘酯，搅拌，研磨，-20℃冰箱中冷藏静置过夜后，按原料预处理40-60℃，进风160-180℃，排风60-80℃喷雾干燥，醚洗后得DHA微胶囊；(5)胶囊组分的混配将步骤(1)所制甲鱼粉和经步骤(2)、(3)、(4)所制成的DHA微胶囊及市场所购银杏叶提取物与乳酸锌按重量份12∶10∶2∶0.4混配；(6)胶囊填充，抛光，成品检验，包装将步骤(5)各组分混合物在洁净度10万级胶囊车间灌胶囊，所用胶囊必须符合GB13731药用明胶硬胶囊要求，室内工作环境使用除湿器除湿，维持相对湿度在45％以下，装量负偏差控制在9％以下，装好的胶囊移于抛光机抛光，检验合格，包装即成产品。
实施例2(甲鱼保健胶囊制备2)本实施例中DHA乙酯化提取工艺条件为脱水甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠的重量体积比为0.6Kg∶1.3L∶0.015Kg，加热温度50℃，反应3小时；
DHA提取物纯化工艺条件为尿素-无水乙醇饱和液与DHA提取物-无水乙醇溶液体积比为11∶1.5，室温下持续搅拌2小时，包合次数2次；DHA微胶囊制备工艺条件为DHA与精制玉米蛋白粉按重量份1∶3配比，再加入按总重量1.5％的乳化剂蔗糖酯；胶囊组分的混配比例为甲鱼粉、DHA微胶囊、银杏叶提取物及乳酸锌重量份比为10∶8∶1.5∶0.3混配。
本实施例的其余步骤工艺均同于实施例1。
实施例3(甲鱼保健胶囊制备3)本实施例中DHA乙酯化提取工艺条件为脱水甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠的重量体积比2Kg∶0.5L∶0.045Kg，加热温度75℃，反应1小时；DHA提取物纯化工艺条件为尿素-无水乙醇饱和液与DHA提取物-无水乙醇溶液体积比为20∶0.8，室温下持续搅拌4小时，包合次数1次；DHA微胶囊制备工艺条件为DHA与精制玉米蛋白粉按重量份1∶5配比，再加入按总重量2.5％的乳化剂吐温-80；胶囊组分的混配比例为甲鱼粉、DHA微胶囊、银杏叶提取物及乳酸锌重量份比为14∶6∶2.5∶0.5混配；本实施例的其余步骤工艺均同于实施例1。
试验材料中得甲鱼胶囊 杭州中得保健食品有限公司 本发明实施例1产品。
试验例1(增强免疫力的功能)经南京医科大学卫生分析检测中心检验证明，经口连续给予小鼠250mg/kg.bw、500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw的中得甲鱼胶囊1个月，结果显示
(1)细胞免疫功能1500mg/kg.bw组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化率显著高于0mg/kg.bw组；500mg/kg.bw组小鼠耳壳增重显著大于0mg/kg.bw组。
(2)体液免疫功能500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw组小鼠HC50显著高于0mg/kg.bw组；500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw组小鼠溶血空斑数显著高于0mg/kg.bw组。
(3)NK细胞活性500mg/kg.bw、1500mg/kg.bw组小鼠NK细胞活性显著高于0mg/kg.bw组。
因此认为甲鱼胶囊具有增强免疫力的功能。
试验例2(改善动物记忆)经中国疾控中心营养与食品安全所的动物试验结果判断，认为甲鱼胶囊有改善动物记忆的作用。实验方法与结果如下1.方法选择6周龄雌性昆明种小鼠165只，体重24-28g，适应1周后，将小鼠随机分为水迷宫、跳台、避暗3项试验，在实验前对动物进行初筛，水迷宫试验经训练后，3分钟内不能游至终点者淘汰；跳台和避暗试验，动物经5分钟训练仍不能回避者或电击受伤者淘汰，各组共保留小鼠48只，分别分为正常、低、中、高剂量组，每组12只，经灌胃给予受试物，剂量设定分别为0.25g/kgbw、0.50g/kgbw、0.75g/kgbw，溶于去离子水中，连续给样30天，进行跳台、水迷宫试验和避暗试验的训练，24小时后进行24小时测验，一周后进行消退试验。试验期间连续给样，重复实验同上。
2.结果水迷宫试验中，到达终点所需时间，中、高剂量组训练成绩均显著优于对照组(p＜0.05)；错误总数，中、高剂量组训练成绩和高剂量组24小时测验成绩及中、高剂量组1周后测验的消退成绩均显著优于对照组(p＜0.05)。
跳台试验中，受电击动物数，中、高剂量组1周后测验的消退成绩均显著优于对照组(p＜0.05)；动物的潜伏期，高剂量组24小时测验成绩和1周后测验的消退成绩均显著优于对照组(p＜0.05)；错误总数，中、高剂量组训练成绩、24小时测验成绩及1周后测验的消退成绩均显著优于对照组(p＜0.05)。
避暗试验中，受电击动物数，中剂量组训练成绩均显著优于对照组(p＜0.05)；动物的潜伏期，高剂量组训练成绩均显著优于对照组(p＜0.05)；错误总数，中、高剂量组训练成绩显著优于对照组(p＜0.05)。
试验例3(人体辅助改善记忆)经中国疾控中心营养与食品安全所的人体试验结果判断，认为甲鱼胶囊具有辅助改善记忆的作用。实验方法与结果如下1.方法挑选年龄在40-60岁的健康受试者111名，文化程度大专以上，未参加过类似测试，受试前未服用与改善记忆功能有关保健食品与药品，经临床体检，无严重的心血管疾病，严重的循环系统疾病，严重的代谢系统疾病，严重的泌尿系统疾病，严重的消化系统疾病。其中试食组56名，对照组55名，对照组服用外观一致的空白安慰剂，试食组与对照组均为每人每日口服2次，每次2粒(2×2×0.5克/人.天)，连续服用45天，期间共11名受试者因未按服用方法服用受试物或自愿退出试食试验，试验结束时共有100名受试者参加测试，试食组与对照组各50名。
2.结果在试食前二组受试者的各分量表和记忆商均衡的前提下，经45天的试食试验，试食组受试者的指向记忆、图象自由回忆和无意义图形再认分量表的测试中量表分显著高于对照组(p＜0.05)。试食组受试者的指向记忆、联想学习、图像自由回忆分量表的量表分较试食前均有显著的升高(p＜0.05)。试食组试验后图像自由回忆分量表量表分的增加值显著高于对照组(p＜0.05)。同时试食前受试者的试食后记忆商显著高于对照组(p＜0.001)，并较试食前有非常显著的升高(p＜0.001)，试食组记忆商的增加值显著高于对照组(p＜0.05)。根据《保健食品检验与评价技术规范2003版》中的判断标准，认为甲鱼胶囊具有辅助改善记忆的作用。
试验例4(毒性试验)本发明所制备的甲鱼胶囊安全有效，服用剂量小。
经国家食品药品监督管理局指定食品毒理学检测单位--浙江省医学科学院保健食品研究所毒理学研究表明1.急性毒性试验1.1小鼠急性毒性试验按霍恩氏法将小鼠随机分为1.00g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg、10.0g/kg四个体重剂量组，每组10只，雌雄各半。甲鱼胶囊对雌雄小鼠经口LD50均大于10g/kg体重，属实际无毒。
1.2大鼠急性毒性试验按霍恩氏法将大鼠随机分为1.00g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg、10.0g/kg四个体重剂量组，每组10只，雌雄各半。甲鱼胶囊对雌雄大鼠经口LD50均大于10g/kg体重，属实际无毒。
2.小鼠微核试验结果甲鱼胶囊对小鼠微核率的影响雌雄各剂量组与阴性对照组比较，微核千分率均无显著性差异，而阳性对照组微核率则显著高于阴性对照组，其差异有非常显著性意义(P＜0.01)。表明甲鱼胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响，检测结果为阴性。
3、精子畸形发生率结果甲鱼胶囊对小鼠精子畸形发生率的影响试验表明，各剂量组与阴性对照组比较，小鼠精子畸形发生率均无显著性差异，而阳性对照组则明显高于阴性对照组，其差别有非常显著性意义(P＜0.01)，表明甲鱼胶囊对小鼠精子畸形发生率未见明显影响，检测结果为阴性。
4. Ames试验结果不同浓度受试物在加和不加S9条件下的回变菌落与阴性对照组相近似，而阳性对照回变菌落数均高于阴性对照回变菌落数2倍以上。甲鱼胶囊Ames试验检测结果为阴性。
权利要求
1.一种甲鱼保健胶囊，其特征是该胶囊的组分与各组分的重量份配比为甲鱼粉10-15DHA微胶囊 5-10银杏叶提取物 1-3乳酸锌0.3-0.5
2.根据权利要求1所述的甲鱼保健胶囊，其特征是该胶囊的组分与各组分的重量份配比为甲鱼粉12，DHA微胶囊10，银杏叶提取物2，乳酸锌0.4。
3.一种制备权利要求1或2所述甲鱼保健胶囊的方法，其特征是按以下步骤条件制备而成(1)甲鱼粉的制备鲜活甲鱼清洗，宰杀，剖腹，去内脏，切成块在-198℃低温中冷冻并粉碎后，再进行冷冻干燥至水分≤5％，备用；(2)DHA乙酯化提取将真空脱水的甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠按重量体积比0.5-2Kg∶0.5-1.5L∶0.01-0.05Kg称量备料，先把脱水甲鱼油加热至50℃-75℃，在搅拌下缓慢加入无水乙醇与氢氧化钠，在恒温下反应1-4小时，然后用15％的盐水洗涤，得到甲鱼油乙酯，将其放入-20℃冰箱中过夜，过滤、除去沉淀，即为DHA提取物；(3)DHA提取物纯化将尿素溶于无水乙醇至饱和溶液，另将DHA提取物与无水乙醇按体积比1∶1混合，两液分别加热到70℃，按体积10-22∶0.8-1.5将尿素-乙醇饱和液缓慢加入到DHA提取物-乙醇溶液中，恒温下搅拌至溶液澄清，再室温下持续搅拌2-5小时，所得溶液放入-20℃冰箱中过夜，冷却结晶，离心得上清液，加10％盐酸至PH2-3，加适量水充分洗涤，除去尿素，分离有机相，水洗至中性，加无水硫酸钠脱水，蒸去溶剂，上述包合工艺操作1次或2次后混合，得DHA纯品；(4)DHA微胶囊的制备以精制玉米蛋白粉为囊材，DHA与精制玉米蛋白粉按重量份1∶3-5配比，先加入少量蒸馏水润湿精制玉米蛋白粉，再加入DHA和按总重量1.5-2.5％的乳化剂，搅拌，研磨，-20℃冰箱中冷藏静置过夜，喷雾干燥，醚洗后得DHA微胶囊，备用；(5)按比例将DHA微胶囊、银杏叶提取物、乳酸锌加入到甲鱼粉中，混合均匀；(6)胶囊填充，抛光，成品检验，包装将步骤(5)混合物灌入药用明胶硬胶囊，抛光机抛光，检验合格后包装。
4.根据权利要求3所述甲鱼保健胶囊的制备方法，其特征是所述DHA乙酯化提取的工艺条件为甲鱼油和无水乙醇及氢氧化钠的重量体积比为1Kg∶0.75L∶0.03Kg，在65℃条件下回流提取2小时。
5.根据权利要求3所述甲鱼保健胶囊的制备方法，其特征是所述DHA提取物纯化的工艺条件为尿素-无水乙醇饱和液与DHA提取物-无水乙醇溶液比为15∶1，反应时间3小时，包合次数1次。
全文摘要
本发明公开了一种甲鱼保健胶囊及其制备方法。该胶囊以甲鱼粉为主要原料，配伍DHA微胶囊，银杏叶提取物与乳酸锌，经特定的甲鱼冷冻磨粉、甲鱼油中所含DHA的乙酯化提取、尿素包合提纯与微胶囊化、各组分按比例混配及填充胶囊等加工工艺制备而成。该产品食用安全，服用方便，效果显著，具有提高人体免疫力与改善老年人记忆力的双重功能；本发明既为产量日增的甲鱼生产开辟了一条新的开发利用途径，又为体弱者和老年人群提供了一只理想的甲鱼保健胶囊产品，具有广阔的应用前景。
文档编号A61K9/52GK1733024SQ20051006044
公开日2006年2月15日 申请日期2005年8月23日 优先权日2005年8月23日
发明者王茵, 周淡宜, 蒋有水, 王淼 申请人:杭州中得保健食品有限公司