专利名称：靶向氧化治疗剂在骨再生中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含有过氧化物或氧化产物的组合物及其制备方法和应用。更具体的说，本发明涉及一种药物组合物或制剂，其含有使用含氧氧化剂(如臭氧)氧化烯烃族化合物(液体形式或存在于溶液中)所得到的过氧化物或反应产物；渗透溶剂；含有螯合金属的染料；和芳香族氧化还原化合物。本发明还涉及所述药物制剂的制备及其在骨再生中的应用。
背景技术：
肌骨和肢体损伤在发达国家和发展中国家都是严重的经济负担。较长的预期寿命和老龄人口的增加已经导致了世界范围内升高的肌骨疾病发病率。单在美国，估计每年肌骨疾病相关的总花费超过2500亿美元(世界卫生组织，2000年)。由于65岁以上的人口数目逐年增长，这些损伤的年度总医疗费用将继续增加。直接的负担包括与下列有关的花费医院和家庭护理；医师和其他专业服务；康复；社区服务；医疗设备的使用；处方药物；局部康复；家庭疗养；和保险管理。直接花费未计算这些损伤所带来的长期损失，如残疾、生育能力下降、工资损失和生活质量下降。
另外，用于加速骨修复和移植物固定的现有技术和方法具有显著的缺点。习惯使用的骨胶和封闭剂对成骨细胞的康复可能产生不利影响。研究表明，根管封闭剂通过抑制成骨细胞繁殖而阻碍根尖周愈合过程(Granchi等人，1995)。而且，尽管羟磷灰石具有极好的生物相容性，但它的存在似乎延缓了骨的生成(Beck-Coon等人，1991)。巨噬细胞和格根包尔氏细胞还与铝、铅和镉等金属发生副反应。
慢性牙齿感染和根管过程在末稍病理状况(包括动脉粥样硬化)的发展中也可能是危险因素。尽管有抗生素、根管治疗和外科引流术，但完全清除根尖周骨的厌氧菌感染是困难的。通过引流关闭感染的“死区”、巨噬细胞开始作用以及成骨细胞的骨修复作用都需要进行，来防止形成远端感染。
巨噬细胞和成骨细胞的功能依赖于细胞内线粒体、微丝和过氧化作用之间正确的功能关系。线粒体在细胞钙离子动力学中也是重要的参与者，它调节有释放能力的分泌粒的供应(Chakraborti等人，1999)。有证据表明，格根包尔氏细胞的线粒体中具有颗粒状的磷酸钙(Plachot等人，1986)。另外，骨母细胞的骨修复功能的诱导似乎需要适当的线粒体外膜功能。已知细胞内控制的过氧化作用是一个引发骨修复过程中成骨细胞转化和钙分泌的因素。
臭氧是一种三原子气体分子，也是氧气的一种同素异形体。它可以通过纯氧放电或强烈紫外线穿过纯氧而获得。普遍的错误观点认为臭氧是严重的污染物，疾病的“自由基”理论和抗氧化剂添加物市场使医疗理论对臭氧作为治疗的应用存有偏见。然而，臭氧疗法是一个错误的叫法。臭氧是非常活跃而不稳定的气体，与副产物直接有关的作用机制是臭氧与血浆和细胞膜中有机化合物的选择性相互作用。臭氧与不饱和烯烃的选择性反应发生在碳-碳双健，从而生成臭氧化物。臭氧本身是有毒的，它的反应产物-臭氧化物不稳定，不能单独作为治疗剂。
过氧化氢(H2O2)，1818年被发现，痕量存在于自然界。过氧化氢不稳定，当与有机的膜和颗粒物质直接接触时剧烈分解(或发泡)。光、搅拌、加热和铁都能加速溶液中过氧化氢的分解速度。过氧化氢通过体外直接接触而杀灭微生物，所述微生物具有低水平的过氧化物分解酶，如过氧化氢酶。然而，当过氧化氢被注入兔血液中时(该兔感染了对过氧化物敏感的大肠杆菌)，没有杀菌作用。而且，在体外，兔或人血液中(含有大肠杆菌)过氧化物浓度的增加没有表现出直接的杀菌活性。高浓度过氧化氢作用的缺乏与宿主动物血液中过氧化物分解酶-过氧化氢酶的存在直接相关。为了产生作用，高浓度的过氧化氢必须与细菌接触有效的时间周期。普遍存在于血液中的大量过氧化氢分解酶(如过氧化氢酶)使过氧化物在血液中不能多存在几秒钟。因此，通过注射或输注而被引入血液中的过氧化氢在血液或细胞外液中没有像细胞外杀菌剂那样直接起作用。
但是，过氧化氢确实参与了活化的巨噬细胞的杀菌过程。活化的巨噬细胞被引入感染部位，吸附于传染生物体并将之吞噬。生物体杀伤作用发生在巨噬细胞内部，由过氧化氢产生。过氧化氢将细胞的氯化物氧化成二氧化氯自由基，使微生物细胞膜不稳定，如果作用持久，将引起细胞凋亡或细胞自杀。对于细胞内过氧化作用关键的治疗条件是过氧化物载体分子的选择性传递、吸收和激活，只进入患病巨噬细胞中，这些巨噬细胞被认为没有提高的过氧化氢酶和谷胱甘肽还原酶活性。注入的过氧化氢无显著特点的毒物，而定向的细胞内氧化作用是一种选择性的治疗手段。
巨噬细胞在免疫、骨钙化、视力、神经隔离(髓鞘化)、解毒、泵强度和毒素从机体清除等方面起关键作用，取决于它们的位置分布。巨噬细胞对能量的需求由细胞内结构-线粒体提供。线粒体在结构上通常具有微丝内部细胞结构。线粒体的折叠内层产生高能量分子ATP，而外层含有细胞色素和电子循环分子，产生过氧化物。线粒体的外层对内毒素、真菌毒素、药物、重金属和杀虫剂引起的毒性阻断或损伤是敏感的。当线粒体的过氧化作用功能被阻断时，细胞的丝状结构易于交联，产生错误信号、机能不全、不适当复制或早熟细胞死亡。
美国专利4,451,480(De Villez)公开了一种治疗痤疮的组合物和方法。该方法包括使用臭氧化物质来局部处理感染区域，所述臭氧化物质是通过氧化各种不挥发性油和不饱和酯、醇、醚和脂肪酸而获得的。
美国专利4,591,602(De Villez)公开了一种Jojoba(加州希蒙得木)的臭氧化物，用于控制微生物感染。
美国专利4,983,637(Herman)公开了一种非经肠处理局部或全身病毒感染的方法，通过药物可接受的载体来给入萜烯的过氧化物。
美国专利5,086,076(Herman)公开了一种含有载体和萜烯的抗病毒组合物。该组合物适合于全身用药或局部用药。
美国专利5,126,376(Herman)公开了一种使用载体中萜烯过氧化物来局部治疗哺乳动物体内病毒感染的方法。
美国专利5,190,977(Herman)公开了一种含有非水载体和萜烯过氧化物的抗病毒组合物，适于全身注射。
美国专利5,190,979(Herman)公开了一种使用载体中萜烯过氧化物来非经肠治疗哺乳动物体内疾病状况的方法。
美国专利5,260,342(Herman)公开了一种使用载体中萜烯过氧化物来非经肠治疗哺乳动物体内病毒感染的方法。
美国专利5,270,344(Herman)公开了一种治疗哺乳动物体内全身性疾病的方法，通过肠道应用三甲沙林或不饱和烃的过氧化物衍生物，其衍生物是通过对溶解于非极性溶剂中的不饱和烃进行过氧化而制备的。
美国专利5,364,879(Herman)公开了一种用于治疗哺乳动物体内疾病状况的组合物，该组合物含有非萜烯不饱和烃的双氧化物或三甲沙林衍生物，其衍生物是通过在低于35℃条件下氧化载体中的不饱和烃。
尽管有关于萜烯用于不同的医疗适应症的报道，但是萜烯过氧化物表现出多种缺陷。例如，单萜的过氧化物(如月桂烯和柠檬烯)在实验室中燃烧。因此，它们在做成制剂或贮存时是非常危险的。
因此，需要一种安全有效的药物制剂或组合物，利用烯烃化合物的氧化反应产物。还需要一种方法来刺激对抗自由基形成的线粒体防御并有效治疗患有癌症(如淋巴瘤)的个体。
发明内容
本发明涉及药物制剂，该药物制剂含有使用含氧氧化剂(如臭氧)氧化不饱和有机化合物(液体形式或存在于溶液中)所得到的过氧化物或反应产物；渗透溶剂；含有螯合金属的染料；和芳香族氧化还原化合物。在一种药物制剂中，必要组分包括通过不饱和醇臭氧分解而形成的过氧化产物；稳定剂；金属卟啉；和醌。本发明还涉及使用上述药物制剂来治疗癌症。
优选的，过氧化物或反应产物是通过烯烃与臭氧反应而形成的。普遍认为烯烃和臭氧之间的反应是按照Criegee机理进行。根据该机理，如下图解1所示，该反应的起始步骤为臭氧与烯烃的1，3-双极环加成作用而生成初级过氧化物(1，2，3-三环氧乙烷)。该初级过氧化物不稳定，经1，3-开环成为一个羰基化合物和一个羰基氧化物。在不存在其他试剂或亲核溶剂的条件下，该新的1，3-偶极子进入第二次1，3-双极环加成作用而生成“正常的”过氧化物-1，2，4-三环氧乙烷。
图解1在一个副反应中，羰基氧化物能够进行二聚作用而生成过氧化物二聚体，1，2，4，5-四环氧乙烷。
图解2羰基氧化物是较强的亲电物质，在亲核物质(如乙醇或水)存在下，它经过温和的亲核加成反应而生成1-alkoxyhydroperoxide，如下图解3所示。在一定条件下，1-alkoxyhydroperoxide能够经过进一步的反应而生成羧酸衍生物。
图解3不受理论束缚，在本发明含有乙醇的烯烃的臭氧分解过程中，预期出现下述三个主要类型的过氧化物产物是合理的正常的臭氧化物、羰基四环氧乙烷二聚物和1-alkoxyhydroperoxide。当有水存在时，这些过氧化物产物还可以导致粗品混合物中出现有机过酸。
本发明还包括使用渗透溶剂(如二甲基亚砜(DMSO))来“稳定”臭氧分解的初始产物。同样，不想受任何理论束缚，稳定作用大部分类似于简单的溶剂化现象。但是，已知DMSO在正常情况下是一种亲核试剂。它也可能作为亲核配偶体而参与反应物的稳定(例如，作为二甲基硫代氧鎓盐)。本发明药物制剂稳定的过氧化分子和渗透溶剂是从公认为安全的(GRAS)成分所制得。
药物制剂的另外一个组分是螯合染料，如卟啉。金属卟啉使氧在光化激活下感光的特性是公知的，如同与含氧系统相结合的亚铁卟啉和铜卟啉的特性。
药物制剂的另一个组分是芳香族氧化还原化合物，如醌。
尽管不想受任何理论的束缚，但依然提出优选的药物制剂是生化剂的组合，所述生化剂引发了在受感染或异常的巨噬细胞中重复的、自身催化的氧化作用。药物制剂通过非对抗的过氧化作用刺激了靶向细胞凋亡(细胞自杀)。因此，该药物制剂在许多看似不同的线粒体巨噬细胞性疾病中产生治疗作用。特别是，该药物制剂已经表现出加速骨的再生长以及牙根尖周脓肿、牙周损害和复合性骨折的康复。该药物制剂在刺激骨的再生活性方面是有效的。这些结果表明了该药物制剂在骨再生中的功效。
具体实施例方式
本发明涉及药物制剂，该药物含有使用含氧氧化剂(如臭氧)氧化不饱和有机化合物(以液体形式或存在于溶液中)所得到的过氧化物或反应产物；渗透溶剂；含有螯合金属的染料；和芳香族氧化还原化合物。该药物制剂可以用来治疗糖尿病和肥胖症。本发明的一个具体实施方式
中，所述药物制剂的必要组分包括不饱和醇臭氧分解而形成过氧化产物、稳定溶剂、金属卟啉和醌。
药物制剂的不饱和有机化合物(也可以是不饱和烯烃)可以是不含羟基的烯烃或者是含有羟基的烯烃。优选的，所述烯烃的碳原子数小于35。不含羟基的烯烃可以是开链不饱和醇、单环不饱和醇或二环不饱和醇。所述烯烃也可以包含在非挥发油、酯、脂肪酸或醚中。
可用的不饱和烯烃可以是未取代的、取代的、环状的或复合的烯烃、肼、类异戊二烯、类固醇、喹啉、类胡萝卜素、生育酚、异戊烯化或不饱和脂肪。本发明优选的不饱和烃是烯烃和类异戊二烯。
作为精油的组分，类异戊二烯主要存在于植物中。而许多类异戊二烯是烃，含氧类异戊二烯也可以是醇、醛和酮。形式上，类异戊二烯烃类的组成结构可以被视为异戊二烯CH2＝C(CH3)-CH＝CH2，尽管已知异戊二烯本身是类异戊二烯生物合成的终产物而非中间体。类异戊二烯烃类的分类是根据它们所含有的异戊二烯单元(C5H8)数目。因此，单萜类具有2个异戊二烯单元、倍半萜具有3个异戊二烯单元、二萜类具有4个异戊二烯单元、二倍半萜具有5个异戊二烯单元、三萜类具有6个异戊二烯单元、四萜类具有8个异戊二烯单元。四萜更普遍的已知为类胡萝卜素。
柠檬烯和蒎烯是单萜的例子。法尼醇和橙花叔醇是倍半萜醇的例子。维生素A1和叶绿醇是双萜醇的例子，鲨烯是三萜的例子。维生素原A1，已知为胡萝卜素，是四萜的例子。香叶醇，一种单萜醇，其氧结合状态和正常状态都是液体形式并对活细胞是安全的。
用于本发明药物制剂的优选的不饱和烃包括烯烃类异戊二烯，如myricene、citrillene、柠檬醛、蒎烯或柠檬烯。优选的不饱和烃还包括在线性链上具有2-4个重复的异戊二烯基团的线性类异戊二烯醇，如α-萜品醇、香茅醇、橙花醇、叶绿醇、薄荷醇、香叶醇、尨牛儿基尨牛儿醇、芳樟醇或法尼醇。
不饱和有机化合物可以是线性的、分支的、环状的、螺旋形的或者在构型上与其他分子复合的。不饱和有机化合物在与氧化剂结合前可以气态液体或固体状态天然存在。
开链不饱和烃可以是CnH2n，1个双健，n＝2-20；CnH2n-2，2个双健，n＝4-20；CnH2n-4，3个双健，n＝6-20；CnH2n-6，4个双健，n＝8-20；C25H40，二倍半萜烯烃；或C30H48，三萜烯烃。
单环不饱和烃可以是CnH2n-2，1个双健，n＝3-20；CnH2n-4，2个双健和1个环，n＝5-20；CnH2n-6，3个双健和1个环，n＝7-20；C25H40，二倍半萜烯烃；或C30H48，三萜烯烃。
二环不饱和烃可以是CnH2n-4，1个双健和2个环，n＝4-20；CnH2n-6，2个双健和2个环，n＝6-20；C25H40，二倍半萜烯烃；或C30H48，三萜烯烃。
开环不饱和醇可以是CnH2nOm，1个双健n＝3-20，m＝1-4；CnH2n-2Om，2个双健n＝5-20，m＝1-4；CnH2n-4Om，3个双健n＝7-20，m＝1-4；CnH2n-6Om，4个双健，n＝9-20，m＝1-4；C25H40Om，m＝1-4，二倍半萜烯醇；或C30H48Om，m＝1-4，三萜烯醇。
单环不饱和醇可以是CnH2n-2Om，1个双健和1个环，n＝3-20，m＝1-4；CnH2n-4Om，2个双健和1个环，n＝5-20，m＝1-4；CnH2n-6Om，3个双健和1个环，n＝7-20，m＝1-4；C25H40Om，m＝1-4，二倍半萜烯醇；或C30H48Om，m＝1-4，三萜烯醇。
二环不饱和醇可以是CnH2n-4Om，1个双健和2个环，n＝5-20，m＝1-4；CnH2n-6Om，2个双健和2个环，n＝7-20，m＝1-4；C25H40Om，m＝1-4，二倍半萜烯醇；或C30H48Om，m＝1-4，三萜烯醇。
基于药物制剂的总重量，烯烃可以为约0.001％-30％，优选为约0.1％-5.0％，更优选为约0.5-3.0％。
本发明药物制剂的含氧氧化剂(氧化不饱和烃)可以是单态氧、三重态的氧、超氧负离子、臭氧、高碘酸、羟基、过氧化氢、过氧化烃、过氧化氨基酰、过氧化苯甲酰、过渡元素(如钼)结合氧(如MoO5)。
将“活化的氧”与完整的类异戊二烯醇(如香叶醇)相结合的优选方法是通过臭氧化作用，条件为温度0-20℃、黑暗中、不含水或极性溶剂。然后，黑暗条件下将香叶醇“臭氧化物”溶解并稳定于100％DMSO中，来防止产物过早分解。虽然不想受任何理论束缚，但相信香叶醇臭氧化的副产物过氧化四环氧乙烷二聚体(不是一种臭氧化物)在细胞中超氧负离子存在时发生催化分解。最终释放的活性治疗剂是过氧化氢和乙酸。
药物制剂还使用了渗透溶剂。稳定氧合不饱和烃的渗透溶剂可以是软化剂、液体、胶束薄膜或吸入剂。可用的渗透溶剂包括水溶液、脂肪、醇、卵磷脂、磷脂、乙醇、丙二醇、甲硫酰甲烷、聚乙烯吡咯烷酮、pH缓冲盐和二甲基亚砜(DMSO)。优选的渗透溶剂包括DMSO、聚乙烯吡咯烷酮和pH缓冲盐。最优选的渗透溶剂是DMSO。
基于药物制剂的总重量，渗透溶剂可以约为50％-99％，优选为90％-98％，更优选为约95％-98％。
“稳定的”过氧化分子及其渗透溶剂从目前受食品药品监督管理局(FDA)管理的生产中所使用的组分而制得。这些成分是药物主文件的(DMF)、药物专论的主题，记载于USP/NF，或者被公认为是安全的(GRAS)。
药物制剂的另一组分是螯合染料。该染料优选为含有螯合的二价或三价金属，如铁、铜、锰锡、镁或锶。优选的螯合金属是铁。发现螯合染料(如金属卟啉)在光化激活条件下有对氧敏感的倾向，如亚铁卟啉和铜卟啉倾向于结合有氧系统。可用的染料包括天然或合成染料。这些染料的例子包括卟啉、玫瑰红、叶绿酸、氯化高铁血红素、卟吩、咕啉、得萨啉(texaphrins)、亚甲篮、苏木精、曙红、藻红、黄酮、核黄素、蒽染料、金丝桃素、甲基胆蒽、中性红、荧光素、酞菁、真黑素和嗜黑色素。优选的染料可以是任何天然或合成的卟啉、血卟啉、叶绿酸、玫瑰红、它们各自的同源物、或者上述物质的混合物。最优选的染料是天然生成的卟啉，如血卟啉和玫瑰红。染料可以快速响应光子、激光、电离辐射、声子、电穿孔、磁或等离子脉冲或恒流刺激。
基于药物制剂或组合物的总重量，染料约为0.1％-30％，优选为约0.5％-5％，更优选为0.8％-1.5％。
药物制剂的其他组分为芳香族氧化-还原化合物，如醌。芳香族氧化还原化合物可以是任何取代或非取代的苯醌、萘醌或蒽醌。优选的芳香族氧化还原化合物包括苯醌、甲基苯醌、萘醌和甲基萘醌。最优选的芳香族氧化还原化合物为甲基萘醌。
基于药物制剂的总重量，芳香族氧化还原化合物可以约为0.01％-20.0％，优选的约为0.1％-10％，和更优选为约0.1％-0.5％。
药物制剂优选的被能量或电子给体所激活。有用的电子给体包括等离子体、电流、维生素C或抗坏血酸、三氧化二锗。优选的电子给体包括维生素C和三氧化二锗。最优选的电子给体是任何盐形式的抗坏血酸。
基于药物制剂的总重量，电子给体约为0.01％-20％，优选为1％-10％，更优选为1％-5％。
为获得体内生物学作用，优选的，被注入的药物制剂为不饱和烃经臭氧分解而生成的过氧化产物(不是臭氧化物)与生成螯合染料和芳香醌的超氧化物的交联物。不饱和烃产物或过氧化二聚体分子应该在非水稳定溶剂中被稳定，并且应该能够穿透类脂膜。
高能活性染料疗法的研究者们早已知道生成染料的超氧化物和芳香族氧化还原化合物优选的吸收入被感染和异常的细胞中，所述细胞一般还缺乏过氧化氢酶。不想受理论束缚，但过氧化氢酶诱导的过氧化物分解将在靶细胞中受到抑制，这种抑制的发生是自然地或者由药物制剂引起。过氧化二聚体还可以被超氧化物生成染料所激活，引发对二聚体的电子供给并导致过氧化氢和乙酸的细胞内释放。染料的电子激活作用不总是需要光，它的产生更可能是通过小电脉冲，例如由心脏脉冲提供的小电脉冲。然后，受感染的巨噬细胞中的过氧化反应易于破坏细胞内微管的异戊烯化蛋白键，易于破坏传染毒素，或者易于诱导宿主巨噬细胞的细胞凋亡。
药物制剂是稳定成分的组合。这些成分可以优选的作为干燥固体成分和液体成分而保存在分开的容器中，然后在使用场所混合。干燥固体成分优选的含有螯合染料和芳香族氧化还原化合物。液体成分优选的含有过氧化物或含氧活性剂氧化不饱和烃所得到的反应产物以及渗透溶剂。给药途径优选为静脉注入。重新溶解的产品优选的可以生理盐水浓缩剂静脉给入。牙髓和腹内也是可能的给药途径。肌肉内注射不是优选的方式，因为它易于产生局部刺激。药物制剂的体内使用能有效治疗受染患者体内的病毒和病毒症状。具体的，药物制剂刺激了牙脓肿、骨损伤和骨折的加速愈合和骨再生。药物制剂导致了增加的成骨细胞活性并在骨再生中是有效的。
实施例1不饱和烃的臭氧分解烯烃的臭氧分解在溶剂或neat中进行。在两种情况下，反应混合物的冷却在避免反应的过氧化产物爆炸性分解中都是关键的。
下述一般程序是液体烯烃臭氧分解的典型程序。
装有磁力搅拌器的1升烧瓶中装入烯烃(2摩尔)，该装置被称重。烧瓶至于冷却浴中(冰-水或冰-盐)。当内容物冷却至5℃以下时，开始搅拌，并将含有臭氧的干燥氧气(一般含3％臭氧)通过混合物。通过玻璃釉料排出含有臭氧的氧气是方便的，但这对于搅拌中的溶液不是必需的。定期中断气体流，进行反应瓶称重或反应混合物取样，之后继续通入气体流。
当反应瓶重量有足够增加时，或者当反应混合物的核磁共振(H1NMR)谱显示烯族质子共振强度的减少达到预期时(一般约减少50％)，停止气体流。
臭氧分解可以如上进行，在对臭氧无反应性的溶剂(如饱和烃或氯化烃)中代替烯烃溶液。臭氧分解也可以如上进行，使用或不使用溶剂，用烯醇代替烯烃，而对反应没有实质影响。
之后，反应混合物被缓缓倒入冷却的渗透溶剂中。
实施例2药物制剂的制备本发明优选的药物制剂制备如下(1)将臭氧/纯氧气体混合物120mg/L鼓泡通过二烯醇，3，7-二甲基-2，6-辛二烯-1-醇(香叶醇)，1升/小时；(2)反应温度保持在约5℃；(3)每1小时取出小部分反应产物并通过H1NMR检测过氧化物或反应产物的形成；(4)当有50％以上的可用不饱和键反应后，停止反应；(5)用二甲基亚砜稀释产品混合物(1∶10)而形成溶液或分散液；(6)在应用于靶生物系统之前，向所述溶液或分散液中加入足量的血卟啉、玫瑰红和甲基萘醌干燥粉末混合物，在通过盐水静脉注入靶生物系统时，散布在其中的每种组分的浓度为20微摩尔。任选的，可以在使用前将维生素C加入制剂。
实施例3药物制剂的举例两种优选的制剂如下A.
*通过质谱检测
B.
*通过质谱检测实施例4牙髓骨脓肿的治疗15例牙髓骨脓肿患者参加了一项研究，以确定药物制剂在骨髓治疗后的骨修复和愈合中的作用。12例患者接受牙髓清创并使用示例的药物制剂加强治疗。3例患者没有接受治疗，作为常规对照。接受治疗的患者的牙被打开并清创。一种含有上述实施例3制剂A的示例药物制剂连同0.2ml Ca(OH)2一起被滴入牙管和跟尖周骨，用药浓度为1cc药物制剂/10cc生理盐水。在牙髓治疗之前以及之后的6-8周，对根尖周脓肿进行放射照片。对照采用非增强的牙髓清创进行治疗。对于治疗组和对照组，清创后都进行充填、杜仲胶填充和暂时性复髓材料(IRM)加封。
一名79岁的男性出现1个月的瘘管感染，通过牙龈侧面区域感染(牙2)。最初放射照片显示牙齿上根尖周骨的大面积脓肿。患者接受了牙髓外科手术，从根管和瘘管释放了脓性渗出物。首先采用增强的髓清创术来治疗牙-骨。3周后，完成第二次清创并用杜仲胶充填根管。14天后，瘘管康复，随后的放射照片显示根尖周脓肿消除并伴有快速的骨再生。
一名50岁的男性出现1个月的牙齿冷过敏(牙19)。在采用根管部分充填前，牙齿已经接受了10年的牙髓治疗。初次放射照片显示了前根周围中度的根尖周病灶。该患者接受了上述增强的牙髓外科手术。所有症状在48小时内解决。3周后，使用杜仲胶充填完成了牙髓治疗过程。随后的放射照片显示根尖周病灶接近消除并伴有骨密度增加。
一名43岁的女性出现2个月的面部肿胀和疼痛并伴有牙齿叩击过敏(牙6)。初次放射照片显示牙根周围的根尖周病灶。该患者接受了上述增强的牙髓外科手术。2周内解决了面部肿胀。3周后，使用杜仲胶充填完成了牙髓治疗过程。随后的放射照片显示根尖周病灶接近消除并伴有骨密度增加。
一名50岁的女性出现牙齿外部的面部肿胀疼痛(牙19)。在之前的3个月内已经接受过牙髓治疗，没有治好；之前6个月，该患者还因甲状腺癌而接受过放射性碘疗法。初次放射照片显示了之前不完全的充填和后跟周围扩散的根尖周病灶。该患者接受了上述增强的牙髓外科手术。化脓性碎片的细菌培养物显示有奈瑟氏菌属和甲型链球菌。治疗后4天内解决了面部肿胀。6周后，使用杜仲胶充填完成了牙髓治疗过程。随后的放射照片显示根尖周病灶接近消除并伴有骨密度增加。
一名59岁的女性出现3个月的上腭牙齿根尖区上的瘘管(牙2)。该患者在4个月前接受过上述区域的根尖周外科手术。从瘘道分离的碎片培养物显示有β链球菌、肠球菌(D组)和变形梭杆菌。采用上述增强的牙髓外科手术治疗该患者的牙-骨。6周后，进行了临时恢复并修复了根管，此时，瘘管开始康复；3周后，该区域完全康复。
一名43岁的女性出现上颌骨双尖牙感染(牙13)。放射照片显示有增厚的牙周膜(PDL)，特别是全缘根尖近中面上，可能是折断的牙。如上进行增强的牙髓外科手术。患者在24小时内感觉有所改善，1个月后检测无症状。6周内，PDL厚度显著减少，特别是近中面上。
一名47岁的女性出现牙齿感染(牙14)。左上部区域肿胀，导致上颌骨左侧区域疼痛。如上进行了增强的牙髓外科手术。1天后，疼痛和肿胀消失。1个月内，患者无症状，根管区域充填无异常。
一名50岁的男性出现左下颌骨疼痛。检查确定是两颗牙的问题。一颗(牙18)患有不可逆的牙髓炎，另一颗(牙19)在前根管部位有感染并在远中根显示有根尖周病灶。采用上述增强的牙髓外科手术来治疗这两颗牙齿。次日，患者反映术后无疼痛，并没有采用止痛药或抗炎药物治疗。2个月后，当疗程结束时，第二颗牙的远中根病灶消失，牙齿保持无症状。
一名31岁的女性出现慢性牙骨质炎和牙周炎(牙19)，之前已经接受了2个多月的治疗。放射照片显示根尖骨病灶。采用上述增强的牙髓疗程进行治疗。患者反映疼痛在几天内有显著缓解。1个月后，当根管疗程正常结束时，原病灶区域无症状。6周后的放射照片显示骨脓肿康复。
一名76岁的女性出现牙齿的偶然疼痛(牙21)。该患者的医疗史表明之前有心脏病发作、癌症和抗生素过敏。放射照片显示有根尖周病灶和根管钙化。采用上述增强的牙髓疗程进行治疗。1天内疼痛得到缓解。1个月后的放射照片显示骨脓肿病灶消失。
一名40岁的女性出现牙周疼痛和根尖周骨脓肿(牙18)，几年前接受过牙髓治疗。采用上述牙髓疗程进行治疗，6周后完成全部治疗过程，放射照片显示根尖周脓肿损伤明显改善并有部分清除。
一名18岁的女性在牙齿近中根出现根尖周骨脓肿损伤(牙19)。牙髓治疗过程中提出的髓是坏死的。采用上述增强的牙髓疗程进行治疗。使用杜仲胶和氧化锌以常规方法完成最后治疗，用IRM密封。8周后的放射照片显示根尖周脓肿损伤的改善和部分清除。
对照组患者一名具有牙周疾病史的58岁男性(牙13)。其牙髓是坏死的。放射照片显示有根尖周骨脓肿损伤。常规牙髓治疗采用Ca(OH)2临时填敷，6周后完成治疗。牙齿依然有轻度症状，放射照片显示依然存在骨脓肿，也许会有轻微增大。
一名47岁的男性有一颗之前用假牙修复的牙齿(牙10)，证明有严重的根尖周骨再吸收，伴随慢性疼痛。常规牙髓治疗采用Ca(OH)2临时填敷，6个月后完成治疗和杜仲胶根管充填。1年后，牙齿依然有轻度症状，放射照片显示依然存在根尖周骨缺陷。
一名49岁的女性出现断折牙(牙19)，已经导致持续1年的疼痛，尽管做了修复。初次放射照片显示有牙本质破裂和根尖周骨脓肿。常规牙髓治疗采用Ca(OH)2临时填敷，7周后完成充填和杜仲胶填充。8个月后，牙齿依然有轻度症状，放射照片显示依然存在根尖周骨缺陷。
这些结果表明(包括治疗组和对照组患者的比较)，药物制剂在治疗牙髓骨脓肿和加速治疗区域骨再生中是有效的。
实施例5牙周损害和纤维瘤的治疗进行下述实验来确定药物制剂是否诱导了残存牙周韧带组织的骨化生。一名38岁的男性患者被诊断有良好局限的、非敏感的射线透性损伤(牙32)，该牙位是之前智牙拔除的位置。其病史和放射显像与纤维瘤相一致。在活组织检查之前，使用套管针将一种含有上述实施例3制剂B的药物制剂1cc注入损伤部位。3周后再次放射照相显示损伤内部放射密度增加。治疗后进行切除活组织检查，证实存在有被诱导的骨化生、编织骨的不规则柱和成骨细胞在良性纤维损伤部位的扩增。这些结果表明该药物制剂能有效诱导牙周纤维瘤部位的骨化生。
实施例6复合性骨折的治疗一名25岁的男性在摩托车比赛的意外事故中导致右肱骨复合粉碎性骨折。在受伤当天进行了开放的外科手术复位，使用了很多螺钉和板固定。放射照片记录了损伤的严重度，虽然被固定了，但在骨对合中有较宽间隙。手术1个月后，放射显示没有愈合作用。患者被静脉注入一种含有上述实施例3制剂B的药物制剂，2周内注射四次。治疗后，首次外科修复后7周，放射照片显示骨折线中多个缝隙被加速修复。对于这种类型的损伤来说，正常的修复结果估计要在4个月后才有。因此，上述实验结果表明药物制剂能有效诱导骨再生并加速复合性骨折的修复。
实施例7马骨折和关节损伤的治疗使用示例的药物制剂治疗两只跛瘸的马。
第一只马是3岁的纯种马，它出现跛行并对保守治疗无反应，持续1周，经诊断为非移位的肩胛骨骨折。在透视控制下，将一种含有上述实施例3制剂B的示例性药物制剂直接注射入骨折线，并且将肢体夹板固定。6周内，放射显示骨折愈合并无硬化或变形。治疗后8周，该马重返赛场。对于闭合复位术来说，马的这种承重骨骨折的正常愈合时间为5个月。
第二只马是6岁的杂种马，跛行后被诊断为右后肢腕骨中传染性病原死骨片。在两个腕关节采用螺钉固定进行关节融合。一个腕关节还使用一种含有上述实施例3制剂B的药物制剂进行治疗，通过静脉直接注入关节。另外一个关节没有注入药物制剂，作为对照。术后3周和6周的放射照片显示，与对照关节相比，使用药物制剂治疗的关节有加速的关节融合。6周时，经药物治疗的关节康复，比常规的马关节融合过程快了近5个月。
参考文献下述美国专利文献和出版物以引用方式并入本文。
美国专利美国专利号4,451,480(DeVillez)美国专利号4,591,602(DeVillez)美国专利号4,983,637(Herman)美国专利号5,086,076(Herman)美国专利号5,126,376(Herman)美国专利号5,190,977(Herman)美国专利号5,190,979(Herman)美国专利号5,260,342(Herman)美国专利号5,270,344(Herman)美国专利号5,364,879(Herman)其他出版物Beck-Coon，RJ.，Newton，C.W.，Kafrawy，A.H.An in vivostudy of the use of anonresorbable ceramic hydroxyapatite asan alloplastic graft material in periapical surgery.Oral SurgOral Med Oral Pathol’vol.71(4)，pp.483-88，1991.
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权利要求
1.一种刺激患者骨再生的方法，该方法包括为所述患者给入有效量的药物制剂，所述药物制剂包括使用含氧氧化剂氧化薄荷醇或烯烃所得到的过氧化物或反应产物，其中所述烯烃包括萜品醇、香茅醇、橙花醇、芳樟醇、叶绿醇、香叶醇、紫苏醇、薄荷醇、尨牛儿基尨牛儿醇或法尼醇，其中所述过氧化物或反应产物占所述药物制剂总重量的0.001-30％；渗透溶剂，包括二甲基亚砜、甾醇、卵磷脂、丙二醇或甲硫酰甲烷，占所述药物制剂总重量的50-99％；含有螯合二价或三价金属的染料，所述染料包括卟啉、玫瑰红、叶绿酸、氯化高铁血红素、咕啉、texaphrin、亚甲篮、苏木精、曙红、藻红、核黄素、蒽染料、金丝桃素、甲基胆蒽、中性红、荧光素、酞菁、真黑素或嗜黑色素，占所述药物制剂总重量的0.1-30％；和芳香族氧化还原化合物，包括取代或非取代的苯醌、萘醌或蒽醌，占所述药物制剂总重量的0.01-20％。
2.权利要求1所述的方法，其中所述烯烃是液体形式、在溶液中或者在分散液中。
3.权利要求1所述的方法，其中所述烯烃包含在非挥发油、酯、脂肪酸或醚中。
4.权利要求1所述的方法，其中所述含氧氧化剂包括单态氧、三重态的氧、超氧负离子、高碘酸、羟基、过氧化氢、过氧化烃、过氧化氨基酰、过氧化苯甲酰、与过渡元素结合的氧。
5.权利要求1所述的方法，其中所述含氧氧化剂包括臭氧。
6.权利要求1所述的方法，其中所述渗透溶剂是液体、胶束薄膜、软化剂或吸入剂。
7.权利要求1所述的方法，其中所述渗透溶剂是二甲基亚砜。
8.权利要求1所述的方法，其中所述染料包括卟啉、玫瑰红、叶绿酸或它们的混合物。
9.权利要求1所述的方法，其中所述金属包括铁。
10.权利要求1所述的方法，其中所述金属包括铜、锰、锡、镁或锶。
11.权利要求1所述的方法，进一步包括电子给体。
12.权利要求11所述的方法，其中所述电子给体包括抗坏血酸或其药用盐。
13.一种治疗糖尿病患者的方法，该方法包括为所述患者给入有效量的药物制剂，所述药物制剂包括使用臭氧和氧气的混合物氧化香叶醇所得到的过氧化物或反应产物；二甲基亚枫；含有螯合二价或三价金属的染料，其中所述染料含有血卟啉和玫瑰红的混合物或者血卟啉和叶绿酸的混合物；和甲萘醌。
14.一种提高患者成骨细胞活性的方法，该方法包括为所述患者给入有效量的药物制剂，所述药物制剂包括使用含氧氧化剂氧化薄荷醇或烯烃所得到的过氧化物或反应产物，其中所述烯烃包括萜品醇、香茅醇、橙花醇、芳樟醇、叶绿醇、香叶醇、紫苏醇、薄荷醇、尨牛儿基尨牛儿醇或法尼醇，其中所述过氧化物或反应产物占所述药物制剂总重量的0.001-30％；渗透溶剂，包括二甲基亚砜、甾醇、卵磷脂、丙二醇或甲硫酰甲烷，占所述药物制剂总重量的50-99％；含有螯合二价或三价金属的染料，所述染料包括卟啉、玫瑰红、叶绿酸、氯化高铁血红素、咕啉、texaphrin、亚甲篮、苏木精、曙红、藻红、核黄素、蒽染料、金丝桃素、甲基胆蒽、中性红、荧光素、酞菁、真黑素或嗜黑色素，占所述药物制剂总重量的0.1-30％；和芳香族氧化还原化合物，包括取代或非取代的苯醌、萘醌或蒽醌，占所述药物制剂总重量的0.01-20％。
15.权利要求14所述的方法，其中所述烯烃是液体形式、在溶液中或者在分散液中。
16.权利要求14所述的方法，其中所述烯烃包含在非挥发油、酯、脂肪酸或醚中。
17.权利要求14所述的方法，其中所述含氧氧化剂包括单态氧、三重态的氧、超氧负离子、高碘酸、羟基、过氧化氢、过氧化烃、过氧化氨基酰、过氧化苯甲酰、与过渡元素结合的氧。
18.权利要求14所述的方法，其中所述含氧氧化剂包括臭氧。
19.权利要求14所述的方法，其中所述渗透溶剂是液体、胶束薄膜、软化剂或吸入剂。
20.权利要求14所述的方法，其中所述渗透溶剂是二甲基亚砜。
21.权利要求14所述的方法，其中所述染料包括卟啉、玫瑰红或它们的混合物。
22.权利要求14所述的方法，其中所述金属包括铁。
23.权利要求14所述的方法，其中所述金属包括铜、锰、锡、镁或锶。
24.权利要求14所述的方法，进一步包括电子给体。
25.权利要求24所述的方法，其中所述电子给体包括抗坏血酸或其药用盐。
26.一种提高患者成骨细胞活性的方法，该方法包括为所述患者给入有效量的药物制剂，所述药物制剂包括使用臭氧和氧气的混合物氧化香叶醇所得到的过氧化物或反应产物；二甲基亚枫；含有螯合二价或三价金属的染料，其中所述染料含有血卟啉和玫瑰红的混合物或者血卟啉和叶绿酸的混合物；和甲萘醌。
全文摘要
本发明公开了一种药物制剂及其应用。该药物制剂含有使用含氧氧化剂(如臭氧)氧化烯烃(如香叶醇)所得到的过氧化物或反应产物；渗透溶剂，如二甲基亚枫；含有螯合金属的染料，如血卟啉；和芳香族氧化还原化合物，如苯醌。该药物制剂用于有效刺激患者骨再生并增加成骨细胞活性。
文档编号A61K31/045GK101027086SQ200580023281
公开日2007年8月29日 申请日期2005年5月10日 优先权日2004年5月10日
发明者罗伯特·F·霍夫曼 申请人:罗伯特·F·霍夫曼