专利名称：胎儿透明标本的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种人体标本的透明化方法，尤其涉及一种胎儿透明标本的制作方法。
背景技术：
制作透明标本是利用一些化学药品或物理方法处理机体组织，使其折光率与透明剂或周围介质相近，以便能透过肌肉组织清晰地观察胎儿的骨骼生长发育变化。此方法可显示一般解剖方法难以观察清晰的结构，如未完全骨化的胎儿骨等，这种方法对软组织的损伤达到最小程度。但目前，胎儿标本在制作时由于其骨骼尚未完全发育，因此成人标本的透明化方法不能完全适用于胎儿的标本透明制作，且其制作时间长，胎儿透明标本效果也不好，无法满足法医、医学及科研工作的需要。
发明内容
本发明的目的就是为了解决目前胎儿标本透明化效果不好，影响其应用等问题，提供一种具有方法简便，制作时间短，透明化效果好，能很好的满足医学等需要的胎儿透明标本的制作方法。
为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案一种胎儿透明标本的制作方法，它的方法为，(1)收集新鲜胚胎标本，即收集脱离母体死亡时间在24小时以内正常发育的胚胎；(2)标本固定，将收集到的新鲜胚胎标本清洗整理测量顶臀长度即坐高后，分组放入含75％乙醇固定液中固定2-7天；再放入含95％乙醇固定液中3-25天；(3)漂白，将固定好的标本放入漂白液中漂白，根据标本大小时间为12小时-10天，漂白后进行水洗；(4)脱水，将上述漂白后的标本放入95％乙醇液中脱水2-10天；(5)染色，按重量份计，将1-4份氢氧化钾、0.0002-0.0004份茜素红与100份水混合，形成的水溶液，将标本放入其中进行透明染色，染色时应以骨着色，软组织不着色为标准；(6)甘油脱水透明，将染色后的标本依次放入不同比例的水与甘油混合液中进行脱水透明，最终过渡到纯甘油液中保存，完成标本的透明制作。
所述步骤(2)中，标本分组时按胎龄进行，胎龄按克里斯和撕凯姆的计算图表中的坐高CR计算出，每两周为一组，共分17组，计自5-38周。
所述步骤(3)中，漂白液组成为，按重量份计，95％乙醇90份、30％过氧化氢1份、蒸馏水9份；漂白时间为，5-8周标本为12小时；9-12周标本为1-4天；13-16周标本为2-4天；17-24周标本为2-7天；25-38周标本为3-10天。
所述步骤(5)中，染色时染液浓度及染色时间为，5-8周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由1份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色24小时；9-12周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由2份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色48小时；13-16周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色3-4天；17-24周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色3-4天；25-38周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色4-5天。
所述步骤(5)中，对大于16周的标本可先放入浓度为6％的氢氧化钾水溶液中2小时加速透明，在胎儿脐带透明后再将其放入按重量份计，由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液进行骨染色。
所述步骤(5)中，在染色中，对过度染色的标本进行分色，其方法是将标本放入按重量份计，由浓度为1％的氢氧化钾5份与甘油1份组成的溶液中透明又分色，时间为2-15天。
所述步骤(6)中，水与甘油的比例按重量份计，分别为2∶1；1∶1；1∶2；最后为纯甘油；标本在各不同浓度的甘油液中透明时间依胎儿长度不同为3-25天。
所述步骤(6)中，在甘油脱水透明时，将装有标本的容器放在阳光充足处照射。
本发明的方法，透明效果好，易于观察胎儿骨骼发育情况，比使用的X线摄片观察效果更加准确可靠。
本发明的有益效果是方法简便，透明效果好，可使胎儿骨骼的骨化部分清晰显示，能满足医学、法医学及科研工作的要求。
图1为本发明的制作工艺流程与时间表。
具体实施例方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。
本发明的方法为(1)收集新鲜胚胎标本，即收集脱离母体死亡时间在24小时以内正常发育的胚胎标本。
(2)对所收集的标本进行整理、测量、确定胎龄并分组将其放入含75％乙醇固定液内保存。具体方法为胎龄按克里斯和撕凯姆的计算图表中坐高(CR)计算出。每两周为一组，共分17组，计自5-38周；在测量胚胎坐高的同时标本固定将收集到的新鲜胚胎标本清洗整理测量顶臀长度(即坐高)分组后放入含75％乙醇固定液中固定一周。再放入含95％乙醇固定液中3-20天(依胎体长度而定)；为便于观察，标本大于60mm时应去皮、去内脏、去脑。固定液可选乙醇或甲醛，但以乙醇固定后制作的标本透明效果好，使用甲醛固定的标本，透明后见在骨骼两端有黑色沉淀。
(3)漂白将固定好的标本放入漂白液中漂白。
漂白液组成为，按重量份计，95％乙醇90份、30％过氧化氢1份、蒸馏水9份；漂白时间为，5-8周标本为12小时；9-12周标本为1-4天；13-16周标本为2-4天；17-24周标本为2-7天；25-38周标本为3-10天。如图1所示。
(4)脱水将上述漂白后的标本放入含95％乙醇液中脱水2-10天。脱水越彻底，标本透明效果越好。
(5)染色按重量份计，由1-4份的氢氧化钾与0.0002-0.0004份茜素红、100份水组成水溶液，将标本放在其中进行透明染色，染色时应以骨着色，软组织不着色为标准。染液中氢氧化钾浓度应根据标本坐高长度的不断变化而调整才能得到理想的透明染色效果。
具体的染液浓度与染色时间的关系如下如图1所示5-35mm(5-8周)胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由1份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色24小时；36-80mm(9-12周)胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，由2份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色48小时；81-140mm(13-16周)胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色34天。
141-210mm(17-24周)胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色3-4天。
211-360mm(25-38周)胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色4-5天。
为保证染色效果和染色速度，应经常更换染液，新染液可使标本骨染色速度提前10-24小时。
为缩短染色时间增加透明效果对胎体长度大于110mm胚胎(大于16周者)可先放入浓度为6％的氢氧化钾水溶液2小时加速透明，观察胎儿齐带透明后再将其放入按重量份计，由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水组成的水溶液进行骨染色。
在染色中，胎儿软组织常被染上颜色，影响标本的观察，此时可对过度染色的标本进行分色，其方法是将标本放入按重量份计含1％氢氧化钾5份与甘油1份的溶液中既透明又分色。分色时间以胎题长度不同而不同，为2-15天，具体见图1所示。
(6)甘油脱水透明将染色后的标本放入不同比例的水、甘油混合液中进行脱水透明。最终过渡到纯甘油液中保存，完成标本的透明制作。所用水与甘油的比例按重量份计为2∶1；1∶1；1∶2；最后为纯甘油。标本在各不同浓度的甘油液中透明时间依胎儿长度不同为3-25天。其中，水与甘油的比例按重量份计为2∶1时，透明时间为4-20天；水与甘油的比例按重量份计为1∶1时，透明时间为3-21天；水与甘油的比例按重量份计为1∶2时，透明时间为6-20天；纯甘油时，透明时间为25天。如图1所示。
因甘油穿透力较弱，在标本放入甘油透明过程中，标本过大时，可将装有标本的容器放在阳光充足处照射，此法可加速甘油透明速度，得到满意的透明效果。此项改进可使甘油透明的速度提高3-5倍。
权利要求
1.一种胎儿透明标本的制作方法，其特征是它的方法为，(1)收集新鲜胚胎标本，即收集脱离母体死亡时间在24小时以内正常发育的胚胎；(2)标本固定，将收集到的新鲜胚胎标本清洗整理测量顶臀长度即坐高后，分组放入含75％乙醇固定液中固定2-7天；再放入含95％乙醇固定液中3-25天；(3)漂白，将固定好的标本放入漂白液中漂白，根据标本大小时间为12小时-10天，漂白后进行水洗；(4)脱水，将上述漂白后的标本放入95％乙醇液中脱水2-10天；(5)染色，按重量份计，将1-4份氢氧化钾、0.0002-0.0004份茜素红与100份水混合，形成的水溶液，将标本放入其中进行透明染色，染色时应以骨着色，软组织不着色为标准；(6)甘油脱水透明，将染色后的标本依次放入不同比例的水与甘油混合液中进行脱水透明，最终过渡到纯甘油液中保存，完成标本的透明制作。
2.根据权利要求1所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(2)中，标本分组时按胎龄进行，胎龄按克里斯和撕凯姆的计算图表中的坐高CR计算出，每两周为一组，共分17组，计自5-38周。
3.根据权利要求1或2所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(3)中，漂白液组成为，按重量份计，95％乙醇90份、30％过氧化氢1份、蒸馏水9份；漂白时间为，5-8周标本为12小时；9-12周标本为1-4天；13-16周标本为2-4天；17-24周标本为2-7天；25-38周标本为3-10天。
4.根据权利要求1或2所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(5)中，染色时染液浓度及染色时间为，5-8周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由1份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色24小时；9-12周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由2份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色48小时；13-16周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色3-4天；17-24周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色3-4天；25-38周胚胎标本染液浓度及染色时间为按重量份计，在由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液中染色4-5天。
5.根据权利要求1或2所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(5)中，对大于16周的标本可先放入浓度为6％的氢氧化钾水溶液中2小时加速透明，在胎儿脐带透明后再将其放入按重量份计，由4份氢氧化钾与0.0003份茜素红、100份水形成的水溶液进行骨染色。
6.根据权利要求4所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(5)中，在染色中，对过度染色的标本进行分色，其方法是将标本放入按重量份计，由浓度为1％的氢氧化钾5份与甘油1份组成的溶液中透明又分色，时间为2-15天。
7.根据权利要求1所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(6)中，水与甘油的比例按重量份计，分别为2∶1；1∶1；1∶2；最后为纯甘油；标本在各不同浓度的甘油液中透明时间依胎儿长度不同为3-25天。
8.根据权利要求1或7所述的胎儿透明标本的制作方法，其特征是所述步骤(6)中，在甘油脱水透明时，将装有标本的容器放在阳光充足处照射。
全文摘要
本发明公开了一种胎儿透明标本的制作方法。它解决了目前胎儿标本透明化效果不好，影响其应用等问题，具有方法简便，制作时间短，透明化效果好，能很好的满足医学等需要的优点，其方法为一种胎儿透明标本的制作方法，它的方法为，(1)收集新鲜胚胎标本；(2)标本固定；(3)漂白；(4)脱水；(5)染色；(6)甘油脱水透明，完成标本的透明制作。
文档编号A61B19/00GK1961816SQ20061007019
公开日2007年5月16日 申请日期2006年11月24日 优先权日2006年11月24日
发明者张维建 申请人:山东建筑大学