专利名称：硫普罗宁赖氨酸及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物化学领域，涉及硫普罗宁赖氨酸及其制备方法和用途。它可用于制备改善各类急慢性肝炎的肝功能，脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤的治疗及重金属的解毒，降低放化疗的毒副作用的药物，并可制备预防放化疗所致的外周白细胞减少，也可用于制备老年性早期白内障和玻璃体浑浊的治疗药物。
背景技术：
硫普罗宁为一种含巯基的甘氨酸衍生物，首先在日本上市，而后德、意、美、瑞士等国家相继作为改善肝功能药物应用临床。国外长期使用证实该药能全面、明显改善病毒性肝炎、酒精性肝损伤的肝功能指标及有关症状，具有疗效确切、安全可靠等特点。国内经上海市传染病医院等3家医院应用结果表明，硫普罗宁无论对急、慢性病毒性肝炎的症状及肝功能ALT和SB均有较好的改善作用，，其复发率低于常用的降酶药物如垂盆草冲剂、联苯双脂及强力宁注射液等。上海市传染病医院临床结果显示，硫普罗宁可减轻肿瘤患者放化疗后的消化道症状，同时又能升高白细胞的数量，改善和提高患者的生活质量，对放化疗引起的白细胞减少、肝损伤起到很好的防治作用。硫普罗宁对于老年性早期白内障及有玻璃体混浊的患者也有较好的疗效。硫普罗宁无明显不良反应，对血、尿常规及心肾功能均无损害，所以硫普罗宁在临床应用中是一种疗效确实，安全可靠的药物。
硫普罗宁结构中含有羧基表现出较强的酸性，对血管刺激性较大，因此静脉给药时常需将其冻干粉针剂先用5％碳酸氢钠水溶液溶解中和。另外，由于硫普罗宁结构中含有巯基容易发生氧化反应，其化学性质不稳定，不易制成稳定的药物制剂，也不利于药物的储存，对临床用药的安全性造成影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种化学性质稳定、水溶性良好的可用于改善各类急慢性肝炎的肝功能，脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤的治疗及重金属的解毒，降低放化疗的毒副作用，并可预防放化疗所致的外周白细胞减少，也可用于老年性早期白内障和玻璃体浑浊的治疗的有机盐类化合物及这种有机盐类化合物的制备方法和用途。
本发明的硫普罗宁赖氨酸是通过硫普罗宁与L-赖氨酸在乙醇和水混合溶液中成盐得到，并可以与相应的药用敷料组合制成供口服和静脉给药用的制剂。
本发明硫普罗宁赖氨酸的结构式为
分子式为C6H14N2O2·C5H9NO3S，分子量为309.38。
本发明制备过程中，由于赖氨酸含有两个可以成盐的氨基，因此应控制硫普罗宁的量。硫普罗宁与赖氨酸的摩尔比为1～1.5∶1，以1.1∶1最合适。
本发明的优点是L-赖氨酸属碱性氨基酸，分子中含两个氨基，为人体必需氨基酸之一，具有组织修复和增强免疫的作用，在临床上常用做恢复期病人的营养剂。
硫普罗宁与L-赖氨酸成盐后得到硫普罗宁赖氨酸，本品化学性质稳定，其水溶液pH值接近中性，从而有效的解决了硫普罗宁酸性强，化学稳定性差的问题；同时本品水溶性良好，为制成溶液剂型提供了方便。另外，由于L-赖氨酸具有组织修复和增强免疫的作用，其对肝功能的恢复和改善将起到有益的作用。
综上所述，硫普罗宁赖氨酸具有较高的临床应用价值。
具体实施例方式实施例1硫普罗宁赖氨酸的制备取100g(0.61mol)L-赖氨酸置于三颈瓶中，加入150mL蒸馏水，搅拌下固体全溶得澄清液。取110g(0.67mol)硫普罗宁溶于200mL乙醇中，控温-5-0℃下将之滴入赖氨酸溶液中。滴加完毕继续搅拌20分钟，冰浴下加入1000mL无水乙醇，搅拌2小时析出白色固体。抽滤，无水乙醇洗滤饼(100mL×2)，干燥，称重得170g白色固体。收率85％。
精制方法取粗品20g置于烧杯中，加20mL水溶解，得无色清液，滤至圆底瓶中。搅拌下加入160mL无水乙醇，渐渐析出白色固体。搅拌2小时，抽滤，无水乙醇洗滤饼(50mL×2)。50℃真空干燥2小时，称重得17g白色固体。熔点198-200℃。
元素分析理论值(％)C 42.70 H 7.49 N 13.58 S 10.37实测值(％)C 42.73 H 7.56 N 13.45 S 10.591H-NMR(DMSO-d6+D2O，300MHz)δ1.49(d，3H)，1.59(m，2H)，1.81(m，2H)，1.97(m，2H)，3.11(t，2H)，3.66(q，1H)，3.73(s，2H)，3.77(t，1H)。
13C-NMR(DMSO-d6+D2O，300MHz)δ22.03，22.32，27.25，30.77，37.57，39.86，44.44，55.24，174.42，175.32，175.63。
实施例2硫普罗宁赖氨酸注射液的制备处方硫普罗宁赖氨酸 190g氯化钠 18.0g注射用水 加至2000ml制成1000支制备工艺称取处方量的氯化钠，加入1800ml注射用水，搅拌使溶解。另称取处方量的硫普罗宁赖氨酸，加至上述溶液中搅拌使溶解制成澄明溶液，加1.8g活性炭，60℃搅拌吸附20分钟，过滤脱炭使药液澄明，加入注射用水至全量，搅拌均匀，0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓶中每支2ml，封口，100℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。
实施例3注射用硫普罗宁赖氨酸的制备处方硫普罗宁赖氨酸190g甘露醇100g制成1000支工艺称取处方量的主药及甘露醇倒入1800mL注射用水中，搅拌至全部溶解。加1.8g活性炭，60℃搅拌吸附20分钟，过滤脱炭使药液澄明，加入注射用水至全量，搅拌均匀，0.22um膜过滤。罐装，冻干，轧盖即可(2mL/支)。实施例4硫普罗宁赖氨酸片剂的制备处方奥替溴铵 190g乳糖 114g微晶纤维素142g羧甲基淀粉钠 24g硬脂酸镁 5g制成 1000片包衣液处方欧巴代(03B28796)21g95％乙醇 适量制成约430ml工艺将已过100目筛的辅料与主药过60目筛混合，以95％乙醇制软材，以18目筛制粒，60℃通风干燥，以16目筛整粒后与硬酯酸镁混合均匀，以Φ6mm浅凹冲打片。
包衣溶液的配制在适宜容器中加入适量的95％乙醇，开动搅拌机，将处方量的欧巴代(03B28796)固体粉末均匀地加入到旋涡中，同时尽量避免有粉末飘浮在液体表面，必要时，可以提高转速以保持适当的旋涡，待所有的欧巴代(03B28796)全部加入后，降低搅拌速度，使旋涡消失，继续搅拌45min，即得。
薄膜包衣片的制备将片芯置包衣锅内，保持温度60℃±5℃，进行包衣，即得稳定性影响因素试验根据2005年版《中国药典》二部附录XIX C“药物稳定性试验指导原则”方法，对硫普罗宁赖氨酸进行稳定性影响因素试验。
1、高温试验样品摊成≤5mm厚的薄层，露置于60℃的恒温箱中，分别于0、5、10天取样考察。
2、高湿度试验样品摊成≤5mm厚的薄层置于称量瓶中，精密称定重量，在温度25℃，相对湿度RH92.5％的条件下放置，于0、5、10天取样考察。
3、强光照射试验样品摊成≤5mm厚的薄层置于称量瓶中，露置于4500lx±500lx光照度下放置，于0、5、10天取样考察。
结果硫普罗宁赖氨酸分别在高温在60℃、高湿RH92.5％(25℃)和强光4500lx±500lx条件下放置10天后，外观、熔点、含量均无明显变化，稳定性较好。
酸度及溶解度试验1、酸度取本品0.2g，加水10mL溶解后，用精密pH试纸测定，pH为6.5。
2、溶解度根据2005年版《中国药典》二部凡例中溶解度测定方法，以水为溶剂在25℃条件下测定，硫普罗宁赖氨酸易溶于水，在25℃水中的溶解度为83.3g。
药理试验(硫普罗宁赖氨酸以代号L1-1表示)一、急性毒性试验(LD50的测定)[试验方法]取40只小鼠，随机分为4组，每组10只。通过预试找出合适的最大剂量为12.5g/kg，然后用蒸馏水按组间浓度1∶0.8依次稀释3个浓度。分别给4组小鼠一次性灌胃给药，给药容量为0.2ml/10g。给受试药物后，立即观察动物反应情况，连续观察给药后7天内的动物死亡数和中毒反应。
结果经Bliss法计算，LD50＝8.5g/kg，95％可信限为7.4～9.7g/kg。试验表明L1-1毒性很低，口服安全可靠。
二、药效学试验[试验方法]1.L1-1对CCl4致大鼠急性肝损伤模型的保护作用试验动物随机均衡分为6组，每组10只，标记后称重，即正常对照组，模型组，硫普罗宁对照组，L1-1高(189.5mg/kg)、中(95mg/kg)、低(47mg/kg)剂量组。正常对照组与模型组给予生理盐水(给药容积10ml/kg)，其它组等量的灌胃给药qd×5d。末次给药30min后，正常对照组腹腔注射(给药容积1ml/kg)生理盐水，其它组动物一次性腹腔注射等量的CCl4原液(剂量1ml/kg)，禁食不禁水24h后，腹主动脉取血，3000rpm离心10min，取血清，测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)，统计数据；同时剖取肝脏，称量肝重，计算肝脏的脏器指数；10％福尔马林液中固定，对肝脏进行病理组织学检查。
2.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型的治疗作用试验动物随机均衡分为6组，每组40只，即正常对照组，模型组，硫普罗宁对照组，L1-1高(379mg/kg)、中(189.5mg/kg)、低(95mg/kg)剂量组。试验时将醋氨酚溶于40℃的生理盐水，除正常对照组，其他各组均腹腔注射一次性腹腔注射醋氨酚生理盐水溶液(剂量为300mg/kg，给药容积10ml/kg)，30min后给药进行治疗，连续灌胃给药qd×5d，末次给药禁食不禁水24h后，自眼球后静脉窦采血，分离血清，3000rpm离心10min，取血清，测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)，统计数据；同时剖取肝脏，称量肝重，计算肝脏的脏器指数；10％福尔马林液中固定，对肝脏进行病理组织学检查。
3.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型的保护作用试验动物随机均衡分为6组，每组40只，即正常对照组，模型组，硫普罗宁对照组，L1-1高(379mg/kg)、中(189.5mg/kg)、低(95mg/kg)剂量组。正常对照组与模型组给与生理盐水(给药容积10ml/kg)，其它组等量的灌胃给药qd×5d。末次给药30min后，正常对照组腹腔注射(给药容积1ml/kg)生理盐水，其他各组均腹腔注射一次性腹腔注射醋氨酚生理盐水溶液(剂量为300mg/kg，给药容积10ml/kg.)，禁食不禁水24小时后，自眼球后静脉窦采血，分离血清，3000rpm离心10min，取血清，测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)，统计数据；同时剖取肝脏，称量肝重，计算肝脏的脏器指数；10％福尔马林液中固定，对肝脏进行病理组织学检查。
4.统计学方法统计学处理试验数据，单因素方差分析后，进行两组间的q检验，所有数据均经简明统计软件包处理。
1.CCl.致大鼠急性肝损伤试验血液学指标表1.L1-1对CCl4致大鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05表2.L1-1对CCl4致大鼠急性肝损伤模型血清中ALB、TP的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05由以上数据可知，与正常对照组相比，模型组的ALT、AST均显著升高(P＜0.01)，ALB、TP均显著下降(P＜0.01)。L1-1三个剂量组及硫普罗宁对照组与模型组相比，ALT、AST均显著下降(P＜0.05，P＜0.01)，ALB、TP均显著升高(P＜0.05，P＜0.01)，且呈现明显的剂量依赖关系。
病理组织学检查表3.L1-1对CCl4致大鼠急性肝损伤模型肝脏脏器指数的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05正常组肝小叶结构正常，中央静脉含红血球多少不等，肝窦内皮细胞未见增生、肿胀、肝细胞核、浆均未见异常。
模型组肝小叶结构紊乱，肝细胞核大小形状不一，肝细胞浆内可见圆形空泡，大小不等，尚可见嗜酸球。
硫普罗宁对照组肝细胞结构正常，有者内皮细胸轻度肿胀，窦内可见多数红血球，肝细胞未见异常。
L1-1高剂量组肝小叶结构正常，肝细胞未见空泡变性，水样变性及嗜酸球，窦内皮细胞未见明显肿胀。
L1-1中剂量组肝小叶结构紊乱，肝细胞胞浆内可见圆形空泡，局部可见嗜酸球。
L1-1低剂量组肝小叶结构紊乱，肝细胞胞浆内可见圆形空泡，气球样变及嗜酸球。
由病理观察结果可知CCl4使肝组织出现严重坏死区域、水肿、急性炎性浸润，还空泡变性等病理现象；而L1-1治疗组仅见少量的胞浆膨胀、空泡变性和少数炎性浸润，并无坏死现象。
以上结果提示，L1-1对CCl4致大鼠急性肝损伤模型的有保护作用。
2.醋氨酚致小鼠急性肝损伤试验(治疗)表4.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05表5.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型血清中ALB、TP的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05由以上数据可知，与正常对照组相比，模型组的ALT、AST均显著升高(P＜0.01)，ALB、TP均显著下降(P＜0.01)。L1-1三个剂量组及硫普罗宁对照组与模型组相比，ALT、AST均显著下降(P＜0.05，P＜0.01)，ALB、TP均显著升高(P＜0.05，P＜0.01)，且呈现明显的剂量依赖关系。
病理组织学检查表6.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型肝脏脏器指数的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05正常组肝小叶结构正常，中央静脉含红血球多少不等，肝细胞索呈放射状排列，内皮细胞未见肿胀、增生，肝细胞未见明显异常。
模型组肝小叶结构紊乱，多处可见肝细胞称点状或灶状坏死，亦可见巨噬细胞。
硫普罗宁对照组肝小叶结构正常，肝窦内皮细胞轻度肿胀，肝细胞未见坏死及变性。
L1-1高剂量组肝小叶结构正常，窦内皮细胞未见肿胀增生，肝细胞未见浊肿坏死等病理变化。
L1-1中剂量组肝小叶结构、肝窦及肝细胞均未见异常。
L1-1低剂量组肝小叶结构紊乱，肝窦内皮细胞肿胀，窦轻度扩张，肝细胞未见明显异常。
由病理观察结果可知醋氨酚使肝组织出现多处坏死区域、炎性浸润等病理现象；而L1-1治疗组仅见轻度肿胀和少数炎性浸润，并无坏死现象。
以上结果提示，L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型有治疗作用。
3.醋氨酚致小鼠急性肝损伤试验(预防)表7.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05表8.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型血清中ALB、TP的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05由以上数据可知，与正常对照组相比，模型组的ALT、AST均显著升高(P＜0.01)，ALB、TP均显著下降(P＜0.01)。L1-1三个剂量组及硫普罗宁对照组与模型组相比，ALT、AST均显著下降(P＜0.05，P＜0.01)，ALB、TP均显著升高(P＜0.05，P＜0.01)，且呈现明显的剂量依赖关系。
病理组织学检查表9.L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型肝脏脏器指数的影响
与Control组比较，##P＜0.01；与Model组比较，**P＜0.01，*P＜0.05正常组肝小叶结构正常，中央静脉含红血球多少不等，肝细胞索呈放射状排列，内皮细胞未见肿胀、增生，肝细胞核、浆未见明显异常。
模型组肝小叶结构紊乱，多处局部细胞可见为炎性细胞浸润，呈点状或灶状坏死，亦可见肝细胞呈水样变性。
硫普罗宁对照组肝小叶结构正常，肝窦内皮细胞轻度肿胀，肝细胞未见坏死变性。
L1-1高剂量组肝小叶结构正常，以中央静脉为中心，肝细胞索呈放射状排列，内皮细胞未见肿胀增生，肝细胞未见坏死及水样变性。
L1-1中剂量组肝小叶结构正常、肝细胞未见明显病理性改变。
L1-1低剂量组肝小叶结构正常，局部肝细胞不见，可见为炎性细胞浸润呈点状坏死，内皮细胞轻度肿胀。
由病理观察结果可知醋氨酚使肝组织出现多处坏死区域、水样病变等病理现象；而L1-1治疗组仅见轻度肿胀和少数炎性浸润，并无坏死现象。
以上结果提示，L1-1对醋氨酚致小鼠急性肝损伤模型的保护作用。
在药效学试验中，L1-1灌胃给药可明显使CCl4中毒大鼠、醋氨酚中毒小鼠被升高的ALT、AST及被降低的TP、ALB水平正常化。因此，可以用于制备保肝药物。
权利要求
1.硫普罗宁赖氨酸，其特征在于硫普罗宁与L-赖氨酸按摩尔比1～1.5∶1成盐，其结构式为 分子式为C6H14N2O2·C5H9NO2S，分子量为309.38。
2.一种如权利要求1所述的硫普罗宁赖氨酸的制备方法，其特征在于硫普罗宁与L-赖氨酸在乙醇和水混合溶液中进行成盐反应制得，反应式为 硫普罗宁与L-赖氨酸在乙醇和水混合溶液中进行成盐反应的温度为-5℃～80℃，二者用量摩尔比为1～1.5∶1。
3.硫普罗宁赖氨酸的用途，其特征在于以硫普罗宁赖氨酸为活性成分，与药学领域中常用的的药用敷料组合按常规方法制成供口服和静脉给药用的制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液以及注射液和冻干粉针剂。
4.根据权利要求4所述的硫普罗宁赖氨酸的用途，其特征在于用于制备改善各类急慢性肝炎的肝功能，脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤治疗的药物及重金属的解毒，降低放化疗的毒副作用的药物，并可用于制备预防放化疗所致的外周白细胞减少的药物，也可用于制备老年性早期白内障和玻璃体浑浊的治疗药物。
全文摘要
本发明涉及硫普罗宁赖氨酸及其制备方法和用途。它解决了硫普罗宁酸性强化学稳定性差的问题，将硫普罗宁的乙醇溶液滴加到L－赖氨酸水溶液中进行成盐反应，然后冷却析出固体，经抽滤、洗涤、干燥得硫普罗宁赖氨酸，分子式为C
文档编号A61P1/00GK1880301SQ20061007973
公开日2006年12月20日 申请日期2006年5月11日 优先权日2006年5月11日
发明者王绍杰, 陈欣, 付守廷 申请人:沈阳药科大学