专利名称：：一种当归有效组分及制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明属中药提取物，具体地说涉及从当归中提取的有效组分，及其制备方法，以及该有效组分在制备治疗、预防肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：肿瘤是一种常见病、多发病，其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾病。目前业内对恶性肿瘤的治疗主要还是以手术、放疗、化疗为主，但许多化学抗癌药物在作用于靶细胞时往往累及正常细胞，造成严重的副反应。植物药的遗传毒性不明显，中草药在抗癌抗突变方面有独特的优势和广阔的应用前景，而且中药在对肿瘤的辅助治疗中也起到不容忽视的作用。紫杉醇即是典型的从植物中获得的具有良好抗癌活性的天然化合物，现已开发为抗肿瘤药物。目前我国危害性最为严重的肿瘤为肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病及淋巴瘤等。特别是肝癌的发生率近年来有所增加。值得重视，这些肿瘤的病因学、发病学及其防治，均为我国肿瘤研究的重点。寻找高效低毒的抗癌药物以及抗癌辅助药物是当前肿瘤研究的重要内容。我国药用生物资源十分丰富，其生理活性物质是研究和发现新药先导化学物，开发新药的天然宝库。目前，我国从天然产物中提取活性物质，用于开发成治疗肿瘤疾病、安全性好、毒性低的新药还很少，从天然产物中提取活性物质，开发成具有抗肿瘤疗效的新药，具有重要应用价值和广阔发展前景。当归为伞形植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的根，始载于《神农本草经》。当归喜阴凉湿润气候，多生于高山寒湿的落叶林，在我国主产于甘肃、云南、四川等地。当归味甘平，性温，广泛应用于临床，素有"十方九归"之称，"药王"之美誉。当归的主要成分为藁本内酯类及其异构物、香豆素类、黄酮类以及有机酸类物质，其有效成分对神经系统、免疫系统、循环系统、血液系统、呼吸系统等均有作用，同时还具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等作用。
发明内容本发明的目的是提供一种当归有效组分，该有效组分主要含有化合物A:JapoangelolD，化合物B:Angelicolide,化合物C:Angeolide，其中化合物A的含量为15~30%,化合物B的含量为6075%，化合物C的含量为10~25%。优选A的含量为15~25%，B的含量为6070%，C的含量为1020%。最佳选A的含量为17~22%，B的含量为63~68%，C的含量为12~18%。化合物A的结构式为-化合物B的结构式为:化合物C的结构式为:本发明的另一目的是提供该当归有效组分的制备方法，通过以下步骤实现将当归药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液，将提取液浓縮成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改换氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液n，将洗脱液II浓縮干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，收集溶液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。优选的当归有效组分制备方法，包括下列步骤将当归药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:0.8-1.2)，加热回流0.8-1.2小时，提取13次，合并滤液得提取液，将提取液浓縮成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯(4753:1)作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改换氯仿和甲醇(813:1)作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓縮干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为911ml/min，柱温为室温，收集溶液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。最佳的当归有效组分制备方法，包括下列步骤将当归药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(l:l)，加热回流l小时，提取2次，合并滤液得提取液；将提取液浓縮成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯(50:1)作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改换氯仿和甲醇(10:1)作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓縮干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱(ZorbaxSB-C18;21.2mmx250mm)，流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序如下0分钟时，流动相为70%的水溶液和30%的乙腈溶液；18分钟时，流动相为60%的水溶液和40%的乙腈溶液；30分钟时，流动相为50%的水溶液和50%的乙腈溶液；32分钟时，流动相为30%的水溶液和70%的乙腈溶液；53分钟时，流动相为5%的水溶液和95%的乙腈溶液；60分钟时，流动相为5%的水溶液和95%的乙腈溶液；流速为10ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段34.244.0min收集溶液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。本发明的再一个目的是提供该当归有效组分在制备治疗、预防肿瘤的药物中的应用。本发明的当归有效组分可以作为活性成分，加入药剂学上接受的药物赋形剂或载体，按照药剂学上记载的方法制成制剂。本发明的当归有效组分还可以作为活性成分之一，还含有其他抗肿瘤药物，加入药剂学上接受的药物赋形剂或载体，按照药剂学上记载的方法制成制剂。所述药物的制剂形式包括液体制剂、固体制剂、胶囊剂、胶丸剂。包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。本发明的有益效果为1.本发明的提取分离工艺中使用了正相硅胶柱，能有效地除去糖、蛋白质、氨基酸等杂质，提高有效成分的含量，同时采用了制备色谱，能快速准确的得到有效成分。2.本发明提供的当归有效组分化学成分简单明确，在药理研究上更易于阐明其作用机制，在生产中更易于药物的质量控制。3.本发明提供的方法首次从当归中得到A、B、C等几个成分的组合物，并首次将其在多种肿瘤细胞株上进行药效筛选，得到较好的药理活性。具体实施例方式本发明结合附图和下面实施例进一步详细说明本发明的实质内容，该实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。实施例一当归有效组分的制备将200g当归药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液，将提取液浓縮成浸膏10.2g，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改换氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液II,将洗脱液II浓縮干燥后得样品3.3g;用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱。样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段34.2~44.0min收集溶液，浓縮干燥后得到有效组分0.25g。实施例二当归有效组分的制备将500g当归药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(l:0.81.2)，加热回流0.81.2小时，提取1~3次，合并滤液得提取液，将提取液浓縮成浸膏21.2g，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯(4753:1)作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改换氯仿和甲醇(813:1)作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓縮干燥后得样品6.8g;用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为9~llml/min，柱温为室温。样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段34.2~44.01^11收集溶液，浓縮干燥后得到有效组分0.60g。实施例三当归有效组分的制备取当归药材250g,将其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(l:l)，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得提取液。将提取液浓縮成浸膏得10.5g，将浸膏和硅胶拌样，用正相硅胶柱进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯(50:1)作为流动相，得洗脱液I，然后改换氯仿和甲醇(10:1)作为流动相，得洗脱液II，浓縮干燥后得3.5g样品。用制备液相色谱继续分离得到的样品。制备色谱的分离条件色谱柱为Agient制备柱(ZorbaxSB-C18;21.2mmx250mm)，流动相为水(A)和乙腈(B),梯度洗脱程序如下0分钟时，流动相为70%的水溶液和30%的乙腈溶液；18分钟时，流动相为60%的水溶液和40°/。的乙腈溶液；30分钟时，流动相为50%的水溶液和50%的乙腈溶液；32分钟时，流动相为30%的水溶液和70%的乙腈溶液；53分钟时，流动相为5%的水溶液和95%的乙腈溶液；60分钟时，流动相为5%的水溶液和95%的乙腈溶液；流速为10ml/min，柱温为室温。样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段34.244.0min收集溶液，浓縮干燥后得到有效组分0.28g。实施例四当归有效组分HPLC-ELSD分析色谱条件色谱柱AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6mmx150mm，5nm);采用梯度洗脱，流动相A相为0.2n/。冰醋酸水溶液，流动相B相为含0.2y。冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脱程序如下0分钟时，流动相A为90%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为10%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液；10分钟时，流动相A为50%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为50%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液；30分钟时，流动相A为5%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为95%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液；35分钟时，流动相A为5%的0.2%冰醋酸水溶液、流动相B为95%的0.2%冰醋酸的乙腈。溶液流速0.5mL'min";检测波长全波长；柱温3(TC。ELSD参数氮气流速:2.0L/min;漂移管温度105'C。供试品溶液的制备称取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。测定方法精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，依色谱分析条件测定，即得。本发明中，A的结构式为:实施例五当归有效组分制剂取实施例三的当归有效组分0.5g与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移至滴丸滴灌中，药液滴至68'C液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。实施例六当归有效组分制剂取实施例三的当归有效组分0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸钠0.9g和蒸馏水lml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装500支，即得。实施例七当归有效组分制剂取降香油1.5g，加入到13ml饱和的羟丙基P-环糊精中，搅拌溶解，滤过，滤叶低温干燥，的降香油和羟丙基P-环糊精的包合物粉末。除上述降香油合羟丙基P-环糊精的包合物粉末外，再取实施例三的当归提取物0.5g、甘露醇5.5g、依地酸钙钠0.9g和蒸馏水2ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装300支，即得。实施例八当归有效组分的药理实验药理模型HL60肿瘤细胞细胞培养与种板细胞培养使用RPMI1640(Gibco)[添加3.7g/L碳酸氢钠]90%，胎牛血清(四季青)10%，非必需氨基酸(Gibco)1。/。混合培养HL60细胞，密度需低于1(^个/mL。计算需要细胞总量Nfpcell，mL"xVT(p=2xl04个/mL)，其中V产0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10^iL，加10pL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数Nl，则离心管中的细胞数N为N!74xlO、2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液V!mL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2-Nt/NxV^在细胞槽中再加入Vt-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入100pL，孵育24h。种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100pLPBS，以减少培养液的蒸发。给药方案当归有效组分用DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。96孔板换液，每孔加入新鲜培养液15(HiL。在新的96孔板中加入220pL/孔的培养液，将吸取0.88i止药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50pL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为50ng/mL。孵育48h。每个浓度设4个平行复孔，每板设空白组(blank，只加培养液，不含细胞)，及阴性对照组(negative,细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200pL的培养液，将吸取0.88^LDMSO加入混匀)。SRB染色细胞培养结束后，取出培养板，每孔加入40%(质量/体积)的三氯乙酸(TCA)100(iL固定细胞，室温放置5min，4"C冰箱中放置1h。培养板各孔用去离子水洗涤5遍，以去除TCA。在空气中干燥后，每孔加0.4%的SRB100pL(1%色谱纯乙酸溶解)，室温下放置20min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，去除未结合的染料，空气中干燥后用lOmmol/LTrisl50ML/孔溶解，振荡5min，使用酶标仪(ELx800)测定，所用波长为4卯nm。抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药物胞值—空自胞值xl00%阴性对照组/t值一空白组^值药效结果见表l。根据HL60肿瘤细胞抑制率结果，当归有效组分对抑制HL60肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2.2药理模型K562肿瘤细胞细胞培养与种板细胞培养使用RPMI1640(Gibco)[添加2g/L碳酸氢钠]90%，小牛血清(赛乐)10%，非必需氨基酸(Gibco)1。/。混合培养K562细胞。计算需要细胞总量NT-pcell，mL"xVT(p:8x103个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10^iL，加10pL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液V1mL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2=NT/NxVl。在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入100^iL，孵育24h。种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100^iLPBS，以减少培养液的蒸发。给药方案当归有效组分加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-20。C。96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150mL。在新的96孔板中加入220pL/孔的培养液，将吸取0.88pL药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50pL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为50pg/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200^iL的培养液，将吸取0,88pLDMSO加入混匀)，阳性对照组(阿霉素终浓度4pg/mL)。SRB染色细胞培养结束后，取出培养板，每孔加入40%(质量/体积)的三氯乙酸(TCA)70pL固定细胞，4。C冰箱中放置1h。培养板各孔用去离子水洗涤5遍，以去除TCA。在空气中干燥后，每孔加0.4%的SRBlOOpL(1%色谱纯乙酸溶解)，室温下放置20min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，去除未结合的染料，空气中干燥后用10mmol/LTrisl50pL/孔溶解，振荡5min，使用酶标仪(ELx800)测定，所用波长为490nm。抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药物歸-空白歸xl00%阴性对照组^(值一空白组/(值药效结果见表2。根据K562肿瘤细胞抑制率结果，当归有效组分对抑制K562肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.3药理模型MCF-7肿瘤细胞细胞培养与种板细胞培养使用DMEM高糖型(Gibco)[添加3.7g/L碳酸氢钠]90%，小牛血清(赛乐)10%，非必需氨基酸(Gibco)1。/。混合培养MCF-7细胞。计算需要细胞总量NT:pcell'mL"xVT(p:2x103个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10^iL，加10pL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液V1mL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2-NT/NxVl。在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入100pL，孵育24h。种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100pLPBS,以减少培养液的蒸发。给药方案当归有效组分根据所称量的药品的重量，加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-20。C。96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150pL。在新的96孔板中加入220nL/孔的培养液，将吸取0.88nL药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入5(HiL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为50pg/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200pL的培养液，将吸取0.88pLDMSO加入混匀)，阳性对照组(阿霉素终浓度4pg/mL)。MTT比色法测定取出培养板，去除每孔上清，加入培养液一MTT混合溶液(培养液MTT溶液二10:1)100^L，孵育4h。吸弃培养液，每孔加入150pL的DMSO，振荡10min，550nm酶标仪(Elx800)测定。抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药物歸-空白歸x應阴性对照组」值一空白组v4值药效结果见表3。根据MCF-7肿瘤细胞抑制率结果，当归有效组分对抑制MCF-7肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>2.4药理模型KB肿瘤细胞，细胞培养与种板细胞培养使用DMEM高糖型(Gibco)藤加3.7g/L碳酸氢钠]90%，小牛血清(赛乐)10%，非必需氨基酸(Gibco)1%混合培养KB细胞。计算需要细胞总量NT-pcell，mL"xVT(p-2xl03个/mL)，其中VT=0.1mLx孔数+细胞槽剩余量。吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取l(HiL，加10pL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4x104x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液V1mL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2-NT/NxVl。在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入10(HiL，孵育24h。种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100^PBS，以减少培养液的蒸发。给药方案当归有效组分根据所称量的药品的重量，加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-20。C。96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150pL。在新的96孔板中加入220^iL/孔的培养液，将吸取0.88pL药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50pL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为50pg/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200pL的培养液，将吸取0.88pLDMSO加入混匀)，阳性对照组(阿霉素终浓度4pg/mL)。MTT比色法测定取出培养板，去除每孔上清，加入培养液一MTT混合溶液(培养液MTT溶液二10:1)100^L,孵育4h。吸弃培养液，每孔加入150iiL的DMSO，振荡10min，550nm酶标仪(Elx800)测定。抑制率的计算抑制率按如下公式计算抑制率(％)=药物歸-空白歸xl00%阴性对照组4值一空白组/l值药效结果见表4。根据KB肿瘤细胞抑制率结果，当归有效组分对抑制KB肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.5药理模型HepG2肿瘤细胞细胞培养与种板细胞培养使用DMEM高糖型(Gibco)[添加3.7g/L碳酸氢钠]90%，胎牛血清(四季青)10%，非必需氨基酸(Gibco)1%混合培养HepG2细胞。计算需要细胞总量NT=pcdlmL1xVT(p=2xl03个/mL)，其中VTKUmLx孔数+细胞槽剩余量。吹打培养瓶壁上的悬浮细胞，加入离心管中。取10mL，加10pL胎盘蓝稀释，计算计数板上活细胞数总数NL，则离心管中的细胞数N为NL/4xl04x2xV个，其中V为离心前离心管中的溶液体积。离心(900rad/min，10min)，吸去上清液，加入培养液VlmL，吹打，使细胞混匀，吸取V2mL加入到细胞槽中，使V2-NT/NxVl。在细胞槽中再加入VT-V2mL的培养液，用排枪吹打、混匀，取该液，每孔加入100pL，孵育24h。种板后选取4孔加入培养液作为空白对照，剩余孔加入100.uLPBS，以减少培养液的蒸发。给药方案当归有效组分根据所称量的药品的重量，根据所称量的药品的重量，加入相应体积的DMSO溶解，浓度为约50mg/mL。震荡溶解，若有大量液滴粘壁，可适当离心。可储存-20。C。96孔板换液，每孔加入新鲜培养液150nL。在新的96孔板中加入220pL/孔的培养液，将吸取0.88^L药液加入混匀，稀释250倍，将上述稀释好的药物向种有细胞的孔每孔加入50pL，此时药物稀释1000倍，即终浓度为5(Hig/mL。孵育48h。每个浓度设4(2)个平行复孔，每板设阴性对照组(细胞中加入空白溶液，空白溶液配法——加入200^iL的培养液，将吸取0.88pLDMSO加入混匀)，阳性对照组(阿霉素终浓度4pg/mL)。MTT比色法测定取出培养板，去除每孔上清，加入培养液一MTT混合溶液(培养液MTT溶液二10:1)100^L，孵育4h。吸弃培养液，每孔加入150pL的DMSO，振荡10min，550nm酶标仪(Elx800)测定。抑制率的计算抑制率按如下公式计算-抑制率(％)=药物歸-空麵x腦阴性对照组乂值一空白组^值药效结果见表5。根据HepG2肿瘤细胞抑制率结果，当归有效组分对抑制HepG2肿瘤细胞增殖有非常显著效果。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>权利要求1.一种当归有效组分，其特征是该有效组分含有化合物AJapoangelolD、化合物BAngelicolide、化合物CAngeolide，其中化合物A的含量为15～30％，化合物B的含量为60～75％，化合物C的含量为10～25％，化合物A的结构式为id="icf0001"file="S2007101568712C00011.gif"wi="88"he="59"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>化合物B的结构式为id="icf0002"file="S2007101568712C00012.gif"wi="45"he="45"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>化合物C的结构式为id="icf0003"file="S2007101568712C00013.gif"wi="52"he="34"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.根据权利要求1所述的一种当归有效组分的制备方法，其特征是通过以下步骤实现将当归药材粉碎后加入1:0.8-1.2的乙酸乙酯和乙醇，加热回流0.8-1.2小时，提取13次，合并滤液得提取液，将提取液浓縮成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用47~53:1的石油醚和乙酸乙酯作为流动相，得洗脱液I，弃之，再用813:1的氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓縮干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的目的物；制备色谱的分离条件为色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为9llml/min，柱温为室温，收集溶液，溶液经浓縮干燥后得到有效组分。3.根据权利要求2所述的一种当归有效组分的制备方法，其特征是所述梯度洗脱程序为0分钟时，流动相为70%的水溶液和30%的乙腈溶液；18分钟时，流动相为60%的水溶液和40%的乙腈溶液；30分钟时，流动相为50%的水溶液和50%的乙腈溶液；32分钟时，流动相为30%的水溶液和70%的乙腈溶液；53分钟时，流动相为5%的水溶液和95%的乙腈溶液；60分钟时，流动相为5%的水溶液和95%的乙腈溶液。4.根据权利要求2所述的一种当归有效组分的制备方法，其特征是色谱分离后，在34.2-44.0分钟时间段收集溶液。5.根据权利要求1所述的一种当归有效组分在制备治疗、预防肿瘤的药物中应用。6.根据权利要求5所述的一种当归有效组分的应用，其特征是所制备的药物还含有制剂允许的药物赋形剂或载体。7.根据权利要求5所述的一种当归有效组分的应用，其特征是所制备的药物还含有其他抗肿瘤药物。8.根据权利要求5所述的一种当归有效组分的应用，其特征是所述药物的制剂形式包括液体制剂、固体制剂、胶囊剂、胶丸剂。9.根据权利要求8所述的一种当归有效组分的应用，其特征是所述药物的给药方式包括口服给药或注射给药。全文摘要本发明提供一种当归有效组分，主要含有化合物AJapoangelolD，化合物BAngelicolide和化合物CAngeolide，含量分别为15～30％、60～75％和10～25％。通过加热提取，浓缩，硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用液相色谱继续分离，收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。本发明提供的当归有效组分可在制备治疗、预防肿瘤的药物中应用。本发明方法设计合理，能快速准确的得到有效成分，在生产中更易于药物的质量控制。文档编号A61K36/232GK101181321SQ20071015687公开日2008年5月21日申请日期2007年11月15日优先权日2007年11月15日发明者雳刘,水文波,瞿海斌,程翼宇,静窦,葛志伟,庆贺申请人:浙江大学