一种用于防治黄褐斑的中药组合物及其制备方法和其应用的制作方法

专利名称：：一种用于防治黄褐斑的中药组合物及其制备方法和其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药，特别涉及一种用于防治黄褐斑的中药组合物及其制备方法和其应用。
背景技术：
：黄褐斑又名黧黑斑，表现为面黑、黧黑、面尘、面軒、肝斑、面生黑斑等症状，为一种多因性色素沉着病，影响患者容貌，给其造成严重的心理压力。但黄褐斑的发病原因和机理复杂，其中肝气郁滞、肾水(阳)不足和血瘀内阻为其最多见的证型，其次是脾土亏虚。目甜，多数研究认为，黄褐斑是由于黄褐斑患者皮损部位黑色素细胞活性增强，黑素和黑素小体均增加，进而表现出色斑。病理状态下，真皮内巨噬细胞可吞噬滴落入真皮的黑色素体，或沉着于真皮上层，或在细胞内降解，一部分经淋巴转移。色素的产生与排泄失去平衡，并过剩地聚集在表皮细胞内的部分，就形成色素沉着。黑色素的排泄有两条途径--是从肾内排泄，另一是经皮肤排出，即黑色素被转移到角质蛋白中，随表皮生长移行到角质层，最后随角质层周期换新而脱落。治疗黄褐斑的方法包括针灸推拿(如局部针刺、体针、穴位注射、拔罐、刮痧、推拿、祌阙穴贴敷、埋线、埋针、耳穴等)、外治法(如乳霜、面膜、洗剂、熏蒸方)和方药治疗等。已有方药包括逍遥散、加味逍遥散、六味地黄汤、桃红四物汤、血府逐瘀汤、二至丸、归脾汤等；最常用的中药依次为当归、茯苓、川芎、白芍、柴胡、红花、甘草、熟地、白术、桃仁、丹皮、生地、赤芍、丹参、白芷、山萸肉、益母草、山药、女贞子、香附等。但这些治疗方法的效果不是很理想，不能从根本上治疗黄褐斑，并且还有一定的副作用。因此，提高一种高效安全的防治黄褐斑的药物己成为人们的迫切需求。
发明内容本发明的目的在于提供一种用于防治黄褐斑的中药组合物，其特征在于，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄7.5-25份，山楂6-20份，枸杞4.5-16份，丹参6-20份，红花3-10份。进一步，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄10-20份，山楂8-16份，枸杞6-12份，丹参8-16份，红花4-8份。3进一步，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄15份，山楂12份，枸杞9份，丹参12份，红花6份。进一步，优选组合物中的姜黄为片姜黄。进一步，优选组合物中的山楂为生山楂。本发明的中药组合物具有活血化瘀，疏经活络，改善皮肤的血液循环，增强皮肤抵抗力，调节肝脾等作用，以内治外，可有效的治疗色素沉着性皮肤病，特别是用于防治黄褐斑。其中，姜黄性温，味辛、苦。归肝脾经。有活血行气、通经之痛的功效。为"血中之气药"，可用于血瘀气滞的心、腹、胸、胁痛，经闭，产后腹痛及跌打损伤和风湿痹痛。山楂性微温，味酸甘。归脾、胃、肝、经。有消食化积、行气散瘀的功效。主要用于肉食积滞，泻痢腹痛，疝气痛，瘀阻胸腹痛和痛经。枸杞性平，味甘。归肝、肾经。具有补肝肾，明目的功效。可用于肝肾不足，腰酸遗精，头目晕眩，视力减退，内障目昏，消渴等。此外，本品含有甜菜碱、多糖、粗脂肪、粗蛋白、硫胺素、核黄素、胡萝卜素、抗坏血酸、尼克酸及钙、磷、铁、锌等元素。具有升高外周白细胞、增强网状内皮系统吞噬能力，有增强细胞与体液免疫的作用；对造血功能有促进的作用；还能抗衰老、抗突变、抗肿瘤、保肝及降血糖等。丹参性微寒，味苦。归心、肝经。有活血调经，凉血消肿，安神的功效。可用于妇女月经不调，痛经，经闭，产后瘀滞腹痛，疮疡痈肿，热病烦躁神昏及杂病心悸失眠。有报道称，丹参能扩张外周血管，改善微循环；有抗凝，促进纤溶，抑制血小板聚集，抑制血栓形成的作用；能提高机体的耐缺氧能力；能促进组织的修复。此外，还有增强免疫力，降低血糖及抗肿瘤的作用。红花性温，味辛。归心、肝经。最消瘀热，少则养血性温。有活血通经，祛瘀止痛的功效。用于血滞经闭，痛经，产后瘀滞腹痛，跌打损伤，血栓闭塞紫肿疼痛，斑疹色暗，热郁血瘀等。取本品有活血化斑之功。近代有以红花注射液肌注，防治多形性红斑者。上述各味中药之间协同作用，使得本发明的中药组合物对心、肝、脾等有不同程度的裨益，具有疏通经络和血液循环等作用，还可改善心态，增强健康信念，提高自身素质，从根本上防治黄褐斑。本发明的组合物可为本领域熟知的各种剂型。所述的适合于本发明的剂型可以为口服制剂、外用制剂及注射剂。口服制剂可选自口服液、汤剂、片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂、滴丸、糖浆剂、合剂、露剂或茶剂等；外用制剂可选自胶剂、贴膏剂、膏药、软膏剂、搽剂、洗剂、涂抹剂或凝膏剂等；注射剂可选自针剂、输液及冻干粉针等。可采用本领域熟知的制剂技术手段来完成本发明组合物的制备。所述的药学上可接受的载体为本领域熟知，为用于制备上述制剂的常用赋形剂或辅料。口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于填充剂或稀释剂、润滑剂或助流剂或抗粘着剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂等。粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮，优选的纤维素衍生物为微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐、山梨醇或甘氨酸，优选无机钙盐为硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙；润滑剂，例如微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇；崩解剂，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素，优选的淀粉衍生物为羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇等；优选口服制剂的药学上可接受的载体为微晶纤维素、硬脂酸镁或乙醇等。所述注射剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于抗氧剂，例如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠；抑菌剂，例如O.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇；调节剂，例如盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂磷酸二氧钠和磷酸氢二钠；乳化剂，例如聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂；抗氧剂，例如亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；增溶剂，例如吐温-80、胆汁、甘油等。另外，还可将活性成分与药学上可接受的缓控释载体按其制备要求加以混合，再按照本领域熟知的缓控释制剂的制备方法，如加入阻滞剂包衣或将活性成分微囊化后再制成微丸，如缓释微丸或控释微丸；所述的缓控释载体包括但不仅限于油脂性掺入剂、亲水胶体或包衣阻滞剂等，所述的油脂性掺入剂为单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、矿油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的亲水胶体为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等纤维素衍生物，或PVP、阿拉伯胶、西黄耆胶或卡波普等；所述的包衣阻滞剂为乙基纤维素(EC)、羟丙甲基纤维素(HMPC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、丙稀酸类树脂等。本发明的另一目的在于提供一种制备用于防治黄褐斑的中药组合物有效成分的方法，其特征在于，将制备该组合物所用药效成分的原料混合后，采用水提醇沉方法提取其有效成分。进一步，所述的水提醇沉方法提取其有效成分是指，取处方量的五味药材，加入药材量6一10倍的去离子水，煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次0.5小时；过滤，收集合并煎煮液，浓縮至相对密度1.05—1.3，冷却，加入95%乙醇，使其含醇量达到60-80%;静置，过滤，浓縮醇提取液，即得。进一步，优选去离子水的用量为药材量的7—9倍，更优选为8倍。进一步，优选煎煮液的浓縮相对密度为1.1一1.25，更优选为1.15—1.2。本发明的另一目的在于提供本发明的中药组合物用于制备美容祛斑的药物中的应用，优选所述的美容祛斑为色素沉着性皮肤病，更优选为防治黄褐斑。具体实施例方式以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。实施例1口服液的制备口服液的组成片姜黄120g，生山楂96g，枸杞72g，丹参96g，红花48g。制备方法取处方量的五味药材，加入药材量8倍的去离子水，煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次0.5小时；过滤，收集合并煎煮液，浓縮至相对密度1.15，冷却，加入95%乙醇，使其含醇量达到65%。静置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.2。加纯化水至1000ral，搅匀，灌装至10ml口服液瓶中，灭菌，包装即得。实施例2汤剂的制备将片姜黄15g，生山楂9g，枸杞9g，丹参12g和红花6g，加入药材量8倍的去离子水，煎煮三次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次0.5小时；过滤，收集合并煎煮液，即制得本发明的汤剂。以下通过药效试验例或毒性试验例来以验证本发明药物组合物对黄褐斑的防治效果。试验例1本发明中药组合物对黄褐斑的防治作用1、动物分组与造模、灌胃治疗方法取雌性昆明种小鼠60只，随机分为6组，每组10只。造模时间45天，灌胃治疗时间45天。①正常组以10。/。NaS2水溶液脱去背部毛，裸露出皮肤l块，面积约1.5cmX1.5cm。每周脱毛一次，每天肌肉注射注射用水，5ml/kg体重。连续观察小鼠的脱毛部位皮肤变化情况。45天后，停止造模，每天灌胃去离子水0.6ml。②模型组同正常组脱毛处理，每日注射0.4%黄体酮，5ral/kg体重。每闩将小鼠置于特制束缚桶内束缚，并在束缚同时以波长为320nm的中波紫外线(UVB)照射小鼠1次，束缚照射时间60min，连续观察。45天后，停止造模，每天灌胃去离子水0.6ml。③阳性对照组(逍遥散治疗组，3.43g/kg):同正常组脱毛处理，每日注射0.4%黄体酮，5ml/kg体重。每R将小鼠置于特制束缚桶内束缚，并在束缚同时以波长为320nm的中波紫外线(UVB)照射小鼠1次，束缚照射时间60min，连续观察。45天后，停止造模，每天灌胃逍遥散0.6ml。④组合物的高剂量组(14.19g/kg):同正常组脱毛处理，每日注射0.4%黄体酮，5ml/kg体重。每日将小鼠置于特制束缚桶内束缚，并在束缚同时以波长为320nm的中波紫外线(UVB)照射小鼠1次，束缚照射时间60min，连续观察。45天后，停止造模，每天灌胃组合物0.9ml。⑤组合物的中剂量组(9.46g/kg):同正常组脱毛处理，每闩注射0.4%黄体酮，5ml/kg体重。每日将小鼠置于特制束缚桶内束缚，并在束缚同时以波长为320nm的中波紫外线(UVB)照射小鼠1次，束缚照射时间60min，连续观察。45天后，停止造模，每天灌胃组合物0.6ml。⑥组合物的低剂量组(4.73g/kg):同正常组脱毛处理，每日注射0.4%黄体酮，5ml/kg体重。每日将小鼠置于特制束缚桶内束缚，并在束缚同时以波长为320nm的中波紫外线(UVB)照射小鼠1次，束缚照射时间60min，连续观察。45天后，停止造模，每天灌胃组合物0.3ml。2、取材第91天上午8点开始取材，取材前12小时断食水。双侧眼球取血处死，取肝脏0.5g，背部脱毛皮肤取2块0.5cm*0.5cm大小后，再取0.5g。血液室温静置4小时后4'C低温离心，取上清液备用。0.5g肝脏和皮肤用预冷生理盐水(4'C)冲洗，除尽杂质，拭干，分别放入有2.0ml预冷生理盐水的小试管内，用细胞粉碎机匀浆(肝脏2次，皮肤4次)，每次5s。匀浆后加入预冷生理盐水至5ml。以3500r/m离心15tnin，，取上清液备用。0.5c.m*0.5cm皮肤1块以10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片。另l块液氮冰存，冰冻切片备用。3、行为学实验方法3.1旷场实验分别于46天和90天清晨8时，在无噪声的实验环境条伴下进行。操作者握住小鼠的尾巴根部1/3处，轻轻将小鼠放入26cmX16cmX13cm的长方形实验盒内的中央格，并开始计时。底部均分为6格(2X3),分别观察并记录3min内小鼠行走的格数和直立的次数。实验要求在单盲的条件下进行，避免实验者了解组别后对实验结果产生影响。观察指标穿格次数、理毛修饰时间和次数、直立次数。进行4次，每次间隔3分钟。取后3次的数据计算平均数用于统计。3.2甩尾实验用一块软布轻轻裹住实验小鼠的身躯仅露出尾巴，使之不能逃脱又不至于太难受。将鼠尾尖端约1.5cra部分浸入53'C的水浴内，同时用秒表测出鼠尾从浸入到甩出水面的时间(精确到O.ls)。连续做4次，每次间隔30s。取后3次的数据计算平均数用于统计。3.3体重变化每天测量小鼠的体重，并进行分析统计。4、实验指标的测定4.1血清ACTH、CORT的测定(竞争法)加入25ul标准品、25ul血清标本于相应反应板孔中。每孔加入200ul酶联物，轻轻混匀30秒，20-25°C120分钟。洗板，甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板，并去除水滴(在厚叠吸水纸上拍干)；这样反复洗涤3次。每孔加入100ul显色液，室温15分钟。每孔加入50ul终止液。轻轻混匀30秒；60分钟内在450nm处读0D值。4.2皮肤、肝脏MDA、SOD、ZnCu—S0D活性测定采用试剂盒检测MDA、SOD活性，实验按照说明书进行。4.2.l总SOD(T-SOD)活力的测定按照说明书的要求，进行预实验计算出最优样本量为30ul。先后加入试剂14以及1%的组织匀浆，用旋涡混匀器充分混匀，置37'C恒温水浴40分钟。然后加入显色剂2ml混匀，IO分钟后倒入lcm光径比色杯中，蒸馏水调零，波长550nm处比色。4.2.2CuZn-SOD活力的测定取组织匀桨0.2ml加0.1ml的试剂七，用旋涡混匀器充分混匀l分钟后，以3500_4000转/分，离心15分钟，取上清液进行测试。方法同总SOD。4.2.3MDA活力的测定按照说明书的要求，先后加入试剂13以及1%的组织匀浆，旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，剌一小孔，95'C水浴40分钟，取出后流水冷却，然后35004000转/分，离心10分钟，(3000转/分以下离心时间需延长，目的使沉淀完全)。取上清O.lml，532nm处，lcm光径，蒸馏水调零，比色测各管吸光度值。4.3HMB45标记的皮肤黑色素细胞的病理形态学观察1)常规石蜡包埋切片(5um)，脱蜡至水。蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟。2)3XHA室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗，2分钟*3次。3)10%正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟，滴加一抗HMB45，4。C过夜。4)PBS冲洗，2分钟*3次。滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS稀释)，37度孵育10-30分钟；5)PBS冲洗，2分钟*3次。滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS稀释)，37度孵育10-30分钟；6)PBS冲洗，2分钟*3次。显色剂显色(DAB)5-10分钟。87)自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水透明、封片。采用Image-ProPlus5.0图像分析系统软件分析、计算各组黑色素细胞及黑色素颗粒阳性表达部位的面积和光密度。4.4皮肤黑色素细胞N0S的表达1)常规石蜡包埋切片(5um)，脱蜡至水。蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟。2)3XHA室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗，2分钟*3次。3)10%正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟，滴加一抗N0S，4'C过夜。4)PBS冲洗，2分钟*3次。滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1XBSA-PBS稀释)，37度孵育10-30分钟；5)PBS冲洗，2分钟*3次。滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS稀释)，37度孵育10-30分钟；6)PBS冲洗，2分钟*3次。显色剂显色(DAB)5-IO分钟。7)自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水透明、封片。采用Image-ProPlus5.0图像分析系统软件分析、计算各组N0S阳性表达部位的面积和光密度。4.5皮肤酪氨酸酶的mRNA表达1)冰冻切片(5um)，置打孔液中室温10分钟，给细胞打孔改变组织细胞的通透性使探针快速顺利的穿透细胞膜。0.1MPBS冲洗3次。2)置仏02封闭液室温20分钟，以封闭内源性^02酶。0.1MPBS冲洗3次。3)滴加复合消化工作液，覆盖组织表面，室温20分钟，0.1MPBS冲洗3次。0.2Xssc冲洗一次(室温3分钟)。4)滴加预杂交工作液，盖上原位杂交专业盖玻片，覆盖组织42'C湿盒孵育4小时。5)揭去盖玻片，以0.2Xssc冲洗三次，每次洗涤5分钟。6)滴加杂交工作液，覆盖组织37'C湿盒孵育5小时。7)揭去盖玻片，以2Xssc37。C冲洗三次，每次洗涤5分钟。0.2Xssc37。C冲洗三次，每次洗涤5分钟。0.1MTBS37'C冲洗3-5次，每次洗涤5分钟。8)滴加小鼠抗地高辛生物素标记的抗体工作液，覆盖组织37'C湿盒孵育45-60分钟。0.1MPBS冲洗3次，每次洗涤5分钟。9)滴加高敏过氧化氢酶链亲和素复合物工作液，覆盖组织37'C湿盒孵育50分钟，0.1MPBS冲洗3次，每次洗涤5分钟。10)DAB显色，光学显微镜下观察至细胞内胞浆阳性颜色与细胞外背景颜色反差对比明显时用蒸馏水冲洗，终止反应。11)苏木素复染，脱水透明、封片。引物序列如下鼠酪氨酸酶5'—GGTCCCTCAGGTGTTCCATCGCATAAA探针浓度8ug/ml杂交液，探针适用于小鼠。5、数据统计和图像分析5.1数据统计采用SPSS11.0软件进行多组间单因素的方差分析以及治疗前后对照的配对T检验进行统计分析。5.2图像分析图像在ImageproPlus5.0图像分析系统进行图像分析。每组8-10张切片，每张切片分析3个视野进行图像处理。处理前先用同等条件下拍摄的测微尺图像和空白片进行空间和光密度校正，分别测量各分区任意面积平均光密度(meanopticaldensity,MOD)、积分吸光度(intergralopticaldensity,IOD)和阳性物面积(area,wm)。数据结果按如下公式计算阳性面积=阳性物面积/测量总面积，100=积分吸光度测量值/测量总面积。6、实验结果6.1行为学本研究中肝郁证的行为学观察包括旷场实验、甩尾试验、体重变化观察和食量观察，分别反映小鼠的兴奋性和活跃度、反应性和体重、食欲。肝郁证包括肝气疏泄不及和太过两种情况，慢性束缚造模法限制了动物的自由行动，致使情绪受抑，情怀不遂出现疏泄不及。患者临床通常表现为郁郁寡欢、精神萎靡、情绪低落、食欲不振、体重下降，因此，小鼠行为学的表现是判断肝郁证模型成功与否的主要指标之一。6.1.1旷场实验旷场实验可以反映实验动物的兴奋性和活跃度，包括穿格次数、直立次数、理毛时间、理毛次数的观察。6.1.1.1穿格次数的计算和统计各模型组的穿格次数的均较空白组降低并有极显著差异，见表1。逍遥散、组合物高、中、低治疗组治疗后，穿格次数有所增加。其中逍遥散治疗组与模型无治疗组有显著差异。比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散和组合物高剂量治疗可以明显增.加肝郁小鼠的穿格次数，其中逍遥散治疗前后差异极显著，见表2。表l治疗前后穿格数(x土s，/5min)II^治疗前格数(格)治疗后格数(格)空白治疗§74.88±17.63模型治疗855.00±19.47《逍遥散治疗1051.00±11.13*75.88±12.4547.50±8.65:59.50±11.67:10—的高剂量组—10—40.30±10.34"46.00±9.7广组合物的中剂量组1054.10±12.32"56.卯±15.13"组合物的低剂量组1049.40±13.99"43.70±8.72"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，'P<0.01。表2治疗前后穿格次数对照表(治疗前一治疗后x土s,Z5min)组别n格数(格)空白治疗8—1.00±10.36模型治疗87.50±20.08逍遥散治疗8—9.75±7.19**组合物的高剂量组10—5.70士6.88'组合物的中剂量组10—2.80±9.68组合物的低剂量组10一4.30±8.56注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。治疗前后比较*P<0.05，**P<0.01。6.1.1.2直立次数的计算和统计各模型组的直立次数的均较空白组降低并有极显著差异，见表3。逍遥散、组合物高、中、低治疗组治疗后，直立次数有所增加。其中逍遥散治疗组与模型无治疗组有极显著差异。比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散和组合物高剂量治疗可以明显增加肝郁小鼠的直立次数，其中逍遥散治疗前后差异极显著，见表4。表3治疗前后直立次数(x士s，/5min)组别n治疗前直立(次)治疗后直立(次)空白治疗830.37±6.6129.50±7.52*模型治疗818.88±7.22**20.63±7.48*逍遥散治疗1019.80±6.56**32.00±8.00**组合物的高剂量组1016.70±5.06**23.50±6.35组合物的中剂量组1020.11±7.18**23.11±6.09组合物的低剂量组1020.60±8.75"23.60±6.10注与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01;与模型组比较，"<0.05，**P<0.01。治疗前F-3.879，治疗后F:3.435。表4治疗前后直立次数对照表(治疗前一治疗后x土s，/5min)组别n直立(次)空白治疗80.88±9.48模型治疗逍遥散治疗组合物的高剂量组组合物的中剂量组组合物的低剂量组88101010—1.75±6.88—13.75±8.78"—6.80±7.36*一3.00±6.06—3,00±7.72注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。治疗前后比较*P<0.05,**P<0.016.1.1.3理毛次数的计算和统计各模型组的理毛次数的均较空白组降低并有显著差异，见表5。逍遥散、组合物高、中、低治疗组治疗后，理毛次数有所增加。其中逍遥散治疗组与模型无治疗组有显著差异，且与空白组无明显差异。比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散治疗可以明显增加肝郁小鼠的理毛次数，其中逍遥散治疗前后差异极显著，见表6。表5治疗前后理毛次数(x土s，/5min)组别n治疗前理毛(次)治疗后理毛(次)空白治疗83.13±1.13"3.38±1.06*模型治疗81.38±0.52"2.13±0.83*逍遥散治疗101.30±0.48"3.25±1.28*组合物的高剂量组100.90±0.74"1.80士0.79**组合物的中剂量组101.60±0.7(T2.20±1.03*组合物的低剂量组101.80±0.79**2.10±1.20'注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05，林P〈0.01:与模型组比较，*P<0.05，★★P<0.01。治疗前F-9.048，治疗后F-3.457表6治疗前后理毛次数对照表(治疗前一治疗后x士s，/5min)组别理毛(次)空白治疗8—0.25±1.39模型治疗.8一O.75±1.04逍遥散治疗8—2.OO土l.51*组合物的高剂量组10—0.90±1.37组合物的中剂量组10—0.60±1.58组合物的低剂量组10—0.30±1.34注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。治疗前后比较*P<0.056.1.1.4理毛时间的计算和统计12各模型组的理毛时间的均较空白组降低并有显著差异，见表7。逍遥散、组合物高、中、低治疗组治疗后，理毛时间有所增加。与模型组对比，逍遥散治疗组有极显著的差异，与空白组无明显差异。比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散和组合物高剂量治疗可以明显增加肝郁小鼠的理毛时间，差异极显著，见表8。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表8治疗前后理毛时间对照表(治疗前一治疗后x士s，/5min)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。治疗前后比较，*P<0.05,**P<0.01。6.1.2甩尾时间的计算和统计各模型组的甩尾时间的均较空白组延长并有显著差异，见表9。逍遥散治疗后，甩尾时间縮短，与空白组无明显差异。比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散和组合物高、中剂量治疗可以明显縮短肝郁小鼠的甩尾时间，其中组合物高剂量组差异极显著，见表IO。提示逍遥散与高剂量组合物可以明显縮短肝郁证小鼠的甩尾时间，提高对外界刺激的反应能力，缓解肝郁引起的精神萎靡，对外界反应冷淡的症状。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>模型治疗逍遥散治疗组合物的高剂量组组合物的中剂量组组合物的低剂量组81010101016.50±2.80*16.36±2.55*19.85±5.92"17.49±6.30**16.47±3.79*丄O.00±3.10*'8.36±2.80"10.76±2,66*'13.65±3.86*"10.39±2.05"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05,林P〈0.01:与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。治疗前F-13.780,治疗后F可O.279。表10治疗前后甩尾时间对照表(治疗前一治疗后x土s，)组别n甩尾时间(s)空白治疗8-O.45±0.81模型治疗86.50±11.36逍遥散治疗87.51±8.64*组合物的高剂量组109.09±12.74**组合物的中剂量组103.84±3.17'组合物的低剂量组106.08±8.63注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。治疗前后比较，*P<0.05，林P〈0.016.1.3体重的变化各模型组的体重均较空白组有所下降，并有显著差异，见表ll。停止造模后，各组的体重上升，其中组合物高剂量组与空白组比较有显著差异，逍遥散治疗组有极显著差异，并与模型组差异显著。比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散和组合物高剂量治疗可以明显增加肝郁小鼠的体重，差异显著，见表12。提示逍遥散与高剂量组合物可以明显增高肝郁证小鼠的体重，缓解肝郁引起的体重下降症状。表ll治疗前后体重的变化(x土s，/45天)组别n治疗前体重增加量(克)治疗后体重增加量(克)空白治疗83.25±1.910.625±1.99模型治疗8一O.13±2.23"0.88±1.55逍遥散治疗10L30士1.49'2.80±1.69"*组合物的高剂量组100.70±1.83**2.30±1.89'组合物的中剂量组101.1±2.08*0.78±1.20组合物的低剂量组100.7±1.95"1.30±1.25注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05，林P〈0.01;与模型组比较，*P<0.05，★*P<0.01。治疗前F-2.863，治疗后F二2.879。14表12治疗前后体重变化对照表(治疗前--治疗后x土s，/45天)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。治疗前后比较，*P<0.05，**P<0.016.1.4行为学小结综上所述，本实验采用慢性束缚法建立肝郁证动物模型，从行为学的旷场实验、甩尾实验、体重可以发现，各模型组与空白组均有显著差异，验证了肝郁模型的成功，比较逍遥散、组合物的高、中、低治疗组的治疗前后效果可见，逍遥散和组合物高剂量对肝郁证具有缓解治疗作用，其中逍遥散作用更为明显。逍遥散具有疏肝解郁、健脾和营的作用，因此对于肝郁证模型小鼠具有较好的治疗作用。组合物中的君药片姜黄味辛、苦、温，归肝脾经，功能破血行气，通经止痛。该方虽然仅有一味药能够行气解郁，但是在大剂量使用的情况下，也具有一定的疏肝解郁的功效。6.2实验指标的测定6.2.1血清ACTH、CORT的测定6.2.1.1ACTH与空白组对照，模型组和逍遥散、组合物高、中、低剂量治疗组的血清ACTH值有极显著的差异。与模型组对照，逍遥散、组合物高、中、低剂量治疗组的血清ACTH值也有极显著的差异。见表13。可见慢性束缚法建立的肝郁证小鼠模型血清ACTH值明显上升，逍遥散、组合物高、中、低剂量对肝郁证小鼠血清ACTH值有恢复的作用，以组合物高剂量组最为显著但是与正常小鼠仍然有一定差距。6.2.1.2C0RT与空白组对照，模型组和逍遥散、组合物高、中、低剂量治疗组的血清CORT值上升，具有极显著的差异。与模型组对照，治疗各组无显著的差异。见表13。可见慢性束缚法建立的肝郁证小鼠模型血清CORT值明显上升，逍遥散、组合物高、中、低剂量对肝郁证小鼠血清CORT值没有显著的改变。表13血清中ACTH、CORT的变化(x士s，/ml)组别nACTH(pg/ml)CORT(ng/ml)空白治疗825.60±6.87"13.80±4.73**模型治疗873.17±17.78"28.76±7.10"逍遥散治疗850.82±7.73"**27.13±6.39"组合物的高剂量组1039.80±10.97"**22.56±6.15'*组合物的中剂量组1044.03±11.09"**26.31±3.85"组合物的低剂量组1048.02±8.08"**30.59±10.20"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05，》<0.01;与模型组比较，"P〈0.01。治疗前F=16.908,治疗后F=6.684。6.2.2肝脏、皮肤总SOD、ZuCu—SOD、MDA活性的测定6.2.2.1肝脏总SOD活性的测定和统计与空白组对照，模型组和组合物低剂量组的肝脏总SOD活性值下降，具有极显著的差异。与模型组对照，治疗逍遥散、组合物中剂量组有极显著的差异。见表14。可见慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型肝脏总SOD活性下降，逍遥散、组合物高、中、低剂量均能提高肝脏总SOD活性，其中逍遥散、组合物中剂量组有极显著的改变。6.2.2.2皮肤总SOD活性的测定和统计与空白组对照，模型组和组合物低剂量组的皮肤总SOD活性值下降，具有显著的差异；逍遥散、组合物高、中剂量组与空白组无显著差异。与模型组对照，治疗逍遥散、组合物高、中剂量组有极显著的差异，低剂量组有显著差异。见表14。可见慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型皮肤总SOD活性下降，逍遥散、组合物高、中、低剂量均能提高皮肤总S0D活性，其中逍遥散、组合物高、中剂量治疗有极显著的作用，治疗后与空白组没有显著差异。表14肝脏、皮肤总S0D活性的变化(x土s，/mg蛋白)Hi肝脏总S0D(nu)总SOD(加)空白治疗§81.95±9.09**模型治疗856.24±13.04"逍遥散治疗878.26±23.32*'组合物的高剂量组1069.65±9.1789.79±24.43*53.06±12.86'79.09±13.85'82.97±16.95，16组合物的中剂量组T574.84±13.26**84.53±15.31**组合物的低剂量组1059.05土11.74"71.01±16.64"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。肝脏F-4.624，皮肤F-5.0106.2.2.3肝脏ZuCu—SOD活性的测定和统计与空白组对照，模型组和组合物低剂量组的肝脏ZuCu—SOD活性值下降，具有显著的差异。与模型组对照，治疗逍遥散、组合物中剂量组有显著的差异。见表15。可见慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型肝脏ZuCu—SOD活性下降，逍遥散、组合物高、中、低剂量均能提高肝脏ZuCu—SOD活性，其中逍遥散、组合物中剂量具有显著的治疗作用。6.2.2.4皮肤ZuCu—SOD活性的测定和统计与空白组对照，模型组和组合物低剂量组的皮肤ZuCu—SOD活性值下降，具有显著的差异。与模型组对照，治疗逍遥散、组合物中剂量组有显著的差异。见表15。可见慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型皮肤ZuCu—SOD活性下降，逍遥散、组合物高、中、低剂量均能提高皮肤ZuCu—SOD活性，其中逍遥散、组合物中剂量具有显著的治疗作用。表15ZuCu—SOD活性的变化(x士s，/rag蛋白)组别n肝脏ZuCu—S0D(nu)皮肤ZuCu—S0D(nu)空fi治疗851.70±6.25*64.81土9.97**模型治疗839.94±10.94*41.66土12.76"逍遥散治疗851.81±9.44*51.35±:13.71*组合物的高剂量组1048.10±8.8554.70±7.79*组合物的中剂量组1050.98±8,63*58.57±9.68"组合物的低剂量组1039.31±11.87"40.42±9.96**注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01;与模荆组比较，*P<0.05，**P<0.01。肝脏F:3.395,皮肤F-6.804。6.2.2.5肝脏MDA活性的测定和统计与空白组对照，模型组的肝脏MDA活性值升高，具有显著的差异。与模型组对照，治疗组合物中剂量组有显著的差异。见表16。可见慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型肝脏MDA活性升高，逍遥散、组合物高、中、低剂量均能降低肝脏MDA活性，其中组合物高剂量具有显著的治疗作用。3.2.2.6皮肤MDA活性的测定和统计与空白组对照，模型组的皮肤MDA活性值升高，具有极显著的差异。与模型组对照，逍17遥散、组合物高、中剂量组有极显著的差异，低剂量组有显著差异，见表16。可见慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型皮肤MDA明显活性升高，逍遥散、组合物高、中、低剂量均能降低皮肤MDA活性，其中逍遥散、组合物高、中剂量具有极显著的治疗作用，与空白组无显著差异。表16MDA活性的变化(x士s，Ang蛋白)组别n肝脏MDA活性(nmol)皮肤MDA活性(nraol)空白治疗85.11±2.65**4.63±0.96**模型治疗815.36±2.67"13.23±5.73**逍遥散治疗88.57±4.17***6.84±2.73"组合物的高剂量组106.35±3.65**8.05±4.81**组合物的中剂量组109.09±3.17"*7.17±3.61"组合物治疗低1010.80±3.43""9.44±3.10"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为8。与空白组比较，*P<0.05,**P<0.01;与模荆组比较,*P<0.05，★*P<0.01。肝脏F-9.572，皮肤F-4.867。6.2.3丽B45标记的皮肤黑色素细胞病理形态学观察6.2.3.1HMB45标记的皮肤黑色素细胞的整体观察正常组鳞状上皮较菲薄，由排列整齐的基底细胞和棘细胞组成，共2-3层，表面有少量角质。真皮中见毛囊，皮脂腺与表皮相连，未见汗腺。皮下脂肪组织未见特殊。HMB^标记表皮中几乎未见黑色素细胞，毛囊、皮脂腺基底细胞中见少量黑色素细胞。模型组HMB，5标记的黑色素阳性细胞明显增多，与空白组有极显著差异，成簇分布于毛囊基底细胞团中，呈强阳性反应，表皮基底细胞和棘细胞层中亦见单个散在分布的黑色素细胞，伴细胞核增大及核上移。表皮细胞数增多，局部呈疣状增生。治疗组表现基本同模型组，黑色素阳性细胞减少，与模型组有显著差异，提示慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型皮肤黑色素细胞较正常小鼠显著增多，逍遥散和组合物有治疗作用。6.2.3.2HMB45标记的皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒的图像分析表17刚B45标记的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒阳性面积的变化组别n阳性面积(x士s)IOD(x±s)MOD(x±s)空白治疗240.0006±0.0002"0.0017±0.0006"0.1328士0.0538"模型治疗240.0129±0.0026"0.0038±0.0013**0.2087±0.0604"逍遥散治疗240.0024±0.0006'"0.0021±0.0010s**0.137±0.0501**组合物的髙剂量组300.0038±0,0003**0.0035±0.00150.2043±0.0308"18组合物的中剂量组300.0029±0.0003"0.0033±0.0013"0.1799±0.0230"*组合物的低剂量组300.0024土0.0002"0.0026±0.0010'"*0.1815±0.0310"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为24。与空白组比较，'P<0.05，"P〈0.01;与模型组比较〈0.05，**P<0.01。阳性面积的F=61.170，IOD的F=14.096，MOD的F=ll.896。从表17看出(1)模型组HMB45标记的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒的阳性面积较正常组显著升高(P<0.01)，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，其中逍遥散治疗组和组合物低剂量组下降非常显著(P<0.01)，组合物高、中剂量组下降趋势不明显。(2)模型组HMB45标记的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒的IOD较正常组显著升高(P<0.01)，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，其中逍遥散治疗组和组合物低剂量组下降非常显著(P<0.01)。组合物中、高剂量组下降趋势不明显。(3)模型组HMB45标记的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒的MOD较正常组显著升高(P<0.01)，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，其中逍遥散治疗组下降非常显著(P<0.01)，组合物中剂量组下降明显(P<0.05)。组合物高、低剂量组下降趋势不明显。综上所述，模型组HMB45标记的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒的阳性面积、IOD、MOD均有显著的升高，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，但是总体而言，逍遥散治疗组的效果最为显著，对阳性面积、IOD、MOD均有显著的降低作用，其次是组合物各剂量组。6.2.4皮肤黑色素细胞NOS表达的观察和分析6.2.4.1皮肤黑色素细胞NOS表达的整体观察正常组鳞状上皮较菲薄，由排列整齐的基底细胞和棘细胞组成，共2-3层，表面有少量角质。真皮中见毛囊，皮脂腺与表皮相连，未见汗腺。皮下脂肪组织未见特殊。NOS标记表皮中几乎未见黑色素细胞，毛囊、皮脂腺基底细胞中见少量黑色素细胞。模型组NOS阳性细胞明显增多，与空白组有极显著差异，成簇分布于毛囊基底细胞团中，呈强阳性反应，表皮基底细胞和棘细胞层中亦见单个散在分布的黑色素细胞，伴细胞核增大及核上移。表皮细胞数增多，局部呈疣状增生。治疗组表现基本同模型组，NOS阳性细胞减少，与模型组有显著差异，提示慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型皮肤黑色素细胞较正常小鼠显著增多，逍遥散和组合物有治疗作用。6.2.4.2皮肤黑色素细胞NOS表达的图像分析表18皮肤黑色素细胞NOS表达的变化组另寸i阳性面积(x±s)IOD(x±s)MOD(x±s)19空白治疗240.0205土O.0058"0.0378±0.0115"0.1673±0.0299"模型治疗240.1103±0.0232"0.0875±0.0162"0.2183±0.0515"逍遥散治疗240.0496±0.0063""0.0651±0.0120"**0.1908士O.0372**组合物的高剂量组3'00.0555±0.0117**"0.0553±0.(X)92""0.2051±0.0318"组合物的中剂量组300.1160土0.0258"0.0701土0.0112""0.2167±0.0430"组合物的低剂量组300.0616士0.0113""0.0632±0.Oll(T"0.1982±0.0367**注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为24。与空白组比较，'P<0.05，"P〈0.01;与模荆组比较，*P<0.05，★*P<0.01。阳性面积F-143.103，IOD的F=46.929，MOD的F=6.058从表18可以看出(1)模型组的小鼠皮肤黑色素细胞NOS表达的阳性面积较正常组显著升高(P<0.01),逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，其中逍遥散治疗组和组合物高、低剂量组下降非常显著(P<0.01)，组合物中剂量组下降趋势不明显。(2)模型组的小鼠皮肤黑色素细胞NOS表达的IOD较止常组显著升高(P<0.01)，逍遥散、组合物各剂量治疗组有明显下降趋势，其中逍遥散治疗组和组合物中剂量组下降非常显著(P<0.01)，组合物高、中剂量组高、低剂量组下降趋势显著。(3)模型组的小鼠皮肤黑色素细胞NOS表达的MOD较正常组显著升高(P<0.01)，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，其中逍遥散治疗组下降显著(P<0.05)，组合物各剂量组下降趋势不明显。综上所述，模型组的小鼠皮肤黑色素细胞NOS表达的的阳性面积、IOD、MOD均有显著的升高，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，但是总体而言，逍遥散治疗组的效果最为显著，其次是组合物各剂量组。6.2.5皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA水平的影响6.2.5.1皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的整体观察正常组鳞状上皮较菲薄，由排列整齐的基底细胞和棘细胞组成，共2-3层，表面有少量角质。真皮中见毛囊，皮脂腺与表皮相连，未见汗腺。皮下脂肪组织未见特殊。基底层未见胞浆棕黄色酪氨酸酶mRNA表达的黑色素细胞，毛囊、皮脂腺基底细胞中见少量黑色素细胞酪氨酸酶mRNA的表达。模型组黑色素细胞酪氨酸酶mRNA的表达明显增多，与空白组有极显著差异，成簇分布于毛囊基底细胞团中，呈强阳性反应，表皮基底细胞和棘细胞层中亦见多个表达。表皮细胞数增多，局部呈疣状增生。治疗组表现基本同模型组，黑色素细胞酪氨酸酶mRNA的表达减少，与模型组有差异。提示慢性束缚+紫外线+黄体酮法建立的肝郁型黄褐斑小鼠模型皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA20的表达较正常小鼠显著增多，逍遥散和组合物有治疗作用。6.2.5.2皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的图像分析表19皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的变化组别n阳性面积(x±s)IOD(x±s)MOD(x土s)'空白治疗240.0061±0.0010**0.0279±0.0020"0.2016±0.0818**模型治疗240.128±0.0368"0.1183±0.0300**0.3346±0.0856'"逍遥散治疗240.0728±0.018广**0.0925±0.0210****0.3214±0.0750"组合物的高剂量组300.0864±0.0126""0.0791±0.0122"**0.3290±0.095广组合物的中剂量组300.0678士0.0124""0.0905±0.0187"1^0.2642±0.0992""组合物的低剂量组300.0723±0.0102,0.1172士0.0227"0.3343±0.0772"注逍遥散治疗组死亡2只，样本量为24。与空白组比较，卞<0.05，"P〈0.01;与模型组比较，*P<0.05，★*P<0.01。阳性面积F414.440,IOD的F=70.739，MOD的F-10.041。从表19可以看出(1)模型组的小鼠皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的阳性面积较正常组显著升高(P<0.01)，逍遥散、组合物高、中、低剂量治疗组有下降趋势，与模型组差异非常显著(P<0.01)。(2)模型组的小鼠皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的IOD较正常组显著升高(P〈0.0D，逍遥散、组合物高、中剂量治疗组有下降趋势，与模型组差异非常显著(P〈0.01)。(3)模型组的小鼠皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的MOD较正常组显著升高(KO.Ol)，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，其中组合物中剂量组下降非常显著(P<0.01)，逍遥散、组合物高、低剂量组下降趋势不明显。综上所述，模型组的小鼠皮肤黑色素细胞酪氨酸酶mRNA表达的阳性面积、IOD、MOD均有显著的升高，逍遥散、组合物各剂量治疗组有下降趋势，但是总体而言，逍遥散和组合物高、中剂量治疗组的效果最为显著，其次是组合物低剂量组。6.2.6测定指标结果小结模型组血清ACTII、CORT明显上升，皮肤、肝脏的总S0D，ZnCu-S0D下降，MDA上升，HMB45标记黑色素细胞的阳性面积、M0D、IOD升高，NOS表达阳性面积、M0D、IOD升高，酪氨酸酶mRNA表达阳性面积、M0D、IOD升高。逍遥散治疗组与模型组比较，血清ACTH明显下降，血清CORT无显著差异。皮肤、肝脏的总S0D，ZnCu-S0D上升，皮肤MDA下降，肝脏MDA无显著变化。HMB45标记黑色素细胞的阳性面积、M0D、IOD降低，N0S表达阳性面积、M0D、IOD降低，酪氨酸酶mRNA表达阳性面积降低，M0D、IOD无显著变化。组合物高剂量组与模型组比较，血清ACTH明显下降，皮肤总SOD上升，皮肤MDA下降。HMB45标记黑色素细胞的MOD降低，NOS表达阳性面积降低，其余指标无显著变化。组合物中剂量组与模型组比较，血清ACTH明显下降，皮肤、肝脏的总SOD，ZnCu-SOD上升，皮肤、肝脏MDA下降。HMB45标记黑色素细胞的IOD降低，NOS表达MOD降低，酪氨酸酶mRNA表达阳性面积、IOD降低，其余指标无显著变化。组合物低剂量组与模型组比较，血清ACTH明显下降，皮肤总SOD上升。HMB45标记黑色素细胞的阳性面积降低，NOS表达阳性面积降低，酪氨酸酶mRNA表达阳性面积降低，其余指标无显著变化。7、结论模型组的各个指标均有变化，提示黄褐斑模型的成功。本发明组合物的高、中、低剂量对于小鼠行为学有较好的改善作用，并且能够改善血清C0RT、肝脏MDA、酪氨酸酶mRNA表达M0D、IOD以外的其它所有指标，甚至接近正常组，提示对黄褐斑有较好的防治作用。2权利要求1、一种用于防治黄褐斑的中药组合物，其特征在于，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄7.5-25份，山楂6-20份，枸杞4.5-16份，丹参6-20份，红花3-10份。2、根据权利要求l所述的中药组合物，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄IO-20份，山楂8-16份，枸杞6-12份，丹参8-16份，红花4-8份。3、根据权利要求2所述的中药组合物，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄15份，山楂12份，枸杞9份，丹参12份，红花6份。4、根据权利要求1-3任-^项所述的中药组合物，所述屮药组合物的剂型选g门服制剂、外用制剂、注射剂或其缓控籽制剂，优选组合物屮的姜黄为片关黄，更优选组合物屮的山楂为生山楂。5、根据权利要求4所述的中药组合物，所述的口服制剂选自汤剂、口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂、滴丸、糖浆剂、合剂、露剂或茶剂。6、根据权利要求4所述的中药组合物，所述的外用制剂选自胶剂、贴膏剂、膏药、软膏剂、搽剂、洗剂、涂抹剂或凝膏剂。7、根据权利要求4所述的中药组合物，所述的注射剂选自针剂、输液或冻千粉针。8、种制备权利要求1一7任'项所述的中药组合物有效成分的方法，其特征在于，将制备该组合物所用药效成分的原料混合后，采用水提醇沉方法提取其有效成分。9、根据权利要求8所述的方法，所述的水提醇沉方法提取其有效成分是指，取处方量的TI味药材，加入药材量6—10倍的去离子水，煎煮三次，第-'次1.5小吋，第二次l小吋，第二次O.5小时；过滤，收集合并煎煮液，浓縮节相对密度L05—1.3，冷却，加入95%乙醇，使其含醇量达到60-80%;静置，过滤，浓縮醇提取液，即得。10、根据权利要求9所述的方法，所述去离子水的用量为药材量的7—9倍，优选为8倍。11、根据权利要求9所述的方法，所述煎煮液的浓缩相对密度为1.1—1.25,优选为1.15一l.2。12、权利要求1—7任项所述的中药组合物用于制备美容祛斑的药物中的应用，优选所述的美容祛斑为色素沉着性皮肤病，更优选为防治黄褐斑。全文摘要本发明涉及一种用于防治黄褐斑的中药组合物，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为姜黄7.5-25份，山楂6-20份，枸杞4.5-16份，丹参6-20份，红花3-10份。本发明的中药组合物具有活血化瘀，疏经活络，改善皮肤的血液循环，增强皮肤抵抗力，调节肝脾等作用，可有效的治疗色素沉着性皮肤病，特别是用于防治黄褐斑。文档编号A61K36/9066GK101468182SQ200710301479公开日2009年7月1日申请日期2007年12月28日优先权日2007年12月28日发明者吴晓丹,汪南玥,陈家旭申请人:陈家旭