专利名称：抗过敏药以及含有其的食品及饮料、外用药、化妆品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗过敏药以及含有其的食品及饮料、外用药、化妆品，上述抗过敏药含有作为有效成分的新的儿茶素。
背景技术：
在现代社会，随着饮食生活和生活方式的多样化不断推进，过敏症状也趋于多样化，并且在逐年增加。现在，包括潜在的患者在内的过敏患者共有3000万人。另外，还有很多人担心类固醇等药剂的副作用，尽管意识到过敏症状，但担心药剂的副作用，因此不能期望积极治疗而苦于症状。因此，消费者非常期待和关心能够简便且放心地摄取具有抗过敏作用的成分的食品及饮料的开发。
现有技术中已经指出绿茶中所含的儿茶素类、皂角苷、类黄酮、咖啡因具有抗过敏效果(参照专利文献1、非专利文献1和非专利文献2)，红富贵(Benifuuki)、红藤(Benifuji)、红誉(benihomare)等含有甲基化儿茶素的茶叶具有I型过敏抑制效果、抗炎症效果(参照专利文献2)。
其中，由红富贵、红藤、红誉等阿萨姆杂种所制造的绿茶或者包种茶具有抗过敏作用、抗炎症作用，这些茶叶已被利用。但是，这些茶叶目前产量少，价格高，并且其效果存在个体差异。因此，开发了一种对所有人都可期待效果的食品及饮料。
专利文献1日本专利特开2001-253879号公报
专利文献2日本专利特开2000-159670号公报
非专利文献1Allergy，52，58(1997)，Fragrance J.，11，50(1990)
非专利文献2Biol.Pharm.Bull.，20,565(1997)
发明内容
已知具有抗过敏活性的儿茶素类有表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为EGCG3＂Me)。然而，虽然在其他茶叶中也含有此EGCG3＂Me，但仅凭EGCG3＂Me的抗过敏活性并不能说明所述阿萨姆杂种茶叶萃取物的强抗过敏活性。
如果可以将阿萨姆杂种茶叶所特有的具有高抗过敏活性的物质提取出来，用作抗过敏药，则能够容易地制造出对所有人均可期待效果的食品及饮料。但是，迄今为止还不了解阿萨姆杂种茶叶所特有的具有高抗过敏活性的物质是何种物质。
鉴于以上问题，本发明提供一种抗过敏药以及含有其的食品及饮料、外用药、化妆品，所述抗过敏药含有以提取阿萨姆杂种茶叶所特有的具有强抗过敏性的物质为目的而获得的儿茶素类，即表儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)没食子酸酯以及这些物质的差向异构体，并将其作为有效成分。
更具体来说，本发明提供如下物质和方法。
(1)一种抗过敏药制造用化合物，其特征在于其是由下述通式(1)表示。
[化1]
[式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。] 如上所述，儿茶素类具有抗氧化作用、动脉硬化抑制作用、血压上升抑制作用、血糖上升抑制作用、杀菌作用、抗菌作用、除臭作用等各种效果。本发明的发明人们发现，由通式(1)所表示的化合物，即表儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂Me)、表儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯(以下称为ECG4＂Me)、表儿茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂4＂diMe)、表儿茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂5＂diMe)、表儿茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂4＂5＂triMe)以及这些物质的差向异构体(以下称为CG3＂Me、CG4＂Me、CG3＂4＂diMe、CG3＂5＂diMe、CG3＂4＂5＂triMe)是阿萨姆杂种茶叶所特有的具有强抗过敏性的物质。其中，发现ECG3＂Me具有特别强的抗过敏性。这些物质在萃取茶叶时容易差向异构化，所以例如在利用色谱法等分离方法时，这些物质会和其他甲基化儿茶素一起被分离。此外，R1、R2、R3的对应关系如下所示。
[表1] 因此，通过将所述化合物用作抗过敏药制造用化合物，可以提供速效性更高的抗过敏药。另外，此化合物是从茶叶中萃取出的儿茶素类的一种，因此对像医药品那样的副作用的顾虑也很少。
其中，所谓“抗过敏药”是指以ECG3＂Me等为有效成分，并且发挥抑制过敏症状效果的药物。判断在所述抗过敏药中含有有效成分量的ECG3＂Me等，即可判断所述抗过敏药发挥充分效果的程度。因此，在本发明中，所谓抗过敏药包括ECG3＂Me单体以及含有其他儿茶素类或保存剂、防腐剂等的混合物这两种。
(2)根据(1)所述的抗过敏药制造用化合物，其特征在于其是来自以阿萨姆杂种茶叶为原料的绿茶或者包种茶的茶叶的成分。
以通式(1)所表示的ECG3＂Me等是来自阿萨姆杂种茶叶的化合物。因此，根据本发明(2)，可以通过制成以阿萨姆杂种茶叶为原料的绿茶或者包种茶来提高茶叶中的ECG3＂Me等的含量，因此可以效率良好地制造抗过敏药制造用化合物。
(3)根据(2)所述的抗过敏药制造用化合物，其特征在于所述阿萨姆杂种茶叶是红富贵。
即使在阿萨姆杂种系茶叶中，红富贵的抗过敏活性也特别强。因此，根据本发明(3)，可以通过将红富贵的茶叶制成绿茶或者包种茶来提高茶叶中的ECG3＂Me等的含量，因此可以效率更加良好地进行提取。此外，提取时也可以添加磷酸溶液、乙酸溶液、柠檬酸溶液、抗坏血酸溶液。其原因在于通过添加磷酸溶液等酸性溶液，可以防止像小木麻黄素(strictinin)这样的水解型单宁酸分解。并且可以提高儿茶素类的萃取效率。
(4)根据(1)至(3)中任一项所述的抗过敏药制造用化合物，其特征在于其是在利用使用了粒径为5μm、柱长度为150mm的十八烷基二氧化硅柱的高效液相色谱法进行测定的条件下，洗脱液为水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇的混合液，在流动相的流速为1ml/min下，多元酚组分在37分钟至50分钟的溶出时间内移动的成分。
根据发明(4)，通过使用粒径为5μm、柱长度为150mm的十八烷基二氧化硅柱(ODS-C18柱)，洗脱液为水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇的混合液，将在流动相的流速为1ml/min下提取出来的物质用作抗过敏药制造用化合物，可以更高效良好地制造抗过敏药制造用化合物。
洗脱液使用将水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇全部以特定的比例进行混合而获得的溶液。例如，优选使用将水、乙腈、磷酸分别以体积比400:10:1进行混合而获得的溶液作为洗脱液A，并且使用将所述洗脱液A与甲醇分别以体积比2:1进行混合而获得的溶液作为洗脱液B。
(5)一种饮料，其特征在于在每100ml的饮料中含有0.08mg至80mg的根据(1)至(4)中任一项所述的抗过敏药制造用化合物。
根据发明(5)，通过使饮料中的抗过敏药制造用化合物含量为所述量，可以使儿茶素类在饮料中发挥抗过敏作用。如果所述含量不足0.08mg，则不能发挥充分的抗过敏作用。另外，当所述含量超过80mg时，口味会受损。
此外，本发明中所谓的“饮料”是指例如绿茶、红茶、中国茶等茶饮料，果汁饮料、运动饮料等清凉饮料，咖啡类、可可、果汁类、牛奶饮料、碳酸饮料、酒精饮料、其他在日本标准商品分类(总务厅)中所公布的各种饮料。
(6)根据(5)所述的饮料，其特征在于其是密闭容器装饮料。
根据发明(6)，通过制成装入到密闭容器中的饮料，可以随时方便地摄取。这样可以通过饮茶这种日常行为来预防或减轻过敏症状。
另外，本发明中所谓的“密闭容器装饮料”是指填充在如下容器等中的饮料以聚对苯二甲酸乙二醇酯为主要成分的成形容器(即所谓PET瓶)、金属罐、与金属箔或塑料膜复合而形成的纸容器、瓶等。
(7)一种食品，其特征在于在每100g的食品中含有0.08mg至80mg的根据(1)至(4)中任一项所述的抗过敏药制造用化合物。
根据发明(7)，通过使食品中的过敏剂制造用化合物的含量为所述量，可以使儿茶素类在食品中发挥抗过敏作用。如果所述含量不足0.08mg，则不能发挥充分的抗过敏作用。另外，当所述含量超过80mg时，口味会受损。
此外，本发明中所谓的“食品”，如果是可以含有本发明涉及的抗过敏药制造用化合物的形态的食品，那么没有特别限定。例如可以是面包、曲奇饼、巧克力、口香糖、谷物食品、点心等固态食品，果酱、酸奶、果冻等凝胶状食品或者半固态食品等。
(8)一种使用方法，其特征在于将根据(1)至(4)中任一项所述的抗过敏药制造用化合物用作抗过敏增效剂。
根据发明(8)，通过将抗过敏药制造用化合物用作抗过敏增效剂，添加在例如像薮北(yabukita)这样的ECG3＂Me等的含量不高的茶饮料，或者利用了谷物茶、混合茶的抗过敏作用的食品的开发等中，可以在不损失这些茶饮料自身的功能的情况下增强抗过敏效果。
此外，本发明中所谓的“抗过敏增效剂”，除了提纯以通式(1)所表示的化合物而获得的物质以外，还包含根据需要将例如没食子儿茶素没食子酸酯或儿茶素等适当组合而获得的混合物。另外，对其形状并无特别限制，可以是液体、粉末、粒状等。
(9)一种抗过敏药制造用化合物的制造方法，其特征在于具有以下步骤在以阿萨姆杂种茶叶为原料的绿茶或者包种茶的茶叶粉末中添加溶剂继而获得混合液的步骤；从所述混合液中萃取出由下述通式(1)所表示的抗过敏药制造用化合物，再利用高效液相色谱法进行提纯的步骤。
[化2]
[式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。] (10)一种使用方法，其特征在于使用内径为4.6mm、长度为150mm以及粒径为5μm的十八烷基二氧化硅柱，用于制造由下述通式(1)所表示的抗过敏药制造用化合物。
[化3]
[式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。] 根据本发明，通过将从阿萨姆杂种茶叶中提取的ECG3＂Me等用作抗过敏药制造用化合物，可以提供速效性更高的抗过敏药。另外，所述抗过敏药制造用化合物是来自茶叶中的物质，因此很少引起嗜睡等的副作用。因此，无论是谁都可以放心地摄取。
另外，通过将所述抗过敏药制造用化合物添加到食品及饮料中，可以提供一种具有符合大众口味的食品及饮料。这样可以通过喝饮料，或者吃食品等日常行为来预防过敏症状。
此外，通过将所述抗过敏药制造用化合物用作抗过敏增效剂使用，可以既不损失抗过敏效果低的茶饮料等本来所具有的功能，又增强抗过敏效果。
图1是表示使用色谱法来提取本发明的抗过敏药的结果的图。
图2是表示通过改变儿茶素类的添加量来研究组胺释放抑制效果的结果的图。
图3是表示EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合比与组胺释放抑制效果的关系的图。
图4是表示EGCG3＂Me和ECG3＂Me的添加量与组胺释放抑制效果的关系的图。
具体实施例方式 以下，对本发明加以详细的说明，但本发明并限定于此。
<茶叶萃取物的制造> 本发明的抗过敏药制造用化合物的制造方法具有以下步骤在以阿萨姆杂种茶叶为原料的绿茶或者包种茶，特别是红富贵绿茶或者红富贵包种茶的茶叶粉末中，添加溶剂而获得混合液的步骤；以及从该混合液中萃取出由下述通式(1)所表示的抗过敏药制造用化合物，再利用高效液相色谱法进行提纯的步骤。以下，依次对使用红富贵茶叶时的各步骤加以说明。
[化4]
[式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。] 首先，在获得混合液的步骤中，红富贵茶叶可以保持原来的状态，但优选为粉末物。另外，该粉碎物优选为大小均匀的，因此可以将粉碎物筛选后使用。
另外，萃取溶剂只要无毒性即可，可列举水，低级醇类例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇等，及其醚类例如乙醚，二氧六环，丙酮等；如果考虑到萃取物中的儿茶素类的回收率，则更优选使用含有乙醇的溶剂。另外，萃取时的温度如果是高于溶剂熔点且低于沸点的温度，则并没有特别限定，但以水进行萃取时优选为10℃至100℃，以乙醇以及甲醇进行萃取时优选为10℃至40℃。萃取时间优选为10秒至24小时的范围。
萃取是最初在250mg茶叶或者茶叶粉末中添加溶剂而得到混合液。此外，这时为了提高萃取效率，也可以添加磷酸溶液。磷酸溶液的浓度优选为0.1％至5％，更优选为0.8％。接着，在该混合液中添加乙醇或水等萃取溶剂，然后在20℃至40℃下保温15分钟至120分钟。
<ECG3＂Me等的提取> 利用高效液相色谱法进行提纯(提取)的步骤是以通常所使用的方法作为化学分离提纯方法，对由所述方法所获得的混合液进行提取的步骤。所谓化学分离提纯方法，例如可以使用液-液分配、薄层色谱法、吸附柱色谱法、分配柱色谱法、凝胶过滤柱色谱法、离子交换柱色谱法、电泳或高效液相色谱法等。另外，也可以根据需要将这些分离提纯方法组合起来进行。将利用所述方法进行提取而获得的ECG3＂Me或其异构体，与保存剂或防腐剂等通常添加在抗过敏药中的物质进行组合，制成本发明的抗过敏药。
此外，从操作简便、分离能力良好等观点考虑，优选使用高效液相色谱法(HPLC)进行提取。此时，优选以如下顺序进行。
首先，以蒸馏水将所述混合液定容后进行搅拌，静置几分钟后进行过滤。此外，滤液优选采集到Falcon管中。将该滤液以亲水性过滤器进行过滤，采集到Eppendorf管中。然后，用蒸馏水将该上清液稀释至10倍。接着，以如下条件将其提取。
洗脱液A(流动相A)优选将水、乙腈、磷酸(H3PO4)制备成以体积比计分别为800:10:1至400:40:1，更优选制备成400:10:1。另一方面，洗脱液B(流动相B)优选将甲醇和洗脱液A制备成以体积比计为1:1至1:4，更优选制备成1:2。
提取优选在如下所述的条件下进行。首先，使流动相的流速为1ml/min，在分离开始(测定开始)后3分钟内使洗脱液B线性梯度为20质量％，在30分钟内使洗脱液B线性梯度为75质量％。接着将其从测定开始后保持45分钟，然后使洗脱液B一下子降低至20质量％。
柱通常使用市售的柱，但如果可能柱优选使用新柱。这是因为如表2所示，ECG3＂Me或其异构体随着柱的老化，容易与GCG3＂Me一起被提取。
[表2] 另外，在本发明中，可以将利用所述方法提取所得的ECG3＂Me等，加以浓缩后用作抗过敏药制造用化合物。浓缩是使用通常所使用的方法进行的，例如在减压下使用旋转蒸发器。此时的温度优选为20℃至80℃，更加优选为60℃以下。
<食品及饮料的制造> 本发明的抗过敏药制造用化合物可以作为单独或者与其他儿茶素类混合的抗过敏药，应用于像饮料、医药、食品等各种用途中。用于食品时，可以作为食品添加物调配到特定保健用食品、特殊营养食品、营养辅助食品、健康食品等中。添加对象的食品可以是各种食品。用于饮料时，可以调配到作为特定保健用食品、特殊营养食品、营养辅助食品的饮料或其他营养饮料、健康饮料、各种健康茶、其他饮料等中。其他食品可列举点心类、面包、面类、大豆加工品、乳制品、蛋加工品、鱼肉加工品、油脂、调味料等。
具体的制造方法是使用公知的方法进行制造。此外，在制造步骤中，可以进一步添加将茶叶本身加以粉碎而获得的粉碎物。另外，还可以混合入以生化方法合成的其他甲基化儿茶素。
这里所谓的甲基化儿茶素，是指被甲基化的儿茶素以及在提纯时不可避免的成分。本发明中的甲基化儿茶素，除了表儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂Me)、表儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯(以下称为ECG4＂Me)、表儿茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂4＂diMe)、表儿茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂5＂diMe)、表儿茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)没食子酸酯(以下称为ECG3＂4＂5＂triMe)、儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为CG3＂Me)、儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯(以下称为CG4＂Me)、儿茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)没食子酸酯(以下称为CG3＂4＂diMe)、儿茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)没食子酸酯(以下称为CG3＂5＂diMe)、儿茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)没食子酸酯(以下称为CG3＂4＂5＂triMe)以外，主要有如下化合物符合要求表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为EGCG3＂Me)、表没食子儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯(以下称为EGCG4＂Me)、没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为GCG3＂Me)、或者没食子儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯(以下称为GCG4＂Me)。
另外，将本发明的抗过敏药制造用化合物和其他儿茶素类混合后用于食品及饮料、外用药中时，优选混合(EGCG3＂Me+GCG3＂Me)/(ECG3＂Me+CG3＂Me)的值为0.5至6。其原因在于如果该数值不足0.5，则无法发挥充分的抗过敏效果。另外，当该数值大于6时，口味会受损。
此外，在饮料及食品中，为了使所述抗过敏药制造用化合物充分发挥抗过敏效果，可单独或并用调配以下添加剂抗氧化剂、香料、各种酯类、有机酸类、有机酸盐类、无机酸类、无机酸盐类、无机盐类、色素类、乳化剂、防腐剂、调味料、甜味剂、酸味剂、果汁提取物类、蔬菜提取物类、花蜜提取物类、pH调节剂、品质稳定剂等。
例如甜味剂可列举砂糖、葡萄糖、果糖、异构化液糖、甘草甜素、甜菊糖(stevia)、阿斯巴甜、低聚果糖、低聚半乳糖等。酸味剂除了从天然成分中萃取出的果汁类以外，可列举柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、富马酸、磷酸。在饮料中可以含有0.1g/L至5g/L的柠檬酸或苹果酸，优选含有0.5g/L至2g/L的柠檬酸或苹果酸。抗氧化剂可列举L-抗坏血酸、L-抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠。在饮料中可以含有0.005质量％至0.5质量％的抗氧化剂，优选含有0.01质量％至0.1质量％的抗氧化剂。
用于饮料的容器，可以和一般的饮料同样地以如下通常形态提供以聚对苯二甲酸乙二醇酯为主要成分的成形容器(所谓PET瓶)、金属罐、与金属箔或塑料膜复合而成的纸容器、瓶等。
另外，填充到上述容器后，例如像金属罐这样的容器，在可以加热杀菌的情况下，则在食品卫生法所规定的特定杀菌条件下制造。对于像PET瓶、纸容器这种无法进行蒸煮(retort)杀菌的容器，采用如下方法预先以与上述同等的杀菌条件，例如利用板式热交换器等进行高温瞬间杀菌后，冷却至一定温度，然后填充到容器中等的方法。另外，可以在无菌条件下调配其他成分并填充到所填充的容器中。并且，也可以进行如下操作在酸性条件下进行加热杀菌后，在无菌条件下使pH恢复为中性；或者在中性条件下进行加热杀菌后，在无菌条件下使pH恢复为酸性等。
另外，在填充到像PET瓶这样的透明容器中时，为了防止褐变，优选添加L-抗坏血酸、L-抗坏血酸钠等抗氧化剂。
另外，作为以本发明的抗过敏药制造用化合物为有效成分的医药，可列举用于治疗过敏性鼻炎、遗传性皮炎、哮喘、荨麻疹或高脂血症、肥胖症、肝病、高血压症的医药。
<作为抗过敏增效剂的用途> 本发明涉及的抗过敏药制造用化合物可以作为抗过敏增效剂，添加到例如薮北茶这样的ECG3＂Me等的含量并不高的茶饮料或者谷物茶、混合茶等中。由此可以使该茶饮料等中所含的儿茶素类的抗过敏效果进一步增强。
添加到薮北茶中时的具体制法是以上述方法制造茶叶萃取物，再从该茶叶萃取物中提取出ECG3＂Me等。然后将提取出来的抗过敏药制造用化合物添加到薮北茶中。作为优选添加量，优选为在每100ml的饮料中含有0.08mg至80mg，更优选在每100ml的饮料中含有0.4mg至40mg。
<医药品的制造> 关于医药，可直接口服本发明的抗过敏药制造用化合物，或者将其以水等加以稀释后口服。或者通过将其与公知的医药用载体一起制成制剂来制备。例如可以将本发明的抗过敏药制造用化合物制成糖浆剂等的口服液体制剂来服用，或者加工成提取物、粉末等，与在药学上可接受的载体调配，制成锭剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等口服固体制剂来服用。在药学上可接受的载体是作为制剂原料而惯用的各种有机或无机载体物质，其作为固体制剂中的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂，以及液态制剂中的溶剂、赋形剂、悬浮剂、粘合剂等进行调配。另外，也可以根据需要来使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等制剂添加物。
除了所述的内服药以外，还可以将本发明的抗过敏药制造用化合物添加到软膏剂、冻胶剂、凝胶剂、乳膏、敷剂、乳液等半固态物，或者洗剂、化妆水等液体，粉剂等固态物等中作为外用药使用。这些外用药的制造方法可以使用现有公知的方法来制造，但是将基剂和本发明的抗过敏药制造用化合物进行混合时的温度优选为20℃至80℃，更优选为50℃以下。另外，抗过敏药制造用化合物的添加量优选为0.1质量％至3质量％，更优选为0.2质量％至2质量％。
[实施例] <抗过敏药的制造> 在250mg预先测定了水分含量的红富贵茶叶粉末(水分含量3％)中，添加10ml的2％磷酸溶液，获得茶叶分散液。接着，在该茶叶分散液中添加10ml的乙醇进行搅拌，然后在30℃下保温60分钟。接着，以蒸馏水进行定容后加以搅拌，静置约5分钟后进行过滤。此外，将10ml滤液采集到15ml的Falcon管中。将该滤液用0.45μm的亲水性过滤器(ADVANTEC公司DISMIC-13HP，PTFE non-sterile)进行过滤，采集到1.5ml的Eppendorf管中。然后，将该上清液以蒸馏水稀释至10倍(1.5ml的Eppendorf管中有900μl的蒸馏水和100μl的上清液)。接着，将其采集约100μl到自动注射器管中，在以下条件下提取ECG3＂Me，作为本发明涉及的抗过敏药。
此外，在图1的下半段表示提取出ECG3＂Me时的色谱法的图。图中，上半段的图是ECG3＂Me等的含量少的茶叶的茶叶分散液的图。由此，显示ECG3＂Me等被提取。
流动相A水、乙腈、磷酸混合液(体积比为400:10:1) 流动相B甲醇、流动相A混合液(体积比为1:2) 柱 和光纯药制造(Wakopak Navi C18-5(4.6×150) 5μm) 保护柱 和光纯药制造(Wakopak Navi C18-5(4.6×10) 5μm) 自动进样器 4℃ 柱温度 40℃，注入量20μl，流速1ml/min 检测波长 272nm(利用UV-VIS或PDA检测器进行检测) <ECG3＂Me的组胺释放抑制效果的研究> 对利用所述方法得到的抗过敏药的组胺释放抑制效果进行研究。另外，作为比较使用提取出了其他的儿茶素类、表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(以下称为EGCG)、表没食子儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯(以下称为EGCG3＂Me)的物质。
抗过敏活性(I型过敏)的判定法是将来自小鼠肥大细胞中的组胺释放抑制作用作为标准。组胺释放抑制效果是使用来自小鼠骨髓的培养肥大细胞(BMMC)，在添加了3ng/ml的10％灭活FBS(胎牛血清)、白细胞介素-3(IL-3)、5mM谷氨酸Na和50μM的2-巯基乙醇的RPMI1640培养基中进行培养。
细胞(1×107cells/mL)是用抗DNP-小鼠IgE抗体致敏一晚后，次日使其悬浮在Tyrode液中，与被验样品一起培养10分钟后，添加DNP-HSA(抗原)，诱发脱颗粒(20分钟)，以液相色谱法来测定上清液中的组胺量。
测定仪器是使用岛津制作所的LC-10A，柱是使用Shodex ODP50-4E。在流速为0.5ml/min、注入量为20μl、柱温箱温度为37℃、检测器为RF(ex.330nm，em.430nm)的条件下进行等度分析。与作为对照组的蒸馏水的相对值越低，判断其抗过敏性越高。
其结果示于表3。由此可显示出本发明涉及的抗过敏药制造用化合物与其他儿茶素类相比，发挥了更强的组胺释放抑制效果。
[表3] <ECG3＂Me的添加量对组胺释放抑制效果的影响的研究> 接着，改变所述儿茶素类的添加量来研究组胺释放抑制效果。将在每1ml中含有2μg、或10μg ECG3＂Me的饮料分别作为样品1、2。另外，将在每1ml中含有2μg、或10μgEGCG的饮料分别作为比较样品1、2。将在每1ml中含有2μg、或10μg的EGCG3＂Me的饮料分别作为比较样品3、4。这些样品的组胺释放抑制效果示于图2。由此显示出，本发明的抗过敏药制造用化合物与EGCG3＂Me相比，发挥了约1.5倍的组胺释放抑制效果。
<EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合比与组胺释放抑制效果的关系的研究> 接着，对EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合比与组胺释放抑制效果的关系进行研究。另外，同时也对用热水萃取红富贵而得到的萃取液的抗过敏活性一并进行研究。制备样品，使样品中的儿茶素含量达到如下述的表4所述的值，研究组胺释放抑制效果。其结果示于图3。推测在EGCG3＂Me和ECG3＂Me的混合物中，抗过敏活性的强度为1.5倍至2.5倍。另外，与各物质单体相比，红富贵绿茶热水萃取液表现出较强的活性。
[表4] <EGCG3＂Me以及ECG3＂Me的添加量与组胺释放抑制效果的关系的研究> 另外，在抗过敏效果低的薮北热水萃取物中，添加EGCG3＂Me或者ECG3＂Me，使最终添加浓度分别成为0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml，对此时的组胺释放抑制效果进行研究，将其结果示于图4。由此可显示出，与EGCG3＂Me相比，ECG3＂Me可以提高抗过敏活性。这样显示出，可以通过向抗过敏效果小的茶叶中添加从阿萨姆杂种中萃取得到的ECG3＂Me衍生物的方式赋予其抗过敏作用。
权利要求
1.一种抗过敏药制造用化合物，其特征在于其是由下述通式(1)表示，
[化1]
式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。
2.根据权利要求1所述的抗过敏药制造用化合物，其特征在于其是来自以阿萨姆杂种茶叶为原料的绿茶或者包种茶的茶叶的成分。
3.根据权利要求2所述的抗过敏药制造用化合物，其特征在于所述阿萨姆杂种茶叶为红富贵。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗过敏药制造用化合物，其特征在于其是在利用使用粒径为5μm、柱长度为150mm的十八烷基二氧化硅柱的高效液相色谱法进行测定的条件下，
洗脱液为水、乙腈、磷酸混合液、以及甲醇的混合液，
在流动相的流速为1ml/min下，多元酚组分在37分钟至50分钟的溶出时间内移动的成分。
5.一种饮料，其特征在于在每100ml的饮料中含有0.08mg至80mg的根据权利要求1至4中任一项所述的抗过敏药制造用化合物。
6.根据权利要求5所述的饮料，其特征在于其是密闭容器装饮料。
7.一种食品，其特征在于在每100g食品中含有0.08mg至80mg的根据权利要求1至4中任一项所述的抗过敏药制造用化合物。
8.一种使用方法，其特征在于将根据权利要求1至4中任一项所述的抗过敏药制造用化合物用作抗过敏增效剂。
9.一种抗过敏药制造用化合物的制造方法，其特征在于具有以下步骤在以阿萨姆杂种茶叶为原料的绿茶或者包种茶的茶叶粉末中添加溶剂而获得混合液的步骤；
从该混合液中萃取出由下述通式(1)所表示的抗过敏药制造用化合物，再利用高效液相色谱法进行提纯的步骤，
[化2]
式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。
10.一种使用方法，其特征在于使用内径为4.6mm、长度为150mm且粒径为5μm的十八烷基二氧化硅柱来制造由下述通式(1)所表示的抗过敏药制造用化合物，
[化3]
式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。
全文摘要
本发明提供一种抗过敏药以及含有其的食品及饮料、外用药、化妆品，所述抗过敏药含有以提取阿萨姆杂种茶叶所特有的具有强抗过敏性的物质为目的而获得的儿茶素类，即表儿茶素-3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(4-O-甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(3，4-O-二甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(3，5-O-二甲基)没食子酸酯、表儿茶素-3-O-(3，4，5-O-三甲基)没食子酸酯以及这些化合物的差向异构体等，并将其作为有效成分。将由上述通式(1)所表示的化合物作为抗过敏药用化合物。[式中，R1、R2、R3分别独立地是氢原子、甲基中的任一基团。]
文档编号A61K36/18GK101365443SQ200780002119
公开日2009年2月11日 申请日期2007年1月12日 优先权日2006年1月13日
发明者山本万里, 永井宽 申请人:独立行政法人农业·食品产业技术综合研究机构, 朝日饮料株式会社