含吲哚-3-烷基羧酸的光敏剂，和含该光敏剂用于光动力学疗法的试剂盒的制作方法

专利名称：含吲哚-3-烷基羧酸的光敏剂，和含该光敏剂用于光动力学疗法的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种包含吲哚-3-烷基羧酸(ICA)的光敏剂，以及包含该光敏剂用于光动力学疗法的试剂盒。更具体地说，本发明涉及一种包含ICA或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及一种利用ICA作为光敏剂用于光动力学疗法的新方法。
背景技术：
光动力学疗法(PDT)是用于癌症治疗的有前景的新疗法之一。其
包括三种关键组分光敏剂、光和组织氧。除此之外正在研究将其用
于牛皮癣和痤疮治疗。光敏剂是一种能为特定波长的光所激发的化合物。这种激发使用可见光或近红外光。当光敏剂和氧分子接近时，可
发生能量传递，使得光敏剂衰减至其单重基态(ground singlet state),并产生激发态的单线态氧分子。单线态氧是一种非常活泼的化学物质并会很迅速地与任何邻近的生物分子起化学反应。最终，这些破坏性反应会通过细胞凋亡或坏死造成细胞杀伤。
5紫外光或可见光激发。在可见光中，优选蓝光、绿光。当用光激发ICA时，ICA能发射自由基并破坏癌细胞或不必要组织或细菌等。
PDT使用激光或其它光源结合光敏药物(有时称为光增敏剂)来破
坏癌细胞。光增敏剂是一种使细胞对光更敏感的药物。一旦进入体内，该药物就被吸引到癌细胞上。在暴露于特定类型的光之前其是无活性的。当把光对准癌症区域时，该药物被激活并破坏癌细胞。体内某些
健康、正常的细胞也受PDT影响，尽管在治疗后这些细胞通常会得以恢复。PDT可用于治疗皮肤癌或那些在内脏内壁之上或邻近其的癌症，例如头、颈部、口腔内膜、肺内壁、食道内壁、胃内壁、膀胱内壁、胆管内壁的癌症。此外，PDT可应用于治疗如牛皮癣或痤疮的良性疾病。尽管如此，PDT还是具有许多缺陷。因此，需要开发安全且有效的光动力学疗法或光动力学疗法试剂盒。
为了 了解光动力学疗法(PDT)在恶性肿瘤治疗中的作用，针对该问题需要考虑的常规方法的技术发展现状。所有的疗法可分类为1)局部疗法(其中原发性肿瘤得到治疗)和2)全身疗法(其中播散性癌得到治疗)。
主要的局部疗法类型包括外科治疗和放射疗法。局部疗法通常以破坏原发性肿瘤和局部淋巴结中的转移灶为目标。在许多癌症患者中，这些治疗方法单独使用是有效的。全身疗法通常意味着化学疗法或某种免疫疗法。全身疗法用于治疗远端大量和微小转移灶。其主要指向生存延长和外科治疗改善。除此之外，全身疗法消除局部肿瘤症状。光动力学疗法是一种以治疗局部肿瘤症状为目标的局部治疗。然而，据说PDT无法应用于所有类型癌症的治疗，原因在于其的浅表
效应(superficial effects)。但是，据报道与正常组织相比光敏剂选择性积聚于肿瘤细胞中(Gomer和Dogherty, 1979; Jori， 1996; Young,等,1996; Dougherty,等，1998)。可能地，PDT特异性可通过光敏剂积聚和曝光区域限制获得。这会导致对肿瘤细胞的严重损伤以及对健康组织的微不足道损伤。这样的疗效增加赋予了 PDT较其他治疗技术突出的优点。
光动力学疗法研究始于1980年，直到1990年加拿大、德国和曰本批准PDT用于临床外科操作。美国FDA批准的第一例PDT应用是阻塞性食道癌的姑息疗法。接着，在1997年9月FDA批准了首例使用PDT治疗肺癌。
然而，目前操作PDT受限，原因在于当治疗大肿瘤时光无法穿透，以及此外具副作用风险的现有卟啉光敏剂的高成本。因而，由于当治疗肿瘤时低相容性，因此现有治疗的有效性值得怀疑。
正在广泛地研究新一代光增敏剂如卟啉、氯、细菌叶绿素、血卟啉(porphycenes)等(J Org. Chem., 63, 1998, 1646-1656)。在这些光增敏剂中，针对脱镁叶绿素(其是金属离子脱离的叶绿素)的大量研究持续进行。脱镁叶绿素不仅较血卟啉的衍生物一光敏素(Photofrin)更多地吸收长波长的光，而且还以高纯度被分离制备。然而，尽管进行了广泛研究，但至今尚未获得真正实效。因此，非常需要开发供PDT使用的有效的光敏剂。发明内容技术方案
为了克服常规光敏剂的缺点，本发明人经长时间研究发现一种新的光敏剂，并最终提供一种供光动力学疗法使用的具有高癌症体系选择性和最小副作用发生的新的光敏剂； 一种包含在光动力学疗法中要被使用的光敏剂的药物组合物； 一种施用所述药物组合物的方法；以及一种包含光敏剂用于光动力学疗法的试剂盒。
本发明的主要目的是提供一种用于治疗或预防癌症的光敏剂，其包含结构式(I)的化合物(吲哚-3-烷基羧酸)或其药学上可接受的盐
其中n为0 3的整数。
本发明的另一个目的是提供一种药物组合物，其包含结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或稀释剂，其中n为0 3的整数。
本发明的又一个目的是提供一种施用该药物组合物的方法，所述药物组合物包含结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或稀释剂，其中给药途径选自局部施用、静脉注射、肌内注射、颅内注射、瘤内注射、上皮内注射、经表皮注射、食道给 药、腹膜内给药、动脉内注射、关节内注射和口服。
本发明的再一个目的是提供一种光动力学疗法试剂盒，其包含 i)含有浓度0.001 Wt% 30 wtQ/。的结构式(I)的化合物的药物组合物； 和ii)用于发射280nm l,000nm波长的光的发光装置。
能够通过提供具有很小副作用的高灵敏度和选择性的光动力学 疗法而达到本发明的目的。本发明涉及卩引哚-3-烷基羧酸(ICA)的衍生 物以及它们在光动力学疗法(PDT)中作为光敏剂的应用。更具体地说， ICA衍生物可为紫外光或可见光所光激活，更有效的是蓝光、绿光。 当ICA被照射时，光激活的ICA可破坏癌细胞或病变组织。
本发明的另一个目的是提供使用该组合的光动力学癌症疗法试 剂盒。
吲哚-3-乙酸(也称为IAA)是被称为生长素的植物激素群体中的 一员。通常认为IAA是最重要的天然生长素和植物生长调节剂。
吲哚-3-乙酸(IAA)是植物生长激素，但其对酵母和动物细胞也具 有生物活性。已报道IAA与辣根过氧化物酶(HRP)结合导致人癌细胞 死亡，因此其能用作为一种新的抗癌剂(KimDS等人著写的"通过辣 根过氧化物酶进行吲哚-3-乙酸氧化诱导对G361人黑色素瘤细胞凋 亡"，Cell Signal 2004， 16:81-8; Greco等人著写的"由辣根过氧化 物酶/刚哚-3-乙酸基因疗法诱导的细胞毒性机理"，J Cell Biochem 2002， 87: 221-32; Huang等人著写的"由吲哚-3-乙酸与辣根过氧化物 酶结合诱导的胰腺癌BXCP-3细胞凋亡"，World J Ganstroenterol 2005，11:4519-23)。此外，由于IAA/HRP-诱导的细胞凋亡为抗氧化剂所阻 断，因此本发明人提出IAA/HRP-诱导的自由基导致细胞凋亡。然而， 尚不知道哪种类型的自由基涉及IAA/HRP-介导的反应以及在 IAA/HRP-介导的反应中它们如何起作用。
由于IAA单独使用是无毒性的且在人中良好耐受，但在经HRP 氧化脱羧后变得有活性，因而IAA是一种有趣的物质。因此，已提 出如果HRP靶向癌细胞，贝IJIAA可仅在肿瘤中被激活。基于这些研 究，提出了三种用于将HRP靶向肿瘤的设想抗体导向酶前药疗法 (ADEPT)、聚合物导向酶前药疗法(PDEPT)和基因导向酶前药疗法 (GDEPT)(在药物中使用吲哚-3-乙酸衍生物，美国专利6890948)。然 而，由于外源蛋白之故ADEPT能够引起免疫问题。在GDEPT中， 酶可能只在细胞内表达。因此，并不容易传递足够数量的用于在肿瘤 组织中激活IAA的HRP。
因此，本发明人研究光是否能激活吲哚-3-烷基羧酸(ICA)并产生 能诱导癌细胞坏死的自由基。实际上，发现了紫外光和可见光有效地 激活ICA。在可见光中，特别是蓝光、绿光能最有效地经ICA诱导 自由基。
近来，报道了 IAA通过形成自由基增加光动力学癌症疗法的疗 效(Folkes, L. K.和Wardman, P.著写的"通过植物生长素(喷哚-3-乙 酸)照射提高光动力学癌症疗法的效能"，Cancer Res, 63: 776-779， 2003; Folkes, L. K.和Wardman， P.著写的"在癌症疗法中吲哚-3-乙酸的氧 化活性对植物生长素细胞毒性种类-a的潜在新作用"，BiochemPharmacol. 2001年1月15日，61(2): 129-36)。在他们的报道中，他 们使用吩噻嗪(phenothiazinium)染料和甲苯胺蓝染料作为光敏剂用于 氧化IAA。经过氧化物酶或其他光催化剂包括酚噻嗪染料或核黄素的 IAA的氧化激活对癌细胞或微生物是有毒性的(Fukuyama TT和 MoyedHS.著写的"通过卩引哚-3-乙酸光氧化产品抑制细胞生长"JBiol Chem 1964,239(7):2392-2397)。但并不知道IAA是一种光敏剂，并且 尚未尝试通过与光结合用于癌症治疗。在本发明中，本发明人使用的 ICA是一种光敏剂且在ICA激活中紫外光和可见光都是有效的。特 别是，在ICA激活中蓝光和绿光是有效的。与紫外光相比，可见光 能深深地透入组织中。因此，可见光能有效地传递光用于肿瘤组织中 ICA激活。此外，ICA与光结合仅对肿瘤细胞有毒性。我们的结果显 示正常人成纤维细胞对ICA和HRP或光结合的毒效应具有抗性(图2、 3、 4和5)。因此，本发明可提供一种具有很小副作用的高灵敏度和 选择性的光动力学疗法方法。
为了该目的， 一种药物光敏组合物，包括结构式(I)的化合物的衍
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其中n为0 3的整数。此外，本发明提供了具有所述结构式I结构的吲哚-3-垸基羧酸 (ICA)的组合物，该组合物包括具有光敏剂性质的有效成分以及具有 光动力学疗法的治疗有效量。
此外，本发明提供了一种光动力学疗法试剂盒，包括具有所述结 构式I结构的光敏剂ICA和(用于体内或体外光传输的发光装置)。在
本发明中，ICA并不需要任何用于经光激活的光催化剂。此外，任何 波长皆可激活，然而，发现紫外光(〉280nm)对于激活ICA是最有效 的。更长波长的光可深深地透入组织中。因此，任何280 1,000 nm 波长的光都可有效使用。然而，实验结果显示蓝光、绿光(400 600nm) 对于激活ICA是最有效的。
在本发明中，发光装置可以是发光二极管装置、激光二极管、染 料激光器、卤素金属灯、闪光灯、滤波荧光灯(mtered fluorescent)或 任何类型的用于光动力学疗法的灯或任何用于通过激光光学纤维将 光传输入体内的装置。
此外，在本发明中，ICA可在注射入体内之后或之前均能够光敏 化。由于在体外ICA激活期间对于发射光的能量强度没有限制，因 此在激活期间当光强度低时，曝光持续时间和/或发射频率可能增加， 以及当光强度高时，则曝光持续时间和/或发射频率可能减少。
如果光强度太低，则无法充分穿透靶组织，因此不会发生有效的 光敏化。如果光强度太高，反之可能发生正常组织坏死。因此，光强 度应当保持在l~100J/cm2。此外，如果脉冲曝光时间太短或发射频率太低，则光敏化的有效 性就会降低，反之如果脉冲曝光时间太长或发射频率太高，则可能发
生正常组织坏死。因此，脉冲曝光时间应当保持在0.1 500 ms以及 发射频率应当保持在1 100次发射。
PDT中的ICA组合物具有光敏活性的ICA，该ICA由0.001% ~ 99%重量组成，但更优选为总内容物重量的0.001% 30%。为了维持 足够的ICA光敏感性效应和疗效，ICA重量应当至少为0.001%。该 组合物可以液体、半固体、固体或气溶胶状态例如水或非水混悬剂、 溶液、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、糖桨剂、栓剂、片剂、胶囊剂、微 滴喷雾剂等形式使用。此外，可添加必需的载体到该组合物和类似的 配方中。此外，所述组合物可包含供贮藏和给药方法使用的防腐剂、 稳定剂、缓冲剂、pH调节剂、甜味化合物、芳香化合物、染料等。 此外，基于治疗目标亦可将其他类型的药物添加到该组合物中。
ICA可在注射入体内之后或之前光敏化。为了在体内光敏化，应 当在施用于体内之后用光照射ICA。光敏化的化合物包括ICA可通 过包括局部施用、静脉注射、肌内注射、颅内注射、瘤内注射、上皮 内注射、经表皮注射、食道给药、腹膜内给药、动脉内注射、关节内 注射和口服的多种给药方法之一送递。
本发明的药物组合物可用于治疗或预防病症例如皮肤或皮肤相 关疾病(光化性角化病、疣、博温氏病、痤疮、基底细胞瘤、鳞状细 胞癌、恶性黑素瘤、牛皮癣、扁平苔藓等)、口腔和胃肠道疾病(胃癌、 十二指肠癌、胃炎等)、泌尿或泌尿相关疾病(前列腺癌、前列腺炎、宫颈癌、子宫内膜炎、子宫癌、盆腔炎等)、呼吸系统或相关疾病(肺 癌等)、循环系统或相关疾病(白血病等)、头颈相关疾病(脑肿瘤、甲 状腺癌、喉癌、喉炎、鼻癌、鼻炎、舌癌等)、淋巴网状内皮细胞病 症(淋巴瘤等)、传染病包括微生物、病毒、寄生虫病症(脓疱病、疗、 痈等)。


图1显示了来自吲哚-3-乙酸与辣根过氧化物酶(HRP)的细胞毒效 应的实施例1的图解分析。
图2、 3和4显示了来自IAA/HRP对不同细胞类型的细胞毒效应 的实施例2的图解分析。
图5显示了来自IAA与UVB照射的细胞毒效应的实施例3的图 解分析。
图6显示了来自通过不同波长的光光敏化IAA水平的实施例4 的图解分析。
图7显示了来自单独用强脉冲光(IPL)治疗癌症的实施例5的图 像，所述强脉冲光对癌细胞不起作用。
图8显示了来自通过结合IAA和IPL治疗癌症的实施例6的图 像，所述结合显示对癌细胞的细胞毒性效应。
图9显示了来自通过结合IAA和IPL预防癌症的实施例7的图像。最佳实施方式
在下文中，本发明将根据下列实施例得以更详细描述。所给出的 实施例仅用于例证本发明而并不限制本发明的范围。
实施例l:吲哚-3-乙酸与HRP的细胞毒效应
本实验证实了当与HRP—起使用时，IAA存在细胞毒效应，但 当IAA单独使用时，则绝对没有细胞毒效应。
(细胞培养)
在5% C02， 37。C，含10。/。胎牛血清(FBS)和50吗/ml青霉素的 RPMI 1640培养基(WelGene, Daegu, Korea)中培养G361人黑素瘤细 胞系(ATCC， Rockville, MD)。
(G361细胞毒性实验)
将在培养基中培养的细胞分入24个孔(4 X IOV孔)中，然后在不 含FBS的培养基中培养24小时。使用^/[订(3,4-二甲基噻唑-2-基)2,5-二苯基溴化四唑)分析法测定细胞毒效应(Kim, D. S., Jeon, S.E., Park, K.C. Cell Signal, 16, 81-8， 2004)。
分成HRP(1.2 mg/ml， Sigma, St. Louis, MO)处理组(在图1中指示 为'O')和未用HRP处理的组(在图1中指示为V)，使在培养物中各自 具有1-500 mM的最终IAA浓度。在培养20小时后，添加0.5 mg/ml 的MTT到培养物中再继续培养4个小时。在孔中添加并溶解1 ml 二甲基亚砜溶液后，使用ELISA酶标仪(TECAN, Salzburg, Austria)在
540nm处测定吸收值。计算吸收值和细胞存活率的结果并示于图1中。 对照组的存活率设定为100%。
(计算)
细胞活力(％)=(实验组/对照组吸收值)x 100
如图1中所示，单独使用IAA的组(—无细胞毒效应迹象，而同 时使用至少100 mM浓度的IAA和HRP的组(I),则显示明确的细胞 毒效应。根据这些结果，可以证实HRP对于激活是必不可少的。
实施例2: IAA/HRP对不同细胞类型的细胞毒效应
在培养不同类型的肿瘤细胞和成纤维细胞后，实施IAA/HRP处 理。确定了 IAA和HRP结合对大部分癌细胞具有毒性，但对正常的 人成纤维细胞没有毒性。
在5% C02， 37°C，含10% FBS和50昭/ml青霉素的RPMI 1640 培养基(WelGene, Daegu, Korea)中培养胃癌细胞系(SNUl、 SNU16、 SNU601、 SNU719， Korean Cell Bank, Seoul, Korea)和肺癌细胞系 (NCI-H157、 NCI陽H1264， Korea Cell Bank, Seoul, Korea),以及在相同 条件下于DMEM培养基(WelGene, Daegu， Korea)中培养肝癌细胞系 (SK-HEP-I, Korean Cell Bank, Seoul, Korea)。所使用的成纤维细胞来 自在包皮环切术期间分离的包皮。按照Rheinward和Green (Rheinwald JG， Green H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes; the formation of keratinizing colonies from single cells.Cell 1975;6:331-43.)的皮肤活组织检査法，在含10。/o胎牛血清(FBS)、 50pg/ml链霉素和50 pg/ml青霉素的DMEM培养基中培养分离的肿 瘤细胞。
(不同细胞类型的毒性实验)
将在培养基中培养的细胞分入24个孔(4 X 104/孔)中，然后在不 含FBS的培养基中培养24小时。使用MTT(3,4-二甲基噻唑-2-基)2,5-二苯基溴化四唑)分析法测定细胞毒效应(Kim, D. S., Jeon， S.E., Park， K.C. Cell Signal, 16, 81-8, 2004)。
分成HRP(1.2 mg/ml)处理组和未用HRP处理的组，使在培养物 中各自具有1-1000 mM的最终IAA浓度。在培养20小时后，添加 0.5 mg/ml的MTT到培养物中并多培养4个小时。在孔中添加并溶解 1 ml 二甲基亚砜溶液后，使用ELISA酶标仪在540nm处测定吸收值。 计算吸收值和细胞存活率的结果并示于图2-4中。图2-4中对照组的 存活率设定为100%。
(计算)
细胞活力(。/。一(实验组/对照组吸收值)x 100
图2-4中所示的结果显示单独施用IAA对正常细胞和癌细胞两者 皆无毒性，然而，辅以HRP贝i」IAA对大部分癌细胞有毒性，但对正 常的人成纤维细胞无毒性。细胞毒效应
在培养不同类型的细胞之后，给予IAA/UVB处理。通过MTT 分析法测定细胞活力。结果显示IAA/UVB对癌细胞有毒性，但正常 的人成纤维细胞抗IAA/UVB处理。
(细胞培养)
在于5%(302， 37°C，含10。/。胎牛血清(FBS)、 50|ig/ml链霉素和 50吗/ml青霉素的DMEM培养基中培养G361人黑素瘤细胞系(ATCC， Rockville, MD)后，在相同的条件下于DMEM培养基中培养小鼠黑素 瘤细胞系B16(Korea Cell Bank, Seoul, Korea)、肝癌细胞(SK-HEP-I, Korea Cell Bank, Seoul, Korea)。所使用的成纤维细胞来自在包皮环切 术期间分离的包皮。根据Rheinward和Green (Rheinwald JG, Green H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes; the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell 1975;6:331-43.) 的皮肤活组织检査法，在含10。/。胎牛血清(FBS)、 50pg/ml链霉素和 50 |ig/ml青霉素的DMEM培养基中培养分离的肿瘤细胞。
(不同细胞类型的毒性实验)
将在培养基中培养的细胞分入24个孔(4x 104/孔)中，然后在不含 FBS的培养基中培养24小时。使用MTT(3,4-二甲基噻唑-2-基)2,5-二苯基溴化四唑)分析法测定细胞毒效应。分成用UVB(100 mJ/cm2) 处理的ICA组和单独使用ICA的组，使在培养物中各自具有1-1000mM的最终IAA浓度。在培养20小时后，添加0.5 mg/ml的MTT到 培养物中并继续培养4个小时。在孔中添加并溶解l ml二甲基亚砜 溶液后，使用ELISA酶标仪在540nm处测定吸收值。计算吸收值和 细胞存活率的结果并示于图5中。图5中对照组的存活率设定为 100%。
(计算)
细胞活力(。/。)K实验组/对照组吸收值)x 100
示于图5中的结果显示单独施用IAA对正常细胞和癌细胞两者 皆无毒性，然而，用UVB处理的IAA则对大部分癌细胞有毒性，但 对正常的人成纤维细胞无毒性。
实施例4:通过不同波长的光光敏化IAA
为了研究不同波长的光的效应，用HL-2000-HP(Ocean Optics, Dunedin, FL， USA)照射IAA。通过DCF(二氯荧光素)分析法测定自 由基形成。为了诱导DCFH-DA的活性，将DCFH-DA溶解在100% 乙醇中至lmM浓度。然后将350ul的溶液添加到1.75 ml的0.01 N NaOH中并使反应得以持续5、 10和20分钟。接着，通过与17.9ml 的25mM磷酸钠缓冲溶液(pH 7.2)混合制备激活的DCFH-DA溶液。 然后，将1 mM IAA给予激活的DCFH-DA，并使用HL-2000HP光辐 照器，使用不同波长滤波器(380、400、480、520、590、640 nm) (Thorlabs, Inc., Long Beach, CA, USA)来观察利用各种波长所产生的任何IAA的光敏化。结果示于图6中。使用ELISA酶标仪在490nm处测定吸收 值。如图5所示，480 nm(蓝)和520 nm (绿)波长在激活IAA中特别有 效。
实施例5:单独使用IPL治疗癌症
考虑到依赖二极管光源临床有效性的困难，在本发明的动物实验
中将IPL(强脉冲光)用于特定高能量光的照射。为了检验单独使用IPL 治疗癌症的有效性，将IPL注射入肿瘤细胞并在1天后检查。在与组 织学专家商议后(4天后IPL的结果示于图7)，确认在肿瘤中不存在细 胞坏死的迹象，暗示单独使用IPL没有细胞毒效应。
(癌细胞移植)
在0.1M PBS溶液(pH 7.2)中洗涤人肺癌细胞NCI-H1246细胞并 转换为细胞样品(lx106、 lxl0S和5x104 )，接着使用30G注射器由静 脉内注射入裸鼠(Charles River Lab. Wilmington, MA，雄性，6周龄， 重22 25g)中。在4天后观察到肿瘤形成的迹象。
(IPL研究)
Eclipse的强脉冲光(IPL)闪光灯用于可见光照射。利用能照射515 nm 1200 nm的IPL装置进行20J/cm2强度的20次照射。在将透射凝 胶(transmission gel) (PROGEL DA-YO Medical, Seoul, Korea)施用于 肿瘤形成区域后，使用IPL照射每个区域两次。实施例6:通过IAA和IPL结合治疗癌症
将人肺癌细胞(NCI-H 1264 cell, 1 x 1()6)皮下注射入裸鼠(Charles River Lab. Wilmington, MA/雄性，6周龄，重22-25g)中。发现在1 x 106个癌细胞注射后4天观察到瘤块。在癌细胞注射后4和7天，用 IAA(50mg/kg)注射这些小鼠。在IAA静脉注射后30分钟，用 IPL(20J/cm、照射小鼠。在癌细胞注射后12天，进行活组织检査，同 时进行通道染色(tunnel stain)。结果显示IAA与IPL可诱导肿瘤细胞 死亡并被认为是在疾病包括癌症的治疗中是有效的。
(IAA施用)
制备实验性的IAA (10mg/ml，溶于50mM NaHCO/2% v/v乙醇/ 7乂， pH 7中)。分成具有瘤块形成的小鼠对照组和注射IAA(pH 7, 50mg/kg)的小鼠实验组。注射组再分成两组， 一组在癌细胞注射4天 后用IAA处理，另一组在癌细胞注射7天后用IAA处理。在IAA静 脉注射后30分钟，用IPL(20J/cm勺照射小鼠。
(TUNEL测定法)
TUNEL(Chemicon, Temecula， CA)检测试剂盒用于本实验中。简 单来说，在IAA注射和IPL照射后经过12天，将裸鼠组织样品置于 10%福尔马林中24小时，其中使用0.1% Triton X-100增加细胞渗透 性。通过末端脱氧核苷酸转移酶和抗-地高辛配基过氧化物酶偶联物标记DNA片段。接着，使用化学发光过氧化物酶底物一二氨基联苯 胺以供观察。
实验结果可见图8。如苏木精和曙红染色以及TUNEL检测结果 所示，IAA和IPL并行使用可诱导肿瘤坏死并可用作治疗癌症的有效 手段。
实施例7:通过结合IAA和IPL预防癌症
观察到IAA和IPL结合能诱导癌细胞坏死。然而，在癌症治疗 中组织或远端转移的预防却更为重要。为了研究预防效果，在癌细胞 注射后但在瘤块出现前进行IAA和IPL处理。在NCI-H1264细胞注 射后1、 3和5天，进行IAA和IPL处理。在癌细胞注射后10天， 进行活组织检査。这些结果可见于图9中。如所预期的，在对照组织 中观察到肿瘤细胞生长，但在处理的组织中没有观察到肿瘤细胞生 长。因此，可以说IAA和IPL处理在预防远端转移中是有效的。
权利要求
1、一种用于治疗或预防癌症的光敏剂，该光敏剂包括结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐其中n为0～3的整数。
2、 一种药物组合物，该药物组合物包括结构式(I)的化合物或其 药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或稀释剂-<formula>formula see original document page 2</formula>(I)其中n为0 3的整数。
3、 如权利要求2所述的药物组合物，其中，结构式(I)的化合物 被波长280 nm~l,000 nm的光所光敏化。
4、 如权利要求2所述的药物组合物，其中，包含用于光动力学 疗法的浓度为0.001 wt% 30 wty。的结构式(I)的化合物。
5、 如权利要求4所述的药物组合物，其中，结构式(I)的化合物被波长280 nm 1,000 nm的光所光敏化。
6、 如权利要求4所述的药物组合物，其中，结构式(I)的化合物 被波长350 nm 450 nm的光、400 nm 500 nm波长的光、或500 nm 600 nm波长的光所光敏化。
7、 如权利要求4所述的药物组合物，其中，所述组合物的剂型 以选自液体、半固体、固体和气溶胶的形式存在。
8、 如权利要求7所述的药物组合物，其中，所述组合物的剂型 以选自水或非水混悬剂、溶液、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、糖浆剂、 栓剂、片剂、胶囊剂和微滴喷雾剂的形式存在。
9、 如权利要求4所述的药物组合物，其中，光动力学疗法应用 于皮肤或皮肤相关疾病、口腔和胃肠道疾病、泌尿或泌尿相关疾病、 呼吸系统或相关疾病、循环系统或相关疾病、头颈相关疾病、淋巴网 状内皮细胞病症和传染病包括微生物、病毒和寄生虫病症的治疗或预 防。
10、 一种施用根据权利要求2的药物组合物的方法，其中，给药 途径选自局部施用、静脉注射、肌内注射、颅内注射、瘤内注射、上 皮内注射、经表皮注射、食道给药、腹膜内给药、动脉内注射、关节 内注射和口服。
11、 一种光动力学疗法试剂盒，其包括:i)含有浓度0.001 wt% 30 wto/。的结构式(I)的化合物的药物组合物；和ii)用于波长280 nm~l,000 nm的光发射的发光装置。
12、 如权利要求11所述的光动力学疗法试剂盒，其中，发光装置发射350 nm 450 nm波长的紫外线、400 nm 500 nm波长的蓝光或 500 nm~600 nm波长的绿光。
13、 如权利要求11所述的光动力学疗法试剂盒，其中，发光装 置选自发光二极管、激光二极管、染料激光器、卤素金属灯、闪光灯、 滤波荧光灯或任何类型的用于光动力学疗法的光，以及任何用于通过 激光光学纤维将光传输入体内的装置。
14、 如权利要求11所述的光动力学疗法试剂盒，其中，发光装 置所发射的光强度为1 J/cm2 100 J/cm2。
15、 如权利要求14所述的光动力学疗法试剂盒，其中，发光装 置所发射的光的脉冲持续时间为0.1 ms 500 ms，以及发射次数为 卜100次。
16、 如权利要求11所述的光动力学疗法试剂盒，所述试剂盒用 于选自皮肤或皮肤相关疾病、口腔和胃肠道疾病、泌尿或泌尿相关疾 病、呼吸系统或相关疾病、循环系统或相关疾病、头颈相关疾病、淋 巴网状内皮细胞病症和传染病包括微生物、病毒和寄生虫病症的治疗 或预防。
全文摘要
本发明涉及一种包含吲哚-3-羧酸相应为吲哚-3-烷基羧酸(ICA)的光敏剂，以及包含该光敏剂用于光动力学疗法的试剂盒。更具体地说，本发明涉及一种包含ICA或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及一种ICA作为光敏剂用于光动力学疗法的新方法。
文档编号A61K31/403GK101484160SQ200780025367
公开日2009年7月15日 申请日期2007年7月6日 优先权日2006年7月7日
发明者朴景赞, 金东锡, 金韶英 申请人:株式会社威尔斯金