专利名称：：高纯度科罗索酸和高纯度熊果酸的制造方法
技术领域：
：本发明涉及高纯度科罗索酸和高纯度熊果酸的制造方法。技术背景已知科罗索酸具有胰岛素样活性(Chem.Pham.Bull.(1993)41(12):2129画2131)、辅助糖向细胞内的吸收(Chem.Pham.Bull.(1993)41(12):2129-2131)、抑制血糖值上升的作用(PlantaMed.(1991)57:414-416)等。另外已知，熊果酸具有防止皱紋产生(特开平9-143050号公报)、改善紫外线引起的纤维束的破坏(特开2002-255781号公报)、抗肿瘤作用(WorldJGastroenterol(2002)8(3):493-495、WorldJGastroenterol(2006)12(6):874-879)等。由于已确认科罗索酸和熊果酸分别具有上述多种作用，因此人们希望制造纯度高的科罗索酸、熊果酸。到目前为止，关于科罗索酸，公开了用含水醇提取巴拿巴(banaba)叶，将该提取物进行活性炭处理，再进一步浓缩回收沉淀物的制造方法(特开2005-263650号公报)；由枇杷叶制造含科罗索酸的提取物的方法(美国专利第6908632号公报)等。另外，关于熊果酸，公开了得到熊果酸和齐墩果酸衍生物的混合浓缩物的方法(特开2002-345434号公报)。另夕卜，枇杷(学名Eriobotryaiaponica，英文名Japaneseloquat、Japanesemedlar、Japaneseplum，曰文名批把)是高度达38m的常绿小乔木的果树，广泛分布于中国、日本。叶为长1530cm、宽37cm的长椭圆形，具有一定的厚度和石U。为具有光泽的浓绿色，互生。在中国，叶被用于抗菌、镇咳、去痰、利尿、中暑的改善等目的，另外，煎煮液的湿敷布^1用于皮肤病的改善等。另外已知，叶中存在熊果酸、齐墩果酸、科罗索酸、山楂酸(maslicacid)等的多种三薛化合物(美国申请公开2005/0137259号公报)。但是，对于以枇杷叶为原料的高纯度科罗索酸和高纯度熊果酸的高效率制造方法、以及在可以作为食品利用的条件下的制造方法，到目前为止尚未>^开。
发明内容本发明者们发现，用碱和含水醇处理枇杷叶的粗提取物，通过使用吸附树脂进行分离精制，可以有效率地得到高纯度的科罗索酸和熊果酸(实施例2)。本发明是基于该发现的发明。本发明的目的在于，以枇杷的叶子作为原料，高效率地制造高纯度科罗索酸和高纯度熊果酸。根据本发明，可以提供一种科罗索酸的制造方法，其包括(1)将枇杷叶的粗提取物用碱和含水醇进行溶解的工序；和(2)将该溶解液流过非极性吸附树脂，得到科罗索酸的工序。另外才艮据本发明，可以提供一种熊果酸的制造方法，其包括(1，)将枇杷叶的粗提取物用碱和含水醇进行溶解的工序；和(2，)将该溶解液流过非极性吸附树脂，得到熊果酸的工序。根据本发明的制造方法，在可以高效率地制造纯度高的科罗索酸和熊果酸的方面是有利的。另外根据本发明的制造方法，由于使用作为食用被广泛栽培的枇杷叶为原料，因此在可以低廉稳定地供给高纯度的科罗索酸和熊果酸的方面是有利的。由于根据本发明的制造方法而得到的科罗索酸和熊果酸分别都是高纯度，因此可以为了发挥发挥各化合物具有的已知作用，用于药品、准药品、化妆品等、也由于使用的溶剂限定为乙醇而可以作为食品材料来使用，在这些方面是有利的。具体实施方式下面详细说明本发明。下面的记述是用于说明本发明的示例，但本发明并不仅限定于所记述的实施形态。只要不脱离其主旨，本发明可以用各种形态来实施。本申请说明书中引用的全部现有技术文献、公开公报等的专利文献，作为参考被列入本申请说明书中，可以用于本发明的实施。粗提取物粗提取物，可以根据公知的方法用溶剂提,杷叶，由该粗41_取液调制。具体地说，在用低级醇提取枇杷叶后，可以通过降低该粗提取液的醇浓度来得到粗提取物。本发明中作为原料使用的枇杷(Eriobotrvaiaponica)叶，可以直接使用刚采摘的枇杷叶，也可以经过干燥后再用于提取操作。作为干燥方法，可以列举出冷冻干燥、日光干燥、暖风干燥等的公知方法。从提取效率的角度来看，优选使用经干燥、细粉碎的枇杷叶。作为提取所使用的溶剂，可以列举出低级醇，但优选为甲醇或乙醇。低级醇的醇含量，优选80~99.5体积％，更优选99.5%。提取操作，可以采用例如一边加热、搅拌，一边提取的方法，将枇杷叶浸渍(冷浸或热浸)于溶剂中的方法等来进行实施。作为提取条件，提取温度优选为60n以上一沸点以下。另外，提取设备中，可以使用用于防止醇的蒸发的回流装置、用于提高提取效率的搅拌装置等。进而，为了提高粗提取物的纯度，也可以用活性炭进行处理。通过降低由此得到的粗提取液的醇浓度来回收产生的不溶物，从而可以得到粗提取物。其中，粗提取物的科罗索酸含量为7~15重量％，熊果酸含量为7~15重量％。作为降低粗提取液的醇浓度的方法，可以列举出水的添加、浓缩(例如减压浓缩)的方法。为了得到粗提取物，醇浓度可以降低至65重量％以下，优选至50重量％以下。不溶物的回收方法，优选过滤、离心分离，在滤过性差的情况下，也可以^吏用助滤剂。溶解工序在得到的粗提取物中加入碱和含水醇溶液进行溶解，可以得到溶解液。碱只要可以将含水醇调至pHll~pH14即可，例如相对于lg粗提取物可以加入0.05~0.5g，或者相对于含7JC醇100ml，可以加入0.5g~5g。作为碱，可以列举出碱金属的氢氧化物，但优选氢氧化钠或氢氧化钾。碱可以直接加入，也可以溶解在含水醇中使用。作为用于溶解粗提取物的含水醇的醇，可以列举出例如甲醇、乙醇等。含水醇的醇含量，优选40~70体积％，更优选50~60体积％。分离精制工序通过将得到的溶解液流过非极性吸附树脂，可以得到科罗索酸和熊果酸。具体地说，通过将得到的溶解液注入到充填有非极性吸附树脂的容器中，利用展开用醇进行展开，进行分级，可以得到科罗索酸，通过在该分级后流入高浓度醇，可以得到熊果酸。根据本发明的科罗索酸的制造方法，通过将得到的溶解液注入到充填有非极性吸附树脂的容器中，利用展开用醇进行展开，进行分级后，以HPLC分析结果作为指标，回收科罗索酸级分，可以获得科罗索酸。通过将回收的该级分用酸调至酸性，使析出的结晶干燥，从而可以获得高纯度的科罗索酸(含量15~60重量％)。或者，通过将得到的溶解液注入到充填有非极性吸附树脂的容器，利用展开用醇进行展开，进行分级后，以HPLC分析结果作为指标，特别回收科罗索酸浓度高的级分(浓科罗索酸级分)，通过将该级分用酸调至酸性，使析出的结晶干燥，从而可以获得更高纯度的科罗索酸(含量60~90重量％)。根据本发明的熊果酸的制造方法，通过将得到的溶解液注入到充填有非极性吸附树脂的容器中，利用展开用醇进行展开后，流入比展开用醇更高浓度的溶出用醇，回收该溶出用醇，可以获得熊果酸。通过将回收的该溶出用醇用酸调至酸性，使析出的结晶干燥，从而可以获得高纯度(含量15~90重量％)的熊果酸。作为非极性吸附树脂，可以列举出例如苯乙烯-二乙烯基苯类或丙烯酸-二乙烯基苯类的合成吸附树脂，优选HP20、XAD4、或者与其类似的树脂。作为充填非极性吸附树脂的容器，可以列举出例如柱等。作为展开用醇的醇，可以列举出例如曱醇、乙醇等。作为展开用醇的醇含量，优选40~70体积％，更优选50~60体积％。关于非极性吸附树脂的分级条件，本领域技术人员可以进行适当决定。例如，将得到的溶解液注入到充填有非极性吸附树脂的容器中，利用展开用醇进行展开，在将全体作为20个级份(级分1~级分20)进行分级的情况下，可以将级分7~12作为科罗索酸级分，进而将级分10作为浓科罗索酸级分进^f于回收。关于HPLC的分析M,本领域技术人员可以进行适当决定。另外，本领域才支术人员可以用HPLC分析结果作为指标，来选择科罗索酸级分。作为溶出用醇的醇，可以列举出例如曱醇、乙醇等。作为溶出用醇的醇含量，也可以比展开用醇的醇浓度更高，但优选为80~99.5体积％，更优选为99.5体积％。用于析出科罗索酸和熊果酸的酸，只要可以将得到的溶液调至pHl~pH4即可，可以列举出例如盐酸、硫酸等，但优选为盐酸。根据本发明的科罗索酸的制造方法的优选形态，是一种科罗索酸的制造方法，其包括(1)用80~99.5体积％的低级醇提取枇杷叶，然后将减压浓缩而得到的粗提取物用氢氧化钠或氢氧化钾和40~70体积％含水醇进行溶解的工序；和(2)将该溶解液流过充填了HP20的分离柱，利用展开用醇进行展开，以HPLC分析结果作为指标，回收科罗索酸级分的工序。另外，根据本发明的科罗索酸的制造方法的优选形态，是一种科罗索酸的制造方法，其包括(l)用80~99.5体积％的低级醇提取枇杷叶，然后将减压浓缩而得到的粗提取物用氢氧化钠或氢氧化钾和40~70体积％含水醇进行溶解的工序；和(2)将该溶解液流过充填了HP20的分离柱，利用展开用醇进行展开，以HPLC分析结果作为指标，回收浓科罗索酸级分的工序。根据本发明的熊果酸的制造方法的优选形态，是一种熊果酸的制造方法，其包括(1，)用80~99.5体积％的低级醇提取枇杷叶，然后将减压浓缩而得到的粗提取物用氢氧化钠或氢氧化钾和40~70体积％含水醇进行溶解的工序；和(2，)将该溶解液流过充填了HP20的分离柱，利用展开用醇进行展开，然后流入80~99.5体积％的溶出用醇，回收该溶出用醇的工序。根据本发明，只要可以高效率地制造高纯度的科罗索酸即可，可以使用巴拿巴叶来代替枇杷叶。另外根据本发明，只要可以高效率地制造高纯度的熊果酸即可，可以使用熊果叶或迷迭香(rosemary)叶来代替枇杷叶。实施例实施例1:粗提取物的调制将干燥的枇杷叶(中国产)粉碎，向得到的粉碎物lkg中加入10L的99.5体积％甲醇(关东化学社制)，在加热回流下进行提取，然后过滤得到粗提取液。重复上述步骤2次，合并得到的粗提取液，向其中加入活性炭，吸附除去叶绿素类。然后将该液体减压浓缩至2L,—边搅拌一边加入1L的温水，然后访文置，将产生的微黄色不溶物过滤回收。干燥该回收物，得到粗提取物(38.5g)。使用HPLC(Waters公司制)分别测定该粗提取物中的科罗索酸含量、熊果酸含量，其结果是科罗索酸含量为12.4重量%、熊果酸含量为13.3重量％。实施例2:科罗索酸和熊果酸的分离精制向实施例1中得到的粗提取物10g中加入50体积％曱醇(关东化学社制)100ml和氢氧化钠2g，搅拌溶解后，过滤除去不溶物，得到滤液。在不溶物中加入15ml水进行搅拌洗涤并过滤，合并该洗涤液和滤液。将该液体流过200ml的充填了HP20(三菱化学社制)的分离柱，用50体积％甲醇进行展开，M100ml为1个级分进行分级分离，对各级分使用HPLC进行分析。HPLC的操作条件如下所述。检测器紫外吸光光度计(测定波长210nm)柱充填了液相色i普用十八烷基法烷基化硅胶的柱流动相乙腈/0.1%三氟乙酸溶液混合液(65:35)温度40。C流速将科罗索酸的保持时间调整至约10分钟(1.0~1.5mL/分钟)另外，当科罗索酸含量高时，用甲醇进行适当稀释，然后测定HPLC峰面积。其结果确认，级分1~6中主要流出的是科罗索酸和熊果酸以外的成分，级分7~12中主要流出的是科罗索酸(表l)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>另外，表中的值是用稀释率修正的值。然后在注入99.5体积％曱醇来回收熊果酸的同时，进行树脂的洗涤。将得到的级分7~12用5N盐酸调至酸性(pH2.5)，使析出的结晶千ii燥，结果可以得到含量为32重量。/。的科罗索酸2.7g(通过HPLC测定)。另外，向99.5体积％甲醇部分中加水后，用盐酸调至酸性(pH2.5)，使析出的结晶干燥，结果可以得到含量为75重量％的高纯度熊果酸l.lg(通过HPLC测定)。实施例3:科罗索酸的分离精制实施例2中得到的级分7~12中，仅将级分10用5N盐酸调至酸性(pH2.5)，将析出的结晶干燥，结果可以得到含量为75重量％的高纯度科罗索酸1.0g(通过HPLC测定)。权利要求1.一种科罗索酸的制造方法，包括(1)将枇杷叶的粗提取物用碱和含水醇进行溶解的工序；和(2)使该溶解液流过非极性吸附树脂，得到科罗索酸的工序。2.如权利要求l所述的方法，工序(2)包括使该溶解液流过非极性吸附树脂，利用展开用醇进行展开，回收科罗索酸级分的工序。3.如权利要求1或2所述的方法，碱是碱金属的氬氧化物。4.如权利要求3所述的方法，碱金属的氢氧化物是氩氧化钠或氢氧化郜。5.如权利要求14的任一项所述的方法，工序(l)中的含水醇的醇含量是40~70体积％。6.如权利要求1~5的任一项所述的方法，工序(l)中的醇是甲醇或乙醇。7.如权利要求1~6的任一项所述的方法，非极性吸附树脂是苯乙烯-二乙烯基苯类树脂或丙烯酸—二乙烯基苯类树脂。8.如权利要求1~7的任一项所述的方法，非极性吸附树脂是HP20或XAD4。9.一种熊果酸的制造方法，包括(1，)将枇杷叶的粗提取物用碱和含水醇进行溶解的工序；和(2，)使该溶解液流过非极性吸附树脂，得到熊果酸的工序。10.如权利要求9所述的方法，工序(2，)包括将该溶解液流过非极性吸附树脂，利用展开用醇进行展开后，流入比展开用醇浓度高的醇，然后回收该高浓度醇的工序。11.如权利要求9或10所述的方法，碱是碱金属的氢氧化物。12.如权利要求ll所述的方法，碱金属的氢氧化物是氢氧化钠或氢氧化钾。13.如权利要求9~12的任一项所述的方法，工序(1，)中的含水醇的醇含量是40~70体积％。14.如权利要求9~13的任一项所述的方法，工序(1，)中的醇是甲醇或乙醇。15.如权利要求9~14的任一项所述的方法，非极性吸附树脂是苯乙烯-二乙烯基苯类树脂或丙烯酸—二乙烯基苯类树脂。16.如权利要求9~15的任一项所述的方法，非极性吸附树脂是HP20或XAD4。全文摘要本发明提供一种科罗索酸的制造方法，包括(1)将枇杷叶的粗提取物在碱和含水醇中进行溶解的工序；及(2)将该溶解液流过非极性吸附树脂，从而得到科罗索酸的工序。文档编号A61K36/73GK101279996SQ20081000456公开日2008年10月8日申请日期2008年1月22日优先权日2007年4月4日发明者佐佐木务,吉田尚明,森千寻申请人:研光通商株式会社;株式会社常磐植物化学研究所