熊果烷型五环三萜氨基酸衍生物、其制备方法及其医药用途的制作方法

专利名称：：熊果烷型五环三萜氨基酸衍生物、其制备方法及其医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及天然药物和药物化学领域，具体涉及一类新型的熊果烷型五环三萜衍生物。该类化合物可用于制备抗糖尿病及其并发症药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物、治疗代谢综合症药物或抗肿瘤药物。本发明还涉及这类化合物的合成方法以及含有它们的药物组合。
背景技术：
：熊果烷型五环三萜化合物在植物界分布广泛，科罗索酸(1)及积雪草酸(2)是其中有代表性的化合物，具有抗肝炎、抗肿瘤、抗病毒、降血糖及降血脂等多种药理活性，且毒性低，副作用小，具有重要的开发价值及广泛的应用前景。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>在降血糖方面，文献报道，科罗索酸通过兴奋葡萄糖的转运，促进细胞对葡萄糖的吸收和利用，从而实现其降血糖功效(Chew.Ptor/w.Bm//.，1993，41，2129-2131)。专利WO2006054370公开了科罗索酸及其类似物积雪草酸作为一种糖异生抑制剂，不仅可以降低血糖，同时还可以降低血压，血脂，降低动脉硬化和肥胖的发生概率。韩国学者研究证明科罗索酸对蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)具有一定的抑制活性，可用于治疗2型糖尿病(尸/朋/aA/ed2006,72,261-263)。发明人先期的中国专利申请(CN1682740A)公开了科罗索酸和积雪草酸具有抑制糖原磷酸化酶的作用，因而可用于降血糖、降血脂、抗缺血性心脑血管疾病和抗肿瘤等。目前，己有糖原磷酸化酶抑制剂进入临床研究阶段用于治疗糖尿病及其并发症，但尚无相关药物被批准上市。缺血性心、脑损伤是导致冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、脑梗死、中风和缺血性神经退行性疾病的重要病理因素。目前，在临床上尚无有效的防治缺血性心脑损伤的药物。在正常情况下，心、脑主要依赖有氧代谢来供应能量。但是，在严重缺血(缺氧)情况下，无氧糖代谢成为重要的能量供应渠道，此时，糖原磷酸化酶高度活跃，糖原的降解加剧，并经无氧糖酵解产生大量乳酸，导致乳酸中毒(lacticacidosis),进而引发缺血性心、脑损伤。因此，通过部分抑制糖原磷酸化酶(在缺血、缺氧及葡萄糖供应不足的情况下，适度的糖原降解供能是必需的)，可避免因糖原过度降解和随后的无氧糖酵解所导致的乳酸中毒，因而有望成为抗缺血性心、脑血管疾病的有效新途径J尸/j;wW.//eawC/rc./V2"/0/.2004,286,H1177-H1184;Nat.Neurosci.2007,10，1377-1386)。尤其值得重视的是，糖原磷酸化酶巳逐渐成为临床上用于诊断心肌缺血的一个重要生化指标。崔福贵在专利文献(CN1582946)中指出，积雪草酸能明显减少结扎冠状动脉造成的心肌梗死区质量，同时使反映心肌损害的生化代谢指标LDH及CK明显下降，提示可将积雪草苷用于制备防冠心病、心肌梗死和脑血栓形成、脑梗死等心脑血管疾病。在肿瘤治疗方面，文献报道，科罗索酸对A549、SK-OV-3、SK-MEL-3、XF498和HCT15五种肿瘤细胞的EDsq在3.9~5.5pg/mL之间(户/a"似Med,2000,66，485-486)。积雪草酸可诱导人黑素瘤细胞SK-MEL-2的凋亡(Ca"cer丄e红，2005，218，81)。熊果垸型五环三萜化合物作为中国传统中药的主要活性成分，在体内具有多靶点、多途径发挥药效的特点。其中科罗索酸和积雪草酸正是通过对多个靶点的协调作用而产生广泛的药理活性，因此不仅可用于治疗糖尿病及其并发症、缺血性心脑血管疾病，也可应用在降血脂、减肥、抗动脉粥样硬化、治疗代谢综合症以及抗肿瘤方面。但是，科罗索酸和积雪草酸水溶性极差，其制剂的生物利用度低，大大限制了其在临床上的应用。为改善其水溶性、增加给药途径并提高药物在体内的生物利用度，根据前药原理，对科罗索酸和积雪草酸进行了结构修饰，引入氨基酸为化学修饰物，使其成为水溶性大大提高的前体药物。
发明内容本发明首次公开了式(I)所示的具有药用价值的新型熊果烷型五环三萜衍生物、其制备方法及医药用途，包括在制备抗糖尿病及其并发症药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物、治疗代谢综合症药物和抗肿瘤药物方面的用途。尤其是式(I)所示的化合物具有糖原磷酸化酶抑制活性，因此可以用于治疗与糖原代谢异常相关的疾病，这些疾病包括糖尿病(特别是2型糖尿病)及其并发症、缺血性心脑血管疾病(特别是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病等)、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、代谢综合征、肥胖、禁食高血糖症和肿瘤。此外，本发明还提供一种含有(I)所示化合物的药物制剂。本发明涉及式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐或酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中:Ri代表H或R5CO;R2代表H或R5CO;R3代表H、OH或RsCOO;R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)；R5代表120个碳的非取代的或X取代的直链或支链烷烃、烯烃、炔烃、苯基、苄基或萘基；X代表H、F、Cl、Br、I、CN、N02、NH2、CF3、SH、OH、OCH3、OC2H5、COOH、1~10个碳的直链或支链烷烃、烯烃、炔烃、苯基、苄基或萘基。上述化合物中优选化合物的特征在于Ri代表H或CH3CO;R2代表H或CH3CO;R3代表H、OH或CH3COO;R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)。更为优选的化合物是N-(2a，3j3,23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸；N-(2fl，3j3,23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸；N-(2fl,3j3,23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸；N-(2fl，3j3，23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸；N-(2fl，3j，23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸；N《2fl,3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L"脯氨酸；N-(2fl,3j3,23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸；N-(2fl,3A23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸；N-(2fl，3j5,23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸；N-(2fl,3j3，23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L"酪氨酸；N-(2fl，3jS，23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸；N-(2",3A23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸；N-(2a，3》-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸；N-(2",3j3-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸；N-(2",3》-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸；N-(2a，3"-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸；N-(2fl，3^C羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸；N-(2fl，3j3-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸；N-(2fl，3》-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸；N-(2fl，3^-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸；N-(2a,3"-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸；N-(2fl，3jS-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸；N-(2a,3,二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸；N-(2a,3》-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯；N-(2a，3j3，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯；N-(2fl,3/J,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2a，3i,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯；N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸甲酯；N-(2a，3j3，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸甲酯；N-(2a,3凡23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2a，3j,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸二甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯；N-(2a，3y-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)甘氨酸甲酯；N-(2fl，3j-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N陽(2fl，3"-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯；N-(2fl，3j-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2fl,3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯；N-(2a，3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸甲酯；N-(2a,3^二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2fl，3》-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸甲酯；N-(2a，3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2fl,3jS-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2a，3》-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸二甲酯；N-(2fl，3^-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯。本发明的部分衍生物可用下列方法制备得到a.按照常规的羟基酯化方法，将科罗所索酸或积雪草酸与各种酰氯、酸酐或羧酸反应，得到羟基保护的科罗索酸或积雪草酸衍生物；b.将a产物溶解在有机溶剂中，加入氯化亚砜或者草酰氯，反应l-24小时，温度为0。C至120。C。所采用的溶剂可以是二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己垸、环己垸、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用二氯甲垸、1，2-二氯乙烷或甲苯作为溶剂；c.将氨基酸酯或氨基酸酯盐酸盐与有机胺或无机碱在有机溶剂中混合，加入b产物，反应l-48小时，温度为0'C至回流，得到羟基保护的科罗索酸或积雪草酸-28-酰胺氨基酸酯。所采用的有机胺为三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶。所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾。所采用的溶剂可以是二氯甲垸、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用二氯甲垸、1，2-二氯乙烷或甲苯作为溶剂；d.将c产物溶解在有机溶剂中，加入碱溶液进行水解反应，温度为0'C至回流，得到科罗索酸或积雪草酸-28-酰胺氨基酸衍生物。所采用的溶剂可以是甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己垸、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用甲醇或四氢呋喃作为溶剂。所采用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂。本发明还包括药物制剂，该制剂包含作为活性剂的通式(I)化合物或其药用盐、酯或药学上可接受的载体。上述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，是指一种或几种惰性的、非毒性的固体或液体填充物、稀释剂，助剂等，它们不逆向与活性化合物或病人发生作用。本发明组合物的剂型可以是片剂、胶囊、丸剂、栓剂、软胶囊、口服液、混悬剂、注射液等药剂学上常用的剂型。口服用药片和胶囊含有传统的赋形剂如填充物、稀释剂、润滑剂、分散剂以及粘合剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。以上活性剂的剂量将因配方而异。一般地，已证明有利的量，为达到所需结果，每千克每24小时给药的式(1)化合物的总量为约0.01-800mg，优选的总量为0.1-100mg/kg。如果必要，以几次单剂量的形式给药。然而，如果必要，也可以偏离上述用量，即这取决于待治疗的受试者的类型和体重、个体对药物的行为、疾病的性质和严重性、制剂和给药的类型、以及给药时间和间隔。图1是表示本发明部分积雪草酸氨基酸衍生物的制备过程。图2是表示本发明部分科罗索酸氨基酸衍生物的制备过程。在图l和图2中，Rs如上述式(I)中所定义；NH2CHR7COOR6代表各种氨基酸酯，包括天然存在的所有氨基酸或人工合成的D-型氨基酸，其中，R6代表l-5个C的烷基或苄基，R7代表氨基酸的不同取代基。具体实施例方式下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实例是为了更好的阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。目标化合物对于糖原磷酸化酶的抑制活性试验试剂的配制1)显色液的配制称量钼酸铵5g，溶解于500mllMHCI中，用搅拌器搅拌，至全部溶解后在加入孔雀绿190mg，继续搅拌至全部溶解，并用锡箔纸避光；2)缓冲液的配制①精密称量Hepes0.5958g，溶于5mlH20中，用10MNaOH调PH至7.2，配制成终浓度为0.5M的Hepes;②精密称量KC10.3728g，溶于5mlH20中，配制成终浓度为1M的KC1;③精密称量MgCl20.0255g，溶于lmlH20中，配制成终浓度为125mM的MgCl2;④精密称量EGTA0.0476g，溶于5mlH20中，用IOMNaOH调PH至7.0，配制成终浓度为25mM的EGTA;⑤精密称量G-l-P0.0152g，溶于10mlH2O中，配制成终浓度为5mM的G-l-P;⑥精密称量glycogen10mg，溶于lmlH20中，配制成终浓度为10mg/ml的glycogen;3)阳性药caffeine溶液的配制将caffeine溶于10mlH20配制0.5、5、50和500nM的溶液；4)配制GPa溶液取1y1的GPa加入到100ui反应体系中，终浓度为250ng/100P1;5)待测试化合物溶液的配制将待测试化合物溶于DMSO配制成浓度为10mM溶液，取适量化合物溶液加入到反应体系中至不同终浓度。测定rabbit肌糖原磷酸化酶活性的量效曲线通过读取不同浓度的GPa加入显色液后的在655nm下的OD值，来测定其量效曲线。由量效曲线可选择GPa的量为250ng。实验步骤1)设计PC(阳性对照)、Blank(空白对照)、阳性药(咖啡因)；2)加反应buffer52u1;3)加测试化合物至终浓度；4)加酶1u1，终浓度为250ng/100u1;5)加显色液150yl;6)2025摄氏度条件下反应20分钟；7)在波长655nm条件下比色；8)数据的读取及抑制率的计算抑制率=[阳性对照-待测样品]/[阳性对照-空白对照]。测试结果表中列出了部分衍生物对rabbit肌糖原磷酸化酶的抑制活性数据，结果显示，科罗索酸或积雪草酸-28-酰胺氨基酸衍生物对糖原磷酸化酶具有不同程度的抑制活性。科罗索酸或积雪草酸氨基酸衍生物对rabbit肌糖原磷酸化酶的抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>fNI^(2,3凡23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸fNHar#^。HN-(2a,3A23-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)七-丙氨酸fNIHS/hoN-(2a，3j8,23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸fNIhoN-(2a，3/，23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸fNIi^Kt^、hhoN-(2a,3jS，23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸亍NI/hoN-(2a，3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)丄-脯氨酸f95.6N-(2a,3j3-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸T361.5'1'1I^IT"Yoh1^-(2^3"-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L"苯丙氨酸!NI'I^T"vohN-(2fl,3"-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸aiC5Q值均为三次实验的平均值；bNI表示在100fxM浓度下没有活性。以上药理学数据显示，本发明通式(I)化合物具有糖原磷酸化酶的抑制作用，因此可用于制备抗糖尿病药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物或抗肿瘤药物。以下通过实施例进一步说明本发明的实施实施例l2a，3A23-三乙酰氧基积雪草酸的合成将积雪草酸(0.20g,0.40mmol)、乙酸酐(76mg,0.74mmol)加入吡啶(10ml)中，室温搅拌过夜。反应液以乙酸乙酯稀释后，依次以水、1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，有机相干燥、过滤、浓縮，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯10/1V/V)，得2fl，3A23-0-三乙酰基积雪草酸(170mg,78%)。M.p.93-95。C。ESI-MSm/z:637[M+Na]+.丄H-NMR(CDC13，300MHz):0.78,0.85，0.88，0.94，1.07,1.11(each3H,s)，1.98,2.02，2.08(each3H，力，2.19(1H,d，J=11.3Hz),3.58(1H，/=11.8Hz),3.85(IH，J=11.8Hz)，5.07(1H,d，/=10.3Hz),5.12-5.17(1H,m)，5.25(1H,0.实施例2N-(2^3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯的合成将2fl，3j3,23-三乙酰氧基积雪草酸(0.25g，0.40腿o1)溶解于精制干燥的二氯甲烷(20ml中，冰浴下滴加草酰氯(0.8ml)，室温搅拌24小时，减压蒸除二氯甲烷，再加入精制干燥的二氯甲垸(20X3)，溶解，蒸除，得到2fl，3A23-三乙酰氧基积雪草酰氯。将甘氨酸甲酯盐酸盐(0.15g，1.20mmol)禾CIDMAP(0.03g,0.22mmol)溶于干燥的二氯甲垸中，滴加上述新鲜制备的三乙酰化积雪草酰氯的二氯甲垸溶液，滴毕，室温搅拌12小时，反应液依次使用1N盐酸水溶液、饱和食盐水洗涤，有机层干燥、过滤、浓縮，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯4/1V/V)，得N-(2a,3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯(244mg,87%)。M.p.175-178°C。ESI-MSm/二686.4[M+H]+.工H-NMR(CDC13，300MHz):.0.73,0.87，0.89,0.96(each3H,匀，1.10(6H,s),1.98,2.02，2.08(each3H,匀，3.58(1H,d，>/=11.8Hz)，3.76(3H,s),3.81-3.88(2H，m),4.05-4.13(1H，m),5.12-5.21(2H,m),5.43(1H，f),6.85(1H，f).实施例3N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2fl，3A23-三乙酰氧基积雪草酸和L-丙氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2a,3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯。M.p.220-222°C。ESI-MS/n/z:700.5[M+H]+.力-固R(CDC13，300MHz):0.70(3H,5)，0.88(6H,力，0.96(3H，力，1.09(9H，力，1.98，2.62,2.08(each3H，力，3.57(1H，d，J=11.8Hz),3.75(3H，力，3.84(1H，《/=11.8Hz),4.45-4.49(1H，m),5.07(1H，《J=10.3Hz),5.12-5.17(1H，m)，5.40(1H，f)，6.57(1H，《/=5.9Hz).实施例4N-(2fl，3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2a，3A23-三乙酰氧基积雪草酸和L-缬氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2fl，3",23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯。M.p.205-208°C。ESI-MSm/z:728.5[胁H]十.工H-NMR(CDC13，300MHz):0.68(3H,s)，0.88-0.97(15H，w),1.09(6H，力，1.98，2.02，2.08(each3H，力，3.57(1H，/=11.8Hz)，3.70(3H，力，3.84(1H，c，/=11.8Hz)，4.42-4.46(1H，m)，5.07(1H，d,J=10.3Hz)，5.11-5.19(1H,m)，5.38(1H，0，6.36(1H,d,/=7.4Hz).实施例5N-(2"，3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2fl，3凡23-三乙酰氧基积雪草酸和L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2a,3j3，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯。M.p.120-124。C。ESI-MSw/二776.4[M+H]+,丄H-NMR(CDC13，300MHz);0.60，0.83，0.88，0.94,1.05，1.06(each3H,力，1.97,2.02,2.08(each3H,s)，3.00-3.17(2H,m)，3.56(1H，d,/=11.7Hz),3.68(3H，力，3.84(1H,d,/=12.0Hz)，4.71(1H,瓶J=6.0,12.0Hz)，5.06(1H,d,J=10.2Hz)，5.10-5.19(1H,m)，5.25(1H，f),6.34(1H，d,J=6.0Hz)，7.08-7.31(5H，m).实施例6N-(2a,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2a，3A23-三乙酰氧基积雪草酸和L-丝氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2a，3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯。M.p.217-219°C。ESI-MS716.5[M+H]+.iH-NMR(CDC13,300MHz);0.70,0.88，0.88,0.97，1.09，1.10(each3H，s)，1.98,2.02,2.08(each3H，5),2.26(1H，=17.1Hz),3.57(1H，d，/=11.8Hz)，3.79(3H，5),3.82-3.86(2H，m)，3.94-3.99(1H，m)，4.52-4.53(1H，5.07(1H，d，/=10.3Hz),5.12-5.16(1H，m)，5.43(1H，f),6.85(1H，d，h5.1Hz).实施例72fl,3"-二乙酰氧基科罗索酸的合成参照实施例l的方法，以科罗索酸和乙酸酐制得2a，3j5-二乙酰氧基积雪草酸。M.p.225-227。C。ESI-MSm/2:555.3[M-H]—.'H-画R(CDC13，300MHz):0.76，0.89，0.90(each3H，力，1.07(6H，"，0.85(3H，《J=6.5Hz)，0.95(3H，d,■/=6.3Hz)，1.97(3H,力，2.05(3H，力，2.19(1H，d，/=11.2Hz)，4.76(1H，《/=10.3Hz),5.10(1H,w)，5.23(1H，f，/=3.6Hz).实施例8N-(2fl,3^-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2fl，3y^二乙酰氧基科罗索酸和L-亮氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯。M.p.133-135°C。ESI-MSw/二684.4[M+H]+.丄H画R(CDC13，300MHz):0.68(3H,力，0.86(3H,力，0.89(6H,"，0.91(3H,力，0.93(3H,力,0.95(3H，力，1.05(3H，力，1.08(3H，力，1.97，2.04(each3H,"，3.69(3H，力，4.55(1H,w),4.74(1H，《/=10.3Hz)，5.04-5.12(1H，w)，5.36(1H,0,6.33(1H，d，/=7.08Hz).实施例9N-(2fl,3,二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2fl，3"-二乙酰氧基科罗索酸和L"蛋氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2a,3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯。M.p.130-133°C。ESI-MSm/z:702.4[M+H]+.工HNMR(CDC13，300MHz):0.67(3H,力，0.89(6H，d，/=6.90Hz)，0.90(3H，力，0.96(3H，力，1.05(3H，力，1.08(3H，5),1.97，2.05(each3H，力，3.73(3H，力，4.58(1H,瓶/=5.91，11.82Hz)，4.74(1H,A=10.34Hz)，5.04-5.12(1H,w)，5.40(1H，0，6.60(1H,《/=6.22Hz).实施例ION-(2"，3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰膨-L-苯丙氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2",3j5-二乙酰氧基科罗索酸和L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2fl，3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯。M.p.128-132°C。ESI隱MSw/二718.3[M+H]+.丄HNMR(CDC13，300MHz):0.60(3H，"，0.82(3H，d，/=6.29Hz)，0.89(6H，力，0.94(3H，",1.02(3H,力，1.05(3H,力，1.96，2.04(each3H,"，3.05-3.12(2H，m)，3,67(3H,力，4.70-4.75(2H，w)，5.03-5.12(1H，w)，5.24(1H，0，6.35(1H，d，J=6.18Hz),7.08-7.11(2H,附)，7.25-7.28(3H，m).实施例llN-(2a,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯的合成参照实施例2的方法，以2fl,3j-二乙酰氧基科罗索酸和L-酪氨酸甲酯盐酸盐制得N-(2fl,3^二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯。M.p.160-164°C。ESI隱MSm/z:734.4[M+H]+.力NMR(CDC13，300MHz):0.61(3H,5),0.83(3H，《J=6.35Hz)，0.89(6H,力，0.94(3H，力,1.02(3H，力，1.05(3H，力，1.97，2.05(each3H，5),2.91-3.09(2H，3.67(3H，5),4.66-4.76(2H,m)，5.05-5.09(1H,w)，5.26(1H，0,5.82(1H,br力，6.41(1H，d,>/=6.40Hz)，6.73(2H，W,_/=8.41，63.74Hz),6.95(2H，瓶J=8.42，63.74Hz).实施例12N-(2a，3A23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸的合成将N-(2fl，3jS，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯(152mg，0.22mmol)溶于甲醇(3mL)和四氢呋喃(4.5mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠水溶液(1.1ml，4N)，室温搅拌3小时。反应液以乙酸乙酯稀释，并以lN稀盐酸调节pH值，得到的混合物依次以水、饱和食盐水洗涤，有机层干燥、过滤、浓縮，柱层析(二氯甲垸/甲醇10/1V/V)，得^[-(2^3凡23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸(107mg，89%)。M.p.269°C(dec.)。ESI-MSm/z:544.3[Af-H]扁.工H-NMR(d6-DMSO+D20，300MHz):0.55,0.65，0.84，0.92，0.92，1.04(each3H,s)，2.09(1H，d，/=10.7Hz),3.06(1H，d，J=10.6Hz),3.18(1H，《/=9.5Hz)，3.30(1H，/=10.9Hz)，3.49-3.53(1H,m)，3.59(1H，d，J=17.3Hz)，3.74(1H,d，J=17.5Hz)，5.24(1H，f).实施例13N-(2fl,3A23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2fl，3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯为原料制得N-(2fl，3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸。M.p.226-230°C。ESI-MSm/z:558.3[M-H]\工H-NMR(d6-DMSO+D20,300MHz):0.51，0.62,0.80,0.88,0.88，1.00，1.19(each3H，力，2.04(IH，/=10.5Hz)，3.02(1H，d，/=10.5Hz)，3.13(1H,《/=9.1Hz),3.26(1H，d，J=10.7Hz)，3.48(IH，f)，4.06(1H,d，/=6.3Hz)，5.20(1H，br力.实施例14N-(2a，3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2a,3jS，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯为原料制得N-(2fl,3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸。M.p.214-218°C。ESI-MSm/二588.3[胁H]+,工H-NMR(d6-DMSO+D20，300MHz):.0.54，0.63,0.83，0.86,0.87，0.91，0.91，1.04(each3H，s)，2.09(1H，10.5Hz),3.03(1H,d,/=10.5Hz)，3.16(1H，d,/=9.3Hz)，3.29(2H,d，/=10.5Hz)，4.00(1H，0,5.20(1H,brs)，6.90(1H，d，J=7.5Hz).实施例15N-(2",3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2fl，3j，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯为原料制得N-(2fl，3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸。M.p.210-214°C。ESI-MSw/z:636.3[M+H]+.工H-NMR(d6-DMSO+D20,300MHz):.0.52，0,76，0.78,0.83，0.87，0.94(each3H,",2.88-2.91(1H，m),2.92-2.96(2H，fn),3.13(1H,d,■/=9.3Hz),3.27(1H,d,/=10.2Hz),4.16(1H，br5),5.01(1H,f)，7.20(5H,".实施例16N-(2c，3A23-三羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯为原料制得N-(2a，3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸。M.p.224-227°C。ESI-MSw/z:574.2[Af隱町.工H-NMR(d6-DMSO+D20,300MHz):0.50，0.60,0.79,0.86，0.87,1.00(each3H，力，2.99(1H,d,/=10.6Hz)，3.11(1H,J,/=9.3Hz)，3.24(1H，/=11.0Hz)，3.45-3.54(2H,m),4.10-4.11(1H，m)，5.21(1H，br"，6.96(1H，cf，J=6.1Hz).实施例17N-(2fl,3j-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2fl，3"-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯为原料制得N-(2fl，3^二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸。M.p.156-16CTC。ESI-MSm/z:584.4[M陽H]-.丄H-画R(d6-DMSO+D20，300MHz):0.53，0.64,0.75,0.77，0.82，0.84，0.85,0.860.97(each3H，s),2.06(1H，《J=16.14Hz)，2.72(IH,0,3.39-3.40(IH，m),4.07-4.15(IH，m)，5.14(1H，f)，7.12(IH,《J^7.08Hz).实施例18N-(2a，-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2fl,3/-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯为原料制得N-(2a，3j3-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸。M.p.180°C(dec;ESI-MSm/z:642.6[M-町.工H-NMR(CD3OD，300MHz):0.69(3H,5)，0.80(3H,",0.85(3H，d，J=6.46Hz),0.94(3H,d，/=6.23Hz),0.97(3H，s)，1.00(3H，力，1.09(3H,力，2.90(IH，d，/=9.60Hz)，3.07-3.28(2H,/n)，3.56-3.61(IH，m)，4.23(IH,瓶J=4.51，5.61Hz)，5.34(IH，f)，7.13-7.18(5H,nx).实施例19N-(2^3》-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸的合成参照实施例12的方法，以N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯为原料制得N-(2fl,3jS-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸。M.p.182°C(dec.)。ESI-MSm/z:634.4[M-H]—.丄H-画R(CD3OD,300MHz):0.57(3H,力，0.79(3H，力，0.85(3H,c，/=6.32Hz)，0,94(3H，力,0.97(3H，s),0.99(3H，力，1.07(3H，s)，2.87(1H,d，>/=9.57Hz),2.93-2.97(1H,m)，3.07-3.14(1H,;n)，3.53-3.64(1H,m),4.30(1H，br5)，5.27(1H，f)，6.64(2H,AJ=7.61Hz)，6.99(2H，d，/=8.27Hz).权利要求1.下述通式(I)化合物及其药学上可接受的盐或酯R1代表H或R5CO；R2代表H或R5CO；R3代表H、OH或R5COO；R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)；R5代表1～20个碳的非取代的或X取代的直链或支链烷烃、烯烃、炔烃、苯基、苄基或萘基；X代表H、F、Cl、Br、I、CN、N02、NH2、CF3、SH、OH、OCH3、OC2H5、COOH、1～10个碳的直链或支链烷烃、烯烃、炔烃、苯基、苄基或萘基。2.权利要求1的化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于Ri代表H或CH3CO;R2代表H或CH3CO;R3代表H、OH或CH3COO;R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)。3.权利要求l的化合物，其中化合物可以是下列任一化合物及其药用盐或酯酰胺)-甘氨酸；酰胺)-L-丙氨酸；酰胺)-L-缬氨酸；酰胺)-L-苯丙氨酸；酰胺)-L-丝氨酸；酰胺)-L-脯氨酸；酰胺)-L-亮氨酸；酰胺)-L-异亮氨酸；酰胺)-L-蛋氨酸；酰胺)-L-酪氨酸；酰胺)-L-天东氨酸；酰胺)-L-谷氨酸；2N-(2fl，3j3，23-三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2a，，23誦三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3j3,23-三羟基熊果烷-12-烯-28N-(2fl，3j3，23-三羟基熊果烷-12-烯-28N-三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2"，3j3,23-三羟基熊果烷-12-烯-28N-(2a，3j3,23-三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3j3,23-三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3A23-三羟基熊果烷-12-烯-28N-(2fl,3j3,23-三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2a,3A23-三羟基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3-，23-三羟基熊果烷-12-烯-28N-(2a,3"-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸；N-(2fl，3j3-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸；N-(2"，3j5-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸；N-(2fl，3j3-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸；N-(2fl，3j3-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸；N-(2fl,3j3-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸；N-(2^,3j-二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸；N-(2a,3^-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸；N-(2fl,3》-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸；N-(2fl，3^二羟基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸；N-(2a，3"-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸；N-(2fl,3^-二羟基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸；N-(2fl,3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N-(2a，3凡23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯；N-(2a,3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L脯氨酸甲酯；N-(2fl,3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2a，3凡23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸甲酉旨；N-(2a,3jS，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2fl，3y，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸二甲酉lN-(2a,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯；N-(2"，3jS-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)甘氨酸甲酯；N-(2fl,3jS-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N-(2a，3^二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-缬氨酸甲酯；N-(2"，3jS-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2a,3j3-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丝氨酸甲酯；N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸甲酯；N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2a，3j5-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-异亮氨酸甲酯；N-(2fl，3j5-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2a,3j3-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2fl，3j5-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天东氨酸二甲酯；N-(2fl，3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯。4.权利要求l、2、3的化合物的制备方法，包括a.按照常规的羟基酯化方法，将科罗所索酸或积雪草酸与各种酰氯、酸酐或羧酸反应，得到羟基保护的科罗索酸或积雪草酸衍生物；b.将a产物溶解在有机溶剂中，加入氯化亚砜或者草酰氯，反应l-24小时，温度为0。C至12(TC。所采用的溶剂可以是二氯甲烷、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己垸、环己烷、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用二氯甲垸、1，2-二氯乙烷或甲苯作为溶剂；c.将氨基酸酯或氨基酸酯盐酸盐与有机胺或无机碱在有机溶剂中混合，加入b产物，反应l-48小时，温度为0。C至回流，得到羟基保护的科罗索酸或积雪草酸-28-酰胺氨基酸酯。所采用的有机胺为三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶。所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾。所采用的溶剂可以是二氯甲烷、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己垸、环己垸、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用二氯甲烷、1，2-二氯乙垸或甲苯作为溶剂；d.将c产物溶解在有机溶剂中，加入碱溶液进行水解反应，温度为0'C至回流，得到科罗索酸或积雪草酸-28-酰胺氨基酸衍生物。所采用的溶剂可以是甲醇、四氢呋喃、二氯甲垸、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己烷、环己垸、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用甲醇或四氢呋喃作为溶剂。所采用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂。5.—种药物组合物，其中含有治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体。6.权利要求1至3的化合物，其特征在于这些化合物是新型糖原磷酸化酶抑制剂。7.权利要求1至3的化合物在制备用于预防和治疗糖尿病及其并发症、缺血性心脑血管疾病、高血脂症、肥胖、动脉粥样硬化症、代谢综合征或肿瘤的药物中的用途。8.权利要求7的用途，其特征在于糖尿病是2型糖尿病，其并发症包括糖尿病肾病、糖尿病足、糖尿病神经病变或糖尿病并发的心脑血管疾病。9.权利要求7的用途，其特征在于缺血性心脑血管疾病是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、脑缺血、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病。10.权利要求7的用途，其特征在于权利要求1至3的化合物可用于预防和治疗高血脂症和动脉粥样硬化症。全文摘要本发明涉及天然药物及药物化学领域，具体涉及一类熊果烷型五环三萜氨基酸衍生物(I)、其制备方法及其医药用途。这类化合物有糖原磷酸化酶抑制作用，可用于制备抗糖尿病药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物和抗肿瘤药物。本发明还涉及该类化合物的制备方法及含有它们的药物制剂。文档编号A61P3/04GK101337984SQ200810147378公开日2009年1月7日申请日期2008年8月13日优先权日2008年8月13日发明者孙宏斌,张丽颖,军柳申请人:中国药科大学