灵芝三萜类化合物的用图
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体是天然产物活性成分的用途。本发明采用Griess法来考察22个灵芝三萜类化合物抑制小鼠BV?2小胶质细胞NO释放的活性。除化合物4外，其余灵芝三萜类化合物对BV?2小胶质细胞的存活率无影响，均能较好的抑制LPS诱导BV?2小胶质细胞释放NO，其中化合物6、11、13、14、17、18、22表现出显著的抑制活性，其IC50均低于10μM，表明这些化合物可能成为先导化合物。
【专利说明】
灵芝三萜类化合物的用途
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体是天然产物活性成分的用途。
【背景技术】
[0002] 神经退行性病变是一类以神经元丧失正常的功能和结构甚至死亡为病理特征的 疾病，包括帕金森病(PD)、阿尔茨海默病(AD)，多发性硬化(MS)等，这些疾病的发生与发展 都与神经炎症密切相关。小胶质细胞是中枢神经系统固有的免疫细胞，具有巨噬细胞的特 征，广泛分布于大脑和脊髓中。"静息"状态及适度活化的小胶质细胞可发挥重要的免疫防 御、免疫监视作用，维持神经系统内环境稳定。过度或者持续性活化的小胶质细胞则介导神 经炎症，释放包括IL-li3、TNF-a、一氧化氮及活性氧簇等在内的炎症介质，导致继发性神经 损伤。
[0003] 灵芝是灵芝科真菌的总称，属于真菌界，担子菌门，担子菌纲，非褶菌目的一类高 等担子菌，是我国历代医药学家推崇的滋补强壮、扶正培本的珍贵药品，久服有轻身延年的 功效。《神农本草经》将灵芝列为上品。关于灵芝化学成分及其生物活性研究，多年来一直都 是国内外药学领域的研究热点之一。绝大部分的研究集中在赤芝Ganoderma Lucidum这个 品种，偶有涉及紫芝Ganoderma sinense、松杉灵芝Ganoderma tsugae、薄盖灵芝Ganoderma capense、树舌灵芝Ganoderma appIanatum等品种。
[0004] 现代药理学表明灵芝具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗Hiv-I病毒、降血压、免疫调 节、保肝解毒及抑菌等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供灵芝三萜类化合物的用途。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
[0007] 1.灵芝三萜类化合物抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞释放NO的活性。
[0008] 本发明的益效如下：
[0009] 1.提供了神经退行性病变的可能先导化合物，这些化合物具有相同的母核和相似 的取代基，对于构效关系等下一步研究有很大作用。
【具体实施方式】
[0010] 下面结合实施例对本发明作进一步描述。
[0011] 实施例1
[0012] 用于药理活性实验的22个灵芝三萜类化合物详见Table 1:
[0013] Table I Compounds isolated from EtOAc parts of Ganoderma curtisii.
[0019] 药理活性实验:本发明采用Griess法来考察灵芝三萜类化合物抑制小鼠 BV-2小胶 质细胞NO释放的活性。
[0020] 将22个灵芝三萜类化合物及阳性药槲皮素均用DMSO溶解并稀释至合适浓度，-20 °(：保存备用。将BV-2小胶质细胞调整为2X IO5个/mL，接种于96孔细胞培养板中，每孔加入 IOOyL细胞悬浮液，37 °C、5 %⑶2隔夜培养后，各孔按以下分组情况加样：（1)脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)组不加入被测试样品；（2)空白对照组(等体积DMS0); (3)经LPS 预处理的不同浓度的灵芝三萜类化合物(加入终浓度为lyg/mL的LPS孵育30min，再分别加 入浓度为40、20、10、2.5、1.0、0.5、0. ΙμΜ的样品），每个浓度设3个平行孔。在37°C、5%CO2恒 温培养箱中培养24h后，吸取培养液上清IOOyL至酶标板中，加入等体积的Griess试剂，室温 反应15min后测定540nm处的吸光值。用浓度分别为1、2、5、10、20、40、60、IOOymolA^NaNO 2 绘制标准曲线，根据NaNO2标准曲线计算细胞培养上清液中Ν0：Γ的浓度以及对NO释放的抑制
率，抑芾丨丨虫斗智/入才4.
[0021]
[0022]在测定样品对LPS诱导的巨噬细胞释放NO的抑制活性同时，采用MTT法评价样品的 细胞毒性，无明显细胞毒性，细胞存活率>85%; + :弱细胞毒性，70% <细胞存活率< 85 % ;++:中等细胞毒性，50 % <细胞存活率< 70 % ;+++强细胞毒性，细胞存活率< 50 % ;如 样品因具有细胞毒性导致细胞死亡，测定结果所出现的抑制活性为假阳性，因此在评价样 品活性结果的时候应结合样品表现出来的细胞毒性综合判断。只有在不影响细胞正常增殖 的浓度范围内，表现出来的对小胶质细胞释放NO的抑制活性才具有真正意义。
[0023] 在上述培养板每孔中加入MTT溶液(终浓度200yg/mL)，置于37°C、5%C02培养箱中 继续培养4h后，弃去上清，吸干残留液体，加入DMSO 150yL，振摇IOmin使生成的甲瓒结晶充 分溶解后，以630nm为参比波长在570nm下测定吸光倌。细胞存活率计算公式为：
[0024]
[0025] 具体实验结果见Table 2:
[0026] Table 2 Inhibitory effect of tested compounds on NO production I ndnr.pH hv IPS in mi r.rop-1 i a I r.pl I
[0028] 氺Cell viability is expressed as a percentage(%)of the LPS-only treatment group.
[0029] SPositive control.
[0030] 结果显示，除化合物4外，其余灵芝三萜类化合物对BV-2小胶质细胞的存活率无影 口向，均能较好的抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞释放N0,其中化合物6、11、13、14、17、18、22表 现出显著的抑制活性，其IC5Q均低于ΙΟμΜ，表明这些化合物可能成为先导化合物。
【主权项】
1. 灵芝Ξ祗类化合物在制备神经退行性病变药物的用途。2. 如下所述化合物（1)~(22)在制备神经退行性病变药物的用途：3. 如权利要求2所述化合物(6)、（11)、（13)、（14)、（17)、（18)、（22)在制备神经退行性 病变药物的用途。4. 灵芝Ξ祗类化合物在制备抑制脂多糖诱导BV-2小胶质细胞释放一氧化氮药物的用 途。5. 如权利要求2所述化合物（1)~（22)在制备抑制脂多糖诱导BV-2小胶质细胞释放一 氧化氮药物的用途。6. 如权利要求2所述化合物(6)、（11)、（13)、（14)、（17)、（18)、（22)在制备抑制脂多糖 诱导BV-2小胶质细胞释放一氧化氮药物的用途。
【文档编号】A61K31/575GK106074566SQ201610378137
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】邱莉, 谢集照, 焦杨
【申请人】广西医科大学