一种联苄类化合物及其提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及油茶叶中的联节类物质提取领域，具体而言，设及一种油茶叶提取物 中的联节类化合物及其提取方法。
【背景技术】
[0002] 油茶(Camellia oleifera Abel)别名茶巧树、油茶树，为山茶属茶科(Theaceae) 植物，是世界四大木本油料之一，主要分布在中国云南、广西、广东等省份，是中国特有的纯 天然高级油料作物。油茶研究大多着眼于油茶仁、油茶巧、茶巧油、油茶壳或其种质资源，对 油茶叶的综合利用研究较少，每年四五月间打叶产生的大批落叶造成了很大的资源浪费。 油茶叶的开发利用可W充分利用废弃资源，提高油茶的综合利用效率，提高油茶主产区农 民的经济收入。油茶叶含有脂肪、蛋白质、还原糖、酸、氨基酸、茶皂素、叶绿素 W及联节类化 合物等成分，其微量元素和Ve含量高于一些常见水果。
[0003] 联节类化合物是一种生物活性很强的物质，具有抗氧、抗自由基、抑菌保鲜，防癌、 防骨质疏松，清除亚硝酸盐等作用，随着天然产物研究的发展，人们对油茶叶联节类化合物 组份、其功效作用及利用价值开展了深入的研究，但是现有技术从油茶叶中提取的联节类 物质多属于混合物，多种化合物并存，成分不明确杂质也比较多，不纯净，不利于油茶叶提 取物的广泛利用和市场化。
[0004] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一目的在于提供一种联节类化合物，克服了现有技术中存在的诸多技 术问题，其为一种新型的单一化合物，纯度高，成分明确，无任何杂质，属于首次从油茶叶中 提取并纯化得到，现有技术中没有任何相关记载，具有开拓性的意义，提高了联节类物质的 附加值，更利于针对性的进行市场化应用，具有广泛的市场应用价值。
[0006] 本发明的第二目的在于提供一种该联节类化合物的提取方法，该提取方法具有易 操作，简单方便，无需配备专业人员操作也可实现，节省人力物力，前后步骤衔接紧密，提取 操作条件溫和，所需化学试剂便宜易得，通过特定的提取操作条件的摸索获得了一种新型 化合物，为后续提取制备提供了可参考的工艺路线，非常具有借鉴价值。
[0007] 为了实现本发明的上述目的，特采用W下技术方案：
[000引本发明实施例提供了一种油茶叶提取物中的联节类化合物，该联节类化合物的化 学名称为二氨白襲芦醇-4'-0-[6"'-0-(4""-甲基没食子酷基）]-β-0-化喃葡萄糖巧，为二 氨白襲芦醇巧的一种衍生物，分子量为558，化学结构式为：
[0009]
[0010] 本发明实施例掲示的运种化合物是首次从油茶叶中分离提取出来的，现有技术中 还没有过任何相关报道，具有开拓性的意义。关于油茶叶的提取研究之所W运么受关注，是 因为油茶叶中含有脂肪、蛋白质、还原糖、酸、氨基酸、茶皂素、叶绿素 W及联节类化合物等 营养成分，其微量元素和Ve含量也高于一些常见水果，更进一步的油茶叶中的联节类物质 含量丰富，联节类化合物是一种生物活性很强的物质，具有抗氧、抗自由基、抑菌保鲜，防 癌、防骨质疏松，清除亚硝酸盐等作用，直接提取浓缩后可W更加强化其保健价值，尤其本 发明提取出的运种具有特定结构的联节类化合物，其应用价值经过进一步开发研究会更具 商业价值，值得更广泛的开发利用起来。
[0011] 在本发明中，提取得到的提取物中，该新型的联节类化合物的纯度可W达到95% W上，更优可W达到98% W上，只有少量的杂质，得到的物质很纯，不像现有技术中大部分 是多种联节类物质形成的混合物，纯度高的单一物质相比于混合物，会更加提高其应用价 值。
[0012] 本发明除了针对该新型的联节类化合物从化学名称、化学结构式、分子量等方面 予W确认，还提供了该化合物的提取方法，包括如下步骤：
[0013] (A)将油茶叶经过热提取、浓缩得到浓缩液，过D101大孔树脂吸附完成后，依次用 蒸馈水、20-30wt %乙醇、75-80wt %乙醇溶液洗脱；
[0014] (B)将采用75-80wt%乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行硅胶层析，流动相采用二氯 甲烧-甲醇，每400-500mL为一个单位收集洗脱液，对第10个单位的洗脱液进行继续分离提 取得到多化合物提取液；
[001引（C)将多化合物提取液进行硅胶层析，流动相采用二氯甲烧-甲醇，每40-50mL为一 个单位收集洗脱液，对第3个单位的洗脱液进行继续分离提取即得目标化合物。
[0016] 本发明实施例的提取方法是专口针对本发明的特定化合物而设计的，每一个步骤 均需要按照本发明的方案进行操作，不能缺少任何一个步骤，也不能颠倒前后步骤的顺序， 更不能采用其他操作方法替换本发明的任一操作步骤，尤其是本发明的提取方法中设及的 各个操控参数，需要控制在适宜的范围内，比如(A)步骤中，需要采用不同溶剂进行洗脱，并 且由于目标化合物存在于75-80wt %乙醇溶液洗脱得到的洗脱液中，因此针对运部分洗脱 液进行进一步一系列的提取操作，可见发明人在设计整个提取方法中均是有目的性的一步 步进行操作的，是需要付出大量的创造性劳动的，才能最终提取得到目标化合物。
[0017] 步骤(A)中，油茶叶在过柱子之前先要经过热提取、浓缩等预处理操作，油茶叶热 提取的溫度最好控制在70-80°C，更优为75°C，如果溫度太高可能会破坏油茶叶中的营养成 分，因此要注意溫度的控制，另外热提取之前先将油茶叶粉碎成60目W上的粉状;优选地， 热提取采用50wt%W上的乙醇为溶剂进行提取，粉碎成粉状有利于提取操作的顺利进行。
[0018] 在本发明的步骤(B)中，75-80wt%乙醇溶液洗脱得到的洗脱液先进行浓缩干燥 后，溶解于二氯甲烧-甲醇中，再进行硅胶层析，其中硅胶层析过程中所用的硅胶目粒度控 制在200-300目，W提高提取效率，二氯甲烧-甲醇的体积比最好控制在10:1-1:3,层析时每 400-500mL为一个单位收集洗脱液，一般是每500mL收集为一个流份，收集大概24个组份，对 其中Ξ个组分进行细分，分别是排号为第2、10、23运Ξ个组分，由于本发明的目标化合物存 在于第10个单位的洗脱液中，针对第10组分进一步分离提取，实际进行操作时，一般为对第 10个单位的洗脱液进行液相色谱检测后，根据检测结果采用甲醇-水溶液进行洗脱得到多 化合物提取液，液相色谱检测为DAC制备色谱分离并得到色谱图，甲醇-水恒定洗脱得到了 Ξ个单体化合物W及一个含多个化合物的复杂组分，将运个复杂组分溶解于一定比例的二 氯甲烧-甲醇中，继续硅胶层析。其中，甲醇-水溶液的质量百分比浓度为60-65%。
[0019] 优选地，步骤(C)中，第3个单位的洗脱液利用半制备液相色谱检测后，根据检测结 果采用乙腊-水溶液进行洗脱分离得到目标化合物。其中，乙腊-水溶液的质量百分比浓度 最好为20-30 %，优选为25 %。
[0020] 更优选的，步骤(C)中的硅胶层析过程中所用的硅胶目粒度控制在200-300目，W 提高提取效率，获得更加纯净的物质。
[0021] 现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0022] (1)本发明提供的新型的油茶叶提取物中的联节类化合物，纯度高，成分明确，无 任何杂质，属于首次从油茶叶中提取并纯化得到，现有技术中没有任何相关记载，具有开拓 性的意义，提高了联节类物质的附加值，更利于针对性的进行市场化应用，具有广泛的市场 应用价值；
[0023] (2)对于上述联节类化合物本发明提供的提取方法具有易操作，简单方便，无需配 备专业人员操作也可实现，节省人力物力，前后步骤衔接紧密，提取操作条件溫和的优点， 当然本发明提供的提取方法只是较优的一种方法，对于现有技术中任何一种提取方法只要 得到具有本发明特定结构的化合物，均在本发明的保护范围内。
【附图说明】
[0024] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，W下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0025] 图巧本发明实施例一中的80wt %乙醇洗脱液的HPLC图谱；
[0026] 图2为本发明实施例一中的第10个单位的洗脱液的DAC制备色谱分离图谱；
[0027] 图3为本发明实施例一中的第Ξ个流份的液相色谱图；
[0028] 图4为本发明实施例一中的目标化合物的离子图、色谱图和质谱图；
[0029] 图5为本发明实施例一中的目标化合物的iH-NMR图谱；
[0030] 图6为本发明实施例二中的目标化合物的UC-NMR图谱；
[0031] 图7为本发明实施例二中的目标化合物的H-H COSY图谱；
[0032] 图8为实施例二中的目标化合物的HSQ幻普图图谱；
[0033] 图9为本发明实施例二中的目标化合物的HMBC图谱。
【具体实施方式】
[0034] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可W通过市售购买获得的常规产品。
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