一种快速诱导铁皮石斛试管开花的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物生物技术领域，具体地指一种快速诱导铁皮石斛试管开花的方 法。
【背景技术】
[0002] 铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)别称铁皮兰、黑节草，是兰 科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物，因其莖干呈铁绿色，故而得名 铁皮石斛。铁皮石斛具有独特的药用价值，含有石斛多糖、石斛碱、石斛酚、石斛胺等，还有 特殊的菲类、联苄类抗癌成分，有益胃生津、滋阴清热、免疫调节、延缓衰老等功效。千百年 以来，铁皮石斛一直和灵芝、人参、冬虫夏草等被列为上品中药，并被道家养生经典《道臧》 誉为"中华九大仙草之首"，属国家2级保护的贵重濒危药材。由于铁皮石斛为附生植物，多 生于温凉高湿的岩层峭壁或密林的树杈上，其分布区域有很大的局限性。自然条件下，铁皮 石斛开花结实率低，仅为〇. 31 %，且种子极小、无胚乳，需与某些真菌共生才能萌发，自然条 件下萌发率极低。此外，铁皮石斛从种子萌发到开花通常需要3~4年的时间，因此，研究铁 皮石斛试管开花，对阐明开花调控机理具有重要的意义。第一，通过研究铁皮石斛试管开 花，探讨其开花规律和调控机理，进一步建立试管开花授粉受精体系，可以缩短其育种周 期。此外，研究铁皮石斛试管开花，为研发其花期不受季节限制，研发具有新颖视觉效果的 试管花卉产品提供理论依据。
[0003] 近年来，关于铁皮石斛的组培快繁及栽培技术已有较多研究，而对于其开花调控 的研究报道相对较少。
[0004] 参考文献(王光远，刘培，许智宏，石斛离体培养中ABA对诱导花芽形成的影响。植 物学报，1995，37(5): 374-378;王光远，许智宏，蔡德发，等.铁皮石斛的离体开花。中国科学 (C辑），1997，27(3): 229-234)，记载了对铁皮石斛离体开花的研究，研究人员发现原球茎作 为起始材料时形成的植株小，但是花芽时间出现较早，无根小苗次之，完整的小植物形成花 芽所需时间最长，成花频率也最低。同一茎段的顶芽比下部芽容易诱导花芽形成，开花频率 高。此外，在培养基中加入葡萄糖，花芽形成的时间提早，成花率增加。
[0005] 参考文献(邹娜，喻苏琴，王春玲，张露，铁皮石斛组织培养及试管开花研究。江苏 农业科学，2013,41(12) :42-44)，记载了铁皮石斛试管苗在不同培养基上均能开花，开花率 在17.18%-35.37%，指出基本培养基成分可能不是影响铁皮石斛试管开花最主要的因素。
[0006] 参考文献(赵银河，铁皮石斛试管开花的研究。种子，2013，32 (2): 16-23 )，发现了 不经低温诱导或者其他方法处理，应用植物生长调节剂能促进铁皮石斛开花。植物生长抑 制剂PP 333能够促进花芽的起始和开花，但最高开花率仅为20.0%。基于上述研究，目前关 于铁皮石斛试管开花影响因素及如何提高开花率尚需进一步深入研究。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的就是要提供一种快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，该方法简便易 行，可人为控制开花时间，摆脱季节对其花期的限制，缩短开花周期，为铁皮石斛开花机理 的研究及试管花的生产应用奠定基础。
[0008] 为实现此目的，本发明所设计的快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，其特征在于， 它包括如下步骤：
[0009] 步骤1:铁皮石斛试管苗的壮苗培养；
[0010] 将铁皮石斛组培种苗接种到壮苗培养基上，在温度为24~26 °C、湿度为35~45%、 每天光照14~16h的条件下培养，经过25~30d的培养，获得健壮铁皮石斛试管苗；
[0011] 步骤2:铁皮石斛试管苗的花芽诱导和开花培养；
[0012] 将株高3~5cm长的健壮铁皮石斛试管苗，接种到花芽诱导和开花培养基上并在温 度为24~26 °C、湿度为35~45 %的条件下每天光照14~16h，再经过70~90d培养后，可获得 开花的试管植株。
[0013] 本发明的有益效果：
[0014] (1)本发明简便易行，操作方便，可人为控制开花时间，摆脱季节对其花期的限制。
[0015] (2)本发明采用健壮试管苗直接诱导花芽和开花，时间仅需70~90d，周期短，成花 率高。
[0016] (3)本发明诱导的试管花花型大，花器官完整，具有较高观赏价值。
【附图说明】
[0017] 图1为铁皮石斛试管苗壮苗培养示意图；
[0018] 图2为铁皮石斛试管苗花芽诱导示意图；
[0019] 图3为铁皮石斛试管苗开花培养示意图。
【具体实施方式】
[0020] 以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细说明：
[0021] 本发明的快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，它包括如下步骤：
[0022]步骤1:将铁皮石斛组培种苗接种到壮苗培养基上，在温度为24~26°C、湿度为35 ~45%、光照强度为2000Lux、每天光照14~16h的条件下培养，经过25~30d的培养，获得健 壮铁皮石斛试管苗；
[0023] 步骤2:将株高3~5cm长的健壮铁皮石斛试管苗，接种到花芽诱导和开花培养基上 并在温度为24~26°C、湿度为35~45%、光照强度为3000LUX的条件下每天光照14~16h，再 经过70~90d培养后，可获得开花的试管植株。
[0024] 上述技术方案中，所述壮苗培养基为1/2MS基本培养基和附加不同成份的物质， 其中附加成份包括2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤（6-BA)、0.5mg/L的萘乙酸（.4，€(-Naphthaleneacetic acid)、0· 5mg/L的赤霉素(GA3)、30g/L的鹿糖、7g/L的琼脂和0 · lg/L的 活性炭。所述壮苗培养基内的PH值范围为5.8~6.0。上述6-苄基腺嘌呤（6-ΒΑ)、α-萘乙酸 (ΝΑΑ)、赤霉素(GA 3)用O.lmol/L的NaOH或酒精溶解，再用蒸溜水稀释后分别配制成0.5mg/ ml的母液，装入容量瓶中，置于冰箱保存。除赤霉素(GA3)需过滤灭菌外，其它的附加物都在 高压灭菌前加入，压力为I. lkg/cnf2并于121°C时计时20min。
[0025] 上述技术方案中，所述花芽诱导和开花培养基为MS基本培养基和附加不同成份的 物质，其中附加成份包括〇.5mg/L的2,4-0、0.511^/1的财4、3(^/1的蔗糖、78/1的琼脂和 〇. lg/L的活性炭。所述花芽诱导和开花培养基的pH值为范围5.8~6.0。
[0026] 上述pH值通过NaOH调节。
[0027] 实施例1:不同浓度的激素组合对铁皮石斛试管苗开花诱导的影响
[0028] 1、试验材料<