br>[0029] 供试材料为常州世花花卉科技有限公司提供的铁皮石斛组培种苗
[0030] 2、培养基配制：
[0031] MS基本培养基和1/2基本培养基的配制见〈〈植物组织培养>>(李明浚编译.北京： 中国农业出版社，1992)。
[0032] 2,4-0、6-84、嫩4、活性炭、6知均可市售购得。所有培养基均添加琼脂粉78/1、蔗糖 30g/L和0.1g/L活性炭及不同浓度的植物生长调节剂，将配制好的培养基用O.lmol/L的 NaOH调pH值至6.0左右，除GA3外需过滤灭菌外，其他的附加物都在高压灭菌前加入，压力 1 · lkg/cm-2并于 121°C时计时20min。
[0033] 3、数据统计与分析
[0034] 开花率=开花的株数/接种的外植体总数X 100%
[0035]实验中，所有数据均采用SAS软件进行方差分析与多重比较分析（LSD法，P = 〇.〇5);数据为百分数时先经反正弦(7 = &代811?1/2)转换后，再加以分析和比较。
[0036] 4、方法
[0037]以MS添加0.5mg/L NAA，0.1g/L活性炭为基本培养基，将经过壮苗培养后的铁皮石 斛试管苗（图1)接种到各添加不同激素及不同浓度的开花诱导培养基中（表1)，每处理培养 基接种10瓶，每瓶4个外植体，在温度为24~26°C、湿度为35~45 %，光照强度3000LUX，每天 光照14~16h条件下培养，80d后，统计不同开花诱导培养基中试管苗的开花情况，探讨不同 浓度的激素组合对铁皮石斛开花诱导的影响。
[0038]结果表明，将铁皮石斛的试管苗分别接种到不同培养基上进行开花诱导，70d后可 见试管苗的绿色花苞形成（图2 )，随后5~7d，花苞逐渐展开开放，花器官完整，萼片为黄绿 色，唇瓣为淡绿色，中间有两块紫斑，随后颜色慢慢变淡（图3)。由表2~3可知，不同浓度的 激素组合对铁皮石斛试管苗开花诱导效果存在显著性差异，培养基中只添加〇.5mg/L NAA， 试管苗开花率只有4.44%;添加不同浓度的6-8六、激动素（1^11的111，1(1')、2,4-0及噻苯隆 (Thidiazuron ,TDZ)均可以显著提高铁皮石斛试管开花率，其中添加0.5mg/L的2,4-D的试 管开花率最高，可达42.22 %。在不添加2，4-D的情况下，添加 1.0 mg/!的TDZ和添加 1.0 mg/L 的KT对试管苗开花影响差异并不显著，说明2,4-D对铁皮石斛试管开花的诱导发挥重要作 用，因此，选择MS+2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L作为铁皮石斛试管开花诱导的最佳培养基。
[0039]表1不同培养基对铁皮石斛试管苗开花的影响
[0042] 实施例2:不同光照强度对铁皮石斛试管苗开花诱导的影响
[0043] 光照强度在植物开花调控中起到重要的作用，为了探讨光照强度对铁皮石斛试管 苗开花的影响，将铁皮石斛试管苗接种到MS+2，4-D 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L培养基中，在光 照强度分别为1000、2000、3000、4000LUX下进行培养，每个光照强度处理10瓶，每瓶4个外植 体，在温度为24~26 °C、湿度为35~45 %，每天光照14~16h条件下培养，80d后，统计不同光 照强度下的开花情况，探讨不同光照强度对铁皮石斛试管苗开花诱导的影响。
[0044] 结果如表2所示，铁皮石斛试管苗随着光照强度的增加开花率升高，当光照强度为 30001UX时，铁皮石斛试管苗开花率最高，达44.44%，随后，随着光照强度的增加，铁皮石斛 的开花率降低。
[0045] 表2不同光照强度对铁皮石斛试管苗开花的影响
[0048]本说明书未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
【主权项】
1. 一种快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，其特征在于，它包括如下步骤： 步骤1:将铁皮石斛组培种苗接种到壮苗培养基上，在温度为24~26°C、湿度为35~ 45%、每天光照14~16h的条件下培养，经过25~30d的培养，获得健壮铁皮石斛试管苗； 步骤2:将株高3~5cm长的健壮铁皮石斛试管苗，接种到花芽诱导和开花培养基上并在 温度为24~26°C、湿度为35~45 %的条件下每天光照14~16h，再经过70~90d培养后，可获 得开花的试管植株。2. 根据权利要求1所述的快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，其特征在于:所述壮苗培 养基为1/2MS基本培养基和附加不同成份的物质，其中附加成份包括2. Omg/L的6-苄基腺嘌 呤、0.5mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的赤霉素、30g/L的蔗糖、7g/L的琼脂和0.1g/L的活性炭，pH 值范围为5.8~6.0。3. 根据权利要求1所述的快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，其特征在于:所述花芽诱 导和开花培养基为MS基本培养基和附加不同成份的物质，其中附加成份包括0.5mg/L的2， 4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的萘乙酸、30g/L的蔗糖、7g/L的琼脂和0.1g/L的活性炭，pH值范 围为5.8~6.0。4. 根据权利要求1所述的快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，其特征在于:所述步骤1 中，将铁皮石斛组培种苗接种到壮苗培养基上，在温度为24~26°C、湿度为35~45%、光照 强度为2000Lux、每天光照14~16h的条件下培养。5. 根据权利要求1所述的快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，其特征在于:所述步骤2 中，将株高3~5cm长的健壮铁皮石斛试管苗，接种到花芽诱导和开花培养基上并在温度为 24~26°C、湿度为35~45%、光照强度为3000Lux的条件下每天光照14~16h，再经过70~ 90d培养后，可获得开花的试管植株。
【专利摘要】本发明公开了一种快速诱导铁皮石斛试管开花的方法，它包括如下步骤：步骤1：将铁皮石斛组培种苗接种到壮苗培养基上，在温度为24～26℃、湿度为35～45％、每天光照14～16h的条件下培养，经过25～30d的培养，获得健壮铁皮石斛试管苗；步骤2：将株高3～5cm长的健壮铁皮石斛试管苗，接种到花芽诱导和开花培养基上并在温度为24～26℃、湿度为35～45％的条件下每天光照14～16h，再经过70～90d培养后，可获得开花的试管植株。该方法简便易行，可人为控制开花时间，摆脱季节对其花期的限制，缩短开花周期，为铁皮石斛开花机理的研究及试管花的生产应用奠定基础。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105638459
【申请号】
【发明人】阳永学, 杨洁, 祝菊红, 赵志远, 李其友, 张安华, 毕秋荣, 杨皓琼
【申请人】武汉市农业科学研究所
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月29日