一种鞣花酸类化合物及其提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及油茶叶中的鞣花酸类物质提取领域，具体而言，涉及一种鞣花酸类化 合物及其提取方法。
【背景技术】
[0002] 油茶(Camellia oleifera Abel)别名茶籽树、油茶树，为山茶属茶科(Theaceae) 植物，是世界四大木本油料之一，主要分布在中国云南、广西、广东等省份，是中国特有的纯 天然高级油料作物。油茶研究大多着眼于油茶仁、油茶柏、茶籽油、油茶壳或其种质资源，对 油茶叶的综合利用研究较少，每年四五月间打叶产生的大批落叶造成了很大的资源浪费。 油茶叶的开发利用可以充分利用废弃资源，提高油茶的综合利用效率，提高油茶主产区农 民的经济收入。油茶叶含有脂肪、蛋白质、还原糖、酸、氨基酸、茶皂素、叶绿素、联苄类化合 物以及鞣花酸类化合物等成分，其微量元素和Ve含量高于一些常见水果。
[0003] 油茶叶中的鞣花酸类化合物是一种生物活性很强的物质，具有抗氧、抗自由基、抑 菌保鲜，防癌、防骨质疏松，清除亚硝酸盐等作用，特别是对结肠癌、食管癌、肝癌、肺癌、舌 及皮肤肿瘤等有很好的抑制作用。随着天然产物研究的发展，人们对油茶叶鞣花酸类化合 物组份、其功效作用及利用价值开展了深入的研究，但是现有技术中普遍从油茶叶中提取 的鞣花酸类物质多属于混合物，多种化合物并存的状态，成分不明确杂质也比较多，不纯 净，不利于油茶叶提取物的广泛利用市场化。
[0004] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一目的在于提供一种鞣花酸类化合物，克服了现有技术中存在的诸多 技术问题，其为一种新型的单一化合物，纯度高，成分明确，无任何杂质，属于首次从油茶叶 中提取并纯化得到，现有技术中没有任何相关记载，具有开拓性的意义，提高了鞣花酸类物 质的附加值，更利于针对性的进行市场化应用，具有广泛的市场应用价值。
[0006] 本发明的第二目的在于提供一种该鞣花酸类化合物的提取方法，该提取方法具有 易操作，简单方便，无需配备专业人员操作也可实现，节省人力物力，前后步骤衔接紧密，提 取操作条件温和，所需化学试剂便宜易得，通过特定的提取操作条件的摸索获得了一种新 型化合物，为后续提取制备提供了可参考的工艺路线，非常具有借鉴价值。
[0007] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0008] 本发明实施例提供了一种油茶叶提取物中的鞣花酸类化合物，该鞣花酸类化合物 的化学名称为5-甲氧基-3，3'，4'-三甲基鞣花酸-4-〇-i3-D-吡喃葡萄糖苷，为鞣花酸的一种 衍生物，分子量为536，化学结构式为：
[0010] 本发明实施例揭示的这种化合物是首次从油茶叶中分离提取出来的，现有技术中 还没有过任何相关报道，具有开拓性的意义。关于油茶叶的提取研究之所以这么受关注，是 因为油茶叶中含有脂肪、蛋白质、还原糖、酸、氨基酸、茶皂素、叶绿素、联苄类化合物以及鞣 花酸类化合物等成分，其微量元素和V c含量也高于一些常见水果，更进一步的油茶叶中的 鞣化酸类物质含量丰富，鞣化酸类化合物是一种生物活性很强的物质，具有抗氧、抗自由 基、抑菌保鲜，防癌、防骨质疏松，清除亚硝酸盐等作用，特别是对结肠癌、食管癌、肝癌、肺 癌、舌及皮肤肿瘤等有很好的抑制作用，尤其本发明提取出的这种具有特定结构的鞣花酸 类化合物，其应用价值经过进一步开发研究会更具商业价值，值得更广泛的开发利用起来。
[0011] 在本发明中，提取得到的提取物中，该新型的鞣花酸类化合物的纯度可以达到 95%以上，更优可以达到98%以上，只有少量的杂质，得到的物质很纯，不像现有技术中大 部分是多种鞣花酸类物质形成的混合物，纯度高的单一物质相比于混合物，会更加提高其 应用价值。
[0012] 本发明除了针对该新型的鞣花酸类化合物从化学名称、化学结构式、分子量等方 面予以确认，还提供了该化合物的提取方法，包括如下步骤：
[0013] (A)将油茶叶经过热提取、浓缩得到浓缩液，过DlOl大孔树脂吸附完成后，依次用 蒸馏水、20-30wt %乙醇、75-80wt %乙醇溶液洗脱；
[0014] (B)将米用75_80wt%乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行娃I父层析，流动相米用二氯 甲烷-甲醇，每400_500mL为一个单位收集洗脱液；
[0015] (C)将收集的第2个单位的洗脱液进行硅胶层析，流动相采用二氯甲烷-甲醇，每 90-100mL为一个单位收集洗脱液，将第25-26单位的洗脱液合并后继续分离提取，即得。
[0016] 本发明实施例的提取方法是专门针对本发明的特定化合物而设计的，每一个步骤 均需要按照本发明的方案进行操作，不能缺少任何一个步骤，也不能颠倒前后步骤的顺序， 更不能采用其他操作方法替换本发明的任一操作步骤，尤其是本发明的提取方法中涉及的 各个操控参数，需要控制在适宜的范围内，比如(A)步骤中，需要采用不同溶剂进行洗脱，并 且由于目标化合物存在于75-80wt %乙醇溶液洗脱得到的洗脱液中，因此针对这部分洗脱 液进行进一步的一系列提取操作，可见发明人在设计整个提取方法中均是有目的性的一步 步进行操作的，是需要付出大量的创造性劳动的，才能最终提取得到目标化合物。
[0017] 步骤(A)中，油茶叶在过柱子之前先要经过热提取、浓缩等预处理操作，油茶叶热 提取的温度最好控制在70_80°C，更优为75°C，如果温度太高可能会破坏油茶叶中的营养成 分，因此要注意温度的控制，另外热提取之前先将油茶叶粉碎成60目以上的粉状;优选地， 热提取采用50wt%以上的乙醇为溶剂进行提取，粉碎成粉状有利于提取操作的顺利进行。
[0018] 在本发明的步骤(B)中，75_80wt %乙醇溶液洗脱得到的洗脱液先进行浓缩干燥 后，溶解于二氯甲烷-甲醇中，再进行硅胶层析，其中硅胶层析过程中所用的硅胶目粒度控 制在200-300目，以提尚提取效率，二氯甲烧-甲醇的体积比最好控制在10:1_1:3，层析时每 400-500mL为一个单位收集洗脱液，一般是每500mL收集为一个流份，收集大概24个组份，对 其中三个组分进行细分，分别是排号为第2、10、23这三个组分，由于本发明的目标化合物存 在于第2个单位的洗脱液中，针对第2组分进一步分离提取，实际进行操作时，一般为对第2 个单位的洗脱液进行再一次的硅胶层析，其中硅胶层析过程中所用的硅胶目粒度控制在 200-300目，以提高提取效率。
[0019] 优选地，步骤(C)中，将第25-26单位的洗脱液合并后继续分离提取的步骤包括:先 将合并后的洗脱液溶解于甲醇中，静置一段时间析出晶体，再采用甲醇重结晶，即可。
[0020] 更优选的，步骤(C)中的静置的时间为30min以上，以获得更加纯净的物质。
[0021] 现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0022] (1)本发明提供的新型的油茶叶提取物中的鞣花酸类化合物，纯度高，成分明确， 无任何杂质，属于首次从油茶叶中提取并纯化得到，现有技术中没有任何相关记载，具有开 拓性的意义，提高了鞣花酸类物质的附加值，更利于针对性的进行市场化应用，具有广泛的 市场应用价值；
[0023] (2)对于上述鞣花酸类化合物本发明提供的提取方法具有易操作，简单方便，无需 配备专业人员操作也可实现，节省人力物力，前后步骤衔接紧密，提取操作条件温和的优 点，当然本发明提供的提取方法只是较优的一种方法，对于现有技术中任何一种提取方法 只要得到具有本发明特定结构的化合物，均在本发明的保护范围内。
【附图说明】
[0024] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0025]图1为本发明实施例一中的80wt %乙醇洗脱液的HPLC图谱；
[0026] 图2为本发明实施例一中的目标化合物的离子图、色谱图和质谱图；
[0027] 图3为本发明实施例一中的目标化合物的1H-NMR图谱；
[0028] 图4为本发明实施例二中的目标化合物的13C-NMR图谱；
[0029] 图5为本发明实施例二中的目标化合物的H-H COSY图谱；
[0030] 图6为本发明实施例二中的目标化合物的HSQC图谱；
[0031] 图7为本发明实施例二中的目标化合物的HMBC图谱。
【具体实施方式】
[0032]下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售购买获得的常规产品。
[0033] 实施例1
[0034