一种新的三萜类化合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种新的三萜类化合物及其制备方法。该化合物为首次报道，是一种结构新颖的三萜类化合物，可以从散沫花的干燥叶中提取、分离纯化得到。本发明的化合物(Ⅰ)经体外试验证明化合物(Ⅰ)单独或以组合物形式作用于胃癌细胞时，可以抑制癌细胞的增殖，促进细胞的凋亡，随着浓度的增大，对胃癌细胞的抑制生长作用呈增强趋势。本发明的化合物(Ⅰ)为非传统意义的化疗药物，对机体的损害小，而且避免了肿瘤细胞对传统化疗药物的耐药性，可以为今后胃癌的临床治疗提供参考。
【专利说明】
一种新的三萜类化合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从散沫花的干燥叶中分离得到的一种新的三 萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 散沫花Lawsonia inermis，千屈菜科Lythtaceae散沫花属植物，又叫指甲花、指甲 叶、手甲木、指甲木、干甲树，其叶、花、果实、种子都可以作为传统中药使用。散沫花叶对腹 泻、痢疾、麻风病、疥疮有良好的疗效;花可用来治疗头痛、发烧、过敏、贫血、失眠等;种子对 发烧、失眠、痢疾、腹泻及智力缺陷有效;树皮可以治疗脾脏肿大和皮肤顽疾;根可以治疗麻 风病。散沫花主产于热带、亚热带，广泛存在于中东、北非，在我国广东、广西、福建、台湾等 南部地区也有栽培。早在公元304年晋稽含在《南方草木状》一书中称其为散沫花，1964年版 《维吾尔医用药材》中称其为Hina或Mihid。
[0003] 现代研究发现散沫花含有醌、苯丙素、黄酮、三萜、酚酸和脂肪酸等多种类型的化 合物。
[0004] 药理研究表明散沫花具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗寄生虫等广泛的药理活性，有 很大的开发利用价值，因此受到各国学者的广泛关注。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从散沫花的干燥叶中分离得到的一种新的三萜类化合 物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种新的三萜类化合物，具有下述结构式的化合物a)，
[0008] ^ 1. / .〇
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将散沫花的干燥叶粉碎，用 75~85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和 的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个柱体 积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸 膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85 :1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和 10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用80%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。其中药 物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒 和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0013] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0014] 与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
[0015] 本发明的化合物（I)经体外试验证明化合物（I)单独或以组合物形式作用于胃癌 细胞时，可以抑制癌细胞的增殖，促进细胞的凋亡，随着浓度的增大，对胃癌细胞的抑制生 长作用呈增强趋势。本发明的化合物（I)为非传统意义的化疗药物，对机体的损害小，而且 避免了肿瘤细胞对传统化疗药物的耐药性，可以为今后胃癌的临床治疗提供参考。
【附图说明】
[0016] 图1为化合物(I)结构式；
[0017]图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021]制备方法：（a)将散沫花的干燥叶（10kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取（25L X 3 次），合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(398g)和正丁醇萃取 物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积， 再用75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏 (163g); (c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用200-300目正相硅胶分离，依次用体积比为85:1 (10个柱体积）、45:1 (9个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积） 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分3(49g)用200-300目正相硅胶 进一步分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、20:1 (10个柱体积)和10:1 (5个柱体积）的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(31g)用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶0DS-C18分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (44mg)。
[0022] 结构确证:册431]\^显示[]\1+他]+为111/2 523.3018，结合核磁特征可得分子式为 C30H44〇6，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，DMS〇-d6，500 · 13MHz): H-1 (1 · 95，d，J = 5.0)，H-l(1.59，d，J = 5.0)，H-5(1.36，m)，H-6(1.83，m)，H-6(1.79，m)，H-7(2.98，d，J = 6.4)，H-ll(1.86，m)，H-ll(1.98，m)，H-12(1.49，m)，H-12(1.94，m)，H-15(1.45，m)，H-15 (1.17，ddd，J=12.5，12.5,5.3)，H-16(1.28，m)，H-16(2.06，m)，H-17(1.57，m)，H-18(0.94， s)，H-19(l.ll，s)，H-20(1.33，m)，H-21(0.80，d，J=6.6)，H-22(0.97，m)，H-22(1.32，m)，H-23(1.76，m)，H-23(1.94，m)，H-24(4.98，tt，J=7.1，1.4)，H-26(1.51，s)，H-27(1.59，s)，H-28(1 · 01，s)，H-29(0 · 97，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，DMS〇-d6，176 · 04MHz): 37 · 1 (CH2， 7-C)，64.1(C，8-C)，84.9(C，9-C)，36.4(C，10-C)，22.1(CH2，ll-C)，33.4(CH2，12-C)，45.2 (C，13-C)，58.7(C，14-C)，19.8(CH2，15-C)，26.9(CH2，16-C)，51.6(CH，17-C)，13.3(CH 3，18-C)，15.7(CH3，19-C)，33.8(CH，20-C)，17.6(CH3,2hC)，35.0(CH2,22-C)，24.1(CH2,23-C)， 123.2(CH，24-C)，130.8(C，25-C)，17.2(CH 3,26-C)，25.1(CH3,27-C)，25.2(CH3,28-C)，21.7 (CH 3,29-C)，176.1(C，30-C);碳原子标记参见图UIR光谱显示出酮基（1706cm-4和γ内酯 (1769cm-4吸收带。 1H NMR谱显示含有六个叔甲基信号δΗΟ. 94(Me-18)，1.11 (Me-19)，1.51 (Me-26)，1.59(Me-27)，1.01(Me-28)和0.97(Me-29);以及一个双峰信号SH0.80(Me-21，J = 6.6Hz)，说明该化合物为三萜类化合物。13C NMR和DEPT谱显示30个碳信号，包括七个甲基， 五个次甲基(一个烯烃碳，一个含氧次甲基），八个亚甲基以及十个季碳(三个羰基碳，一个 烯烃碳，两个含氧季碳）。侧链具有24(25)-双键〇(：130.8，123.2和6!14.98，《，1 = 7.1， 1.4Hz)，说明该化合物为羊毛留醇型三萜化合物，HMBC谱中Me-26和Me-27与C-24和C-25， Me-21 与C-17，C-20和C-22，以及H-24与C-22，C-23，Me-26，Me-27的相关性验证了上述推论。 HMBC谱中，H2-1 与C-2，以及H-5，Me-28和Me-29与C-3 的交叉峰证明了 C-2 (SC201.1)和C-3 (δ C204.8)为酮羰基。此外，一个酯羰基信号[SC176.1(C-30)]和两个碳信号[SC84.9(C-9)和 58.7((：-14)]说明该化合物存在一个丫内酯结构。腿8(：谱中]\^-18与(：-14 ;!12-15与(：-30;!12-11与(：-9;!1-11€ [与(：-8以及16-19与(：-9的相关性验证了30,9-这个官能团的连接。综合氢谱、 碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所 示，立体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0023]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0024] -、材料和仪器
[0025] 人胃癌细胞株SGC-7901购于赛尔试剂公司。化合物（I)自制，HPLC归一化纯度大于 98 %。PDTC、胰蛋白酶、MTT、二甲基亚砜(DMS0)、琼脂糖、冰醋酸购于美国Sigma公司。RPMI-1640培养基、PBS磷酸盐缓冲溶液购于美国GIBC0公司。胎牛血清购于山东银香伟业公司。台 盼蓝(北京中杉金桥生物技术有限公司），TUNEL试剂盒(凯基生物科技发展有限公司），DAB 显色试剂盒(北京中杉金桥生物公司），甲醛(美国Fisher公司），过氧化氢酶(天津市天新精 细化工开发中心）。
[0026] WD-9403C紫外分析仪(德国Biometra公司），梯度PCR仪(德国Biometra公司），凝胶 成像分析系统（上海天能公司），电泳仪(北京六一），电子天平（上海精密仪器仪表有限公 司），RKI-1002型二氧化碳培养箱（日本Ikemoto公司），超净工作台（苏州净化实验设备有限 公司），超速离心机(北京医疗器械厂），低速离心机(北京医疗器械厂），Wil 〇vert S型倒置 显微镜（日本Olympus公司），立式压力蒸汽灭菌器(上海博讯实业有限公司），细胞计数板 (上海精密仪器公司），超纯水纯水器(英国PURELAB ulTRA GENETIC)。
[0027]二、试验方法
[0028] 1、胃癌细胞SGC-7901的培养
[0029] 1.1细胞复苏
[0030] (1)从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速置于37°C~42°C，75%酒精中，然后移至同 温水浴锅中；（2)轻轻晃动1~3min冻存管，使冻存液融化，迅速移至超净台中；（3)将含有细 胞的冻存液吸入无菌离心管，加入适量RP頂-1640培养基；（4)吹打混匀后放入低速离心机， 800rpm/min离心3分钟，去除上清液；（5)加入适量培养基吹匀，将细胞悬液依据浓度接种到 1 OmL培养皿中；（6)置于含5 %二氧化碳、37 °C饱和湿度的培养箱中培养。
[0031] 1.2细胞传代
[0032] (1)待培养皿中的细胞贴壁约80 %时，在超净台中用移液管吸取旧的培养基吹打 数次培养皿中细胞，以吹掉死亡细胞；（2)用移液管吸去旧培养基，加入适量0.25 %胰酶消 化细胞，置于30°C培养箱中消化；（3)约3min后将培养皿置于倒置显微镜下观察，待细胞周 边发亮、回缩变圆后则说明细胞已经从壁上脱离；（4)迅速于超净台中吸去胰酶。加入适量 培养基反复吹打细胞，使细胞完全脱离培养皿；（5)将细胞悬液按浓度分别接种至不同的培 养皿中，补足培养基；（6)重新置于含5 % C02、37 °C饱和湿度的培养箱中培养。
[0033] 2、细胞计数
[0034] (1)准备好细胞计数板及盖玻片，二者均用酒精擦拭干净，将盖玻片盖在计数板 上；（2)待酒精挥发后，吸出适量细胞悬液，滴加在盖玻片边缘，使悬液充满盖玻片和计数板 之间，注意不要溢出盖玻片及两侧的玻璃槽，静置后计数；（3)在显微镜下找到4个大格，每 个大格又分为16个小格，分别计数4个大格中的细胞数，取平均值。压线细胞计左侧和上方 的，不计右侧和下方的；（4)细胞浓度(个/mL)=每个方格的平均细胞数X 10000; (5)将细胞 悬液稀释成实验所需浓度。
[0035] 3、细胞活力测定
[0036] (1)取待测定的SGC-7901胃癌细胞悬液0.9mL; (2)向细胞悬液中加入台盼蓝吹打 混匀；（3)采用细胞计数板盲法计数至少200个细胞，倒置显微镜下观察；（4)镜下观察细胞 染色情况，细胞内染成淡蓝色者为死细胞，未染色者为活细胞，以活细胞所占细胞总数的百 分比反映细胞的活力（％ )。
[0037] 4、MTT检测细胞生长抑制率
[0038]实验分组:①阴性对照组;②化合物（I)组1，化合物（I)(5〇ym〇l/L);③化合物（I) 组2，化合物（I) (1 ΟΟμL?ο 1 /L);④roTC组 1，PDTC (50μL?〇 1 /L);⑤PDTC组2，PDTC (1 ΟΟμL?ο 1 /L); ⑥联合用药组1，化合物（I) (25ym〇l/L)+PDTC(25ym〇l/L);⑦联合用药组2，化合物（I) (50μ mol/L)+PDTC(50ymol/L)〇
[0039] (1)取对数生长期的SGC-7901细胞，用细胞计数板计数，调节细胞浓度为5 X 105/ mL; (2)使用加样器以每孔100yL接种于96孔板。注意接种时只接种到中间的60个孔，周边36 孔以PBS填充，同时铺3个96孔板；（3)将铺好的96孔板置于37°C，5%C02细胞培养箱中，待 24h细胞贴壁后取出；（4)将96孔板分为化合物（I)组，（0、50、100ymol/L)，roT(^(0、50、100 ymol/L)，两药联合组(0/0、25/25、50/5(^111〇1/1)，同时设立不含细胞的空白对照组（只加培 养基)分别予以不同处理；（5)各药物每个浓度设5个复孔，分别培养24、48及72h; (6)分别在 特定的结束时间点取出96孔板，每孔加入MTT (5g/L)溶液20yL，放回培养箱继续培养4h，终 止培养。（7)小心吸去孔内上清液，每孔加入150yL DMSO，平板摇床振荡lOmin使结晶充分溶 解，显微镜下观察颗粒消失。（8)于酶标仪490nm波长处测定各孔的光密度(OD)值，计算各时 间点的细胞生长抑制率。抑制率=[1 -(加药组OD值-空白对照组OD值)/ (阴性对照组OD值-空白对照组OD值）]X 100 %。
[0040] 5、TUNEL法检测细胞调亡指数
[0041] 5.1细胞爬片的制备
[0042] (1)盖玻片的处理:将盖玻片置于浓硫酸中浸泡过夜，次日先用自来水冲洗数次， 再置于无水乙醇中浸泡4h，然后用去离子水冲洗干净，放在供干箱中烘干后进行高压消毒， 取出直接放入超净台中备用。6孔板置于超净台内紫外线照射30min; (2)放置盖玻片:在六 孔板的每孔中准备放盖玻片的位置滴入少量培养基后再放置盖玻片，使得盖玻片与孔板考 培养基的张力粘合到一起，防止加细胞悬液时盖玻片飘起，造成双层细胞贴壁；（3)取对数 生长期的SGC-7901细胞，消化吹打成细胞悬液，用细胞计数板调整细胞浓度为lX10 6/mL。 (4)用加样器在放有盖玻片的每孔分别加入lmL细胞悬液，同时铺3板，置于37°(：，5%0) 2培 养箱中培养24h待细胞贴壁；（5)24小时细胞贴壁后在超净台中将6孔板分为阴性对照组和 实验组分别予以不同处理，阴性对照组加 lmL培养基，实验组再分为化合物（I)组、PDTC组及 联合用药组3个亚组，每孔加 lmL药物。化合物（I)组终浓度为100ymol/L，PDTC组终浓度为 100μ mol/L，两药联合组终浓度为两种药物各为50ymol/L。每组设2个复孔。（6)置于37°C， 5 % C02的细胞培养箱中继续培养。
[0043] 5.2TUNEL法操作步骤
[0044] (1)细胞爬片加药培养24h时取出6孔板，按照TUNEL说明书依次进行如下步骤；（2) 小心吸弃每孔里的上清液；（3)每个孔加入PBS (4°C ) 2mL，平板摇床冲洗5min X 3次；（4)每孔 加入lmL预冷细胞固定液，4 °C冰箱固定30min。（ 5)吸弃固定液，每个孔加入roS (4 °C) 2mL，平 板摇床冲洗5min X 3次。（6)浸入封闭液中，室温（15 °C~25 °C )封闭1 Omin。（ 7)每个孔加入 PBS(4°C)2mL，平板摇床冲洗5minX3次。样品周围用吸水纸吸干。（8)每个样本滴加50yL TdT酶反应液，37°C，避光湿润反应60min。（9)每个孔加入roS(4°C) 2mL，平板摇床冲洗5min X 3次。样品周围用吸水纸吸干。（10)滴加50yL Streptavidin-HRP工作液，37 °C，避光湿润 反应30min。（ 11)每个孔加入PBS(4°C)2mL，平板摇床冲洗5minX3次。（12)滴加100yL DAB工 作液，室温显色反应1〇11^11。（13)每个孔加入PBS(4°C)2mL，平板摇床冲洗5minX3次。（14)光 学显微镜下观察拍照:随机选取10个高倍（X 100)视野，每个视野计数100个细胞，计算调亡 指数的平均值。凋亡指数(AI)=(阳性细胞数/总细胞数X 100% )。阳性细胞的细胞核呈棕 褐色。
[0045] 6、统计学分析
[0046] 采用SPSS 11.5进行分析，符合JH态分布的计量资料以表示，组间比较用Oneway-AN0VA法进行分析，两两比较采用LSD-t法，P〈0.05为差异有统计学意义。
[0047]三、结果及结论
[0048] 1、MTT检测药物对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制率
[0049] 经3次重复MTT，检测结果显示，单个药物作用于胃癌细胞72h后，100μ mol/L的药物 组较50ymol/L的药物组对胃癌细胞的生长抑制率均较高，差异有统计学意义(P〈0.05) ΑΟμ mol/L的化合物（I)对胃癌细胞的生长抑制作用与联合用药25/25ymol/L组差异无统计学意 义(ΡΧλΟδΚδΟμ mol/Ι的TOTC对胃癌细胞的生长抑制作用与联合用药25/25ymol/L组相比， 差异有统计学意义(P〈〇.〇5)。联合用药50/50ymol/L组对胃癌细胞的生长抑制率高于各个 高浓度单药组（100μ mol/L)对胃癌细胞的生长抑制率，差异有统计学意义(P〈0.001)，见表1 (*Ρ〈0·05，**Ρ〈0·01)。
[0050] 2、TUNEL法检测各组凋亡指数
[0051 ]化合物（I)、PDTC及联合用药组均对胃癌细胞SGC-7901有抑制生长的作用，各组与 阴性对照组比较差异均有统计学意义(P〈〇.001)，阴性对照组有少量细胞的胞核被染成棕 褐色，各个单药组与联合用药组凋亡细胞较阴性对照组相比均有增加，联合用药组细胞的 凋亡指数最高，对胃癌细胞的抑制效果更显著。见表2(**P〈0.01)。
[0052]结论，PDTC与化合物⑴两药单独作用于胃癌细胞均可以抑制癌细胞的增殖，促进 细胞的凋亡，随着浓度的增大，对胃癌细胞的抑制生长作用呈增强趋势，两种药物联合应用 后促进胃癌细胞的凋亡效果更显著，细胞的生长抑制率及凋亡指数均较单独用药组升高。 研究发现totc及化合物（I)两种药物联合应用对胃癌细胞的抑制作用更显著，且两种药物 均为非传统意义的化疗药物，对机体的损害小，而且避免了肿瘤细胞对传统化疗药物的耐 药性，可以为今后胃癌的临床治疗提供参考。
[0053] 表1各药物组不同时间点对胃癌细胞的生长抑制率(n = 5，i±s)
[0054]
[0055] 表2药物作用24h后各组细胞的凋亡指数(n = 3，&ts)
[0056]
[0057] 实施例3
[0058] 片剂的制备:按实施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬 酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:9的 比例加入赋形剂，制粒压片。
[0059] 实施例4
[0060] 口服液制备:按实施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬 酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制成口服 液。
[0061 ] 实施例5
[0062] 胶囊剂或颗粒剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有机酸如酒 石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重 量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。
[0063] 实施例6
[0064] 注射液的制备:按实施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠 檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精滤， 灌封灭菌制成注射液。
[0065] 实施例7
[0066] 无菌粉针的制备:按实施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有机酸如酒石酸、或 柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射用水 中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封 得粉针剂。
[0067] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种新的=祗类化合物，其特征在于，具有下述结构式的化合物（I)，2. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将散 沫花的干燥叶粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步骤(a)中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（C)步 骤(b)中75 %乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、20:1、10:1和1:1 的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(C)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次 用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2 用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收 集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。3. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，用80%乙醇 热回流提取，合并提取液。4. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。
【文档编号】C07J71/00GK105906686SQ201610356229
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月25日
【发明人】董秋月
【申请人】杭州更蓝生物科技有限公司