一种四环三萜化合物及其医药用图
【专利摘要】发明人追踪研究了三七(：Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng(Burkill)Hoo et Tseng)抗肿瘤的活性，从活性部位(皂苷)中分离得到一个四环三萜单体化合物(代号：Y1218)，并用现代光谱技术鉴定了它的分子结构。该单体化合物具有抗癌效果。
【专利说明】
一种四环三萜化合物及其医药用途
技术领域：
[0001] 本发明属于新医药研究领域。本发明涉及一个具有抗癌效果的化合物，具体涉及 它的提取分离方法和体外抗癌的效果，还具体涉及它与药物载体（按一定比例）配物后的 制剂及其应用。 技术背景：
[0002] 三七叶（拉丁学名：Panax pseudoginseng Wall. var. notoginseng(Burki 11)Hoo et Tseng)是五加科人参属多年生草本植物，也是名贵中药三七的枝叶部分。三七具有止血 散瘀，消肿定痛等功效，近年发现具有一定的抗肿瘤作〈参考文献1.尚西亮，傅华群，刘佳 等.三七总皂苷对入肝癌细胞的抑制作用[J]中国临床康复，2006. 10(23) : 121〉。
[0003] 发明人在系统追踪研究三七抗肿瘤的活性部位（皂苷）的抗癌活性成分的过程 中，从三七叶中分离得到一个四环三萜单体化合物（代号：Y1218,下同），并用现代光谱技 术鉴定了它的分子结构（如式1)。该单体化合物具有抗癌效果。经过检索，国内外均没有 发现化合物Υ1218及其抗癌活性的相关文章、专利和报道。
【发明内容】
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[0004] 本发明的目的，是用现代国内外最为先进的分离、鉴定和药物评价体系、技术，对 传统名贵中药三七抗癌的物质基础进行系统的研究，以求发现新的具有成药前景的抗癌化 合物单体，为抗癌新药的研究提供基础物质。
[0005] 本发明目的另一目的，是阐述Υ1218制备方法及其分子结构确证。
[0006] 本发明目的另一目的，是Υ1218的抗癌作用及其医药用途。
[0007] 本发明原料药三七产自我国云南文山，经过鉴定为人工种植的五加科人参属多年 生草本植物三七（拉丁学名：Panax pseudoginseng Wall. var. notoginseng (Burkill)Hoo et Tseng)的枝叶（俗称：三七叶）。
[0008]
[0009] 本发明涉及的化合物Y1218,是为式1.所表示的分子结构，其中文名称为：达玛 烷-[12-羟基-20,25-环氧基]-3-0-β-?-吡喃葡萄糖苷。英文名：Dammarane-[12-0l-20， 25-epoxy]-3-〇-beta_D-glucopyranside。代号为：Y1218。
[0010] 本发明涉及的化合物Υ1218,是将三七叶，用当今的植物化学手段提取、分离得到 的，并用当谱技术得以确证分子结构。具体地说，是原料药经过水或50-100%醇类，（可以 是乙醇，丙醇或丁醇）的提取，将提取物浓缩至干燥，再用其他有机溶剂（可以是石油醚、乙 酸乙酯、正丁醇、丙酮）等提取，经过柱层析分离（柱层析洗脱剂可以是上述醇类和其他有 机溶剂的任意组合），再经过重结晶得到Υ1218。发明人的结构鉴定手段，包括熔点、红外、 质谱和核磁（? MNR，13C NMR，HMBC，HMQC)等。提取分离和结构鉴定的具体实施过程，将在 实施例中进行详细阐述。
[0011] 本法明还涉及Y1218及其组合物对癌症细胞的作用。具体的实施过程也将在实施 例中进行详细阐述
[0012] 本发明还涉及Y1218及其组合物，作为治疗和预防癌症的医药用途。
[0013] 本发明还涉及Y1218及药用载体，以及该药物化（组）合物可通过注射、口服或局 部途径给药，给药剂型可以是例如片剂，胶囊、缓释和注射液等。根据本发明，本发明药物组 合物可按本领域已知方法制备，例如将该化合物与药用载体混合。
【具体实施方式】 [0014] ：现结合实例，对本发明做进一步的说明，但本发明的范围不限于以 下的实施例。
[0015] 实施例1
[0016] Y1218 的制备。
[0017] 将干品三七叶原料药60kg常规粉碎，用乙醇提取，每次用乙醇1升，提取5次，合 并。减压蒸发至恒重。得到乙醇提取物2. 17kg。将乙醇提取物用热水溶解，并依次用正己 烷、乙酸乙酯和正丁醇进行分配提取。得到正丁醇提取物0.73kg。将正丁醇取物反复经硅 胶H(10~40 μm)柱层析层分离，用正丁醇：醋酸：水=(2~8) : (1~4) : (3~7) 梯度洗脱，得到Frl。将Frl反复经硅胶柱层析，用氯仿：甲醇=(2~20) : 1洗脱，得到 Y1218 0.78g(万分之 0.013)。
[0018] 实施例2
[0019] Y1218的结构鉴定。
[0020] Y1218 为白黄色粉末。mpl66-167 ;IR(cm 〇 3400,2971，1450， 1386;[a]2〇D+3.83 。 （MeOH ;C = 0· 5) ;FAB_MS(m/z)，623[M+H]+，主要碎片峰 495 [623-128 (CsH160,侧链）]+，461 [623-162 (Glc) ]+，提示有一个6碳糖，据此推测其分子量 为622,分子式为C36H620 S;Y1218的13C NMR谱数据与人参皂苷Rh2相比较除了 C2Q-C27不同 外，其他的数据基本一致。表明Y1218的基本骨架与Rh2是相同的，即为达玛烷型基本结 构。虫MNR出现δ 4. 96(1H，d，J = 7. 84Hz)，表明Y1218分子中含有1个β构型的吡喃 糖，将Υ1218经盐酸水解后得到D-吡喃葡萄糖，确证糖基为葡糖。也就进一步证实Υ1218 与Rh2除了 C2。~C27的连接方式不同外，其他完全相同。
[0021] 经1H MNR，13C NMR，HMBC和HMQC综合解析，首先确定了 Y1218分子中C2。~C27的碳 氢归属，并比对Rh2的碳氢归属，进一步确定了 Y1218整个分子的碳氢归属及其结构（如式 2)。与先前赵平等人报道的化合物1结构一致〈参考文献2:赵平，刘玉清，杨崇仁等.三七 根的微量成分（1) [J]云南植物研究1993,15 (4)，409-412〉。Y1218的碳氢主要归属如下：
[0022] 13C 匪R(N0. ) : δ 39. 2(Ci)，26,7(C2)，88. 8(C3)，40· 1 (C4)，56. 4(C3)，18. 5(C6)， 35,2 (C7)，37. 0 (Cs)，50. 1 (C9)，39. 7 (C10)，31. 2 (Cn)，70. 2 (C12)，49. 8 (C13)，51. 3 (C14)， 31. 3 (C15)，25. 4 (C16)，55. 0 (C17)，16. 8 (C1S)，16. 5 (C19)，76. 9 (C20)，27. 3 (C21)，35. 8 (C22)， 30. 0 (C23) , 36 . 5 (C24) , 73. 0 (C25), 33. 2 (C26), 19. 6 (C27) , 28 . 2 (C28), 15. 8 (C29), 17. 2 (C30), 106. 9 (Cr )，75. 8 (C2'），78. 8 (C3'）71. 8 (C4'），78. 4 (C5'），63. 1 (C6'）
[0023] MNR(N0. ) ： δ 4. 96 (1H, d, J = 7. 84Hz, Glc H-l)，3. 63 (1H-C12)， 1. 94 (1H-C17)，1. 63 (1H-C13)，1. 27 (1H-C9)，1. 16 (3H-C26)，1. 10 (3H-C27)，1. 10 (3H-C21)， 0. 86 (3H-C1S) 0. 78 (3H-C19)，0. 78 (3H-C3Q) 0. 77 (3H-C2S)，0. 72 (3H-C29)。
[0024]
[0025] 实施例3 Y1218体外对肿瘤细胞的活性
[0026] 在体外对肿瘤细胞的抑制作用实验肿瘤细胞：转移性结肠癌SW620、胃腺癌 BGC-823等。用MTT方法测定体外细胞毒性，取生长良好的细胞200ul加入96孔板中，C02 培养箱中培养24小时。加入受试药物20 μ 1/孔，培养48小时。将20 μ 1 MTT加入96孔 板中，反应4小时，吸去上清液，加入20 μ 1 DMS0/孔，用酶联免疫检测仪在波长为570nm 处测定每孔的吸光值，计算对细胞的杀伤作用。测定Y1218抑制50%肿瘤细胞生长的浓度 (IC5。)，并与紫杉醇比较了作用的强弱。比较结果如表1.。
[0027] 表 1. Y1218 体外活性（IC5。： μ 1/ml)
[0028]
[0029] SW620转移性结肠癌，BGC-823胃腺癌，A549非小细胞肺癌，MCF-7乳腺癌，PC-3前 列腺癌。
【主权项】
1. 化合物Y1218(式I.)。名称：达玛烧-[12-径基-20, 25-环氧基]-3-0- e -D-化喃 葡萄糖巧。英文名：Dammarane-[12-〇 1-20, 25-epoxy] -3-〇-beta-D-glucopyranside。2. Y1218制备方法。乙醇提取，得到乙醇提取物。将乙醇提取物在正下醇-水中进行分 配。得到正下醇提取物。将正下醇取物经硅胶柱层析层分离，正下醇/醋酸/水梯度洗脱， 得到Y1218。所用的有机体溶剂包括水，醇类如甲醇、乙醇、丙醇、下醇等；酬类如丙酬，下酬 等。3. 根据权利要求1含有Y1218的药物载体的组合物。4. 根据权利1和3所述的Y1218药物组合物的制剂，包括：液体制剂（注射剂，口服液， 滴鼻液）、固体制剂（片剂，胶囊剂、颗粒剂和缓释剂等），外用制剂（如：贴剂，喷雾剂等）， 气溶胶剂和涂布剂等。5. 权利要求3药物载体，为构成固体药物的辅料包括崩解剂、稀释剂、黏合剂、润滑剂 等和构成液体药物的辅料包括溶媒、抑调节剂、渗透压调节剂、抗氧剂、金属络合剂、防腐 剂、矫味剂等。6. 根据权利要求1~5具有预防和治疗癌症的药物组合物，其特征是预防和治疗癌症， 如：转移性结肠癌（SW620)、胃腺癌度GC-823)、非小细胞肺癌（A549)、乳腺癌（MCF-7)和前 列腺癌PC-3等。7.根据权利要求6,含有Y1218的药物组合物的给药途径为口服或注射。
【文档编号】A61K31/704GK105985398SQ201510067046
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月10日
【发明人】刘桂珍, 董晓林, 张秀国, 杨明
【申请人】北京佗林医药科技有限公司