一种齐墩果烷衍生物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种齐墩果烷衍生物，具体涉及一种γ?谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO?Me前?前药I的制备方法以及含有它们的药物组合；该类化合物可用于二型糖尿病引起的慢性肾病。
【专利说明】
一种齐墩果烷衍生物
技术领域
[0001 ]本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种齐墩果烷衍生物，具体涉及一 种γ -谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO-Me前-前药设计、合成及抗糖尿病肾病活性评 价。该类化合物可用于二型糖尿病引起的慢性肾病。本发明还涉及这类化合物的制备方法 以及含有它们的药物组合。
【背景技术】
[0002] 糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病常见的并发症之一，发生率高 达20-40%。在世界范围内，糖尿病影响着超过3亿人民。糖尿病患者的数量将会继续增加， 特别是像中国和印度这样人口老龄化的国家。例如，在中国，年龄超过65岁占总人口比例不 到7%。截至2030年，这个比例将会超过20%。年龄的增长和城市化导致了糖尿病和其并发 症的产生。
[0003] 齐墩果酸(oleanolic acid，0A)及其衍生物是一类重要的五环三萜化合物，具有 抗炎、抗肿瘤和抗病毒等多种生物活性。通过对0A进行结构改造，合成了 A环含α-氰基-α，β_ 不饱和酮(a-cyan〇-a ,β-unsaturated ketone，CUK)的衍生物CDDO-Me。该化合物显不了极 强的生物活性，已对其进行了多种疾病的临床试验。遗憾的是，在治疗糖尿病慢性肾病 (diabetic nephropathy，DN)的III期临床试验中，发现CDDO-Me对心脏有严重毒副作用。其 后不久，经过方案改进，治疗DN的临床研究重新在日本开展。尽管临床研究还在继续，但 ⑶D〇-Me的安全性已受到严重关注。因此，保留或增强⑶D〇-Me的药效，降低其毒副作用是一 个亟需解决的挑战性难题。
[0004] α，β_不饱和酮是许多活性天然产物和化学合成小分子中的药效团，可以作为迈克 尔受体与体内多种生物大分子亲核性基团（如半胱氨酸残基的巯基)发生加成反应，通过共 价结合，调节细胞内众多信号通路，发挥及其广泛的生物学活性及疾病治疗作用。研究表 明，CDD〇-Me通过激活ARE-Nrf2-Keapl信号通路产生抗炎活性，究其分子机理，主要是⑶D0-Me的A环α-氛基-α，β-不饱和酮（a-cyan〇-a,β-unsaturated ketone，CUK)与Keapl蛋白BTB 区域151位CYS的巯基发生迈克尔加成反应所致。
[0005] γ -谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transferase，GGT)是体内谷胱甘肽代谢的相 关酶之一，主要分布在肾脏组织。由于GGT具有组织分布特异性及能够选择性地水解谷氨酰 胺键的特点，故其常被用于肾靶向的前药设计。然而，一般对α，β_不饱和酮保护的前药策略 并不适用于⑶D〇-Me这样一个具有⑶Κ结构的化合物。有鉴于此，我们采用前-前药(pro-prodrug)策略，用4-谷氨酰胺苄基保护CUK的1，4加成物即前药1中的烯醇羟基，得到了可 以在肾脏部位选择性释放CDDO-Me的前-前药2,并对其进行了较为深入的生物活性评价。
【发明内容】
[0006] 本发明公开了一种齐墩果烷衍生物，其特征在于:一种γ-谷氨酰转肽酶(GGT)选 择激活的CDDO-Me前-前药设计、合成及抗糖尿病肾病活性评价。药理实验证明，该类化合物 具有良好的抗糖尿病活性，因此，它们可用于预防和治疗糖尿病肾病。
[0007] 本发明公开了一种齐墩果烷衍生物，其特征在于:通式I所示的化合物或其旋光异 构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：
[0008]
[0009] 其中：
[0010] R1代表氢原子，C1-C10直链或直链烷基，或者(C1-C10直链或支链亚烷基)-Q，其中 Q代表羟基或卤素；
[0011] R2代表氢原子、或C1-C10直链或支链烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(0)或硫(S);
[0012] R3代表氢原子或C1-C10直链或支链烷基；
[0013] 式I中标明的两个手性中心(分别用* 1和*2表示)为R构型或S构型。
[0014]进一步地，通式1所示的化合物，其特征在于：
[0015] R1代表氢原子、甲基、乙基或丙基；
[0016] R2代表氢原子、甲基或乙基，Y代表氧原子；
[0017] R3代表氢原子或甲基；
[0018] 式I中手性中心*1为S构型，手性中心*2为R构型；
[0019] 具体来说，通式I所示化合物优选自下列化合物：
[0020] 1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2 (3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(化合物编号：1 1，下同）：
[0021]
[0022] 1-甲氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷- 2(3)，9(11)_双烯-28-羧酸甲酯（12)
[0023]
[0024] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)_双烯-28-羧酸甲酯（1 3)
[0025]
[0026]下面药理实验中化合物的代号等同于此处代号所对应的化合物。
[0027] 本发明的另一目的在于提供本发明通式I所述化合物的制备方法，其特征为在于， 包括如下步骤：
[0028] 以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2_二氢喹啉(EEDQ)存在下与 4_氨基苄醇（III)缩合，生成酰胺化合物（IVKIV在三溴化磷的作用下，得到溴代物V。与此 同时，⑶D〇-Me经DMF/碱处理，得到烯醇化合物VI。烯醇VI与化合物V经醚化反应，得到烯醇 醚(VII)。最后脱去VII的Fmoc保护基，得到目标化合物I;合成路线如下：
[0029]
[0030] 这些化合物可按照常规分离技术加以纯化。
[0031] 本发明的再一目的是提供本发明化合物I在制备预防或治疗糖尿病肾病中的应 用。
[0032] 本文采用前-前药策略，对⑶D〇-Me药效团⑶K进行保护，再在肾脏高表达的GGT作 用下释放⑶D〇-Me，这种策略好比在⑶D〇-Me的A环药效团按上一个保护面具，在一定程度上 掩盖和降低了其对非靶部位的攻击性，但在靶部位则暴露出活性药效团
[0033] 本发明化合物I抗糖尿病肾病的药理实验方法与结果如下：
[0034]实验方法：10周龄的db/db 2型糖尿病小鼠适应性饲养一周，自由饮食饮水，随机 分组，分为模型组(Model组），Q)D0-Me(0.6mg/kg)组，Ii(lmg/kg)组，Ii(2mg/kg)，每组6只，6 只C57BLKs/Jdb/m作为正常对照组。每日上午腹腔注射给药，正常组和模型组给予等容量的 蒸馏水，连续12周。实验开始所有小鼠称重编号，每两天称重记录体重，共12周。小鼠每三只 一笼，每两天记录每笼饮水量和进食量。每日观察各组小鼠毛色、神态、尿量和行为活动等。 在实验11周，禁食不禁水12小时后，采用欧姆龙血糖仪HEA-232型，欧姆龙血糖试纸HEA-STP30,测定每只小鼠的12小时空腹血糖。在实验进行至11周时，用代谢笼分别收集每只小 鼠24小时尿液标本。所有小鼠于前一晚7点开始禁食，饮水不限，24小时后结束尿液收集，准 确称量每只鼠的尿液体积，高速离心取上清液用于尿蛋白，尿肌酐等含量测定，并于_78°C 保存尿液样本。实验12周，将所有实验动物用10%水合氯醛麻醉，眼球取血处死。剪断静脉， 用头皮针插进左心室，用PBS缓慢冲洗，直到流出的液体由红色变为无色，在换成多聚甲醛 固定组织。用手术刀片轻轻切下肾脏两端的组织完整薄切片（参照TEM样品制备方法），切 片迅速保存于3%戊二醛溶液中，以备电镜检查。摘取其它重要脏器如心、肝、肺等，3只保存 于4%甲醛溶液中，3只用液氮速冻，于-78°C冰冻保存。
[0035] 表1中列出了本发明化合物h对小鼠体重和饮水体重的影响：
[0036] 表1.本发明化合物I对小鼠体重和饮水进食的影响(n = 6j ±SEM)
[0037]
[Oujb」 Data tor body weight are meanzt^KM. statistic significance was calculated with One-way AN0VA，Tukey's test.*，p<0.05，**，p<0.01，***，p<0.001.
[0039] 表2中列出了本发明化合物^对小鼠血浆尿酸（UA)、尿素氮（BUN)和肌酐 (Creatinine)水平的影响：
[0040] 表2 ·本发明化合物Ii对小鼠血浆尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Creatinine)水 平的影响（n = 6，x ±SEM)
[0041]
[0042] 表3中列出了本发明化合物Ιι对小鼠尿白蛋白对肌酐比值（urine albumin to creatinine ratios，UACR)的影响：
[0043] 表3中列出了本发明化合物I i对小鼠 UACR的影响
[0044]
[0046] 糖尿病肾病是糖尿病损害肾脏而发生的病理改变，是糖尿病最常见的微血管病变 之一。随着糖尿病发病率逐年上升，糖尿病肾病已成为导致终末期肾病的主要原因，严重影 响了人类的生命健康及生存质量。在上述体内实验完成后，取动物的肾脏切片后进行不同 的组织染色(HE，Mass 〇n以及PAS)，并采用电镜检测肾脏组织的微结构，以考察化合物1丄以 及⑶D〇-Me对肾脏组织的保护作用。
[0047] HE染色（Figure 1)
[0048] 与正常组相比，模型组肾小球中重度纤维化，纤维化处细胞数明显减少，弥漫性肾 小球系膜区增宽，毛细血管壁增厚明显，结构不清;球囊壁增厚及球囊黏连，并可见肾小管 扩张伴上皮细胞空泡样改变，肾间质纤维化并伴明显炎性细胞浸润。CDDO-Me组肾小球纤维 化程度，肾小球系膜增厚，毛细血管壁增厚，球囊壁增厚及球囊黏连均有所改善；肾小管中 度扩张伴上皮细胞空泡样改变，间质轻中度纤维化伴轻度炎性细胞浸润未见明显改善。Ii 的药效与CDDO-Me组基本相近。结论:病理切片数据显示，^对糖尿病小鼠的肾脏结构具有 与⑶D〇-Me接近的保护作用。
[0049] Masson染色（Figure 1)
[0050] 在糖尿病肾病发病过程中，随着疾病的发展，肾小球会出现不同程度的纤维化病 变，影响肾小球的结构和正常生理功能，我们通过Masson染色评价肾脏组织的纤维化病变 的情况。模型组：肾小球中被苯胺蓝所染的纤维化组织重度堆积，表明纤维化程度严重。 CDD〇-Me组及I i处理的db/db小鼠肾小球Mas son所染的纤维化组织显著减少，表明，CDD〇-Me 和化合物Ιι均能有效改善糖尿病小鼠肾脏的纤维化病变，其中Ii(lmg/kg)与CDDO-Me相当， I! (2mg/kg)对纤维化病变的改善略优于CDDO-Me组。
[0051] PAS染色（Figure 1)
[0052] 在糖尿病肾病发展过程中，糖蛋白会在肾小管和毛细血管沉积，加剧肾脏的炎症 反应，我们通过PAS染色观察肾脏组织系膜基质、基底膜形态改变。模型组:肾小球与肾小管 细胞内大量糖原蛋白沉积，可见结节。CDDO-Me与低剂量组均明显改善肾小球与肾小管细 胞内糖原蛋白沉积，仍可见少量结节，^高剂量组:肾小球与肾小管细胞内只有少量糖原蛋 白沉积，不见结节。肾脏组织的PAS染色结果表明，化合物IjPCDDO-Me均能有效改善糖尿病 小鼠肾脏的糖原沉积，其中Ii (lmg/kg)与CDDO-Me相当，Ii( 2mg/kg)对糖原沉积的降低优于 CDDO-Me 组。
[0053]电镜下小鼠肾脏变化(Figure 2)
[0054] 足细胞位于肾小球毛细血管壁最外层，其与基底膜和内皮细胞共同组成肾小球血 液滤过屏障。足细胞在维持肾小球正常形态结构和滤过膜选择通透性中起重要作用。在糖 尿病肾病发生过程中，足细胞有明显的形态变化，发生融合或者脱落，最终导致球囊粘连和 肾小球硬化，影响肾脏的基本功能。为此考察了化合物IjPCDDO-Me组电镜下小鼠肾脏变 化。
[0055] 与正常组相比，模型组肾小球基底膜明显增厚，足细胞足突广泛融合、脱落明显， 基底膜结构不完整。CDDO-Me:肾小球小球基底膜轻度增厚，足细胞足突局部融合，结构较完 整。iKlmg/kg)组：肾小球基底膜轻度增厚，足细胞足突偶见局部融合，结构尚可。hUmg/ kg)组：肾小球基底膜轻度增厚，足细胞足突偶见局部融合，结构基本完整。电镜结果表明， IjPCDDO-Me均能有效缓解糖尿病肾病基底膜增厚的情况，改善足细胞的融合和脱落，保证 使肾脏能够更好的发挥滤过功能。
[0056] UPCDD〇-Me对肾上皮细胞(293T)和心肌细胞(H2C9)的毒性试验 [0057]由于GGT表达的差异，1!在心脏组织和肾脏释放原药⑶D〇-Me应该存在较大差异。 而高浓度的⑶D〇-Me存在细胞毒作用，因此我们通过MTT试验评价I!和⑶D〇-Me对心肌细胞 和肾上皮细胞毒性差异。结果表明，I^H2C9和293T的毒性均远低于CDD〇-Me。因293T细胞 有GGT表达，因此在293T细胞中，1!最终会转化为⑶D〇-Me，从而产生细胞毒作用，但I!释放 CDD〇-Me需要时间，因此Id#293T细胞的毒性也低于CDD〇-Me。Id#H2C9中的毒性极低，可能 心脏细胞中缺乏GGI 1酶，h不易转化为⑶D〇-Me有关。由此可以推断前-前药h具有显著下降 的心肌细胞毒性。
[0058] 表4 Antiproliferative Activity of Compounds
[0059]
[0060] Ii和⑶D〇-Me对小鼠的急毒试验
[0061] 我们采用ICR小鼠进行IjPCDDO-Me的急毒实验，采用雌性小鼠，随机分组，每组10 只，采用腹腔注射，单次大剂量给药，其中CDDO-Me剂量为200，400，500，600mg/kg，I!的剂 量为400，600，800，lOOOmg/kg。给药后观察7天，每天记录小鼠的活动情况和存活率，采用 SPSS软件分析数据计算LD5Q。结果表明，h在整体动物水平急性毒性略低于CDDO-Me。
[0062]表5.Acute toxicity of Ii and CDDO-Me in mice
[0063；
[0064] UPCDD〇-Me 对 hERG 作用的差异。
[0065] HERG(humanetherago-gorelatedgene)编码心肌快速激活的延迟整流钾通道 (IKr)的α亚基，HERG钾通道在复极化的过程中发挥重要的作用，是抗心律失常药物作用的 一个重要靶点。HERG钾通道检测结果表明（图3)，化合物I!和⑶D〇-Me对hERG通路的毒性均 较小，而在最高浓度200μΜ时，CDD〇-Me的抑制率略高于h，提示IdthERG的毒性略低于CDD0- Me〇
[0066] db/db小鼠心脏组织TUNEL原位凋亡检测
[0067] 为了评价小鼠心肌组织的细胞凋亡情况，我们对心肌组织切片进行了 TUNEL原位 凋亡检测，用以评价Ii和⑶D〇-Me对心肌细胞凋亡情况的影响。结果如图4显示，CDD〇-Me的 凋亡情况与模型组相似，无显著性差异，而Ii(lmg/kg)和Ii(2mg/kg)能改显著降低db/db小 鼠心肌凋亡程度。这一结果表明，在整体动物水平，iKlmg/kg)和I^mg/kg)对心脏组织的 毒性低于CDD〇-Me。
[0068]以上药理学数据显示，本发明涉及的γ_谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的⑶D〇-Me 前-前药1!能够发挥显著的肾脏保护作用，其效果与⑶D〇-Me相当，并且毒性小于⑶D〇-Me。
【附图说明】
[0069] 图1:各组肾组织染色。
[0070]图2:各组肾组织电镜超微结构。
[0071] 图3:HERG钾通道检测结果。
[0072]图4:对心肌细胞凋亡情况的影响。
[0073]图1-4的具体解释
[0074] 图 1:各组肾组织染色：Control group ;Model group (db/db mice); CDD〇-Me (0.65mg/kg)treated db/db mice ； Ii(lmg/kg)treated db/db mice；Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
[0075] 图 2:各组肾组织电镜超微结构：（A)Control group;(B)Model group(db/db mice)；(C)CDDO-Me(O.65mg/kg)treated db/db mice；(D)Ii(lmg/kg)treated db/db mice；(E)Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
[0076] 图4:对心肌细胞凋亡情况的影响：（A)Control group;(B)Model group(db/db mice)；(C)CDDO-Me(O.65mg/kg)treated db/db mice；(D)Ii(lmg/kg)treated db/db mice；(E)Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
【具体实施方式】
[0077] 为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0078] 实施例1
[0079] N2-(芴甲氧羰基)-N5-(4-(甲基)苯基)-L_谷氨酸-甲酯（IV)
[0080] 11
[0081 ]将Fmoc_Glu-〇Me(II，425mg，1mmo1)和4-氣基节醇（TTT，123mg，lmmol)溶于20ml二 氯甲烧，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氢喹啉（2-ethoxy-1-ethoxy carbonyl-12-dihydroquinoline，EEDQ) (296mg，1 · 2mmol)，氮气保护，室温下反应搅拌12小时。反应液用 50ml二氯甲烷稀释，加入1N的稀盐酸终止反应。有机层依次用饱和碳酸氢钠、和饱和食盐 水、各洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯= 2:1)得淡黄固 体 IV(424mg，80%)。
[0082] mp：193-194〇C；1H NMR(300MHz,DMS0)：δ9.90(s,ΙΗ,ΝΗ),7.90(d,2H,Ar H),7.85 (m，NH Fmoc)，7.74(d，2H，Ar H)，7.54(d，2H，Ar H)，7.42(m，2H，Ar H)，7.34(m，2H，Ar H)， 7.23(d，2H，Ar H)，5.10(t，lH，0H)，4.43(d，2H，Fmoc CH2)，4.33(m，2H，benzyl-CH2)，4.23 (m，lH，Glu-a)，4.12(m，lH，Fmoc CH)，3.65(s，3H，0CH3)，2.44(m，2H，Glu-y )，2.10(m，lH， l/2Glu-0)，1.9O(m，lH，l/2Glu-0) ;13C NMR(75MHz，CDC13)J172.7，169.9，156.1，143.7， 140·7，137·8，137·1，127·6，127·0，127·9，126·9，125·2，120·1，118·7,65·7,62·6,53·4， 46.6,40.3,32.4,26.2； ESI-MS(m/z)：524.2[M+Na]+；HRMS(m/z)：[M+Na]+calculated C 28H28N2〇6Na 511.1845,found 511.1855,PPM error 2.0.
[0083] N2-(芴甲氧羰基)-N5-(4-(溴甲基)苯基)-L_谷氨酸-甲酯(V)
[0084]
[0085] 将中间体IV(530mg，lmmol)溶于10mL无水四氢咲喃，冰浴条件下滴加三溴化磷 (410mg，1.5mmol)，0°C搅拌反应30分钟，加入饱和碳酸氢钠淬灭反应，加入乙酸乙酯50ml稀 释，有机层用饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙 酯=2:1)得淡黄色固体V( 467mg，85 % )。
[0086] 1^:156-1581^? 匪R(300MHz，CDCl3)J8.25(s，lH，NH)，7.75(d，2H，ArH)，7.55 (m，4H，Ar H)，7.38(m，2H，Ar H)，7.29(m，4H，Ar H)，5.70(d，lH，NH Fmoc)，4.39(m，5H，Fmoc CH2，benzyl-CH2，Glu-aH)，4.17(t，lH，Fmoc CH)，3.72(s，3H，0CH3)，2.35(m，3H，Glu-y ， Glu-0)，1.97(m，lH，l/2Glu-0);13C 匪R(75MHz，CDC13)J172.2，170.3，156.7，143.7， 143.5,141.3,141.2,138.1，133.4,129.7,127.7,127.0,125.0,124.9,112·0,67·1，53·3， 52.6,47.4,33.7,33.3,29.4;IR(neat，cm-l):1735(s)，1700(s)，1662(s)，1555(s)，1273 (m).
[0087] 丨-羟基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰酰基- a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]- 12-双氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(VIIi)
[0088]
[0089] 将CDD0-Me(298mg，0 · 59mmol)溶解于 10ml的DMF中，加入纯水（106mg，5 · 9mmol)， K2C03 (162 · 8mg，1 · 18mmol)室温搅拌过夜，加入化合物V( 325mg，0 · 59mol)继续搅拌0 · 5h，加 入IN的稀盐酸5ml终止反应。反应液加入适量二氯甲烧(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱 和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅胶 柱层析制得白色固体VII(305mg，53% )。
[0090] πιρ:167-16%~;1Η NMR(300MHz，CDC13):S8.38(s，lH，NH)，7.77(d，2H，Ar Η)，7·59 (m，4H，Ar H)，7.40(m，2H，Ar H)，7.31(m，4H，Ar H)，5.87(s，lH，CDD0 CllH)，5.70(d，lH， NHFmoc)，5.43(m，2H，benzyl-CH2)，4.51(d，2H，Fmoc CH2)，4.43(m，2H，Glu-a，CDD0 C1H)， 4.20(m，lH，Fmoc CH)，3.75(s，3H，0CH3)，3.69(s，3H，0CH3)，2.38(m，2H，Glu-y)，2.00(m， 3H)，1.88(m，2H)，1.28(s，3H)，1.16(s，6H)，1.06(s，3H)，1.01(s，3H)，0.99(s，3H)，0.89(s， 3H);13C NMR(75MHz，CDC13):Sl99.1，177.8，175.1，172.9，171.8，169.9，156.3，143.2， 143·0,137.9,130.7，128.5,127.3,126.6,124.6,124.2,119.7,119.5,119.2,84.1，73.9， 73·3,66·7,59·9,52·8,52·3,51·4,49·4,46·8,46·6,45·0,44·0,41·9,40·4,40·2,35·4， 33.9,33.2,32.8,32.3,31.0,30.2,29.2,28.9,28.1,27.7,23.4,23.2,22.6,22.2,21.1, 20.6，19.9，17.8，13.7;IR(neat，cm-l):2949(w)，2206(s)，1718(s)，1660(s)，1519(s)， 1217(m),l〇62(m)；ESI-MS(m/z)：1016.5[M+Na]+；HRMS(m/z)：[M+Na]+calculated C60H71N3010Na 1016.5037,found 1016.5062,PPM error 2.5.
[0091] 丨-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯- L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2 (3)，9(11)_双烯-28-羧酸甲酯（1〇
[0092]
[0093] 化合物VII (720mg，0.72mmo 1)溶于1 OmL无水CH2C12，加入2ml二乙胺，室温搅拌1小 时。反应液〇°C下用5%稀盐酸调节至近中性，二氯甲烷（100mL)稀释，有机层用饱和碳酸氢 钠溶液、饱和食盐水各洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅 胶柱层析制得白色固体11 (396mg，71 % )。
[0094] 1^:158-1601^? 匪R(300MHz，Me0D):δ7·59(2Η，ΑΓ H)，7.38(2H，Ar H)，5.87(s， 1H，CDD0 CiiH)，5.42(m，2H，benzyl-CH2)，3.72(s，3H，0CH3)，3.69(s，3H，0CH3)，3.01(m，2H)， 2.5(m，2H，Glu-y)，1.96(m，3H)，1.68(m，3H)，1.27(s，3H)，1.17(s，6H)，1.10(s，3H)，1.05 (s，3H)，0.97(s，3H)，0.89(s，3H);13C 匪R(75MHz，MeOD):δ202·1，179·9，178·7，176·9， 176.2.172.5.140.6.132.9.132.8.130.1.129.4.126.3.121.1.88.5.75.2.75.0. 53.8, 53·5,52·4,51·0,46·7,45·8,43·8,42·4,41·8,37·2,35·4,34·0,33·7,33·3,33·0,31·9， 31.5,30.8,29.4,28.7,24.7,24.3,23.8,23.5,21.6,20.8，19.4;IR(neat，cm-l):2978(s)， 2945(s)，2208(s)，1720(s)，1662(s)，1521(s)，1219(m)，1064(m);ESI-MS(m/z):772.5[M+ H] +;HRMS(m/z):[M+H]+calculated C45H6iN3〇8Na 772.4537，found 772.4551，PPM error 1.8.
[0095] 卜甲氧基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰酰基- a-甲酯-L-谷氨酰氨基）-苯甲氧 基]-12-双氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(VII 2)
[0096] 参照VII1的合成方法，将CDD〇-Me(298mg，0 · 59mmo 1)溶解于10ml的DMF中，加入无 水甲醇（188mg，5.9mmol)，K2C〇3(162.8mg，1 · 18mmol)室温搅拌过夜，加入化合物V(325mg， 0.59mol)继续搅拌0.5h，加入IN的稀盐酸5ml终止反应。反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀 释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩 得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体VII 2(269mg，38% )。h-NMlK300MHz， CDC13)，S(ppm):8.36(s，lH)，7.76(d，2H，J=7.44Hz)，7.58(m，5H)，7.42,7.40,7.37(m， each lH)，7.33,7.31，7.26,7.19(m，each lH)，5.78(s，lH)，5.72(d，lH，J=7.98Hz)，5.44 (q，3H)，4.44(d，4H，J=6.57Hz)，4.19(t，lH)，4.01(s，lH)，3.74(s，3H)，3.69(s，3H)，3.49 (s，4H)，3.06(d，lH，J=13.38Hz)，2.92(d，lH，J = 4.38Hz)，2.39(d，2H，J = 5.49Hz)，2.33 (m，2H，J=11.7Hz)，2.01，1.98，1.91，1.86，1.85，1.82(m，each 1Η)，1·23，1·13，1·11， 1.04，1.01，0.91，0.88,0.83,0.80(s，each 3H);13C-NMR(75MHz，CDC13)，S199.33，177.85， 176.29.172.46.171.72.169.85.143.23.143.00. 140.86.137.87.130.77.128.47.127.30， 126.60,124.49,123.89,120.66,119.56,119.54,119.23,83.053,82.80,76.96,76.54， 76.12,73.39,66.68,57.73,52.80,52.21，51.33,49.35,46.87,46.66,44.90,43.72， 42.08,41.11,40.15,35.48,34.03,33.29,32.76,32.38,31.42,31.10,30.32,30.19, 29·11，28·81，27·89,27·80,23·40,23,20,22·60,22·24,20·51，20·17，17·95，13·61·
[0097] 1-甲氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)_双烯-28-羧酸甲酯（1 2)
[0098] 将化合物VII2(720mg，(h72mmol)溶于10mL无水CH2C12,加入2ml二乙胺，室温搅拌1 小时。反应液〇°C下用5%稀盐酸调节至近中性，二氯甲烷（100mL)稀释，有机层用饱和碳酸 氢钠溶液、饱和食盐水各洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速 硅胶柱层析制得白色固体12(24311^,41^)01^:156-1681^4-^^(3001^,1^00,)57.60((1, 2H，J = 7.71Hz)，7.38(d，2H，J = 7.77Hz)，5.87(s，lH)，5.43(m，2H)，4.45(s，lH)，3.72(d， 3H，J=11.7Hz)，3.01(s，2H)，2.52(m，2H)，2.15(m，lH)，1.97(m，lH)，1.63(s，2H)，1.53(d， 3H，J=1.44Hz)，1.41(m，3H)，1.17(s，6H)，1.10(s，3H)，1.05(s，3H)，0.97(s，3H)，0.89(s， 6H); 13C-匪R(75MHz，Me0D):δ199·46，177·87，176·18，172·77，171·76，169·96，156·29， 143.23， 143.01，140.82,137.88,130.81，128.45,127.30,126.60,124.54,123.86， 120.72,119.56,119.23,83.35,81.40,76.99,76.57,76.15,73.33,66.69,65.12,52.95, 52.84,52.22,51.35,49.37,46.87,46.63,44.91,43.67,41.76,41.06,40.13,36.08, 35.40,34.04,33.26,32.77,32.38,31.42,31.10,30.93,30.31,30.19,29.94,29.69, 29.19,28.86,27.84,26.71，26.58,24.35,23.36,22.97,21.29.
[0099] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(N_9-芴甲氧羰酰基-a-甲酯-L-谷氨酰氨基）_苯甲氧 基]-12-双氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(VII 3)
[0100] 参照VII1的合成方法，将CDD〇-Me(298mg，0 · 59mmo 1)溶解于10ml的DMF中，加入无 水乙醇(271.4mg，5.9mmol)，K2C〇3(162.8mg，1 · 18mmol)室温搅拌过夜，加入化合物V(325mg， 0.59mol)继续搅拌0.5h，加入IN的稀盐酸5ml终止反应。反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀 释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩 得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体VII 3(295mg，39% )。h-NMlK300MHz， CDC13):S8.31(s，lH)，7.77(d，2H，J=7.5Hz)，7.59(m，4H)，7.41(t，2H)，7.32(t，3H)，5.76 (s，lH)，5.64(d，lH，J=10.5Hz)，5.44(q，2H)，4.46(m，3H)，4.45(m，3H)，4.20(t，lH)，4.09 (s，lH)，3.90(t，lH)，3.76(s，lH，J=4.56Hz)，2.38(m，3H)，2.05(m，2H)，1.85(m，2H)，1.70 (m，2H，），1.60(s，10H)，1.48(m，2H)，1.25(s，12H)，1.23(s，7H)，1.13(s，5H)，1.09(m，4H)， 1.07(s，lH)，1.05(s，3H)，1.01(d，6H，），0.88(m，6H); 13C-MMR(75MHz，CDC13):Sl99.46， 177.87,176.18,172.77,171.76,169.96,156.29,143.23,143.01，140.82,137.88,130.81， 128.45,127.30,126.60,124.54,123.86,120.72,119.56,119.23,83.35,81.40,76.99， 76·57,76·15,73.33,66.69,65.12,52.95,52.84,52.22,51.35,49.37,46.87,46.63， 44.91,43.67,41.76,41.06,40.13,36.08,35.40,34.04,33.26,32.77,32.38,31.42, 31·10,30.93,30.31，30.19,29.94,29.69,29.19,28.86,27.84,26.71，26.58,24.35， 23.36,22.97,21.29.
[0101] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)_双烯-28-羧酸甲酯（1 3)
[0102] 化合物VII3 (7 20mg，0.72mmo 1)溶于1 OmL无水CH2C12，加入2ml二乙胺，室温搅拌1小 时。反应液〇°C下用5%稀盐酸调节至近中性，二氯甲烷（100mL)稀释，有机层用饱和碳酸氢 钠溶液、饱和食盐水各洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，
[0103] 经快速硅胶柱层析制得白色固体13(3051^,56^)01^:153-1651:/11-^^(30010^, Me0D)，S7.60(d，2H，J = 8.25Hz)，7.39(d，2H，J = 8.25Hz)，5.82(s，lH)，5.45(m，2H)，4.82 (s，3H)，4.17(s，lH)，3.90(m，lH)，3.72(d，6H，J=13.77Hz)，3.64,3.59(s，each 1Η)，3·52 (m，2H)， 3.03(s，2H)，2.53(t，2H)，2.16(m，2H)，2.04(m，3H)，1.95(m，2H)，1.81(m，2H)， 1.72(s，lH)，1.65(s，5H)，1.53(3H)，1.42(3H)，1.17(m，6 Η)，1·12，1·09，1·06,0·97,0·91 (s，each 3H) ;13C-匪R(75MHz，Me0D):Sl99.46，176.97，175.63，173.81，170.29，137.44， 129·83，127·89，122·45，119·11，118·19,83·06,80·41，72·37,63·93,51·55,49·93,49·56， 48.19,46.98,46.70,46.41，46.13,45.84,45.73,45.56,45.28,43.96,42.79,41.13， 40.29,38.94,34.31,32.55,31.12,30.83,30.15,29.19,28.70,27.86,27.64,27.57, 27.39,26.63,25.93,21.60,21.24,20.93,20.84,20.63,18.97,18.21，16.57,15.49， 13·10，11·56〇
【主权项】
1. 一种齐墩果烷衍生物，其特征在于:通式I所示的化合物或其旋光异构体，对映体、非 对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：其中： Rl代表氢原子，Cl-Cio直链或直链烷基，或者(C1-C10直链或支链亚烷基)-Q，其中Q代 表羟基或卤素； R2代表氢原子、或Cl-ClO直链或支链烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(O)或硫(S); R3代表氢原子或Cl-ClO直链或支链烷基； 式I中标明的两个手性中心，分别用*1和*2表示，为R构型或S构型。2. 根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于:所述的通式I化合物或其对映 体、非对映异构体及其药学上可接受的盐，Rl代表氢原子、甲基、乙基或丙基； R2代表氢原子、甲基或乙基，Y代表氧原子； R3代表氢原子或甲基； 式I中手性中心*1为S构型，手性中心*2为R构型。3. 根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于:所述化合物选自： 1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷_2(3)，9 (11)-双烯-28-羧酸甲酯 1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基）-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2 (3)，9 (11)-双烯-28-羧酸甲酯 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基）-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2 (3)，9(11)_双烯-28-羧酸甲酯。4. 根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于:其特征在于： 通式I所示化合物的制备方法包括如下步骤： 以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)存在下与4-氨 基苄醇（III)缩合，生成酰胺化合物（IV)tJV在三溴化磷的作用下，得到溴代物V。与此同时， CDDO-Me经DMF/碱处理，得到烯醇化合物VI。烯醇VI与化合物V经醚化反应，得到烯醇醚 (VII)。最后脱去VII的Fmoc保护基，得到目标化合物I;合成路线如下： UUU-IVIO其中，R的定义如前所述。5. -种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的通式I化合物、或其对映 体和非对映异构体或其药学上可接受的盐及载体。6. 权利要求1的通式I化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗糖尿病肾病有 关的疾病的药物中的用途。
【文档编号】A61P13/12GK106008650SQ201610329985
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月13日
【发明人】张奕华, 黄张建, 徐晓军, 牟伊
【申请人】中国药科大学