毛莲蒿中香豆素类化合物的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及毛莲蒿中香豆素类化合物的提取方法。
【背景技术】
[0002] 毛莲蒿A.vestitaWall.为菊科蒿属植物，藏药名普尔那，是西藏自治区藏药厂生 产的结血蒿膏的主要组成药材[1， 2]，具有极高的药用价值[M；]，是作为防治瘟疫、止血以及抗 炎消肿等的常用藏药材之一 [7]。
[0003] 发明人前期研宄表明，毛莲蒿中含有黄酮类、有机酸、香豆素、生物碱、挥发油及油 月旨、甾体或三萜类等化学成分 [8]。其中，香豆素类化合物具有抗艾滋病、抗癌、抗氧化、抗炎 及平滑肌松弛等多方面的生物活性[9， 1(1]。
[0004]目前还未见对毛莲蒿香豆素类成分的研宄。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供毛莲蒿中香豆素类化合物的提取方法。
[0006] 具体地，本发明提供了一种毛莲蒿中香豆素类化合物的提取方法，它包括如下工 艺条件：
[0007] 取毛莲蒿药材，粉碎后，以60~80% (v/v)乙醇为溶剂，在60~80°C下浸渍提取 45~75min，料液比1 :40~60 (mg/mL)，浸渍提取完成后再超声提取20~30min，即完成提 取。
[0008] 根据单因素试验结果，采用上述方法即能够较为有效地对毛莲蒿中的香豆素类成 分进行提取。
[0009] 在单因素试验结果的基础上，本发明还采用了响应面法对各工艺条件之间的配合 情况进行了研宄，根据响应面计算得到的最佳理论工艺条件为：
[0010] 取毛莲蒿药材，粉碎后，以72.29% (v/v)乙醇为溶剂，在68.46 °C下浸渍提取 70. 73min，料液比1 :57. 71 (mg/mL)，浸渍提取完成后再超声提取25~30min，即完成提取。
[0011] 进一步地，所述超声时间为30min。
[0012] 实际操作过程中，难免会存在误差，因此，本发明确定毛莲蒿的提取工艺条件为：
[0013] 以72.29%±1%(￥八）乙醇为溶剂，在68.46±1°〇下浸渍提取70.73±1!^11，料 液比 1 :57. 71±l(mg/mL)。
[0014] 通过验证实验，本发明发现如下条件中的总香豆素提取率与响应面计算得到的最 佳理论工艺条件基本相同，得率仅相差0.29%:所述乙醇体积分数为72% (v/v);所述浸渍 提取温度为68°C;所述浸渍提取时间为71min;所述料液比为1 :58(mg/mL);上述条件亦在 理论条件的误差范围以内，说明本发明选定的误差范围是合理的。
[0015] 其中，粉碎后的药粉需过3号筛。
[0016] 其中，所述毛莲蒿药材为菊科蒿属植物毛莲蒿A.vestitaWall.的地上部分。
[0017] 本发明还提供了上述提取方法制备的毛莲蒿提取物。
[0018] 本发明采用单因素和响应面法对毛莲蒿的总香豆素提取工艺进行研宄，最终发 现，响应面法得到的最佳工艺条件与单因素法所得启示相差较大，且响应面法得到的最佳 工艺条件中总香豆素的得率也显著优于单因素法，这一结果表明，本发明找到了各因素条 件之间最佳的契合点，实现了对毛莲蒿香豆素类成分的有效提取。
[0019] 本发明采用热浸-超声辅助方法，对毛莲蒿香豆素类成分进行提取方法研宄，找 到了能够有效将毛莲蒿中的总香豆素类成分提取完全的工艺条件，为毛莲蒿香豆素类成分 的进一步研宄提供了基础。
【附图说明】
[0020] 图1乙醇体积分数对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0021] 图2浸提时间对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0022] 图3浸提温度对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0023] 图4料液比对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0024] 图5超声时间对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0025] 图6、图6续各因素两两交互作用对毛莲蒿总香豆素得率影响的响应面图
【具体实施方式】
[0026] 实施例1本发明提取方法
[0027]1仪器与材料
[0028] TU-1950型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）； KQ-250B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ESJ200-4电子天平（沈阳龙腾电子 有限公司）；HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；HX-200型高速中药粉碎机（浙江 永康溪岸五金药具厂）。
[0029] 毛莲蒿药材于2013年11月6日购于西藏藏药厂，经西南民族大学刘圆教授鉴定 为菊科蒿属植物毛莲蒿A.vestitaWall.的地上部分。粉碎，过3号筛，备用；伞形花内酯 对照品（批号：MUST-14031012,成都曼斯特生物有限公司）；水为纯净水；无水乙醇为分析 纯。
[0030] 2方法与结果
[0031] 2. 1毛莲蒿总香豆素含量测定
[0032] 2. 1. 1对照品溶液的制备
[0033] 精密称取3. 3mg的伞形花内醋对照品，用无水乙醇定容至25mL，摇勾，即得 0. 132mg/mL的伞形花内醋对照品溶液。
[0034] 2. 1.2线性关系的考察
[0035]精确量取0?15、0. 2、0. 25、0. 3、0. 35、0. 4、0. 45、0. 5、0. 55mL对照品溶液，精确加 入无水乙醇至9mL，摇勾，以无水乙醇作对照，于325nm处测定其吸光度。以伞形花内醋 质量浓度（C)为横坐标，吸光度（A)为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程为A= 91. 636C+0. 0437,R2= 0. 9997,表明伞形花内酯对照品溶液在2. 20~8. 07yg/mL范围内 与吸光度呈较好的线性关系。
[0036] 2. 1. 3毛莲蒿总香豆素的提取及含量测定
[0037] 称取0.5g毛莲蒿药材粉末，精密称定，加入一定体积分数的乙醇，在设定的试验 条件下按一定的浸提时间、浸提温度、料液比和超声时间，超声辅助提取。过滤，并用少量提 取液洗涤，定容至50mL容量瓶中，摇匀，即得毛莲蒿总香豆素提取液。取0. 2mL于10mL比色 管中，精确加入无水乙醇至9mL，混勾，以无水乙醇做空白对照，于325nm处测定其吸光度， 由回归方程计算总香豆素的含量，以下称为"得率"。
[0038] 2. 2单因素试验
[0039] 以乙醇体积分数、浸提时间、浸提温度、料液比及超声时间5个因素进行单因素试 验，确定影响毛莲蒿总香豆素得率的适宜单因素条件。
[0040] 2. 2. 1乙醇体积分数对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0041] 称取5份0.5g毛莲蒿药材粉末，精密称定，分别加入的不同体积分数的乙醇20mL， 60°C水浴加热30min，再超声提取20min。过滤，并用少量提取液洗涤，定容至50mL容量瓶 中，摇匀，按"2. 1. 3"项下测定总香豆素得率，结果见图1。
[0042] 如图1可知，总香豆素提取率随乙醇体积分数的增大呈先升高后降低的趋势。当 乙醇体积分数为60% (v/v)时，得率达到最大，随着乙醇体积分数的增大，总香豆素得率反 而降低，可能是乙醇体积分数的增大，增加了脂溶性物质的溶出量，同时溶剂极性的降低， 导致香豆素类化合物的溶解度降低等的原因。因此，根据单因素试验结果确定适宜乙醇体 积分数为60 %。
[0043] 2. 2. 2浸提时间对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0044] 称取6份0. 5g毛莲蒿药材粉末，精密称定，分别加入60% (v/v)乙醇20mL，60°C 水浴加热15、30、45、60、75、901^11，再超声提取201^11。过滤，并用少量提取液洗涤，定容至 50mL容量瓶中，摇匀，按"2. 1. 3"项下测定总香豆素得率。结果见图2。
[0045] 由图2可以看出，随着浸提时间的增加，总香豆素得率逐渐增大。浸提60min时， 总香豆素得率最大，超过60min后，总香豆素得率呈下降趋势。因此，根据单因素试验结果 确定适宜浸提时间为60min。
[0046] 2. 2. 3浸提温度对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0047] 称取5份0. 5g毛莲蒿药材粉末，精密称定，分别加入60 % (v/v)乙醇20mL，于 50、60、70、80、90°〇水浴加热601^11，再超声提取201^11。过滤，并用少量提取液洗涤，定容至 50mL容量瓶中，摇匀，按"2. 1. 3"项下测定总香豆素得率。结果见图3。
[0048] 由图3可知，浸提温度为60°C时，总香豆素得率最高，随着温度的增加，总香豆素 得率反而降低，可能是由于温度过高，使部分香豆素升华或分解，从而使得率降低。因此，根 据单因素试验结果确定适宜浸提温度为60°C。
[0049] 2. 2. 4料液比对毛莲蒿总香豆素得率的影响
[0050]称取5份0.5g毛莲蒿药材粉末，精密称定，分别加入不同体积的60 %乙醇，于 60°C水浴加热60min，再超声提取20min。过滤，并用少量提取