黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺，具体属于植物提取技术领 域。
【背景技术】
[0002] 黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵(Abelmoschusmanihot(L. )Medic.)的干燥花冠。始 载于《嘉佑本草》。黄蜀葵花具有清热利湿，消肿解毒的功效，主治湿热壅遏，淋浊水肿，外治 痈疽肿毒，水火烫伤。被收载于《中国药典》（2010版一部）中。黄蜀葵花中富含黄酮类化合 物，如金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素、杨梅素、芦丁等。目前，对于黄蜀葵花中黄酮类化合物的 活性研究比较多，有研究表明金丝桃苷具有抗病毒活性、保肝、保护心脑血管、保护神经系 统、治疗原发性肾小球疾病等，张利斌等研究表明低剂量异槲皮苷对抑郁症模型小鼠抗抑 郁有一定活性，另有研究表明槲皮素具有抗氧化活性、抗炎、抗癌，抗纤维化等作用。
[0003]现有技术中对于黄酮的提取有直接回流法、温浸法、超声等方法。传统提取方法存 在耗时较长，过程繁琐、提取效率不高以及得率不高等问题，因此，提供一种能够有效解决 上述问题的黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺，显得尤为必要。
【发明内容】
[0004]为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的 提取工艺，能够简便、准确、高效的对黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素进行提取，为 其进一步分离纯化和开发利用奠定了基础。
[0005]为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0006]黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺，所述黄酮类化合物为金丝桃苷、异槲皮苷 和槲皮素。
[0007]前述黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺，具体包括以下步骤:将黄蜀葵花干燥 后粉碎，过筛，取黄蜀葵花粉末，加入乙醇后，超声提取，随后进行离心，取上清液过滤即得。
[0008]进一步地，前述黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺，包括以下步骤:将黄蜀葵花 干燥后粉碎，过药典4号筛，取黄蜀葵花粉末，加入40%~90%乙醇，称重后，在200W~400W 条件下超声提取40min~60min，冷却至室温后加入乙醇补重，随后进行离心，取上清液过 0.45μηι微孔滤膜即得。
[0009]优选地，前述黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺，包括以下步骤:将黄蜀葵花干 燥后粉碎，过药典4号筛，取黄蜀葵花粉末，加入60%乙醇，称重后，在340W条件下超声提取 60min，冷却至室温后加入乙醇补重，随后进行离心，取上清液过0.45μπι微孔滤膜即得。
[0010]前述黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺中，超声提取在30°c~60°C条件下进 行;优选在50°C条件下进行。
[0011] 前述黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺中，离心操作是以3500r/min~5000r/min的速度离心lOmin~20min;优选以4000r/min的速度离心15min。
[0012] 前述黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取工艺中，黄蜀葵花粉末与乙醇的料液比为： 黄蜀葵花粉末的质量:乙醇的体积=〇. 1:5~25g/mL;优选为:黄蜀葵花粉末的质量:乙醇的 体积=〇· 1:15g/mL。
[0013]为了确保本发明提取方法科学、合理，发明人进行了相应的实验研究和筛选，才得 以确定本发明的技术方案。具体实验内容如下：
[0014] 黄蜀葵花中富含黄酮类化合物，如金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素等。本发明对黄蜀 葵花中黄酮类化合物的提取主要是针对金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的提取。因此，本发明 以黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的提取为研究对象。
[0015] 1、材料与仪器
[0016]黄蜀葵花样品贵州省遵义市轩瑞生物科技有限公司提供；金丝桃苷对照品 (93.3 % )、异槲皮苷对照品（92.9 % )和槲皮素对照品（96.5 % )由中国药品生物制品检定所 提供；乙腈(色谱纯）：美国TEDIA公司；无水乙醇（分析纯）：重庆川东化工(集团）有限公司； 磷酸(分析纯）：天津市进丰化工有限公司；水:市售娃哈哈矿泉水。
[0017] 高效液相色谱仪:AllianCeWaterSe2695(配有自动进样器和PDA二极管阵列检测 器）；工作站Empower3 · 0色谱数据工作站;分析天平:StartoriusCP22f5D型十万分之一天平； TDZ5-WS型医用离心机:长沙平凡仪器仪表有限公司;FW135型中草药粉碎机:天津市泰斯特 仪器有限公司;KQ-500DB型数控超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司。
[0018] 2、实验设计
[0019] 2.1黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的提取
[0020] 将黄蜀葵花干燥后粉碎，过药典4号筛，称取黄蜀葵花粉末约0 .lg，置于25mL磨口 锥形瓶中，加入50%乙醇15mL，称重，在50°C下300W超声提取50min，冷却至室温后补重，摇 勾取适量离心(4000r/min，15min)，取上清液过0.45μηι微孔滤膜即得供试液。
[0021] 2.2单因素实验设计
[0022]以金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素得率为评价指标，选择超声功率、提取时间、乙醇浓 度、提取温度和料液比五个单因素，以2.1项下供试液制备条件，采用单一变量原则，分别取 3个平行样进行试验。具体考察条件如下：
[0023] 超声功率考察:选择超声功率100、200、300、400、500W;其他条件:提取时间50min、 乙醇浓度50%、料液比0.lg: 15mL、提取温度50°C;
[0024]提取时间考察:选择提取时间10、20、30、40、50、60min，其他条件：乙醇浓度50%、 料液比0.lg: 15mL、提取温度50°C、超声功率300W;
[0025] 乙醇浓度考察:选择乙醇浓度10 %、30 %、50 %、70 %、90 %、100 %，其他条件:提取 时间50min、料液比0.1g: 15mL、提取温度50°C、超声功率300W;
[0026] 提取温度考察:选择提取温度20、30、40、50、60、70°C，其他条件：提取时间50min、 乙醇浓度50%、料液比0.lg: 15mL、超声功率300W;
[0027]料液比考察:选择料液比 0.1:5、0.1:10、0.1:15、0.1:20、0.1: 25g/mL，其他条件： 提取时间50min、乙醇浓度50%、超声功率300W、提取温度50°C。
[0028] 2.3金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素得率的测定
[0029] 2.3.1HPLC测定实验设计
[0030]本发明采用HPLC法测定金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量。
[0031]色谱柱：PhenomenexLuna5μCi8(2)100A(250mmX4.60mm);流动相：乙腈为流动相 八，0.1%磷酸水溶液为流动相8;流速：1.0111171^11;梯度洗脱:0~401^11^ :8 = 15:85,40~ 60111；!_11:六：8=15~30:85~70,60~65111；!_11:六:8 = 30~15:70~85,65~70111；!_11，六：8=15:85;检 测波长:360nm;柱温:30°C;进样量:10μL^用标准曲线法计算金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的 侍率〇
[0032]分别精密称金丝桃苷对照品、异槲皮苷对照品、槲皮素对照品适量，加无水乙醇分 别制成金丝桃苷对照品溶液(〇.〇497mg/mL)、异槲皮苷对照品溶液(0.4400mg/mL)以及槲皮 素对照品溶液(0.3710mg/mL)。分别精密吸取金丝桃苷对照品溶液0.80、1.00、1.20、1.40、 1·60、1·80mL，异槲皮苷对照品溶液0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16mL，槲皮素对照品溶 液0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12mL分别置于2mL容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，进样， 分别计算标准曲线。
[0033] 得率计算公式:得率（％ )=黄酮提取量/样品称样量X100%
[0034] 采用Empower3 · 0色谱数据工作站、DesignExpert8 · 0 · 6和Origin8 · 5对采集到的数 据进行线性回归处理。
[0035] 2.3.2HPLC结果与分析
[0036] 对HPLC数据进行回归处理建立回归方程：金丝桃苷的回归方程为：Y!=2.38X 104Χι-22100，R2 = 0·9980，线性范围：0·0199~0·0447mg/mL;异槲皮苷的回归方程为:Y2=1·86Χ104Χ2 -4120，R2 = 0.9969,线性范围：0.0132~0.0352mg/mL;槲皮素的回归方程为： Υ3 = 3·77Χ104Χ3 -6210，R2 = 0.9998,线性范围：0.0037~0.0223mg/mL。取2.1项下供试液 进样，在上述色谱条件下，各