照山白化合物提取方法

文档序号：9555577阅读：617来源：国知局

照山白化合物提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种照山白化合物提取方法。
【背景技术】
[0002]照山白(拉丁学名:Rhododendron micranthum Turcz.)杜醇花科常绿灌木，小枝褐色，有褐色鳞片及柔毛。叶互生，革质；椭圆状披针形或狭卵圆形。先端尖，边缘有疏浅齿或不明显，基部楔形，上面绿色，下面密生褐色腺鳞。花密生成总状花序；花冠钟形白色，蒴果长圆形，成熟后褐色，花果期5?9月。野生于山坡、山沟石缝。性喜阴，喜酸性土壤，耐干旱、耐寒、耐瘠薄，适应性强。用播种法繁殖。华北、东北平原与西北地区可栽培。该种有剧毒，幼叶更毒，牲畜误食，易中毒死亡。常绿灌木，高可达2.5米，茎灰棕褐色；枝条细瘦。幼枝被鳞片及细柔毛。叶近革质，倒披针形、长圆状椭圆形至披针形，长(1.5-)3-4 (-6)厘米，宽0.4-1.2 (-2.5)厘米，顶端钝，急尖或圆，具小突尖，基部狭楔形，上面深绿色，有光泽，常被疏鳞片，下面黄绿色，被淡或深棕色有宽边的鳞片，鳞片相互重叠、邻接或相距为其直径的角状披针形或披针状线形，外面被鳞片，被缘毛；花冠钟状，长4-8 (-10)毫米，外面被鳞片，内面无毛，花裂片5，较花管稍长；雄蕊10，花丝无毛；子房长1-3毫米，5-6室，密被鳞片，花柱与雄蕊等长或较短，无鳞片。蒴果长圆形，长(4-) 5-6 (-8)毫米，被疏鳞片。花期5-6月，果期8-11月。
[0003]其枝叶入药，具有祛风通络、调经止痛、化痰止咳之功效，用于治疗慢性气管炎、风湿痹痛、腰痛、痛经、产后关节痛等。药理学研究表明，照山白总黄酮有抗炎、镇痛以及抗前列腺增生作用。尽管照山白在临床应用中疗效确切，但对于其化学成分的研究报道较少，目前从其枝叶中分离得到的化合物仅有1个二萜、5个三萜和7个黄酮类成分。

【发明内容】

[0004]本发明就是针对上述问题，为了更加充分合理地利用照山白的药用价值，提供一种照山白化合物提取方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
[0006]照山白化合物提取方法，包括下步骤。
[0007](1)取干燥照山白枝叶20~40kg，用95%乙醇冷浸提取3次，每次浸泡一周；加入至80°C搅拌1.8小时，加入0.258g、l.38mmol乙烷磺酸，在80摄氏度下反应20小时，加水5升，并搅拌；提取液减压浓缩得浸膏；浸膏温水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩得石油醚部位800 g、氯仿部位529 g、乙酸乙酯部位470 g、正丁醇部位680 g和水溶性65部分481 g；
(2)乙酸乙酯部位经正相硅胶柱色谱以氯仿-甲醇50:1~2:1梯度洗脱得10个组分；
(3)组分B用甲醇溶解后过滤，滤出固体经洗涤后得化合物6(12.1 g)；
滤液经凝胶柱色谱(甲醇)分成3个子组分(B1~B3)，子组分B2经正相硅胶柱色谱和HPLC、40%甲醇，1.5 mL/min纯化得到化合物8 ； (4)子组分B3经反相硅胶柱色谱30%甲醇得化合物5;组分C经反相硅胶柱色70谱30%甲醇和凝胶柱色谱、甲醇得到化合物1和7 ;
(5)组分D经凝胶柱色谱、甲醇并用HPLC、60%甲醇，1.5 mL/min纯化得到化合物10、iR = 29.7 min, 6.1 mg 和 11、iR = 47.8 min, 8.6 mg。
[0008]作为一种优选方案，组分E经凝胶柱色谱(甲醇)和反相硅胶柱色谱15%甲醇纯化得到化合物2、3、和4。
[0009]作为另一种优选方案，组分F凝胶柱色谱、甲醇、反相硅胶柱色谱、14%甲醇和正相硅胶柱色谱、石油醚-丙酮3:1纯化得到75化合物9。
[0010]本发明有益效果:本发明公开了一种操作简单，环境友好的照山白化合物提取方法。公开了照山白枝叶乙醇提取物乙酸乙酯部分的化学成分，分离并鉴定了 11个化合物，其中，化合物1为首次从自然界得到的天然产物。化合物2~5、7~11为首次从照山白中分离得到，化合物2~4、7~11为首次从杜鹃花属植物中分离得到。丰富了对照山白化学成分的认识，为进一步研究照山白活性成分奠定了基础，更加充分合理地利用照山白的药用价值。
【具体实施方式】
[0011 ] 照山白化合物提取方法，包括下步骤。
[0012](1)取干燥照山白枝叶20~40kg，用95%乙醇冷浸提取3次，每次浸泡一周；加入至80°C搅拌1.8小时，加入0.258g、l.38mmol乙烷磺酸，在80摄氏度下反应20小时，加水5升，并搅拌；提取液减压浓缩得浸膏；浸膏温水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩得石油醚部位800 g、氯仿部位529 g、乙酸乙酯部位470 g、正丁醇部位680 g和水溶性65部分481 g；
(2)乙酸乙酯部位经正相硅胶柱色谱以氯仿-甲醇50:1~2:1梯度洗脱得10个组分；
(3)组分B用甲醇溶解后过滤，滤出固体经洗涤后得化合物6(12.1 g)；
滤液经凝胶柱色谱(甲醇)分成3个子组分(B1~B3)，子组分B2经正相硅胶柱色谱和HPLC、40%甲醇，1.5 mL/min纯化得到化合物8 ；
(4)子组分B3经反相硅胶柱色谱30%甲醇得化合物5;组分C经反相硅胶柱色70谱30%甲醇和凝胶柱色谱、甲醇得到化合物1和7 ;
(5)组分D经凝胶柱色谱、甲醇并用HPLC、60%甲醇，1.5 mL/min纯化得到化合物10、iR = 29.7 min, 6.1 mg 和 11、iR = 47.8 min, 8.6 mg。
[0013]组分E经凝胶柱色谱(甲醇)和反相硅胶柱色谱15%甲醇纯化得到化合物2、3、和4。
[0014]组分F凝胶柱色谱、甲醇、反相硅胶柱色谱、14%甲醇和正相硅胶柱色谱、石油醚-丙酮3:1纯化得到75化合物9。
[0015]涉及仪器与材料:核磁共振仪以氘代试剂中残留的质子信号为内标；日立高效液相色谱仪(UV-VIS detector L-7420, pump L-7100, T2000 工作站)；C_18 反相半制备色谱柱(YMC-Pack 0DS-A 250 X 10 mm, 5 μ m),薄层色谱娃胶预制板(，Sephadex LH-20(Pharmacia B1teck), ODS (50 μ m, YMC公司)；柱色谱娃胶,反相板,所用试剂均为分析纯或色谱纯。
[0016]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。
【主权项】
1.照山白化合物提取方法，其特征在于，包括下步骤: (1)取干燥照山白枝叶20~40kg，用95%乙醇冷浸提取3次，每次浸泡一周；加入至80°C搅拌1.8小时，加入0.258g、1.38mmol乙烷磺酸，在80摄氏度下反应20小时，加水5升，并搅拌；提取液减压浓缩得浸膏；浸膏温水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩得石油醚部位800 g、氯仿部位529 g、乙酸乙酯部位470 g、正丁醇部位680 g和水溶性65部分481 g ； (2)乙酸乙酯部位经正相硅胶柱色谱以氯仿-甲醇50:1~2:1梯度洗脱得10个组分； (3)组分B用甲醇溶解后过滤，滤出固体经洗涤后得化合物6(12.1 g)；滤液经凝胶柱色谱(甲醇)分成3个子组分(B1~B3)，子组分B2经正相硅胶柱色谱和HPLC、40%甲醇，1.5 mL/min纯化得到化合物8 ； (4)子组分B3经反相硅胶柱色谱30%甲醇得化合物5;组分C经反相硅胶柱色70谱30%甲醇和凝胶柱色谱、甲醇得到化合物1和7 ; (5)组分D经凝胶柱色谱、甲醇并用HPLC、60%甲醇，1.5 mL/min纯化得到化合物10、iR = 29.7 min, 6.1 mg 和 11、iR = 47.8 min, 8.6 mg。2.根据权利要求1所述照山白化合物提取方法，其特征在于:组分E经凝胶柱色谱(甲醇)和反相硅胶柱色谱15%甲醇纯化得到化合物2、3、和4。3.根据权利要求1所述照山白化合物提取方法，其特征在于:组分F凝胶柱色谱、甲醇、反相硅胶柱色谱、14%甲醇和正相硅胶柱色谱、石油醚-丙酮3:1纯化得到75化合物90
【专利摘要】照山白化合物提取方法属于医药技术领域，尤其涉及一种照山白化合物提取方法。本发明提供一种照山白化合物提取方法。照山白化合物提取方法，包括下步骤。（1）取干燥照山白枝叶20~40kg，用95%乙醇冷浸提取3次，每次浸泡一周；（2）乙酸乙酯部位经正相硅胶柱色谱以氯仿-甲醇50:1~2:1梯度洗脱得10个组分；（3）组分B用甲醇溶解后过滤，滤出固体经洗涤后得化合物6；滤液经凝胶柱色谱分成3个子组分，子组分B2经正相硅胶柱色谱和HPLC，1.5mL/min纯化得到化合物8；（4）子组分B3经反相硅胶柱色谱30%甲醇得化合物5；组分C经反相硅胶柱色70谱30%甲醇和凝胶柱色谱、甲醇得到化合物1和7；（5）组分D经凝胶柱色谱、甲醇并用HPLC、60%甲醇，1.5mL/min纯化得到化合物10。
【IPC分类】A61K36/45, A61K127/00, A61K135/00
【公开号】CN105311087
【申请号】CN201410358784
【发明人】牛誉博, 姚浩言
【申请人】牛誉博
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年7月27日

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该技术已申请专利。仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
技术研发人员：牛誉博;姚浩言;
技术所有人：牛誉博;
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