一种铁皮石斛药材的质量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种铁皮石斛药材的质量检测方法，以紫外分光光度法测定药材中总联苄含量，步骤包括：以联苄类化合物为对照品，用外标法在270-290nm进行总联苄的含量测定。该方法简便、易行、重复性好，能够确切反映铁皮石斛药材质量，进一步完善了铁皮石斛药材的质量标准，弥补了铁皮石斛质量评价中缺乏对以联苄为代表的脂溶性特征成分的检测方法的不足，使铁皮石斛药材的质量检测技术更科学、合理。采用本发明所述检测方法可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。
【专利说明】一种铁皮石斛药材的质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药【技术领域】，具体是一种铁皮石斛药材的质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 铁皮石斛是兰科石斛属多年生草本植物，其主要药用部位是新鲜或干燥茎，主要 分布于安徽、浙江、广西、湖南、云南、贵州等地，是传统名贵中药材。铁皮石斛具有益胃生 津，滋阴清热之功效，用于阴伤津亏，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火 旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软等症。《神农本草经》将其列为上品，道家养生经典《道藏》 将它誉为"中华九大仙草"之首。
[0003] 铁皮石斛中主要含有水溶性的多糖、脂溶性的联苄类，还含有少量的水溶性的氨 基酸、水溶性的微量元素、水溶性的酚酸类，以及微量的偏脂溶性的石斛生物碱、脂溶性的 石斛倍半萜、偏脂溶性的芴酮类化合物、偏脂溶性的木脂素、水溶性的酚类、偏脂溶性的黄 酮、脂溶性的留体等，其中联苄类具有抗肿瘤、抗氧化等重要药理活性作用。
[0004] 然而目前的质量控制方法仍然落后，2005年版《中国药典》以性状和显微特征作 为鉴别石斛的唯一手段，2010年版《中国药典》有所改进，虽然将铁皮石斛从石斛药材中 单列出来，增加了水分、浸出物等项目检查，同时，对铁皮石斛多糖和甘露糖进行含量测定。 但多糖和甘露糖在植物中的存在较普遍，对其特征性的次生代谢产物仍没有进行科学的控 制。目前，以性状鉴别铁皮石斛原料和以粗多糖为主要指标鉴别产品的做法，既难以辨别是 否含有铁皮石斛特征成分，又难以测定铁皮石斛特征有效成分的含量，特别是以联苄为代 表的脂溶性特征成分。因此，迫切需要提供一种科学、全面反映铁皮石斛药材质量的检测方 法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种铁皮石斛药材的质量检测方法，可有效控制铁皮石斛 药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。
[0006] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0007] -种铁皮石斛药材的质量检测方法，采用紫外分光光度法，以联苄类化合物为对 照品，用外标法对铁皮石斛中的总联苄进行含量测定。
[0008] 所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，具体检测步骤如下：
[0009] 1)供试品溶液的制备：取铁皮石斛药材，粉碎，过40-60目筛，精密称取0. 5-1. 0g， 以重量/体积比为30-70倍量的高浓度醇水系统或中极性有机溶剂提取2-3次，提取液转 移至容量瓶中并定容，摇匀，取l_5mL离心10-20min，转速为10000r/min，精密量取上清液 用甲醇稀释，即得供试品溶液；
[0010] 2)对照品溶液的制备：精密称取联苄类化合物对照品，加甲醇溶解制成溶液；
[0011] 3)测定法：以甲醇为空白参比溶剂；采用紫外分光光度法，测试在270-290nm波长 处的吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。
[0012] 作为本发明进一步的方案：具体检测步骤如下：
[0013] 1)供试品溶液的制备：取铁皮石斛药材，粉碎，过50目筛，精密称取lg，置IOOml 圆底烧瓶中，加入50%乙醇70ml水浴回流提取3次，每次3小时，合并提取液，取其中的4ml 离心15min，转速为10000r/min，精密量取上清液Iml用甲醇稀释10倍，即得供试品溶液；
[0014] 2)对照品溶液的制备：精密称取毛兰素对照品25. Omg，置于25ml容量瓶中，力口 甲醇溶解，定容，精密量取毛兰素标准溶液〇. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0、1. 1、1. 2、1. 3、1. 4、 1. 5、I. 6ml，分别置于25ml容量瓶中定容，即得对照品溶液；
[0015] 3)测定法：以甲醇为空白参比溶剂；按照紫外分光光度法在280nm波长处测吸光 度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量，以吸光度为纵坐标Y，毛兰素浓度为横坐标X 进行线性回归，求得回归方程式为A = 11.002C+0. 018,线性范围为0. 02mg/ml-0. 064mg/ ml,相关系数r = 0. 9997,线性关系良好。
[0016] 作为本发明进一步的方案：所述对照品包括但不限于毛兰素和二氢白藜芦醇。
[0017] 作为本发明进一步的方案：所述中极性有机溶剂包括但不限于二氯甲烷、乙酸乙 酯、氯仿和丙酮，所述高浓度醇水系统包括但不限于浓度为50% -95%的甲醇水溶液体系、 乙醇水溶液体系和异丙醇水溶液体系。
[0018] 作为本发明进一步的方案：所述铁皮石斛药材中的总联苄的含量不低于5%。
[0019] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：简便、易行、重复性好，能够确切反映铁皮 石斛药材质量，进一步完善了铁皮石斛药材的质量标准，弥补了铁皮石斛质量评价中缺乏 对以联苄为代表的脂溶性特征成分的检测方法的不足，使铁皮石斛药材的质量检测技术更 科学、合理；可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有 效性。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1是联苄提取率与乙醇浓度的关系；
[0021] 图2是联苄提取率与提取温度的关系；
[0022] 图3是联苄提取率与提取时间的关系；
[0023] 图4是联苄提取率与液料比的关系；
[0024] 图5是联苄提取率与提取次数的关系；
[0025] 图6是毛兰素标准曲线图。
【具体实施方式】
[0026] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0027] 实施例1 :提取方法考察
[0028] 1.称取Ig过50目筛的铁皮石斛粉末，共4份，分别记为A、B、C、D ;
[0029] A、50ml乙酸乙酯超声提取20min ;B、50ml80%的乙醇热提2h ;C、40ml丙酮超声提 取30min ;D、60ml甲醇热提lh。
[0030] 各取4ml提取液离心lOmin，转速为10000r/min，取上清液稀释一定倍数，测定其 总联苄含量，各个提取方法中总联苄提取率如表1所示：这些溶剂都可以将联苄类化合物 提取出来，优选乙醇热提法。
[0031] 表1不同提取方法的总联苄提取率
[0032]
【权利要求】
1. 一种铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，采用紫外分光光度法，以联苄类 化合物为对照品，用外标法对铁皮石斛中的总联苄进行含量测定。
2. 根据权利要求1所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，具体检测步骤 如下： 1) 供试品溶液的制备：取铁皮石斛药材，粉碎，过40-60目筛，精密称取0. 5-1. Og，以重 量/体积比为30-70倍量的高浓度醇水系统或中极性有机溶剂提取2-3次，提取液转移至 容量瓶中并定容，摇匀，取l_5mL离心10-20min，转速为10000r/min，精密量取上清液用甲 醇稀释，即得供试品溶液； 2) 对照品溶液的制备：精密称取联苄类化合物对照品，加甲醇溶解制成溶液； 3) 测定法：以甲醇为空白参比溶剂；采用紫外分光光度法，测试在270-290nm波长处的 吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。
3. 根据权利要求2所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，具体检测步骤 如下： 1) 供试品溶液的制备：取铁皮石斛药材，粉碎，过50目筛，精密称取lg，置100ml圆底 烧瓶中，加入70ml 50%的乙醇，水浴回流提取3次，每次3小时，合并提取液，取其中的4ml 离心15min，转速为10000r/min，精密量取上清液lml用甲醇稀释10倍，即得供试品溶液； 2) 对照品溶液的制备：精密称取毛兰素对照品25. Omg，置于25ml容量瓶中，加甲醇 溶解，定容，精密量取毛兰素标准溶液 〇. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0、1. 1、1. 2、1. 3、1. 4、1. 5、 1. 6ml，分别置于25ml容量瓶中定容，即得对照品溶液； 3) 测定法：以甲醇为空白参比溶剂；按照紫外分光光度法在280nm波长处测吸光度，空 白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量，以吸光度为纵坐标Y，毛兰素浓度为横坐标X进行 线性回归，求得回归方程式为A = 11. 002C+0. 018,线性范围为0. 02mg/ml-0. 064mg/ml，相 关系数r = 0. 9997,线性关系良好。
4. 根据权利要求1-2任一所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，所述对 照品包括但不限于毛兰素和二氢白藜芦醇。
5. 根据权利要求2所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，所述中极性有 机溶剂包括但不限于二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿和丙酮，所述高浓度醇水系统包括但不限于 浓度为50% -95%的甲醇水溶液体系、乙醇水溶液体系和异丙醇水溶液体系。
6. 根据权利要求1-2任一所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，所述铁 皮石斛药材中的总联节的含量不低于5%。
【文档编号】G01N21/33GK104237151SQ201410542575
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】陈贤良 申请人:宁波枫康生物科技有限公司