三萜皂苷类化合物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，特别涉及三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 三七Panax notoginseng为五加科植物三七的干燥根及根莖，另I」名山漆、金不换、 田漆、田三七、田七、参三七、血参、人参三七、滇三七等，主产于我国云南、广西等地。本品性 温，味甘、微苦，无毒。三七生品能消肿止痛，散瘀止血，熟品能补血活血。三七用于治疗疾病 已有悠久的历史，为我国常用的传统名贵药材之一。数千年来为中华民族的繁荣作出了巨 大的贡献，并深受世界人民的关注与重视。
[0003] 如今现代科学技术飞速发展，导致了传统中医药理论的研究手段相对落后，从而 与现代科学理论相脱节，使三七的药效资源开发较局限。皂苷作为三七的主要药效物质成 分，往往很难以初级皂苷形式直接被人体吸收，而是要经过人体代谢成次级皂苷尤其是稀 有人参皂苷，才能被吸收进入血液，发挥药效作用。
[0004] 生物转化手段具有反应较快、专属性较强、副反应较少的特点，利用了微生物体内 复杂的酶系促使三七中原有的化学成分经过结构修饰或活性位点的改变，获得活性更好、 毒性更小、药用价值更大的先导化合物，用于新药开发，从而更好地发挥三七药材资源优 势，开发具有自主知识产权的新药具有了十分重要的研究意义和社会效益。
[0005] 三七作为我国传统名贵中药材，同人参一样作为早期的药食同源植物，素有"参中 之王"的美誉。具有多种药效物质成分及较强的药理作用，已被广泛开发成多种产品用于临 床疾病的治疗。但是同时，三七作为一种传统的中草药，其中多种成分的用途都没有被开发 利用。三七皂苷为其主要的活性成分，但依据人参皂苷在体内的代谢规律及其构效关系可 知，"人参皂苷"是通过胃肠道吸收后被肠道菌逐级代谢为次级皂苷及苷元吸收进入血液循 环后发挥药理作用的，表明，天然人参皂苷结构并不是结构最佳状态。综上所述，如何通过 合理的结构修饰手段，将三七中原有的含量较高的人参皂苷进行结构修饰转化成低糖链或 新的侧链结构的稀有人参皂苷成为本领域技术人员亟待解决的问题。
【发明内容】
[0006] 本发明为解决上述问题，提供了三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途。
[0007] 本发明的首要目的在于提供一种新的三萜皂苷类化合物。
[0008] 本发明的另一目的是提供上述三萜皂苷类化合物作为制备抗肿瘤药物的用途。
[0009] 本发明的再一目的是解决现有技术中所存在的问题，提供一种上述三萜皂苷类化 合物的制备方法。
[0010] 为解决上述问题，本发明采取如下技术方案：
[0011] 三萜皂苷类化合物，所述化合物的结构式为：
[0012]
[0013] 所述三萜皂苷类化合物为6-〇-i3-D-吡喃葡萄糖基-达玛-23(24) (E)_烯-25-酮-3 0，6a，120-2OS-四醇。
[0014]进一步的，所述的三萜皂苷类化合物是从三七转化产物中提取得到的。
[0015] 一种制备上述的三萜皂苷类化合物的制备方法，具体步骤如下：
[0016]步骤一:三七转化产物的制备：
[0017] A种子液制备：
[0018] 取灵芝种子培养液液体培养基于压力蒸汽灭菌器中于121°C灭菌处理30分钟，冷 却后在无菌操作台中接入斜面菌种，于恒温振荡培养箱中于27~29°C，160转/分钟下培养， 得澄清星芒状菌球，即得种子液备用；
[0019] B转化产物的制备：
[0020] 取三七药材粉末，加入碳酸钙生长因子和水，混匀，密封并灭菌，于室温下冷却，在 无菌操作台内接入所述步骤A制备的所述种子液，避光培养，至容器底部布满菌丝体为止， 取出干燥，即得三七转化产物；
[0021] 步骤二:提取：
[0022] 取所述步骤B制备的所述三七转化产物，加入4~8倍重量份的70%的乙醇，回流提 取3~5次，每次1~3小时，过滤并合并提取液，压缩得稠膏;将所述稠膏加水分散并依次用 等体积的石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇溶液萃取6~8次，后对萃取液分别减压干燥，得 石油醚部分、乙酸乙酯部分和水饱和正丁醇部分；
[0023] 步骤三:分离纯化：
[0024] 取所述步骤二制备的所述乙酸乙酯部分上硅胶柱色谱，以体积比100:0~0:100的 二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，薄层色谱检识，收集二氯甲烷-甲醇=100:10部分洗脱液，合 并含所述三萜皂苷类化合物流分157~165的洗脱液，回收溶剂至干，所得物再经反相RP-C18柱层析，以体积比100:50的甲醇-水混合溶剂洗脱，减压回收溶剂至干，得到含有所述三 萜皂苷类化合物粗品，再经半制备型高效液相色谱分离纯化，48 %的甲醇水洗脱，得到所述 三萜皂苷类化合物纯品。
[0025]进一步的，所述灵芝种子培养液液体培养基的配方为:葡萄糖为1%~4%，蛋白胨 为0.2%~1 %，酵母粉为0.1 %~0.3%，磷酸二氢钾为0.1 %~0.3%，硫酸镁为0.1%，水为 95%~99%。
[0026]进一步的，所述灵芝种子培养液液体培养基的配方为：葡萄糖为2%，蛋白胨为 0.5%，酵母粉为0.2%，磷酸二氢钾为0.1%，硫酸镁为0.1%，水为97.1%。
[0027]进一步的，所述步骤B中：所述三七药材粉末过10目筛;所述碳酸钙生长因子为:碳 酸钙，加入的所述碳酸钙的重量为所述三七药材粉末重量的0.01倍量，加水量为所述三七 药材粉末重量的1.5倍;所述混均后的三七药材粉末中含水量为60%。
[0028]进一步的，所述步骤B中：灭菌条件为：于立式压力蒸汽灭菌器中灭菌处理1小时； 避光培养条件为:29~31°C，65%RH。
[0029] 进一步的，所述步骤B中，种子液与三七药材的重量为2:1，所述甲醇水中甲醇与水 的重量比为48:52。
[0030] 一种抗肿瘤药物，包含上述的三萜皂苷类化合物。
[0031] 本发明的有益效果为：
[0032] (1)提供了一种新的三萜皂苷类化合物；
[0033] (2)运用体外抗肿瘤活性筛选体系对此新的三萜皂苷类化合物进行活性评价，结 果表明，所述的化合物具有较好的抗肿瘤作用。经过体外抗肿瘤活性试验，表明具有明显的 抗肿瘤活性，为制备抗肿瘤药物提供了新的来源。
【附图说明】
[0034]图1是三萜皂苷类化合物的1H-NMR谱图；
[0035]图2是三萜皂苷类化合物的13C_NMR谱图；
[0036]图3是三萜皂苷类化合物的HMQC谱图；
[0037]图4是三萜皂苷类化合物的HMBC谱图；
[0038]图5是三萜皂苷类化合物的GC色谱图（D-Glu);
[0039] 图6是三萜皂苷类化合物的GC色谱图（Sample)。
【具体实施方式】
[0040] 下文将结合具体实施例详细描述本
【发明内容】
。应当注意的是，下述实施例中描述 的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更 好的技术效果。
[0041 ] 实施例1:
[0042] 一、本发明涉及的一种三萜皂苷类化合物结构式如下：
[0043]
[0044] 其化学名称为:6-0-β-?-吡喃葡萄糖基-达玛-23(24)(E)_烯-25-酮-3β，6α，12β-20S-四醇。本发明所述三萜皂苷类化合物是从三七转化产物中首次分离得到的新化合物， 命名为人参皂苷Rh 10。
[0045] 本发明所述三萜皂苷类化合物物理化学常数如下：
[0046]白色粉末，易溶于甲醇，10 %的硫酸乙醇溶液显紫红色，Mo 1 i sh反应阳性， Liebermann-Burchard反应阳性。室温条件下测定化合物的比旋光度为[a]D2()-7 · 2° (c 0 · 276，CH30H)，HR-ESI-MS:测定值m/z 673 · 3726[M+C1 ]-，理论计算值为m/z 673 · 3724[M+ Cl ]-，给出分子式为C35H58〇1()，不饱和度为7。咕和13C-NMR数据见表1。
[0047] 表1化合物的1h-nmr、13c-nmr数据归属信息
[0048]
[0049]
[0050] 综上分析，鉴定化合物为6-(H3-D-吡喃葡萄糖基-达玛-23(24)(E)_烯-25-酮-3β， 6a，12i3-20S_四醇。经SciFinder检索化合物结构未见文献报道，确定为一新化合物，命名为 人参皂苷Rh 10。
[0051] 经体外抗肿瘤活性试验，化合物能显著抑制人宫颈癌细胞的扩增，且呈现剂量依 赖关系，表明具有明显的抗肿瘤活性。因此，可用于制备新的抗肿瘤药物。
[0052]二、制备本发明三萜皂苷类化合物：
[0053]步骤一:三七转化产物的制备 [0054] A种子液的制备
[0055]按照微生物细菌生长优选的营养型培养基配方，葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，酵母粉 0.2%，磷酸二氢钾0.1 %，硫酸镁0.1 %，PH自然的条件配制种子液液体培养基。每100ml液 体培养基分装于250ml倒三角瓶中，包扎后置于压力蒸汽灭菌器中于121°C灭菌处理30分 钟。取出冷却后，在无菌操作台中接入保存好的斜面菌种。将接有斜面菌种的液体培养基放 于恒温振荡培养箱中于27°C~29°C，160转/分钟下培养至容器中充满大量澄清星芒状菌球 备用。
[0056] B转化产物的制备
[0057]取干燥的三七药材，适度