五环三萜化合物结构衍生物的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及具有治疗银屑病用途的新化合物，具体说是11羰基-(6-乙酰乳香酸 (acetyl-11-keto-0 -boswellic acid, AKBA)经过化学修饰得到的新衍生物。
【背景技术】
[0002] 银屑病是一种常见的慢性、复发性、炎症性的皮肤病，其特征是在红斑上反复出现 多层银白色干燥鳞屑。中医古称之为"白庀"，古医籍亦有称之为松皮癣。西医称为银屑病， 俗称牛皮癣，其特征是出现大小不等的丘疹，红斑，表面覆盖着银白色鳞屑，边界清楚，好发 于头皮、四肢伸侧及背部。春冬季节容易复发或加重，而夏秋季多缓解。据调查据调查，银屑 病的发病率占世界人口的0. 1% _3%，黄种人发病率约为0.3%，我国有患者约500万。该 病在人群中的发病率白种人明显高于黄种人，黑种人次之。我国每年要花费大量外汇用于 进口治疗牛皮癣药物，尤其是价格昂贵的小分子生物类药物。因此，研究开发我国自主知识 产权的治疗银屑病药物势在必行。申请者多年的研究结果表明：与正常人的皮肤相比，牛银 屑病患者的表皮和真皮内核酸转录因子NF-kappa-B的过度活化，导致了 TNF-alpha、IL-23 以及IL-17等炎症因子的大量释放，过量的TNF-alpha IL-23以及IL-17等炎症因子诱发 了人类的银屑病。
[0003]目前，治疗银屑病的药物中有一种肿瘤坏死因子制剂etanerc印t (依那西普）是 美国FDA批准用于银屑病治疗的生物制剂。这种药物为人源化抗体，它的作用机理是阻隔 肿瘤坏死因子的受体。由于肿瘤坏死因子在基体正常免疫反应中不可缺少，这种人源化抗 体没有选择性地阻挡肿瘤坏死因子会导致用药后的副作用，甚至停药后疾病容易反弹。而 且，由于这种药物是抗体、生产成本高、价格昂贵、普通病人很难能承受。
[0004] 另外，乌特津单抗（ustekinumab)用于中和IL-23的单克隆抗体在临床上对银屑 病有很好的治疗效果，但是生产成本高、价格昂贵。
[0005] 11 擬基-0 -乙酸乳香酸的英文全名是：acetyl-ll-keto-0-boswellic acid,简 称Ak ^ BA,是植物卡式乳香树的胶状树脂_乳香含有的重要成分之一。从天然乳香树提取 物中富集纯化AKBA已经描述于国际专利申请W003/0746，美国专利20030199581以及国际 专利申请W003/077860。更高纯度的产品可以通过色谱分离以及重结晶而获得。
[0006] 乳香提取物已经在传统的医药中被用作抗炎剂，如对关节炎以及溃疡性结肠炎患 者的治疗。另外乳香酸由于其抗增殖作用而受到关注，乳香酸在体外可以抑制几种白血病 细胞株，黑素瘤的生长和细胞凋亡。对乳香酸的研究表明，11羰基-P _乙酰乳香酸显示最 显著的 5-L0X 抑制活性（British J Pharmacology, 1996,117,615-618)。
[0007] 申请人多年来一直致力于银屑病发病机理和治疗方法的研究。申请人已运用银屑 病小鼠模型明晰了 AKBA治疗银屑病的分子免疫学机理。申请人将此研究结果于2009年10 月发表在 The Journal of Immunology (Wang, et al.，2009，183 (7) : 4755-63),该创新性 的研究成果一经发表就受到国际同行的高度关注，并被2009年12月出版的国际权威杂志 Nature Reviews Rheumatology作为科研亮点报道。最近，申请人又发现通过对AKBA化学 修饰得到的新化合物具有更显著的抑制小鼠银屑病模型以及在体外和体内抑制肿瘤生长 的作用。
[0008] 总的来说，已有的治疗银屑病药物生产成本高、靶向性差，11羰基-(6-乙酰乳香 酸具有巨大潜在优良用途，申请人通过化学修饰在乳香酸原有生物学功效上更大幅度地提 高了化合物在小鼠体内抑制银屑病和肿瘤的能力。所以，本发明将提供一种11羰基-(6-乙 酰乳香酸经过化学修饰得到的新化合物，以所述新化合物为活性组分的组合物，以及上述 化合物、组合物在制备治疗银屑病和肿瘤的药物中的应用。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了一类新型化合物为AKBA衍生物，具有分子式（II-VII)。简称为：M1、 M2、M3、M4、M5、M6。
[0010] 本发明所述的分子式如（II-VII)所示的AKBA类衍生物在制备治疗银屑病药物中 的用途，按下列步骤进行：
[0011] a、以AKBA的含量约为60%的市售商品化乳香提取物为原料，加入浓度为100%的 甲醇重结晶4-5次；
[0012] b、将重结晶产品用二氯甲烷溶解，用硅胶色谱进行吸附，用乙酸乙酯-石油醚洗 脱液进行洗脱，分别收集洗脱液，点板，合并洗脱液，将洗脱液减压浓缩，干燥，即得AKBA，以 HPLC测得含量不低于98% ；
[0013] c、将步骤b得到的AKBA加入双口瓶中，加入K0H，在氮气保护下加入异丙醇作为溶 剂，加热回流反应约6小时，待反应体系冷却至室温，使用旋转蒸发仪旋干溶剂，得到白色 固体，加入二氯甲烷后加入稀盐酸调节混合体系pH值至酸性。用二氯甲烷萃取水相3次， 收集二氯甲烷溶剂，用无水硫酸镁干燥，旋干溶剂得到棕色油状产物，使用乙烷：乙酸乙酯 (90 ：10)作为洗脱剂用柱层析法提纯，得到白色固体KBA。
[0014] d、将步骤c得到的KBA溶于二氯甲烷(含有2mol%4-二甲基吡啶)，加入1. 5当量 的三乙胺和1. 2当量的酰化试剂，冰浴过夜。反应完全后，用10%的碳酸氢钠溶液处理，并 用二氯甲烷萃取3次，收集二氯甲烷溶剂，用无水硫酸镁干燥混合物，旋干溶剂得到白色固 体，用乙烷：乙酸乙酯（90 ：10)作为洗脱剂用柱层析法提纯，得到酰化产物即AKBA衍生物。
[0015] 在实施本方法中6种有效化合物包括：Ml，3-0_乙氧乙二羰基-11-酮-(6-乳香 酸；M2，3-0-丙酰基-11-酮-(6-乳香酸；M3，3-0-丁酰基-11-酮-(6-乳香酸；M4，3_0-戊 酰基-11-酮-P _乳香酸;M5，3-0-苯乙酰基-11-酮-0 -乳香酸;M6，3-0-单甲酯丙二酰 基-11-酮-P -乳香酸。
[0016] 本发明中M1、M2、M3、M4、M5、M6化合物分别按常规制药方法，用药学上可以接受的 辅料组成外用剂型。其中所述的M1、M2、M3、M4、M5、M6化合物的重量含量为0. 1%_1%。
[0017] 本发明所述的Ml、M2、M3、M4、M5、M6化合物制备治疗银屑病的药物，是从含有 60%AKBA的商品化试剂中重结晶、纯化得到AKBA，采用易得、低毒、低污染的原料，再经过水 解和酯化得到6种AKBA衍生物，最后将这6种AKBA衍生物按常规制药方法分别制成外用 制剂。
[0018] 本发明针对银屑病发病机制，采用相关的药理学实验方法进行了 Ml、M2、M3、M4、 M5、M6化合物治疗银屑病的体内外药效实验，分别从NF-kappa B炎症信号通路活性、角质 形成细胞分裂增殖、真皮淋巴细胞浸润、表皮厚度等方面进行药效研究，说明M1、M2、M3、M4、 M5、M6化合物在用于治疗银屑病方面的药物用途。
[0019] 本发明所述M1、M2、M3、M4、M5、M6化合物在制