一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法
【专利摘要】一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法，涉及一种三萜皂苷提取方法。包括以下步骤：将干燥的金樱子果皮粉碎后用液料比为10:1-50:1mL/g的40-80%乙醇溶液溶解，置于设置微波功率为200-800W的微波反应器内微波辐射4-10min，趁热过滤，合并提取液减压浓缩成浸膏，即得到金樱子果皮三萜皂苷的粗提物。通过响应面分析方法对乙醇浓度、提取时间、液料比及微波功率进行优化分析，得到微波提取金樱子果皮三萜皂苷的最佳工艺条件。本发明的技术采用微波辅助法提取金樱子果皮皂苷，通过运用响应面法对提取条件进行工艺优化，使前处理简单、操作简便，而且大大缩短提取时间、对环境污染小、溶剂挥发少。
【专利说明】一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种三萜皂苷提取方法，特别是涉及一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法。
【背景技术】
[0002]金楼子三職阜苷药用价值:金楼子(Rose Laevigata Michx.),又名油瓶果子、糖罐子、黄茶瓶、倒挂金钩、蜂糖罐等。是蔷薇科蔷薇属植物。其根、茎、叶、果、花均可入药。广泛分布在我国的东南、西南、华中及华南等地区，是一种开发前景非常好的野生经济植物。药理研究显示金樱子果实具有抑菌、抗动脉粥样硬化、促进胃液分泌、降血脂等作用，其药理作用与三萜类物质有关系。三萜类化合物在自然界中分布十分广泛，它们通常以游离态或以与糖结合成苷或成酯的形式存在。动物、植物及海洋生物中均有其分布，尤其双子叶植物分布最多。药理研究显示，三萜类化合物有广泛的生物活性，如护肝、抗HIV-1、抗HIV-1蛋白酶活性等诸多功效。
[0003]微波辅助提取通过使用少量溶剂和较少能量来支持，是一项环境友好的绿色提取技术，其作用机理有其他方法完全不同。微波辅提法是利用微波能使提取物在极短时间内温度迅速升高，从而使被提取物质从植物体系中快速分离出来。因此，微波辅提法可以提高提取速率，达到强化传质、缩短提取时间的目的。该方法具有提取率闻、提取效率闻、能耗小、设备简单等优点，非常适合于结构稳定的三萜类化合物的提取。
[0004]响应曲面法(Response surface analysis, RSA)是工艺优化时常用的有效方法，用于同时涉及多种工艺参数的工艺优化。与正交分析法相比，采用了更为合理的试验设计，用最经济方式寻求最优工艺，具有试验周期短，求得的回归方程精度高，对因子及其交互作用也可以进行评价等优点。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法，该方法采用微波辅助提取，结合UV-3系列紫外可见分光光度计对金樱子三萜皂苷检测分析，通过运用响应面法对提取条件进行工艺优化，使前处理简便和操作简单，易于掌握，而且大大缩短提取时间，效率高。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法，所述方法包括以下过程:
首先，制备金樱子三萜皂苷粗提物:将干燥的金樱子果皮粉碎后用液料比为10:1-50:1mL/g的40-80 %乙醇溶液溶解，置于设置微波功率为200-800 W的微波反应器内微波辐射4-10 min，趁热过滤，合并提取液减压浓缩成浸膏，即得到金樱子果皮三萜皂苷的粗提物；将皂苷粗提物进行显色反应并采用UV-3系列紫外可见分光光度计测定其吸光度，由标准曲线计算其皂苷含量；
然后，精确量取定量的金樱子果皮皂苷提取液0.1~0.5 mL,分别置于2支具塞试管内，水浴挥干后，分别加入0.2~0.8 mL, 2^5 %香草醛-冰醋酸液，0.8~1.2 mL高氯酸，置于50~70 °C热水浴10~15 min，再冰水浴10~20 min，最后加入5~10 mL冰醋酸，移取3~5 mL于玻璃比色皿以空白试剂为空白参照，用UV-3系列紫外可见分光光度计在最佳吸收波长520^560 nm处测定其吸光度；从标准曲线上查得皂苷的浓度C，根据3次平行测定的平均值，计算出金樱子果皮中皂苷的含量。
[0007]所述的一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法，所述方法，设置乙醇水溶液中乙醇的体积浓度即乙醇浓度，样液在微波反应器内辐射的时间即提取时间，乙醇水溶液与金樱子果皮粉末的比例即液料比以及微波反应器所设置的微波功率；运用Design-Expert 8.0.6软件根据Box-Behnken Design (BBD)设计原则进行工艺的优化。
[0008]本发明的优点与效果是:
本发明微波法提取三萜类物质具有提取时间短、杂质溶出少、三萜皂苷收率和纯度高，金樱子果皮皂苷平均含量为62.48 ± 0.25mg/g。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1优化微波辅助提取三萜皂苷的三维响应面图；
图2优化微波辅助提取三萜皂苷的响应面的等高线图。
[0010]注:图1和图2为产物状态分析示意图，仅供参考。图中文字清晰与否并不影响本发明技术方案的理解 。
【具体实施方式】
[0011]下面结合实施例，对本发明作进一步详述。
[0012]实施例1:
准确称取20份(4组)I g金樱子果实粉末分别置于圆底烧瓶中，分别对乙醇/水比例(40-80 %);微波提取时间(4-10 min);液料比(10:1-50:1 ml/g);微波功率(200-800W);进行单因素考察，从而确定BBD实验的因素及水平。见表1 BBD实验因素水平编码表实施例2;
准确称取29份0.1 g金樱子粉末分别置于圆底烧瓶中，按BBD实验设计表，表2响应面的BBD实验设计及结果表，进行微波提取，离心后取上清液按照标准曲线的方法测定其吸光值并计算其皂苷含量。以提取时间作为横坐标，皂苷含量作为纵坐标。结果见表2。实验数据处理是采用响应曲面分析法方法，各因子与响应值之间的显著性由F值来判断，P值越小，则说明变量的显著性越高。结果表明，乙醇浓度、提取时间、液料比及微波功率四个因素对金樱果皮皂苷含量的影响大小依次为:乙醇浓度(A) >提取时间(B) >微波功率(D)>液料比(C)。从方差分析结果，表3响应面法结果的方差分析表，可以看出:乙醇浓度(A)对三萜皂苷的提取的影响最显著，其次是提取时间(B)，微波功率(D)对皂苷提取的影响，最后是液料比(C)。此外，模型的显著水平小于0.0001，所以该回归模型是极显著的。
[0013]根据所得数据进行多元回归方程的分析，得到各因素与响应值之间的多元二次回归方程，即
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七甘曰里(mg/g)-O gSBC +037BD +OJQCD - 0_63A s - 0_07? 1 1j53C 1 OJSID 1利用Design-Expert 8.0.6软件根据回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面及其等高线图。如图2所示。
[0014]由模型分析可以预测得到微波辅助法提取金樱子果皮皂苷提取的最佳工艺条件。
[0015]实施例3:
取3份金樱子果实粉末，每份I g，按照微波助提法的最佳工艺条件进行提取，将其离心后取上清液按照标准曲线的方法测定其吸光值并计算其皂苷含量。结果显示:金樱子果皮皂苷平均含量为62.48±0.25mg/g，这与预测值62.69 mg/g十分相近。则表明响应面法优化的模型及工艺条件比较稳定，合理。
[0016]表1 BBD实验因素水平编码表
【权利要求】
1.一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法，其特征在于，所述方法包括以下过程: 首先，制备金樱子三萜皂苷粗提物:将干燥的金樱子果皮粉碎后用液料比为10:1-50:1mL/g的40-80 %乙醇溶液溶解，置于设置微波功率为200-800 W的微波反应器内微波辐射4-10 min，趁热过滤，合并提取液减压浓缩成浸膏，即得到金樱子果皮三萜皂苷的粗提物；将皂苷粗提物进行显色反应并采用UV-3系列紫外可见分光光度计测定其吸光度，由标准曲线计算其皂苷含量； 然后，精确量取定量的金樱子果皮皂苷提取液0.0.5 mL，分别置于2支具塞试管内，水浴挥干后，分别加入0.2~0.8 mL, 2^5 %香草醛-冰醋酸液，0.8~1.2 mL高氯酸，置于50~70 °C热水浴10~15 min，再冰水浴10~20 min，最后加入5~10 mL冰醋酸，移取3~5 mL于玻璃比色皿以空白试剂为空白参照，用UV-3系列紫外可见分光光度计在最佳吸收波长520^560 nm处测定其吸光度；从标准曲线上查得皂苷的浓度C，根据3次平行测定的平均值，计算出金樱子果皮中皂苷的含量。
2.根据权利要求1所述的一种金樱子果皮三萜皂苷提取方法，其特征在于，所述方法，设置乙醇水溶液 中乙醇的体积浓度即乙醇浓度，样液在微波反应器内辐射的时间即提取时间，乙醇水溶液与金樱子果皮 粉末的比例即液料比以及微波反应器所设置的微波功率；运用Design-Expert 8.0.6软件根据Box-Behnken Design (BBD)设计原则进行工艺的优化。
【文档编号】A61K36/738GK103977108SQ201410193804
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月9日 优先权日:2014年5月9日
【发明者】高品一, 刘学贵, 金梅, 蒋福宇, 杨頔, 张振学 申请人:沈阳化工大学