黄花菜及黄花菜总黄酮的新用途的制作方法

专利名称：：黄花菜及黄花菜总黄酮的新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药及其有效部位的新用途，特别涉及黄花菜及黄花菜总黄酮新用途及其制备方法。技术背景黄花菜又名"金针菜"、"一日百合"，俗称忘忧草。属百合科萱草属植物，具有丰富的营养成份。其主要化学成分有蛋白质、脂肪、碳水化合物，还有多种维生素、生物碱、苷、黄酮类、胡萝卜素、挥发油、鞣质以及无机矿物钙、磷。据《中药大辞典》记载黄花菜含有生物碱0.7%，苷1.8%，黄酮类0.75%,p-胡萝卜素O.36%。明代李时珍在《本草纲目》中称其有安神醒脑、增智宽胸、美容养血、解热消毒、除烦通乳之功效。现代研究黄花菜具有补脑健智、化痴止血、通络止痛、抗菌消炎等功效。其中黄花菜总黄酮是其重要有效成分之一，它具有增强免疫力、活血化瘀、保肝抗炎、抗菌抗病毒、抑制肿瘤、清除氧自由基和抑菌作用等多种功能。目前对黄花菜总黄酮的提取研究很少，而对其应用研究未见报道。
发明内容本发明第一个目的在于公开了黄花菜的新用途。本发明第二个目的在于公开黄花菜总黄酮的新用途。本发明第三个目的在于公开黄花菜总黄酮的制备方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的黄花菜在制备抗抑郁药物中的应用。黄花菜在制备升高脑皮质中的5-羟色胺药物中的应用。黄花菜在制备升高脑皮质中的去甲肾上腺素药物中的应用。黄花菜在制备升高脑皮质中的多巴胺药物中的应用。黄花菜在制备升高脑皮质中的5-羟基吲哚乙酸药物中的应用。黄花菜在制备拮抗利血平药物中的应用。黄花菜总黄酮在制备抗抑郁药物中的应用。黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的5-羟色胺药物中的应用。黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的去甲肾上腺素药物中的应用。黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的多巴胺药物中的应用。黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的5-羟基吲哚乙酸药物中的应用。黄花菜总黄酮在制备拮抗利血平药物中的应用。黄花菜总黄酮可以按照现有技术的方法制备，本发明同时提供了一种制备黄花菜总黄酮的方法步骤1:将黄花菜60-95%乙醇加热回流提取1-4次，每次0.5-l小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A,残渣I;步骤2:残渣I用20-80。/a乙醇加热提取l-4次，每次20-60min,过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B;步骤3:将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用20%-95%乙醇洗脱2-6倍柱体积，分别回收乙醇，得到样品1;步骤4:将浸膏B用蒸馏水稀释后过滤，通过大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，先后用20%-95%乙醇洗脱2-6倍柱体积，分别回收乙醇，得到样品2。步骤5:混合步骤3、步骤4的样品制得黄花菜总黄酮。所述制备黄花菜总黄酮的方法优选为步骤1:将黄花菜95°/乙醇浸泡过夜，95%乙醇加热才是取3次，每次O.5-l小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A,残渣I5步骤2:残渣I用60%乙醇加热提取2次，每次40min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B;步骤3:将浸膏A用蒸镏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，蒸愤水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样l;步骤4:将浸膏B用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样2;本发明黄花菜总黄酮还可以按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶嚢剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂等制剂。为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧曱基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括甜味剂及各种香精；防腐剂包括尼泊金类、苯曱酸、苯曱酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括PEG6000,PEG4000，虫蜡等。经药理试验证明本发明黄花菜及黄花菜总黄酮具有抗抑郁作用，能显著提高大鼠脑皮质的5-HT、NE、DA含量和海马的5-HT、NE含量，与模型组比较有显著差异(PW.05-0.01),给药28天后，与正常组相比，模型组大鼠的Open-Field法水平穿越格数、竖立次数明显减少，差异具有显著性(P〈0.01)，与;f莫型组相比，黄花菜或黄花菜总黄酮胶嚢剂大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠的0pen-Field法水平穿越格数、竖立次数均有增加，具有显著性差异(P<0.05-0.01);给药28天后，与;f莫型组相比，黄花菜或黄花菜总黄酮胶嚢剂大、中、小剂量组大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差异具有显著性(P<0.05-0.01);与模型组相比，黄花菜或黄花菜总黄酮胶嚢剂大、中、小剂量组大鼠的强迫性游泳期间的不动时间显著减小，具有显著性差异(P〈0.01)。黄花菜或黄花菜总黄酮胶嚢剂大、中、小剂量能显著拮抗利血平所致的体温下降作用和小鼠眼睑下垂及运动不能的作用(P<0.05-0.01)。下述实验例通过黄花菜按照实施例1的方法制备的宁心解郁胶嚢药理试验进一步说明本发明。实验例1宁心解郁胶嚢对大鼠慢性应激抑郁症的治疗作用试验目的釆用慢性综合应激法建立抑郁大鼠模型，观察中药宁心解郁月交嚢的抗抑郁作用。受试药物宁心解郁胶嚢千粉，批号，北京中医药大学中药学院提供。盐酸氟西汀，产品批号A126471,分装批号051020,生产厂美国EliLillyandCompanyLimited,分装厂礼来苏洲制药有限公司。去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5-羟基p引咮乙酸(5-HIAA)、3,4-二羟基卞胺(DHBA)，以上为SIGMA公司产品。二正丁胺(上海化学试剂采购站进口分装)，B-8离子对试剂(天津化学试剂二厂)，甲醇(优级纯，北京化工厂)，其他试剂均为国产分析纯。数据处理所有实验数据以x±s表示。计量数据由SPSS10.0统计软件进行方差分析及组间抬r验。实验动物SPF级Sprague-Dawiey(SD)大鼠，体重250-300g，雌雄各半，动物许可证编号SCXK(京)2002-0003，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。饲养条件动物进入动物实验室后，大鼠每笼放养5只，饲养3天后启用；正常组大鼠每笼放养5只，模型组、宁心解郁胶嚢高剂量组、宁心解郁胶嚢中剂量组、宁心解郁胶嚢低剂量组、盐酸氟西汀组的大鼠均单笼饲养。动物室光照充足，通风和空调设备良好，室温控制在23-25°C,相对湿度为40-70%。实验室按常规定期消毒。慢性应激抑郁模型的建立将大鼠置于昼夜节律光照条件下，自由进食进水，饲养3天以适应环境，每日触摸动物以适应实验人员的操作。大鼠适应环境后随机分为空白对照组(以下简称空白组)、抑郁模型组(以下简称模型组)。模型组根据文献均单笼饲养，以慢性不可预见性的刺激，配合孤养，各种剌激因子按随机方法在28d内应用，包括冰水游泳(4。C,5min)，热刺激(45。C,5min),摇晃(频率160次/分，3min)，夹尾(lmin)，昼夜颠倒(24h)，每日给予一种刺激,每种刺激累计使用4次，顺序随机，使动物不能预料刺激的发生，给予28天刺激后，进行0penField行为学测定、大鼠强迫游泳实验和糖水消耗实验，以评价模型组大鼠的慢性应激抑郁模型是否成功，造模成功的大鼠随机分为模型组、宁心解郁胶嚢高剂量组、宁心解郁胶嚢中剂量组、宁心解郁胶嚢低剂量组、盐酸氟西汀组。使各组大鼠的0penFie1d行为学、大鼠强迫游泳实验和糖水消耗实验的实验结果尽量大致一致，做为给药前的指标。开始给药后，每隔2天再接受一次不同应激刺激，刺激方式及程度与造才莫时相同，直至实验结束。给药方法给予28天刺激后，随机分为模型组、宁心解郁胶嚢高剂量组、宁心解郁胶嚢中剂量组、宁心解郁胶嚢低剂量组、盐酸氟西汀组。依"实验动物与人按体表面积比等效量换算比率"可算出各动物的等效剂量，作为中剂量。宁心解郁胶嚢的大剂量为122.31mg/kg体重，中剂量为40.77mg/kg体重，低剂量剂量为13.59mg/kg体重；西药组给予盐酸氟西汀，剂量为3.6mg/kg体重，均按lml/100g体重的浓度灌胃给药，模型组给予生理盐水lml/100g体重。共灌胃28天。实验指标观察1、Open-Field行为学测定在给予28天刺激后及给药后28天用Open-field法观察各组大鼠行为的变化。根据文献自制OpenField观察箱，直径90cm,高40cm，周壁为黑色，将底面按扇形分成面积相等的25格。以大鼠穿越底面格子数为水平得分，动物穿越l格(3爪以上跨入)为1分；以大鼠双足离开地面次数为垂直得分，动物双足离开底面为标志，无"^仑动物站立多长时间直至》文下双足为1分。每只动物每次进行一次测定，时间为5min。利用摄像装置记录其行为的变化，分析结果。2、大鼠强迫游泳实验在给予28天刺激后及给药后28天后，据文献将大鼠放入内径20cm，高40cm的玻璃圆缸内，每釭1只，缸内水深24cm,水温28-29。C，(每缸水仅用l次)，连续观察5min,累计大鼠在水中停止挣扎，呈漂浮直立状态，仅有偶尔的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间即不动时间。(此实验前一天每只大鼠预游15min,随后取出放于灯下纟察干放入笼中。)3、糖水消耗实验在给予28天刺激后及给药后28天后，进行糖水消耗实验。在进行糖水消耗实验时每只大鼠加l%蔗糖溶液100ml，同时所有大鼠进行禁食，计算大鼠lh饮用l%蔗糖溶液的量。4、皮质和海马单胺类神经递质的测定取材方法断头处死动物后，剥离出全脑，在水上迅速分离出前额皮质和海马，称质量后置l.5ml的冻存管中用液氮快速冷冻后，放入-80。C水箱保存至测定。样品的处理才艮据脑组织质量不同加入不同体积的溶液每100mg脑组织加入lml组织处理液(0.15mmol/L腦04和2ng/|u1的DHBA25jul，冰浴条件下超声匀浆30s，然后在15000转/分，4'C离心20min,上清液用于神经递质测定。神经递质检测采用高效液相色镨系统(HPLC)-电化学检测器(ECD)检测单胺类神经递质及其主要代谢产物的浓度，包括NE，DOPAC,DA，5-HIAA，HVA，5-HT。取上清液IOn1进样测定，各神经递质含量以ng/g组织湿质量计算。色谱条件色谱条件Nova-pakC18色谱柱(4mmx150鹏，5jam);流动相50mmo14宁檬酸-醋酸钠緩沖液pH3.5(内含1.OmmolL—1B-8离子对试剂，1.8國lL—1二正丁胺，0.3腿ol.L—1EDTA二钠，4%甲醇)，流速l.OmL.mirf\玻璃碳工作电极，抬r测池电压为+0.75V;3，4-二羟千胺DHBA为内标物，样品中各主要组分用内标法进4亍定量。实验结果1.宁心解郁胶嚢对大鼠脑皮质的5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA和DOPAC含量的影响冲莫型组大鼠脑皮质的5-HT、NE、DA、5-HIAA和D0PAC含量与正常组比较显著降低(P〈0.01);宁心解郁胶嚢大剂量组大鼠脑皮质的5-HT、NE、DA和5-HIAA与模型组比较含量显著升高(P<0.05-0.01)，宁心解郁胶嚢大剂量组大鼠脑皮质的DOPAC含量与模型组比较有升高趋势，但差异无显著性(P〉0.05),宁心解郁胶嚢中剂量组大鼠脑皮质的5-HT和NE与模型组比较含量显著升高(P<0.01)，宁心解郁胶嚢中剂量组大鼠脑皮质的M、DOPAC和5-HIAA含量与模型组比较有升高趋势，但差异无显著性(P>0.05)，宁心解郁胶嚢小剂量组大鼠脑皮质的5-HT、NE和5-HIAA含量与冲莫型组比较有升高趋势，但差异无显著性(P〉0.05)，见表1-3。表l宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠脑皮质5-HT和5-HIAA含量的影响(ng/g,;±s)组别n5-HT5-HIAA正常组162903.26±177.67*1525.07±129.91*才莫型组141608.96±94.75896.89±50.56宁心解郁胶嚢大剂量组152487.57±240.58*1071.81±100.18*宁心解郁胶囊中剂量组162413.89±243.42*908.10±62.43宁心解郁胶囊小剂量组162058.93±221.561057.70±103.58盐酸氟西汀组132646.28±242.93*1305.27±111.21*注与才莫型纟且比较*P<0.01;**P<0.05表2宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠脑皮质DA和DOPAC含量的影响(ng/g,;±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠脑皮质NE和HVA含量的影响(ng/g,x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注与才莫型纟且比丰交*P<0.01;**P<0.052.宁心解郁胶嚢对大鼠海马的5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA和D0PAC含量的影响;溪型组大鼠海马的5-HT、NE和DA含量与正常组比專交显著降低(P〈0.01),其5-HIAA、DOPAC和HVA含量与正常组比较有降低趋势，但差异无显著性(PX).05);宁心解郁胶嚢大、中剂量组大鼠海马的5-HT和NE与模型组比较含量显著升高(P<0.05-0.01),宁心解郁胶嚢小剂量组大鼠海马的5-HT和NE含量与模型组比较有升高趋势，但差异无显著性(P〉0.05)，见表4-6。表4宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠海马5-HT和5-HIAA含量的影响(ng/g，S±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注与才莫型症且比4交*P<0.01;**P<0.05表5宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠海马DA和DOPAC含量的<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>正常组16682.67±164.27*55.56±11.62模型组14171.58±52.2834.69±5.75宁心解郁胶嚢大剂量组15118.81±18.5917.99±3.54宁心解郁胶囊中剂量组16134.88±27.6646.83±4.80宁心解郁胶嚢小剂量组16153.51±36.9538.55±6.02盐酸氟西汀组13380.11±182.3649.21±15.37注与才莫型纟且比4交*P<0.01;**P<0.05表6宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠海马NE和HVA含量的影响(ng/g，x±s)组别nNEHVA正常組161572.84±77.87*1424.97±373..89模型组141144.49±98.321104.83±373..01宁心解郁胶嚢大剂量组151402,69±62.37**267.25±255.71**宁心解郁胶囊中剂量组161388.83±83,60**505.10±258.37宁心解郁胶嚢小剂量组161341.78±87.5428.84±5.04*盐酸氟西汀组131279.01±103.8354.32±15,.44*注与才莫型症且比4交*P<0.01;**P<0.053.宁心解郁胶嚢对大鼠Open-field行为的影响给药前，才莫型组、宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠的Open-Fie1d法水平穿越^各it、竖立次数无显著性差异(P<0.G5)，但与正常组比较都有显著性差异(P<0.01);给药28天后，与正常组相比，模型组大鼠的Open-Field法水平穿越格数、竖立次数明显减少，差异具有显著性(PW.01)，与^t型组相比，宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠的Open-Field法水平穿越格数、竖立次数均有增加，具有显著性差异(P<0.G5-0.01),与同组的给药前比较，宁心解郁胶嚢大、中剂量组和盐酸氟西汀组大鼠的Open-Field法水平穿越才各^t、竖立次llt明显增加，具有显著性差异(P復05-0.01)。见表7。表7宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠Open-field行为的影响(;±s)竖立次数水平穿越格数组另ijn--------------------------------------------------------给药前给药后给药前给药后正常组1616.88±1.0016.50±0.93*84.50±4.2686.69±3.90*4莫型组1411.43土0.63A9，71±0.4755.43±4.67A50.50±4.53*宁心解郁胶囊大剂量组1611.13土0.55A13.75±0.76*#57.50土4.64A73.69±3.95*#宁心解郁胶嚢中剂量组1611.38土0.48厶13.38±0.68*##57.44±3.80A76.50±3.69*#宁心解郁月交囊小剂量组1611.44土0.53A11.88±0.58**58.56土4.13A63.44±3.76**盐酸氟西汀组1311.38±0.61A14.23±0.82*#53.62±4.90A67.08±3.81*##注与正常组比较AP<0.01与才莫型纟且比專支*P<0.01;**P<0.05与同组的给药前比丰支#P<0.01;##P<0.054.宁心解郁胶嚢对大鼠糖水消耗量的影响18给药前，模型组、宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠蔗糖溶液消耗量比较差异无显著性(P<0.05)，但与正常组比较都有显著性差异(P<0.01)，给药28天后，与正常组相比，模型组大鼠蔗糖溶液消耗量明显减少，差异具有显著性(P〈0.Ol)，与;f莫型组相比，宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差异具有显著性(P〈0.05-0.01),与同组的给药前比较，宁心解郁胶嚢大、中剂量组和盐酸氟西汀组大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差异具有显著性(P〈0.01，P<G.05)。见表8。表8宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠糖水消耗量的影响(ml，；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注与正常组比较AP〈0.01与才莫型组比4交*P<0.01;**P<0.05与同组的给药前比4交#P<0.01;##P<0.055.宁心解郁胶嚢对大鼠强迫性游泳游泳的影响给药前，模型组、宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠在强迫性游泳期间的不动时间，无显著性差异(P〉0.05),但与正常组比较都有明显增加，都有显著性差异(P<0.05-0.01);给药28天后，与正常组相比，模型组大鼠在强迫性游泳期间的不动时间显著增加，具有显著性差异(P<0.01)，与模型组相比，宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组和盐酸氟西汀组大鼠在强迫性游泳期间的不动时间显著减小，具有显著性差异(P〈0.01)，与同组的给药前比较，宁心解郁胶嚢大、中剂量组和盐酸氟西汀组大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差异具有显著性(P<0.05—0.01)。见表。表9宁心解郁胶嚢对抑郁大鼠强迫性游泳游泳的影响(s,S±<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>试验目的采用利血平拮抗实验研究宁心解郁胶嚢的抗抑郁作用。药物及制剂宁心解郁月交嚢干粉，北京中医药大学中药学院提供。盐酸氟西汀，产品批号A126471,分装批号051020，生产厂美国EliLillyandCompanyLimited,分装厂礼来苏洲制药有限/〉司。利血平注射液，上海复旦复华药业有限公司，批号050601，数据处理实验数据均以x±s表示，数据处理采用组间比较t检验。峥眼不能及运动不能观测的组间比较采用x2检验实验动物SPF级ICR，雌雄各半，小鼠，18~20g，北京维通利华实验动物中心提供，合格证号SCXK(京)2002-2003。实验方法l.分组及给药动物随才几分为正常组、阳性药组、治疗组。正常组予生理盐水；阳性药组利血平拮抗实验给予百忧解(5.2mg/kg)，治疗组分为宁心解郁胶嚢大、中、小剂量组(分别为176.67、58.89、19.63mg/kg)。每组20只小鼠，灌胃给药，2次ld,连续7d。2.拮抗利血平实验末次给药lh后，腹腔注射利血平2.5mg/kg，分别进行以下实验及指标观测。2.1肛温的观测腹腔注射利血平3、5h后，将体温计探头插入肛门约lcm测量胆温，记录各组数据。2.2峥眼不能的观测腹腔注射利血平lh后，观察小鼠不能峥眼的个数,计算百分率。2.3运动不能的观测腹腔注射利血平lh后，将小鼠放入直径为7.5cm的圓圈内观察15s，计算各组小鼠出圏率。结杲1.宁心解郁胶嚢对利血平所致小鼠体温下降的影响模型组皮下注射利血平后表现为体温下降，与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01);宁心解郁月交嚢组大、中、小剂量能显著拮抗利血平所致的小鼠体温下降(P<0.05)，结果见表l。表1宁心解郁胶嚢对利血平抑郁大鼠体温的影响(。C，S土s)组别11基础体温三小时体温五小时体温正常组2337.97±0.4237.,86±1,1037.76±1.36**模型组2238.15±0.4732.,83±1.23A32.45±1.20A宁心解郁胶囊大剂量组2337.96±0.4533.70±1.65△**33.33±1.82△**宁心解郁胶嚢中剂量组2138.16±0.5534.99±0.64△*33.98±1.29A*宁心解郁胶嚢小剂量组1938.00±0.4435.41±1.26厶*35.86±1.29A*盐酸氟西汀组2037.88±0.6633.38±1.36△32.87±1.39△注与正常组比较AP〈0.01;与才莫型组比4交*P<0.01,**P<0.052.宁心解郁胶嚢对利血平所致小鼠眼睑下垂的拮抗作用模型组皮下注射利血平后表现为明显的眼睑下垂，不能睁眼，与正常对照组比较均有显著性差异；宁心解郁胶嚢组大、中、小剂量能显著拮抗利血平所致的眼睑下垂(P<0.05-)，结果见表2。表2宁心解郁胶嚢对利血平所致小鼠眼睑下垂的拮抗作用(；±s)组别n不能峥眼动物数瞭眼不能百分率/%正常组2300模型组221986.36宁心解郁胶嚢大剂量组23939.13*宁心解郁胶嚢中剂量组21942.85*宁心解郁胶囊小剂量组181055.56**盐酸氟西汀组20735.00*注与才莫型纟且比4交*P<0.01，**P<0.053.宁心解郁胶嚢对利血平所致小鼠运动不能的拮抗作用模型组皮下注射利血平后表现为运动不能，出圏率显著降低，与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01);宁心解郁胶嚢组大、中、小剂量能显著拮抗利血平所致的运动不能，出圏率显著高与模型组(P〈0.05)，结果见表3。表3宁心解郁胶嚢对利血平所致小鼠运动不能的拮抗作用(-/x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>注与才莫型组比4交*P<0.01实验例3总黄酮的含量测定取实施例中的样品1和2进行总黄酮含量测定。测定方法精密称取减压干燥至恒重的芦丁0.0101g，甲醇定容于50ml容量瓶中摇匀，准确量取0.0，1.0,2.0，3.0，4.0,5.0ml于25ml容量并瓦中，加5%NaN036ml,混匀，；故置6min，加入10。M1(N03)30.6ml，混匀，i丈置6min,加4%NaOH溶液5ml，用60%乙醇稀释至刻度，放置15min，按药典分光光度法，以第一管为空白，在500mn波长处测吸收度。以吸收度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>回归方程为y=12.術x-O.0021r=0.9990准确称取样1和2各0.0025g,置于50ml容量瓶中，同法测定吸收度分别为0.11867和0.12219,由标准曲线计算浓度分别为0.009739和0.010022mg/ml。总黄酮含量分别为19.478%和20.044%。下述实施例均能够实现上述实-睑例所述的效果具体实施方式实施例l:胶嚢剂将9900g干黄花菜切成2-3厘米长的小段，95%乙醇浸泡过夜。95%乙醇加热提取3次，从沸腾开始计时，时间分别为40min，30min,30min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A。残渣用60%乙醇加热才是取2次，每次40min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B。将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样1。同法处理浸膏B，得样2。样1为64.3101g样2为60.9338g。出膏率大于1.265%，取干燥后的浸膏，按l:0-5加入乳糖(或淀粉、或糊精)，混合均匀，制成颗粒或直接罐装于胶嚢中即得。功效解郁，宁心，安神主治用于抑郁状态证属心气亏虚、心神不宁者。症见情志抑郁，喜太息，失眠多梦，梦多易醒，心神不宁，善恐易惊，舌质淡，脉沉细每曰总量合生药15克(每次5克)，每日3次。l个月为1疗程，用3个疗程。实施例2:黄花菜中总黄酮的制备及检验将9900g干黄花菜切成2-3厘米长的小段，95%乙醇浸泡过夜。95%乙醇加热提取3次，从沸腾开始计时，时间分别为40min，30min，30min,过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A。残渣用60%乙醇加热提取2次，每次40min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B。将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样1。同法处理浸膏B,得样2。样1为64.3101g,样2为60.9338g。出膏率大于1.265%，混合样1、2,即得黄花菜中总黄酮。将上述样品采用乙醇溶解按照黄酮类化合物通用的检查方法进行以下实验，证明了属于黄酮类化合物。1、紫外光灯下枱4见有黄绿色荧光；2、加入少许4美粉振摇后滴加浓盐酸2-3滴溶液，l-2分钟后呈书^红色；3、样品的乙醇溶液和1%三氯化铝乙醇溶液通过纸斑反应后，置紫外灯下显黄绿色荧光；4、滴加氲氧化钠溶液呈棕黄色实施例3:颗粒剂将9900g干黄花菜切成2-3厘米长的小段，95%乙醇浸泡过夜。95%乙醇加热才是取3次，从沸腾开始计时，时间分别为40min,30min,30min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A。残渣用60%乙醇加热提取2次，每次40min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B。将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样1。同法处理浸膏B,得样2。样l为64.3101g，样2为60.9338g。出膏率大于1.265%,混合样1、2，加入糊精经常M^工艺制成颗粒剂。实施例4:片剂将9900g干黄花菜切成2-3厘米长的小段，95%乙醇浸泡过夜。95%乙醇加热提取3次，从沸腾开始计时，时间分别为40miri，30min,30min,过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A。残渣用60°/。乙醇加热|是取2次，每次40min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B。将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱，回收乙醇，得到样1。同法处理浸膏B,得样2。样1为64.3101g,样2为60.9338g。出膏率大于1.265%，混合样1、2,加入淀粉、乳糖、糊精经常少见工艺制成颗粒后，按常^L加入润滑剂，压制成片剂。权利要求1.黄花菜在制备抗抑郁药物中的应用。2、如权利要求l所述的应用，其特征在于在制备升高脑皮质中的5-羟色胺药物中的应用。3、如权利要求l所述的应用，其特征在于在制备升高脑皮质中的去甲肾上腺素药物中的应用。4、如权利要求l所述的应用，其特征在于在制备升高脑皮质中的多巴胺药物中的应用。5、如权利要求l所述的应用，其特征在于黄花菜在制备升高脑皮质中的5-羟基吲哚乙酸药物中的应用。6、黄花菜在制备拮抗利血平药物中的应用。7、黄花菜总黄酮在制备抗抑郁药物中的应用。8、如权利要求7所述的应用，其特征在于黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的5-羟色胺药物中的应用。9、如权利要求7所述的应用，其特征在于黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的去甲肾上腺素药物中的应用。10、如权利要求7所述的应用，其特征在于黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的多巴胺药物中的应用。11、如权利要求7所述的应用，其特征在于黄花菜总黄酮在制备升高脑皮质中的5-羟基吲哚乙酸药物中的应用。12、黄花菜总黄酮在制备拮抗利血平药物中的应用。13、一种制备黄花菜总黄酮的方法，包括如下步骤步骤1:将黄花菜60-95%乙醇加热回流提取1-4次，每次0.5-l小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A,残渣I;步骤2:残渣I用20-80%乙醇加热提取l-4次，每次20-60min过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B;步骤3:将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用20°/。-95%乙醇洗脱2-6倍柱体积，分别回收乙醇，得到样品1;步骤4:将浸膏B用蒸馏水稀释后过滤，通过大孔树脂柱，蒸铺水洗至流出液透明，先后用20%-95%乙醇洗脱2-6倍柱体积，分别回收乙醇，得到样品2。步骤5:混合步骤3的样品1、步骤4的样品2制得黄花菜总黄酮。14、如权利要求13所述的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤步骤1:将黄花菜95%乙醇浸泡过夜，95%乙醇加热提取3次，每次O.5-l小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏A，残渣I5步骤2:残渣I用60%乙醇加热提取2次，每次40min，过滤，合并滤液，回收乙醇，得浸膏B,残渣II;步骤3:将浸膏A用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用60%洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样l;步骤4:将浸膏B用蒸馏水稀释后过滤，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用60%洗脱3倍柱体积，回收乙醇，得到样2。全文摘要本发明公开了黄花菜及其总黄酮在制备抗抑郁药物中的应用，具体公开了黄花菜及其总黄酮在制备升高脑皮质中的5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟基吲哚乙酸药物中的应用，并公开了黄花菜及其总黄酮在制备拮抗利血平药物中的应用；通过药理实验证实上述应用。文档编号A61P25/24GK101327289SQ20081013532公开日2008年12月24日申请日期2008年7月31日优先权日2008年7月31日发明者健倪,朱陵群,邹忆怀申请人:健倪