专利名称：一种预防和治疗艾滋病病毒感染的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种预防和治疗艾滋病病毒感染的药物组合物，属于药物制剂领域。
背景技术：
20世纪80年代以来，获得性免疫缺陷综合症(又称艾滋病，AIDS)已经成为 威胁人类健康的重大疾病，且发病人数呈逐年上升的趋势。所以一位著名西方医学 专家称艾滋病为"世纪瘟疫"。2003年12月1日，由中国卫生部和联合国艾滋病中 国专题组联合发布的《中国艾滋病防治联合评估报告》显示中国目前有艾滋病病毒 感染者约84万，艾滋病病人约8万，分布在全国各省、自治区、直辖市，遍布社会 各个阶层。
目前抗艾滋病药物是世界药物研究领域的热点，在临床应用较多的主要是核苷 类逆转录酶抑制剂(nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NRTI);蛋白酶抑制剂 (protease inhibitors, PI)及非核苷类逆转录酶抑制齐lj ( non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NNRTI)。由于HIV复制缺乏保真性(fidelity),经常发生突变， 致使抗HIV药物易产生耐药性。目前国际上对AIDS的药物疗法趋向联合治疗，即 鸡尾酒疗法，通常是一种HIV蛋白酶抑制剂加上二种核苷类逆转率酶抑制剂，用于 治疗急性或慢性的HIV感染或不同期的AIDS患者，及使用齐多夫定失效或无反应 者。己出现了四联和六联等不同疗法，替代疗法，间断疗法，高效抗逆转录病毒联 合疗法等多种方法。这些药物及方法有以下缺点(1)诱导产生抗药性的HIV变异 株；(2)具短期和长期的毒副作用；(3)不能阻断HIV的早期感染过程。由于HIV 变异快，不同地区的毒株也可能不一样，使疫苗的研制难度很大。
自1987年齐多夫定首先被美国FDA批准上市，用于治疗HIV感染和AIDS,从 此抗艾滋病药物发展非常迅速，自1995年以来，每年都有2-3个新品种问世，目前 抗AIDS药物已成为抗病毒药物发展史上进展最快的一类药物。21世纪以来，研究 人员的视线已集中到很多新的靶点上，如反义核苷酸药物，融合抑制剂，各类编码 基因拮抗剂，新受体合成阻断剂等，它们具有药效明显，专一性强，不良反应低等 优点。新靶点药物，复方制剂药物和天然化合物已成为发展HIV药物的重要研究方 向。
目前至少有几十种新药在研制中，然而不幸的是这些新药同现有疗法一样，仍
然只是作用于病毒的酶-逆转录酶和蛋白酶，而不是病毒感染的细胞。治疗艾滋病多 以西药为主， 一般只是针对艾滋病病毒结构的某一点来发挥作用，而艾滋病病毒在 体内适应能力强、变异快，导致用单一的西药无法产生令人满意的效果。上面所提 到的所谓鸡尾酒疗法实际上就是将几种对艾滋病病毒有杀灭或抑制作用的西药混合 使用，使艾滋病病毒无法在短期内出现变异而发挥治疗作用。但这种治疗方法只能 在一定时间内发挥作用，且对机体的毒副作用大，价格昂贵，难以普及。当一些病 人停止药物治疗后，病毒载量可以反弹到比治疗前更高的水平，总之，由于药物的 毒性，持久治疗的困难性，随时间推移而出现的耐药毒株，缺少治疗HIV的新靶位， 以及治疗中对HIV的免疫反应降低等原因，我们必须寻找到战胜这种可怕疾病的药 物。
HIV侵犯CD4+细胞，导致CD4+细胞进行性损耗，引起机会性感染而发病，进 而死亡。根据艾滋病的发病特点是应当考虑免疫治疗的。但免疫治疗的候选药物很 多，选用什么样的免疫治疗药物以及什么样的药物与其他药物相互配互组成的药物 组合物及其适宜的剂型来预防和治疗艾滋病病毒感染未见相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种预防和治疗艾滋病病毒感染的药物组合物，该药物 组合物具有良好的协同作用，通过直肠粘膜的无创伤性给药，大大提高了其使用的 安全性和有效性，远远超过了经皮下或肌肉注射产生的抗病毒治疗效果，具有广泛 的应用和推广前景。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案
一种预防和治疗艾滋病病毒感染的药物组合物，其特征在于所述组合物的配 互包括至少一种免疫调节剂-免疫刺激剂，至少一种粘膜吸收促进剂，以及人血清白 蛋白和苯甲醇。
HIV侵犯CD4+细胞，导致CD4+细胞进行性损耗，引起机会性感染而发病，进而死 亡。根据艾滋病的发病特点是应当考虑免疫治疗的。本发明人经过大量的试验意外 的发现但至少一种免疫调节剂-免疫刺激剂和至少一种粘膜吸收促进剂组成的药物 组合物具有明显的配互和协同作用，对艾滋病病毒感染者具有明显的治疗作用。粘 膜吸收促进剂有利于直肠粘膜吸收，可延长药物在直肠粘膜停留的时间，扩开直肠 粘膜上皮的细胞间隙，促进直肠毛细管一时性扩张，促进粘膜的吸收，有利于增加 药物的生物利用度。
本发明中，所述的免疫调节剂-免疫刺激剂包括重组人白细胞介素、干扰素、胸 腺激素或Toll样受体刺激剂；所述的粘膜吸收促进剂为表面活性剂。
本发明中，选用重组人白细胞介素、干扰素、胸腺激素或Toll样受体刺激剂中 的一种或几种与粘膜吸收促进剂——表面活性剂具有良好的配互作用和协同作用， 对艾滋病病毒感染者具有良好的治疗作用。
本发明中，所述的重组人白细胞介素为重组人白细胞介素-2、重组人白细胞介
素-7或重组人白细胞介素-X;所述的干扰素为重组人干扰素0c2b或重组人干扰素0db;
所述的胸腺激素为人胸腺肽od;所述的Toll样受体刺激剂为TLR-3刺激剂。
重组人白细胞介素-2具有增强机体免疫调节的作用，特别是可使患者T淋巴细胞 数增加。
重组干扰素是一类广谱的抗病毒和免疫调节蛋白质，广泛用于抗病毒治疗。 胸腺肽a l已公认为特异性调节免疫失衡状态，增强免疫力最有效的免疫分子。 其免疫学活性包括(1)增强机体特异T细胞免疫储备能力。T细胞只有保证充足的 数量，才能在病毒、肿瘤入侵时产生特异、高效的清除作用。胸腺肽al的作用耙点 之一正是在T细胞的成熟过程；(2)调动特异性细胞免疫、体液免疫，增强巨噬细 胞功能，清除抗原(病毒、细菌、肿瘤等)，最终效应为促进特异性细胞免疫及体 液免疫过程，使免疫系统有效抑制并清除外来病原体；(3)恢复低下、受损的细胞 免疫、体液免疫功能。
Toll样受体(Tolllike rec印tors， TLRs)家族在病原体的识别和激活天然免疫 方面发挥着非常重要的作用。激活TLRs不仅可以诱导天然免疫应答，而且有利于特 异性免疫反应的发生，因而TLRs是天然免疫与获得性免疫之间的桥梁。TLRs如同天 然免疫的眼睛，监视与识别各种不同的PAMPs，是机体抵抗感染性疾病的第一道屏障。 在人类有TLR-l-lO，其中TLR-3涉及抗病毒的先天性免疫机制，TLR-3的刺激剂有poly 1: C等(见Sigma试剂目录)，有些公司在研制新的TLR-3刺激剂，如Hemispherx Bi opharma公司(AMEX: HEB)宣称已经正式向FDA提交关于实验性药物Amp 1 i gen (r)治 疗慢性疲劳综合征("CFS")的14个问题的详细的回答。FDA提出的问题跨越临床和临 床前的话题。除了局部应用皮肤癌症，目前尚无一种TLR型的化合物获得FDA的同意. Poly I: poly C12U (Ampligen(r))是一种实验性的治疗药物，是一类RNA，以求能 够商业化。
上述免疫刺激齐U-免疫调节剂与表面活性剂具有良好的配互作用和协同作用，对
艾滋病病毒感染者具有良好的治疗作用。
上述表面活性剂包括甘胆酸钠盐、皂角甙、壳聚糖、甘胆酸钠盐、9-十二烷基 醚(BL-9) 、 L甘胆酸盐或多乙氧基醚80中的一种或几种。
本发明中，所述的药物组合物还包括磷酸盐缓冲溶液，以保证所需pH值的稳定 性。根据不同组方配互，有的磷酸盐缓冲溶液的pH值为5.0-7.4，有的磷酸盐缓冲溶 液的pH值为7. 2-7. 4。
本发明中，所述的药物组合物的剂型为水剂或栓剂。将本发明所述的药物组合 物按照本领域技术人员常用的方法制备水剂或栓剂，由于肠粘膜富有淋巴组织，血 管丰富，药物可被直肠粘膜迅速吸收，约50%首次不经肝脏，直接进入血液，避免活 性药物引起的严重副反应；更由于肠淋巴组织丰富，能使药物发挥更大的治疗效果。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果
(1) 本发明的药物组合物之间具有明显的配互和协同作用，对艾滋病病毒感染 者具有良好的治疗作用；
(2) 本发明的药物组合物有利于直肠粘膜吸收，可延长药物在直肠粘膜停留的 时间，扩开直肠粘膜上皮的细胞间隙，促进直肠毛细管一时性扩张，促进粘膜的吸 收，有利于增加药物的生物利用度；
(3) 本发明药物组合物可被直肠粘膜迅速吸收，约50%首次不经肝脏，直接进 入血液，避免活性药物引起的严重副反应；更由于肠淋巴组织丰富，能使药物发挥 更大的治疗效果；
(4) 本发明药物经临床试验，对艾滋病病毒感染者显示出良好的疗效，而且安 全，可靠，副作用小，患者易于接受。
具体实施例方式
以下为本发明的具体实施方式
，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不 是限制本发明。
实施例l
根据肛门直肠的解剖结构使用特制的经肛门直肠粘膜给药器
采用2毫升(或5ml)无菌注射器，不用针头，取代以长约3.5厘米的尖端圆滑的 子弹头，内径细小，与小号针头内径相仿。
带有长约3.5厘米的尖端圆滑的子弹头的2毫升(或5ml)注射器(肛门直肠给药
器)预装l毫升药液，直接经肛门注入直肠，注射后，卧床10分钟。
实施例2
组合物成分之一 每毫升含
1. 重组人白细胞介素-2 (500万单位)
2. 壳聚糖0.5%，分子量为150kD，脱乙酰化85%以上
3. 甘胆酸钠盐1%
4. 人血清白蛋白2%
5. 苯甲醇O. 5%
实施例3
组合物成分之二 每毫升含
1. 重组人干扰素(IOOO万单位)
2. 重组人白细胞介素-2 (500万单位)
3. 皂角甙1%
4. 壳聚糖O. 5%
5. 人血清白蛋白2%
6. 苯甲醇O. 5%
7. 40mM的磷酸盐溶液缓冲液其pH 5. 5
实施例4
组合物成分之三 每毫升含
1. 重组人白细胞介素-2 (500万单位)
2. 1. 6毫克人胸腺肽ocl
3. 壳聚糖O. 51%
4. 甘胆酸钠盐1%
5. 人血清白蛋白2%
6. 苯甲醇O. 5%
7. 40mM的磷酸盐溶液缓冲液其pH 7. 2-7. 4
实施例5
组合物成分之四 每毫升含
1. 重组人白细胞介素-2 (500万单位)
2. 重组人干扰素ot2b或odb(1000万单位) 3.9-十二垸基醚(BL-9)
4. 壳聚糖O. 5%
5. 人血清白蛋白2%
6. 苯甲醇O. 5%
7. 40mM的磷酸盐溶液缓冲液其pH 7. 0
实施例6
组合物成分之五 每毫升含
1. 2毫克人胸腺肽al
2. 重组人白细胞介素-7(或X) (500万单位)
3. 30mrao1 / L甘胆酸盐
4. 多乙氧基醚80 1%
5. 人血清白蛋白2%
6. 苯甲醇O. 5%
7. 40mM的磷酸盐溶液缓冲液其pH 7. 2_7. 4
实施例7
组合物成分之六 每毫升含
1. TLR-3刺激剂(Poly I :C及其衍生物)
2. 重组人干扰素a2b或alb(1000万单位)
3. 9-十二烷基醚(BL-9) 0.5%
4. 人血清白蛋白2%
5. 苯甲醇O. 5%
6. 40mM的磷酸盐溶液缓冲液其pH 7. 2-7. 4
实施例8
重组人干扰素或白介素的制造工艺
本制造工艺是依据[卫药政字(90)第37号文批准]的《人用重组DNA制品质量控制 要点》结合本产品的特点制定。用于制造本品的菌种系将带有人干扰素基因或人白 介素的pBV 220质粒转化大肠杆菌DH 5a株。用80升发酵罐进行发酵。每次发酵前必 须进行一次空罐灭菌。发酵用的培养基为改进的LB培养基，用蒸馏水配制，其中不 含有任何抗生素，配制后进行实罐灭菌。灭菌后加入氨节青霉素使其终浓度为 100ug/ml。工程菌培养温度为30.0土0. rC，培养4-6小时，再升温到42。C表达重组 人干扰素oc2b。时间4-6小时。用离心方法集菌，在冰浴环境超声，破菌。离心收集 包涵体，变性，复性，经过一系列层析后，用0.22um滤膜过滤除菌，重组人干扰素 的比活性不低于1 X 108IU/mg蛋白，重组人白介素比活性不低于1 X 107IU/mg蛋白， 方可判定合格。纯度达95%以上。
实施例9
预装式直肠给药水剂的制作工艺
将在GMP车间生产的免疫调节剂/刺激剂，分析纯的促进粘膜吸收刺激剂，由GMP 车间生产的有SFDA批准生产文号的人白蛋白，分析纯苯甲醇，磷酸缓冲液，按上述 组方含量配互后，用自动分装机分装，每注射器筒预装l毫升，然后自动安装直肠套 管及包装。
实施例IO
肛门直肠粘膜栓剂的制作工艺
甘油45毫升，明胶20克，蒸溜水8毫升，混合均匀，在室温下放置3-5日，1210C 高压，30分钟，冷却至560C时加免疫调节剂/刺激剂，粘膜吸收刺激剂，白蛋白，苯 甲醇，磷酸缓冲液，控制加量为1.0-1.5毫升(要计算活性蛋白质的制定剂量/3.5毫
升)，再加0.7毫升二甲基亚(DMSO)，然后自动打压机分装。
实施例ll
采用上述实施例2的药物组合物进行临床试验的初步结果如下 目的探讨上述组合物通过直肠粘膜给药治疗HIV/AIDS患者的疗效。 方法通过直肠粘膜给予上述实施例2的药物组合物(内含IL-2 400-800万单 位)，每周一次，疗程1个月。
结果7例HIV/AIDS患者参与该治疗，全部为男性，年龄18-40岁，其中3例正在 接受抗逆转录病毒治疗。治疗1月后7例患者CD4+T细胞数无明显改变，但4例患者病 毒载量出现明显下降，下降幅度在0.4-2.01og左右。疗效显著。7例患者治疗后临床 症状明显改善，体力明显恢复，两例患者皮疹部分消失，l例出现类似免疫重建综合 征。
结论临床试验显示，上述组合物通过直肠粘膜给药治疗，对HIV/AIDS患者显 示出良好的疗效。而且安全，可靠，副作用小，患者易于接受。
本发明其他实施例的药物组合物进行上述临床试验，具有基本相似的结果。
权利要求
1、一种预防和治疗艾滋病病毒感染的药物组合物，其特征在于所述组合物的配互包括至少一种免疫调节剂-免疫刺激剂，至少一种粘膜吸收促进剂，及人血清白蛋白和苯甲醇。
2、 根据权利要求l所述的药物组合物，其特征在于所述的免疫调节剂-免疫刺激剂 包括重组人白细胞介素、千扰素、胸腺激素或Toll样受体刺激剂；所述的粘膜吸收 促进剂为表面活性剂。
3、 根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的重组人白细胞介素为重组人白细胞介素-2、重组人白细胞介素-7或重组人白细胞介素-X;所述的干扰素为 重组人干扰素a2b或重组人干扰素oclb;所述的胸腺激素为人胸腺肽ocl;所述的Toll 样受体刺激剂为TLR-3刺激剂。
4、 根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于所述的表面活性剂包括甘胆酸钠盐、皂角甙、壳聚糖、甘胆酸钠盐、9-十二烷基醚、L甘胆酸盐或多乙氧基醚80中 的一种或几种。
5、 根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物还包括磷酸 盐缓冲溶液。
6、 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述的磷酸盐缓冲溶液的pH值 为5. 0-7. 4或7.2-7.4。
7、 根据权利要求l-5任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物 的剂型为水剂或栓剂。
全文摘要
本发明涉及一种预防和治疗艾滋病病毒感染的药物组合物，该组合物的配互包括至少一种免疫调节剂-免疫刺激剂，至少一种粘膜吸收促进剂，及人血清白蛋白和苯甲醇。其中所述的免疫调节剂-免疫刺激剂为重组人白细胞介素、干扰素、胸腺激素或Toll样受体刺激剂；所述的粘膜吸收促进剂为表面活性剂。本发明药物组合物制备成水剂或栓剂，解决了免疫调节剂-免疫刺激剂经注射给病人带来的痛苦，通过直肠粘膜的无创伤性给药，大大提高了其使用的安全性和有效性，远远超过了经皮下或肌肉注射带来的治疗效果，具有广泛的应用和推广前景。
文档编号A61K9/08GK101391103SQ200810135329
公开日2009年3月25日 申请日期2008年7月31日 优先权日2008年7月31日
发明者侯云德, 可 张, 张丽兰, 张利萍 申请人:张 可;北京远策药业有限责任公司