专利名称：半边莲总黄酮有效组分及其制备方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一种中药半边莲的总黄酮有效 组分及制备方法及其在医药和保健食品领域的应用。
背景技术：
半边莲又名急解索、蛇舌草，为桔梗科植物半边莲"^W^
W&mw's Lour.)的带根全草。始载于《滇南本草》，后李时珍在 《本草纲目》中亦有记载。多生长于稻田岸畔、沟边或潮湿的荒地。 主产于安徽、江苏、四川、浙江等地。半边莲性味辛、平，具利尿消 肿、清热解毒之功效，临床主要用于治疗大腹水肿，面足浮肿，痈肿 疔疮，蛇虫咬伤，晚期血吸虫病腹水，各种癌症。半边莲为临床常用 中药，疗效显著，用药量大，然而对于半边莲化学成分及其制备方法 的专利及相关文章未见报道，我们对其进行系统研究，发现了其中主 要含有黄酮类，且为其主要有效组分。
发明内容
本发明的目的在于提供一种半边莲总黄酮有效组分及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种半边莲总黄酮有效组分与某 些碱或金属盐形成的金属盐类衍生物。
本发明的再一个目的在于提供一种半边莲总黄酮有效组分与某 些金属离子形成的金属络合物。
本发明的再一个目的在于提供半边莲总黄酮有效组分及其某些 降解产物、某些金属盐类衍生物和某些金属络合物的用途。
本发明提出的半边莲总黄酮有效组分，是从中药半边莲中提取的
含有多种黄酮类活性成分的组合，其中主要化合物结构如下
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化合物RlR2R3R4英文名
香叶木素HH .HCH3Diosmetin
白杨黄酮HHCH3H
木犀草素HHHHluteolin
香叶木苷Rha-gluHHCH3Diosmin
木犀草素lutedin-7-
7-0-P陽D-葡GluHHHO-p-D-gluco
萄糖苷side
0R2广o、 o、
化合物RlR2R3英文名称
芹菜素HHHELpigenin
芹菜素 國7-0-P-D-葡 萄糖苷GluHHapigenin-7-O-p-D誦 glucoside
蒙花苷 Rha-glu H CH3 linarin
<formula>formula see original document page 6</formula>橙皮苷(英文名hesperidin)
本发明所述原料半边莲，来源于桔梗科半边莲属的任意一种植 物。作为提取半边莲总黄酮的原材料，可以是市售半边莲，也可以是 这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根等任一部位或全部植株，其 中优选的药材部位为这些植物未的全草。
本发明所述的半边莲总黄酮有效组分，是指从上述任一植物的任 何部位提取得到的，包含多种黄酮类活性成分的组合物，其中优选的 是从丄o^"ac/K'"em/sLour.的全草，含有多种黄酮类活性成分的组合 物。这些黄酮类成分主要包括蒙花苷和香叶木苷以及以其为母核的糖 苷类化合物和其它衍生物。
作为半边莲总黄酮有效组分，其中各种黄酮类成分百分含量的总 和为5 100%(w/w)，其中优选的为50 100% (w/w)。
本发明所述的半边莲总黄酮有效组分，可以与某些碱如氢氧化 钠、氢氧化钾等以及钠盐、钾盐、钙盐、锌盐等金属盐如碳酸钠、碳 酸钾、碳酸钙、醋酸钠、醋酸锌等，形成金属盐类衍生物。这些衍生 物具有与上述半边莲总黄酮有效组分相同或相近的药理活性和用途。
本发明所述的半边莲总黄酮有效组分，还可以与钠、钾、钙、铁、 铝、锌、铜、钡、铬、锶等金属离子形成金属络合物。这些金属络合 物不仅具有与上述半边莲总黄酮有效组分相同或相近的药理活性或 用途，而且具有某些新用途，如铁络合物可以作为补铁剂，锌络合物 可以作为补锌剂，铬络合物可以用于防治糖尿病等。
在本发明所述的半边莲总黄酮有效组分所涵盖的各种黄酮类活 性成分之中，最主要的是芹菜素、木犀草素、香叶木素、白杨黄酮、
橙皮苷、木犀草素7-0-P-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0-P-D-葡萄糖苷、蒙
花苷、香叶木苷等。
本发明还提出了所述半边莲总黄酮有效组分的制备工艺，它可以 采用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备(l)溶剂 萃取法；(2)大孔吸附树脂法；(3)铅盐沉淀法；(4)超临界C(V流 体萃取法；(5)柱层析法；(6)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方 法为大孔吸附树脂法和聚酰胺色谱法。
在使用这些方法进行制备时， 一般包括以下几个步骤
(1) 提取所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及脂类溶 剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、 盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提 取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。
优选的提取工艺为半边莲药材加30 90%乙醇，回流提取2 3次, 每次提取1 2小时，溶剂用量为5 15倍量(L/kg)。
(2) 过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使 用以下任意一种澄清剂或其组合醇沉剂，明胶，高岭土，各种树脂， 聚乙二醇，聚乙三醇，壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、 ZTC+1天然澄清剂等。
(3) 浓縮包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及减
压、煎煮浓縮等。 .
(4) 干燥包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。 当采用溶剂萃取法进行制备时， 一般先将提取物混悬于水中，然
后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽 油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如 氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获 得其中的总黄酮成分，得到总黄酮有效组分。
当采用大孔吸附树脂法或聚酰胺色谱法进行制备时，所用的大孔
树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种
类型，这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同，如D101、 D4020、 HPD400、 AB-8、 S_8、 HZ-806等，其中优选的为弱极性或中等极性的 树脂，如AB-8、 HP廳、D101等。所用的聚酰胺为30-90目，所用 的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中优选的为0 100 %的乙醇。
优选的半边莲黄酮有效组分树脂纯化工艺为选用AB-8、 HPD400等 中等极性或弱极性大 L吸附树脂作为纯化用树脂活30-60目聚酰胺为纯 化用填料，半边莲乙醇提取物上样液浓度2 4mg/mL (以总黄酮量计)， 吸附流速3 9BV/h,树脂柱径高比1: 5 1:10，上样量为5 10mg/mL (以 总黄酮量计)，0 30%乙醇洗脱1 4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为 3 8BV/h，用40 90 %乙醇洗脱3 6倍树脂体积，洗脱流速为5 9 BV/h。
当采用铅盐沉淀法进行制备时，所用的铅盐试剂为醋酸铅或碱式 醋酸铅，所用的脱盐剂H2S、磷酸盐及硫酸盐等。
当采用超临界C(V流体萃取法进行制备时，可以对半边莲原材料 直接进行萃取，也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃 取。萃取时可以使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物水、 醇类、酮类及酯类溶剂。
当采用柱层析法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步骤 所获得的产物，也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐 沉淀法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是 硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(S印hadex系列或S印hadex LH-20 系列)、C-8、 C-18、活性炭、纤维素等，所用的洗脱液因固定相的不 同而不同， 一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油 醚等组成的混合溶剂。
当采用液-液逆流萃取法进行制备时，其处理的对象可以是上述 提取步骤的的产物，也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、 铅盐沉淀法或超临界萃取法初步纯化后的产物。 一般先将提取物混悬 于水中，然后用低极性的酯类、垸烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的 溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物， 萃取获得其中的总黄酮成分，得总黄酮有效组分。
该有效组分可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配 伍，用于制备药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶 囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏 剂、散剂、饮料等。
具体实施例方式
实施例l:半边莲总黄酮制备工艺
取半边莲lkg， 50%乙醇10L回流提取3次，每次提取1小时，减 压回收溶剂，得提取物，加水分散，使水溶液浓度为3. 84mg/mL (以总黄 酮量计)，以3000转/分钟的转速离心30min，取使上清液，，通过5LAB-8 大孔吸附树脂，吸附流速1.0mL/min，树脂柱径高比为1:8，上样量为 7.68mg/mL (以总黄酮量计)，10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂，除 杂流速为1.0 mL/min， 70%乙醇洗脱5倍树脂体积，洗脱流速为 2.0mL/min，收集70%乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即为半边莲总 黄酮有效组分，经测定总黄酮含量为59% 实施例2:半边莲总黄酮制备工艺
半边莲lkg， 60X乙醇15L，回流提取3次，每次提取1.5小时，回 收溶剂，提取物加水分散，使上样液浓度为3.84mg/mL (以总黄酮量计)， 使水溶液浓度为3. OOmg/mL (以总黄酮量计)，以3000转/分钟的转速离 心30min，取使上清液，，通过6L聚酰胺层析柱(30-60目)，吸附流速 1. OmL/min，树脂柱径高比为1: 7，上样量为7. OOmg/mL (以总黄酮量计)， 10%乙醇洗脱2倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1. 0 mL/min， 50%乙 醇洗脱4倍树脂体积，洗脱流速为2. OmL/min，收集50%乙醇洗脱液， 回收溶剂，减压干燥，即为半边莲总黄酮有效组分，经测定总黄酮含量 为62%。
实施例3:半边莲总黄酮制备工艺
半边莲lkg， 70X乙醇12L回流提取2次，每次提取2小时，回收
溶剂，提取物加水分散，使上样液浓度为3.84mg/mL (以总黄酮量计)， 使7jC溶液浓度为4. 00mg/mL (以总黄酮量计)，以3000转/分钟的转速离 心30min，取使上清液，，通过7LAB-8大孔吸附树脂，吸附流速1. OmL/min, 树脂柱径高比为l: 10,上样量为8.00mg/mL (以总黄酮量计)，水洗脱4 倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.0 mL/min， 90%乙醇洗脱4倍树脂 体积，洗脱流速为2.0mL/min,收集90%乙醇洗脱液，回收溶剂，减压 千燥，即为半边莲总黄酮有效组分，经测定总黄酮含量为65%。 实施例4:半边莲总黄酮制备工艺
半边莲lkg， 70X乙醇12L回流提取2次，每次提取2小时，回收 溶剂，减压干燥，干燥物加甲醇多次提取至无色，合并甲醇提取液，减 压回收溶剂，得甲醇萃取干浸膏，加水分散溶解，使上样液浓度为 3.84mg/mL (以总黄酮量计)，通过7LAB-8大孔吸附树脂，吸附流速 1. OmL/min，树脂柱径高比为1: 9，上样量为7. 68mg/mL (以总黄酮量计)， 水洗脱4倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1. 0 mL/min， 90%乙醇洗脱 4倍树脂体积，洗脱流速为2. OmL/min，收集90%乙醇洗脱液，回收溶剂， 减压千燥，即为半边莲总黄酮有效组分，经测定总黄酮含量为70%。 实施例5:半边莲总黄酮片的制备
半边莲总黄酮有效组分 100g
淀粉 100g
上述组分混合均匀，装入硬明胶胶囊中，共iooo粒胶囊。
实施例6:半边莲总黄酮复方制剂的制备
半边莲总黄酮有效组分 100g 白花蛇舌草有效组分 200g 半枝莲有效组分 1000g 上述组分混合均匀，装入硬明胶胶囊中，共1000粒胶囊。
权利要求
1、一种总黄酮有效组分，其特征在于该有效组分由中药半边莲中提取获得，并含有以下黄酮类成分香叶木苷、蒙花苷、芹菜素，木犀草素，白杨黄酮，橙皮苷，木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，香叶木素等。
2、 如权利要求1所述的半边莲总黄酮有效组分，其特征在于半边莲为市售半边莲或半边莲属任一种植物的全部植株或任何部位根、茎、叶、花穗、果实等。
3、 如权利要求1所述的半边莲总黄酮有效组分，其特征在于上 述总黄酮类成分含量总和以重量计为5 100%,其中优选的为50 100%。
4、 如权利要求1所述的半边莲总黄酮有效组分，其特征在于上 述黄酮类成分，还包括与钠盐、钾盐、钙盐、锌盐等金属盐形成的金 属盐类衍生物以及与钠、钾、钙、铁、铝、锌、铜、钡、铬、锶等金 属离子形成金属络合物。
5、 如权利要求1 4所述的半边莲总黄酮有效组分，其特征在于 采用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备1溶剂萃取法；2大孔吸附树脂法；3聚酰胺色谱法；4铅盐沉淀法；5超 临界C02萃取法；6柱层析法；7液-液逆流分配色谱法。
6、 如权利要求5所述的半边莲总黄酮有效组分制备方法，其特征在于，在使用这些方法进行制备时，包括以下一个或几个步骤提取所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及脂类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂；提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等；过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任一种澄清剂或其组合醇沉剂，明胶，高岭土，各种树脂，聚乙二醇，聚乙三醇，壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1 天然澄清剂等；浓縮包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及减压、煎 煮浓縮等；干燥包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
7、 如权利要求5所述的半边莲总黄酮有效组分制备方法，其特 征在于当使用大孔吸附树脂法时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱 极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任何一种类型，这些树脂的代号 由于生产厂家不同而不同，如D101、 D4020、 HPD400、 HPD826、 AB-8、 S-8、 HZ-806等，所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等； 当使用聚酰胺色谱法时，所用的聚酰胺为30-90目，所用的洗脱剂为 水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。
8、 如权利要求5所述的半边莲总黄酮有效组分制备方法，其特 征在于当使用溶剂萃取法时，所用的溶剂为水和含水的乙醇、甲醇、 丙酮以及丙醇、丁醇等溶剂。
9、 如权利要求7、 8所述的半边莲总黄酮有效组分制备方法，其 特征在于选用AB-8、 HPD400等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作或聚 酰胺为纯化用填料，半边莲乙醇有效组分以总黄酮量计的上样液浓度2 4mg/mL，吸附流速3 9BV/h，树脂柱径高比1:5 1:10，以总黄酮量计 的上样量为5 10mg/raL, 0 30%乙醇洗脱1 4倍树脂体积进行除杂， 除杂流速为3 8BV/h，用40 90%乙醇洗脱3 6倍树脂体积，洗脱流 速为5 9BV/h。
10、 如权利要求l、 4所述的有效组分的应用，其特征在于，该有效 组分可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，用于制备 药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、 丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等c
全文摘要
本发明公开了一种从中药半边莲中提取得到的总黄酮有效组分及其制备方法。该制备物主要包括芹菜素、木犀草素、香叶木素、白杨黄酮、蒙花苷、香叶木苷以及以其为母核的糖苷类化合物和其它衍生物，可由大孔吸附树脂法、聚酰胺色谱法、溶剂萃取法等多种方法制备获得。
文档编号A61K9/10GK101347491SQ200810135340
公开日2009年1月21日 申请日期2008年8月1日 优先权日2008年8月1日
发明者斌 刘, 姜艳艳, 莹 戴, 王秋莹, 石任兵 申请人:石任兵