专利名称：一种透明质酸-几丁糖生物膜的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种透明质酸-几丁糖生物膜的制备方法。
背景技术：
透明质酸(Hyaluronic Acid，简称HA)凝胶广泛应用于眼科、骨科、妇外科、整 形外科等领域，其在临床已有十多年的历史，其的安全性及有效性得到了医学各界的普 遍认可。天然的外源性的透明质酸分子量大约在10万 500万Dalton，在体内的存留时 间大约在3~15天左右，很大程度上限制了其在某些领域的应用。
几丁聚糖是生物界仅次于纤维素的第二大类多糖，国内外研究已经证实几丁聚糖j: 有生物粘附性和多种生物活性，包括几丁聚糖能够促进上皮细胞的生长，抑制成纤维细 胞的增殖，抑制肿瘤细胞的增殖，抑制细菌等微生物的生长，促进组织创面的修复等多 种作用。
青光眼是我国首位的不可逆性致盲眼病，手术仍是我国抗青光眼质量的首选策略。 但是，山于生物故有的创伤愈合机制，青光眼术后滤过通道的瘢痕化是青光眼手术治疗 成功的最大障碍。近几年来针对原发性开角型青光眼所设计的新的手术——非穿透小梁 切除术联合SK胶植入在临床上得到了广泛的应用，其中SK胶的植入起到了机械支撑滤 过通道的作用，SK胶成分为交联透明质酸钠，在滤过手术后的早期，维持了滤过通道， 由于房水的持续流动，在一定程度上也延缓和抑制了成纤维细胞的生长，提高了手术成 功率。
交联透明质酸凝胶是透明质酸与交联剂的交联产物，具有良好的生物相容性及良好 的生物可降解性，根据交联透明质酸凝胶的上述性质，将其应用于防粘连、骨关节润滑、药物缓释制剂及组织填充剂等领域。
发明内容
本发明的目的是提供一种透明质酸一几丁糖生物膜的制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明的方法包括如下歩骤
(1) 取纯化好的无菌无热原的透明质酸、羧甲基壳聚糖、聚乙烯醇，三者质量比为7-8: 1-2: 1-2,溶于水中；
(2) 按计算好的量加入交联剂丁二醇二缩水甘油醚溶液，搅拌均匀。
(3) 流涎法制膜。
(4) 真空干燥器中干燥。
(5) 膜干后，无菌刀片切成小块。
(6) 无菌包装，用时放在pH7.4的PBS缓冲液中浸泡。所说的透明质酸的分子量为100万 300万道尔顿；透明质酸溶液中，交联剂的浓度为0.0002 0.02g/mL;
所说的交联剂选自用具有2个以上官能团的化合物，其官能团可以与透明质酸分子所具有的羧基、羟基、乙酰氨基等反应性官能团反应并形成共价键的官能团；
优选的，所说的交联剂为环氧化物、酸、二缩水甘油醚或二乙烯砜等中的一种以上，考虑到交联剂对人体的副作用并结合LD50指标，最优选毒性较小的1， 4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)。
本发明中，交联剂的使用量没有特别限制，但考虑到交联透明质酸凝胶的生物体适应性，优先选用尽可能少量的交联剂进行交联反应，交联剂在混合物中的浓度优选为0.0002~0.02g/mL;
所说的透明质酸是由N-乙酰氨基葡糖-D-葡萄糖醛酸为双糖单位组成的直链高分子多糖，包括透明质酸钠、透明质酸镁或透明质酸钙等；
本发明中，透明质酸原料选用细菌发酵法生产或组织提取的均可，为降低抗原性，优先选用细菌发酵法原料，采用如透明质酸及其发酵生产概述(郭学平等)的方法；
本发明利用透明质酸和几丁糖的生物特性，合成透明质酸-几丁糖生物膜，该生物膜既具有国外产品SK胶在滤过手术通道的机械支撑作用，同时又具有抑制成纤维细胞增殖的作用，并且原材料价格低廉，产品成本大大低于国外进口产品，将会有利于青光眼滤过手术成功率的提高和非穿透小梁手术的广泛推广开展，并且会降低患者的医疗费用。
具体实施例方式
以下给出本发明的实施例，进一歩对本发明进行详细说明，但本发明并不限于此。
实施例1
取纯化好的无菌无热原的透明质酸2g、羧甲基壳聚糖0.25g、聚乙烯醇0.25g，溶于水中；
加入交联剂丁二醇二缩水甘油醚1。/o溶液6.5ml，加水至100ml，搅拌均匀。
流涎法制膜。
真空干燥器中干燥。
膜干后，无菌刀片切成小块。
无菌包装，用时放在pH7.4的PBS缓冲液中浸泡。
实施例2
取纯化好的无菌无热原的透明质酸1.5g、羧甲基壳聚糖0.15g、聚乙烯醇0.15g，溶于水中；
加入交联剂丁二醇二縮水甘油醚P/。溶液5ml，加水至100ml，搅拌均匀。流涎法制膜。
真空干燥器中干燥。
膜干后，无菌刀片切成小块。
无菌包装，用时放在pH7.4的PBS缓冲液中浸泡。
实施例3实施例2
取纯化好的无菌无热原的透明质酸2g、羧甲基壳聚糖0.15g、聚乙烯醇0.15g，溶于水中；
加入交联剂丁二醇二縮水甘油醚in/o溶液5ml，加水至100ml，搅拌均匀。流涎法制膜。真空干燥器中干燥。膜干后，无菌刀片切成小块。无菌包装，用时放在pH7.4的PBS缓冲液中浸泡。
权利要求
1.一种透明质酸-几丁糖生物膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1)取纯化好的无菌无热原的透明质酸、羧甲基壳聚糖、聚乙烯醇，三者质量比为8∶1∶1，溶于水中；(2)按计算好的量加入交联剂丁二醇二缩水甘油醚溶液，搅拌均匀。(3)流涎法制膜。(4)真空干燥器中干燥。(5)膜干后，无菌刀片切成小块。(6)无菌包装，用时放在pH7.4的PBS缓冲液中浸泡。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的透明质酸的分子量为150万 300万道尔顿。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，透明质酸溶液中，交联剂的浓度为 0扁2 0.02g/mL。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的交联剂为l， 4-丁二醇二缩水 甘油醚。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，交联剂在混合物中的浓度为 0.0002 0.02g/mL。
6. 根据权利要求1 6任一项所述的方法，其特征在于，选用细菌发酵法生产的透 明质酸或组织提取的透明质酸。
7. 根据权利要求1 6任一项所述的方法，其特征在于，透明质酸为透明质酸钠、 透明质酸镁或透明质酸钙。
8. 根据权利要求1 8任一项所述方法制备的交联透明质酸凝胶。
全文摘要
本发明提供了一种透明质酸-几丁糖生物膜制备方法，该生物膜含有透明质酸和羧甲基壳聚糖，是将透明质酸、羧甲基壳聚糖和聚乙烯醇经交联剂发生交联反应而制备的。本发明具有良好的生物相容性及较长的半衰期，将会有利于青光眼滤过手术成功率的提高和非穿透小梁手术的广泛推广开展。
文档编号A61L31/14GK101676000SQ20081020014
公开日2010年3月24日 申请日期2008年9月19日 优先权日2008年9月19日
发明者玲 丁, 任彩霞, 孔淑静 申请人:上海建华精细生物制品有限公司