高密度脂蛋白样肽磷脂支架("hpps")纳米颗粒的制作方法

专利名称：高密度脂蛋白样肽磷脂支架("hpps")纳米颗粒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种基于肽稳定化超小纳米颗粒的药物递送系统，该药物递送系统 允许用于检测和治疗(处理)癌症和其他疾病的活性剂的靶向递送。所述活性剂可以位 于纳米平台的核心或表面，而细胞表面受体配体附着于所述纳米平台的表面。
背景技术：
纳米平台纳米平台是纳米级(纳米尺度)结构，该结构被设计为一般平台以形成不同组 的多功能诊断和治疗装置。这样的纳米级装置通常具有小于IOOnm的尺寸，由此大小 与其他生物实体相当。它们小于人类细胞(人类 细胞的直径为10,000到20,OOOnm)和 细胞器，并且大小类似于较大的生物大分子，如酶和受体。血红素(血红蛋白)的直 径，例如为大约5nm，而围绕细胞的脂质双层为大约6nm厚。小于50nm的纳米级装 置可以容易地进入大多数细胞，而那些小于20nm的纳米级装置可以运送出血管(NIH/ NCI CancerNanotechnology.NZH Publication No 04-5489 (2004))。结果，纳米装置可以 经常以不改变那些分子的行为和生物化学性质的方式在细胞表面上和细胞内部与生物分 子容易地相互作用。因此，纳米装置提供了通过其观察和操纵基础生物途径和过程的完 整地独特优势。迄今为止报道的大多数多功能纳米平台由合成的纳米结构制成，如树枝 状高分子(树形化合物)(球状，支化聚合物)(Quintana，A.et al Journal of the American Chemical Society.2003 125(26) : 7860-5)、聚合(Xu，H., Aylott, J.W.&Kopelman， R.Analyst.2002 Nov ； 127(11) 1471-7, Pan, D.，Turner, J.L.&Wooley， K.L.ChemicalCommunications, 2400-2401(2003))禾Π 陶瓷(Kasili，P.M., Journalofthe American Chemical Society.2004 126(9) 2799-806，Ruoslahti, E.Cancer Cell.2002 ； 2 (2) 97-8)纳米颗粒、全氟化碳乳剂(Anderson，S.A.et al.，Magnetic Resonance in Medicine.2000 Sep ； 44(3) 433-9)和交联脂质体(Hood, J.D.et al., Science.2002 ； 296(5577) 2404-7, Li, L.etal.，International Journal of Radiation Oncology, Biology， Physics.200415 ； 58(4) 1215—27)。在这些合成纳米平台设计中的一个常见问题是生物相容性问题，其与短期和长 期毒性密切相关。天然纳米结构可以为该生物相容性问题提供一种解决方案。然而，由 天然存在的纳米结构制成的纳米平台是稀少的。对于理想的纳米平台的一些特征如下1)均一的尺寸分布(< IOOnm) ； 2)较 大的有效载荷；3)对于高结合亲和力的多效价；4)经由模块性和多功能性的平台技术； 5)稳定和长期的循环时间；以及6)生物相容的、生物可降解的和无毒的。虽然一些现 有的合成纳米平台符合这些标准中的一些，但是这些纳米平台设计中的一个常见问题是 生物相容性问题，其与短期和长期毒性密切相关。天然纳米结构可以为生物相容性问题 提供一种解决方案。然而，由天然存在的纳米结构制成的纳米平台是少见的。在一个实 例中，来自豇豆花叶病毒和兽棚病毒的空RNA病毒胶囊用作潜在的纳米装置(RajaK.S.etal.，Biomacromolecules 2003 ； 4(3) 472-6)。前提是装配入功能性病毒胶囊的60个拷
贝的外壳蛋白提供了宽范围的化学功能性，其可以用于将归巢(寻靶，homing)分子-如 单克隆抗体或癌细胞-特异性受体拮抗剂和报道分子-如磁共振成像(MRI)对比剂(造 影剂)附着至胶囊表面，并且用于将治疗剂加载到胶囊内。不幸的是，即使人体对植物 来源的病毒具有相当的容忍性；与这些纳米装置相关的免疫结果还是不期望的。在另一实例中，脂蛋白纳米平台用于活性剂的靶向递送(PCT申请公开号WO 2006/073419 (
公开日2OO6 年 7 月 I3 日))。靶向递送虽然特定病理的结果在整个受折磨的人的身体中经常是明显的，但是通常，潜 在的病理学可以仅影响单一器官或组织。然而，少见的是，药物或其它治疗将仅靶向患 病的器官或组织。更常见地，治疗导致不期望的副作用，例如，由于遍及患者身体的广 泛的毒性作用。期望的是选择性靶向器官或组织，例如，用于与靶器官或组织相关的疾 病的治疗。还期望的是选择性靶向身体内相对正常组织的癌组织。大多数治疗物质通过循环被递送至靶器官或组织。衬在血管的内表面的内皮是 在靶器官或组织中循环治疗物质所遇到的第一细胞类型。这些细胞提供了用于将治疗选 择性引导至器官或组织的靶标。内皮在不同组织中可以具有不同的形态和生物化学标记物。淋巴系统的血管， 例如，表达各种粘附蛋白，其用于指导淋巴细胞归巢。例如，存在于淋巴结中的内皮细 胞表达作为用于L-选择蛋白的配体的细胞表面标记物，而集合淋巴小结小静脉中的内皮 细胞表达用于α4β7整联蛋白的配体。这些配体涉及特定淋巴细胞归巢到它们各自的淋 巴器官。因此，将药物连接到L-选择蛋白或连接到α 4β7整联蛋白可以提供用于将所述 药物分别靶向到患病的淋巴结或集合淋巴小结的方式，只要这些分子不结合到在显著数 量的其他器官或组织中存在的类似配体。淋巴细胞循环的一些观察表明存在器官和组织 特异性内皮标记物。类似地，特定类型的肿瘤细胞归巢或转移到特定器官或组织进一步 表明存在器官和组织特异性标记物。需要靶向递送至特定组织，包括癌组织，以消除与非特异性递送相关的不期望 的副作用。认识到对于特异性地靶向期望的组织的递送载体的迫切需求，本申请的发明人 开发了一种基于独特的肽稳定化超小纳米颗粒的药物递送系统，其多功能性使其可用于 各种应用。

发明内容
根据本发明的一个方面，提供了一种非天然存在 的肽-脂质纳米支架，其包括 至少一种磷脂、至少一种不饱和脂质(优选不饱和固醇酯、进一步优选不饱和胆固醇 酯、进一步优选胆固醇油酸酯)和至少一种肽，所述肽包括能够形成至少一个两亲性 α-螺旋的氨基酸序列；其中使前述成分关联以形成肽-磷脂纳米支架。在特别的实施 方式中，所述肽选自由类别Α、H、L和M两亲性α-螺旋、其片段、以及包括类别Α、 H、L和M两亲性α-螺旋的反向肽序列的肽、或其片段组成的组。优选地，所述肽-脂质纳米支架进一步包括至少一种归巢分子。在一个方面，所述归巢分子可以共价连接至所述至少一种肽(优选地在氨基酸处，特别是赖氨酸，在 两亲性α-螺旋的亲水面与疏水面之间的过渡处或附近)和所述至少一种脂质之一。在 另一方面，所述肽_脂质纳米支架包括至少一种活性剂。在一个方面，所述至少一种归巢分子为至少一种活性细胞表面受体配体。根据另外的方面，提供了一种包括本文描述的非天然存在的肽-脂质的药物剂 型(配方)。根据另外的方面，提供了一种制备本文描述的非天然存在的肽-脂质纳米支架 的方法，包括在适合于形成所述肽-脂质纳米支架的条件下合并(组合，结合)其成分。根据另外的方面，提供了一种非天然存在的肽-脂质纳米支架，包括至少一种 磷脂、至少一种不饱和固醇酯(优选不饱和胆固醇酯、进一步优选胆固醇油酸酯)、至少 一种肽、至少一种归巢分子和至少一种包括双链RNA的活性剂；其中所述活性细胞表面 受体配体共价连接至所述至少一种肽，并且使前述成分关联以形成肽_磷脂纳米支架。 在一个方面，所述双链RNA为siRNA。


图1本发明的基于肽-稳定化超小纳米颗粒的药物递送系统的实施方式的示意 图。图2用于并入HPPS纳米颗粒中以用于诊断和/或治疗应用的化合物。 图3用于制备EGFp- (DiR-BOA) -HPPS (类型IEGFR-靶向的HPPS)的合成方案。图4用于制备(DiR-BOA) HPPS (类型2EGFR-靶向的HPPS)的合成方案。图5未靶向的DiR-BOA加载的HPPS的FPLC、DLS和CD。图 6EGFp (DIR-BOA) -HPPS 的 FPLC 分布和 TEM。图7DiR_BOA加载对HPPS大小的影响。A 制剂#1和#2的FPLC分布；B 从FPLC收集的部分。C HPPS大小与货物有效载荷之间的关联(R = 0.91)。图 8 (a) FPLC 分布和(b)与 4F 和-4F 形成的(DiR-BOA) HPPS 的 TEM。图9EGFp (DiR-BOA) -HPPS的共聚焦成像研究。图10通过流式细胞术的EGFp (DiR-BOA) -HPPS的时间-依赖性摄取。图1 IEGFp (DiR-BOA) HPPS 的抑制研究。图12EGFp(DiR-BOA)-HPPS 的体内成像研究。图13通过流式细胞术的EGFp-脂质(DiR-BOA)HPPS在A549与H520细胞中 的时间依赖性摄取。图14在具有不同水平的EGFR表达的细胞系中EGFp-脂质(DiR-BOA)HPPS的
时间_依赖性摄取的流式细胞术研究。图 15 通过 EGFp 的 EGFp (DiR-BOA) HPPS 和 EGFp-脂质(DiR-BOA) HPPS 的
摄取抑制的流式细胞术研究。图16通过MTT和流式细胞术研究的EGFp-脂质(DiR-BOA) HPPS的初步毒性
研究。a)通过MTT分析研究的细胞存活能力显示在甚至6倍的HPPS对照处(在所有先 前的体外研 究中使用的标准剂量)没有毒性；b)通过流式细胞术研究的细胞存活能力显示在6倍的HPPS对照处没有毒性；C)通过流式细胞术研究的HPPS细胞摄取显示在2倍 的HPPS对照处(标准剂量)摄取饱和。图17具有EGFp-脂质(DiR-BOA) HPPS (i.v.)的MTl肿瘤异种移植物的体内成
像。箭头指示肿瘤。
图18在具有人类肺原发肿瘤异种移植物的小鼠中EGFp-脂质(DiR-BOA)HPPS 的体内成像，表明EGFR-靶向特异性。图19利用KB(叶酸受体阳性)和HT1080(叶酸受体阴性)癌细胞中的叶酸受 体-靶向的HPPS的共聚焦成像研究。注意绿色来自DiR-BOA荧光，而蓝色来自DAPI 核染色)。图20多成分荧光标记。HPPS颗粒的每种成分(肽、磷脂、核心货物)可以用 荧光标签标记用于详细的颗粒表征和颗粒降解的评估。图21 (a)ldlA(mSR-Bl)和LdLA7细胞的SR-Bl受体含量的蛋白质印迹分析。(b) (DiR-BOA)HPPS对于SR-B1受体的特异性。共聚焦图像显示(DiR-BOA) HPPS在SR-Bl阳性细胞(ldlA(mSR-Bl))中的强摄取，但是在SR-Bl阴性细胞 (LDLA7)中不存在。此外，过量的HDL有效地抑制IdlA(mSR-Bl)细胞中的(DiR-BOA) HPPS摄取，但是对于LDLA7中的摄取没有影响。图 22 禾Ij 用 FITC-月旨质(DiR-BOA)HPPS 禾口 FITC_(-4F) (DiR-BOA) HPPS 禾口 ldlA(mSR-Bl)细胞的共聚焦成像研究。图23 利用 FITC- (_4F) (DiR-BOA) HPPS 和 IdlA(mSR-Bl)细胞的共聚焦成像研允。图24流式细胞术研究用于评估SR-Bl+和SR-ΒΓ细胞系中(DiR-BOA) HPPS的摄取。图25流式细胞术研究用于评估SR-Bl+细胞系中(DiR-BOA)HPPS浓度-依赖 性的摄取。图26流式细胞术研究用于评估SR-Bl+细胞系中(DiR-BOA)HPPS摄取的HDL 浓度_依赖性的抑制。图27流式细胞术研究用于评估SR-Bl+和SR-ΒΓ细胞系中(DiR-BOA) HPPS的 差异摄取和SR-Bl+细胞系中(DiR-BOA)HPPS摄取被HDL的抑制。图28 流式细胞术用于评估(-4F) (DiR-BOA)HPPS 与(4F) (DiR-BOA)HPPS 被 ldlA(mSR-Bl)细胞的摄取。图29在具有人类KB(SR-Bl+)肿瘤异种移植物的裸鼠上进行体内成像以研 究-4F (DiR-BOA) HPPS 的定位。图30(a)进行共聚焦研究以评估(-4F) EGF (DiR-BOA) HPPS 和(-4F) (DiR-BOA)HPPS在A549和H520细胞中的差异摄取。(b) A549和H520细胞的表面受体分布的蛋白质印迹分析。图31使用流式细胞术来评估(DiR-BOA)HPPS禾Π EGF(DiR-BOA) HPPS (1.0 μ Μ)被 Η520、Α549 和 EGFR-GFP-A549 细胞的摄取。图32在转染有EGFR-绿色荧光蛋白(GFP)的融合基因的LDLA7细胞中进行 EGF-HPPS研究。该实验去除SR-Bl可能对EGF-HPPS的细胞摄取具有的任何贡献。在用(-4F) EGF (DiR-BOA) HPPS孵育3小时后，EGFR_GFP_LDLA7细胞呈现出细胞溶质 内的DiR-BOA的强信号，表明EGF-HPPS通过EGFR的急切摄取。对于EGFR的GFP
信号在外质膜上被可视化。图33进行共聚焦研究以评估HDL对(_4F) EGF (DiR-BOA) HPPS在 EGFR-GFP-LDLA7细胞中的摄取的作用。图34 用 EGF (DiR-BOA) HPPS 孵育的 EGFR-GFP-A549 和 H520细胞的共聚焦成像。图35进行共聚焦研究以评估HDL对(_4F) EGF (DiR-BOA) HPPS在A549和H520
细胞中的摄取的作用。图36在具有双肿瘤(A549和H520)的裸鼠上进行体内成像以确定(_4F) EGF (DiR-BOA) HPPS 的靶向能力。图37 (-4F)EGF (DiR-BOA)HPPS的体内确认。体内成像(A)和生物分布(B) 显示HPPS的改善的递送特异性和效能。C)HPPS匹配HDL的长循环时间(tl/214h)。 D) HPPS荧光信号(DiRBOA)在肿瘤组织中的积聚匹配肿瘤细胞荧光(转染有红色荧光蛋 白)。图38KB肿瘤和H520肿瘤中(_4F) EGF (DiR-BOA) HPPS的细胞摄取。白色条 代表每mg组织的荧光单位，而黑色条代表每百万个细胞的荧光单位。数据反映了来自两 个具有肿瘤的小鼠的平均值。
具体实施例方式图1示出了本发明的实施方式。具体地，图1示出了基于肽-稳定化超小纳米颗 粒的药物递送系统，称为“HPPS”(高密度脂蛋白样肽-磷脂支架)，其允许用于检测和 治疗癌症和其它疾病的活性剂的靶向递送。所述HPPS纳米颗粒包括三种成分1)特异 性两亲大小-对照肽(scPep)和磷脂，其形成超小纳米载体(5至25nm)，2)疾病-特异性 靶向配体，其可以被直接结合至纳米载体上的scPep、结合至纳米载体上的表面磷脂、或 者疾病-特异性靶向配体如蛋白质或其片段，其可以被并入所述纳米载体中而无需结合 至scPep或磷脂(图1中未示出)，以及3)诊断或治疗剂，加载在所述纳米载体核心内或 并入所述纳米载体内使得它们被显示在纳米载体的表面上。为了形成优选的球状纳米颗 粒，不饱和固醇酯也被合并在其中。多种靶向可以通过将一些靶向配体，如肿瘤-归巢 分子(例如，叶酸)，结合至暴露在肽的表面上的可结合的氨基酸如赖氨酸残基来实现。 HPPS纳米颗粒因此靶向癌症和/或特定组织的期望的细胞表面标记物处，即，在各种类 型的癌细胞或组织中选择性过度表达的分子。在特定的实施方式中，HPPS纳米颗粒提 供了活性剂，包括但不限于，诊断剂、成像剂(显像剂，显影剂)和/或治疗剂的靶向递 送。这样的试剂包括，但不限于，磁共振成像(MRI)剂、近红外荧光(NIRF)探针和 光动力学治疗(PDT)齐U。在特定的实施方式中，HPPS脂质核心内的胆固醇酯被亲脂性药剂代替。在另外 的实施方式中，活性剂连接至本发明的HPPS纳米颗粒的表面。因此，MRI/NIRF探针在靶细胞中的积聚提供了一种用于MRI/NIRF可检测信号的扩大的容易的机制并提供了结合MRI (高分辨率/解剖)和NIRF (高敏感性)的强度的 机会，而经由这些途径将PDT剂选择性地递送至肿瘤也提供了检测与治疗之间的容易的 过渡。最后，HPPS纳米颗粒不期待是免疫原性的，并应当避免被网状内皮系统识别，因 此HPPS平台提供了一种与大多数合成纳米装置相关的常见问题，即生物相容性和毒性的 解决方案。术语“纳米 颗粒”、“纳米平台”和“纳米支架”在本文中可互换地使用。本发明提供了包括脂质如磷脂酰胆碱(如DMPC (优选1，2-二肉豆蔻酰in-甘 油-3-磷酸胆碱)、POPC (1-棕榈酰-1-油酰基-磷脂酰胆碱)和EYPC (卵黄磷脂酰胆 碱))、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、和磷脂酰肌醇的HPPS纳米颗 粒。天然存在的脂蛋白颗粒每个具有特有的脱辅基蛋白、以及一定百分比的蛋白、 三酰甘油、磷脂和胆固醇。VLDL颗粒可以包含约10%蛋白、约60%三酰甘油、约18% 磷脂和约15%胆固醇。LDL颗粒可以包含约25%蛋白、约10%三酰甘油、约22%磷脂 和约45%胆固醇。HDL颗粒可以包含约50%蛋白、约3%三酰甘油、约30%磷脂和约 18%胆固醇。同样地，本发明的HPPS纳米颗粒包含不同百分比的上述组分。HPPS纳 米颗粒还可以包含一个或多个三酰甘油。HPPS纳米颗粒可以另外包含固醇、固醇酯、或 其组合。在另外的实施方式中，固醇或固醇酯选自由胆固醇、胆固醇油酸酯和不饱和胆 固醇-酯组成的组。在特定的实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含靶向在癌细胞中过度表达的 受体的细胞表面受体配体。在另外的实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含作为对 于心血管斑块中过度表达的受体的配体的细胞表面受体配体。在另外的实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含靶向特定组织上的受体的细 胞表面受体配体。在一些实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含在HPPS纳米颗粒的核心内的 亲脂性化合物。在一些实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含(部分)位于HPPS纳米颗粒 的表面上的活性剂，所述活性剂是包含亲脂性和亲水性成分的分子。在特定的实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含作为诊断剂、成像剂或治疗 剂的活性剂。优选地，所述成像或诊断剂为对比剂、放射性标记和/或荧光标记。 在一些实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含抗癌剂。这样的活性剂可以为 化疗剂、光动力学治疗剂、硼中子俘获治疗剂或用于放射治疗的放射性核。在实施方式 中，所述抗癌剂选自由烷基化剂(烷化剂)、蒽环类药、抗生素、芳香酶抑制剂、双磷酸 盐类、环加氧酶抑制剂、雌激素受体调节剂、叶酸拮抗剂、无机砷酸盐、微管抑制剂、 修饰剂、亚硝基脲Cnitrosureas)、核苷类似物、破骨细胞抑制剂、含钼化合物、类维生素 A、拓扑异构酶1抑制剂、激酶抑制剂(诸如，但不限于酪氨酸激酶抑制剂)、抗血管生 成剂、表皮生长因子抑制剂和组蛋白脱乙酰基酶(脱乙酰基转移酶)抑制剂组成的组。在另外的实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含选自由抗青光眼药、抗凝 齐U、消炎药、平喘药、抗生素、抗真菌药或抗病毒药组成的组中的治疗剂。在另外的实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含选自以下的组中的治疗剂，所述组包括，但不限于止痛剂、麻醉剂、抗心绞痛剂、抗风湿剂、抗心律失常剂、平 喘剂、抗菌剂、抗-BPH剂、抗癌剂、抗胆碱剂、抗凝血剂、抗惊厥剂、抗抑郁剂、抗 糖尿病剂、止泻剂、抗癫痫剂、抗真菌剂、抗痛风剂、抗驱虫剂、抗组胺剂、抗高血压 齐IJ、消炎剂、抗疟剂、抗偏头痛剂、抗毒蕈碱剂、止恶心剂、抗肿瘤剂、抗肥胖剂、抗 骨质疏松剂、抗帕金森病剂、抗原虫剂、止痒剂、抗精神病剂、退热剂、止痉挛剂、抗 甲状腺剂、抗结核剂、止咳剂、抗溃疡剂、抗尿失禁剂、抗病毒剂、抗焦虑剂、食欲抑 制剂、注意力缺陷障碍(ADD)和注意力缺陷过动症(ADHD)药、钙通道阻滞剂、心变 力剂、阻滞剂、细胞粘附抑制剂、中枢神经系统兴奋剂、认知增强剂、皮质类固醇、 C0X-2抑制剂、细胞因子受体活性调节剂、解充血剂、利尿剂、勃起功能异常改善剂、 必需脂肪酸、肠胃剂、遗传物质、组胺受体拮抗剂、hormonolytics、安眠药、降血糖 齐U、免疫抑制剂、keratolyses、白三烯抑制剂、脂质-调节剂、大环内酯类、有丝分裂抑 制剂、肌肉松弛剂、麻醉药拮抗剂、神经安定剂、尼古丁、硝酸盐类、非必需脂肪酸、 非固醇类平喘剂、营养油、类鸦片镇痛药、副交感神经阻滞剂、镇静剂、性激素、兴奋 齐U、类交感神经剂、镇定剂、血管扩张剂、维生素、以及它们的组合。本发明还提供了包括本发明的HPPS纳米颗粒的药物剂型。本发明进一步提供了制备HPPS纳米颗粒的方法。脂蛋白颗粒脂蛋白颗粒为一类天然存在的纳米结构。胆固醇和三酰甘油在体液中以脂蛋白 颗粒的形式被转运。每个颗粒包括由更极性的脂质和蛋白的壳包围的疏水性脂质的核 心。这些大分子的积聚体的蛋白成分具有两个作用它们溶解疏水性脂质并且包含细 胞-靶向信号。脂蛋白颗粒根据增加的密度被分为乳糜微粒、乳糜微粒残余物、极低 密度脂蛋白(VLDL)、中间-密度脂蛋白(IDL)、低-密度脂蛋白(LDL)、和高密度脂蛋 白(HDL)(参见表1)。因此，它们中的每个的大小不同，并且除了乳糜微粒和乳糜微粒 残余物，它们中的大多数具有纳米结构(< lOOnm)。表1.脂蛋白的大小和类别
脂蛋白ι主要核心脂质 ι脱辅基蛋白ι大小 乳糜4效粒饮食三酰甘油，胆B-48，C、E 75-1200 nm
__固醇面旨___
VLDL 内源性三酰甘油 B-100, C，E 30-80 nm Idl内源 J生胆固醇酯 B-100, E25-35 nm
LDL内源4生月旦固醇酯 B-10018-25 nm
IiDL I内源1 生月旦固醇酯 |a、C、E8-12 nm 一低密度脂蛋白(LDL)颗粒LDL是人血浆中胆固醇的主要载体，并经由LDLR(低密度脂蛋白受体)通过胞 吞作用将外源性胆固醇递送到细胞。LDL颗粒是通常具有约22nm直径的天然存在的纳米 结构。它包含一些1500酯化胆固醇分子和甘油三酯的脂质核心。磷脂和未酯化的胆固醇 的外壳包围该高度疏水的核心。所述外壳还包含被LDLR识别的单一拷贝的apoB-100 (分子量 550kDa)。高密度脂蛋白(HDL)颗粒血浆HDL是作为大约一半脂质和一半蛋白质的较小的、球状、致密的脂蛋白复合体。脂质成分由磷脂、游离胆固醇、胆固醇酯、和甘油三酯组成。蛋白质成分包括 apo A-I (分子量，28,000道尔顿)和apo A-II (分子量，17,000道尔顿)。其它较小但是 重要的蛋白质为apoE和apoC，包括apo C_I、apo OII、禾PapoC-III。HDL颗粒是异质的。它可以被分为较大、较小致密的HDL2或较小、更致密 的HDL3。通常，大多数血浆HDL在HDL3中被发现。HDL每个颗粒由4个载脂蛋白 构成。HDL可以由apo A-I和apo A-II构成或仅由apo A-I构成。HDL2主要仅是apo A-I,而HDL3由apo A-I和apo A-II制成。比HDL2更少致密的HDL颗粒富含apoE。HPPS纳米颗粒因此，本发明提供了可以由多种不同的肽支架制成的具有不同尺寸的一系列纳 米平台。下面描述适于生产HPPS纳米颗粒的肽成分。HPPS纳米颗粒可以靶向多种受体。此外，在一些实施方式中，HPPS疏水核心 和磷脂单层均可以被修饰以携带诊断和/或治疗剂的较大的有效载荷，使得它们成为特 别多功能的纳米平台。在一些实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒包含一个或多个归 巢分子。所述HPPS纳米颗粒还可以携带一种或多种活性剂的有效载荷。HPPS纳米颗 粒还可以包含细胞死亡传感器，使得HPPS纳米颗粒可以同时进行诊断、处理以及治疗反 应监测功能。本发明提供了基于具有如下描述的特定性能的肽的非天然存在的纳米平台。术 语“非天然存在的”是指不是固有地存在于人体内的纳米平台。这样的非天然存在的 HPPS纳米颗粒可以包含一种或多种天然存在的脂蛋白颗粒的成分。例如，存在于天然存 在的LDL和HDL颗粒的核心中的胆固醇酯可以被活性剂替换。同样地，如在天然存在 的脂蛋白颗粒中发现的核心可以保持完整，但是活性剂被连接于HPPS纳米颗粒的表面。在一些实施方式中，对于HPPS纳米颗粒用于靶向递送存在几个不同的优点。在 一些实施方式中，本发明的HPPS纳米颗粒的一个优点是它们被预期与宿主免疫系统完全 相容，并且它们也是生物可降解的。它们还可以提供用于大量诊断或治疗剂的积聚的回 收系统，所述诊断或治疗剂用于利用受体介导的胞吞作用的靶向细胞。本发明的HPPS纳 米颗粒不被预期是免疫原性的，并且应当逃避被网状内皮系统(RES)识别。其它优点可以包括1)本发明的HPPS纳米颗粒与生理载体具有的相似之处在 于它们均具有理想的尺寸范围，该尺寸范围足够大以避免肾清除率，但足够小以减少网 状内皮系统(RES)摄取，因此药物/探针的血清半衰期可以通过并入这些纳米颗粒中被 延长；2)药物/探针停留在脂质核心空间提供了保护以免受血清酶和水；3)HPPS纳米颗 粒的阵列的可利用性提供了具有5nm到SOnm范围的大小的一系列纳米平台。优选地，本发明的非天然存在的HPPS纳米颗粒的直径是(以增加的优选性) 5nm 到 50nm，5nm 到 40nm ； 5nm 到 30nm，5nm 到 25nm ； 5nm 到 20nm，以及 IOnm 至Ij 15nm。HPPS纳米颗粒的起始物质还包含在例如所述颗粒的外层上的至少一种脂质。可 用在本发明的HPPS纳米颗粒中的脂质包括，但不限于，两亲性脂质。可用在本发明中的磷脂包括，但不限于，磷脂酰胆碱(优选DMPC (1，2-二肉豆蔻酰in-甘油-3-磷酸 胆碱、POPCd-棕榈酰-1-油酰基-磷脂酰胆碱)和EYPC(卵黄磷脂酰胆碱))、溶血磷 脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇以及它们的组合。支架肽用于形成所述HPPS纳米颗粒的合适的支架肽包括能够形成至少一个两亲性 α-螺旋的氨基酸序列。在优选的实施方式中，所述两亲性a -螺旋或肽的长度(以增加的优选性)在 6-30个氨基酸、8-28个氨基酸、10-24个氨基酸、11-22个氨基酸、4_21个氨基酸、 16-20个氨基酸和18个氨基酸的范围内。用于检测和表征具有假定的两亲性螺旋结构的蛋白结构域的方法陈述在 Segrest, J.P.et al.in PROTEINS Structure, Function, andGenetics (1990) 8 103—117 中， 将其内容以引用方式并入本文。Segrest等人已经鉴定了七种不同类别的两亲性螺旋并鉴 定了与每个类别相关的肽/蛋白质。在七种不同的类别中，存在四个脂质-相关两亲性 螺旋类别(A、H、L和M)。其中，类别A，指定的载脂蛋白类别，具有用于形成基于 磷脂的颗粒的最佳性能。合适的支架肽可以选自由类别A、H、L和Ma-螺旋或其片段组成的组。合适 的支架肽还可以包括类别A、H、L和M两亲性α-螺旋的反向肽序列或其片段，因为形 成两亲性α-螺旋的性能通过所述肽序列内氨基酸残基的相对位置确定。在一个实施方式中，所述支架肽具有包括脱辅基蛋白的连续氨基酸的氨基酸序 列，优先选自由apoB-100、apoB-48、apoC、apoE和apoA组成的组。本发明中所用的“氨基酸”，以及如在说明书和权利要求书中所用的术 语，包括已知天然存在的蛋白质氨基酸，其通过它们常见的的三字母缩写和单字母 缩写被提及。通常参见 Synthetic Peptides A User ‘ s Guide, G A Grant, editor, W.H.Freeman&Co., New York, 1992，将其教导以引用方式并入本文，包括第11页到 第24页陈述的正文和表。如上所述，术语“氨基酸”还包括天然存在的蛋白质氨基 酸的立体异构体和修饰物、非-蛋白质氨基酸、翻译后修饰的氨基酸、酶促合成的氨基 酸、衍生的氨基酸、设计为模拟氨基酸的构建物或结构等。修饰的和不常见的氨基酸 通常描述在 SyntheticPeptides A User ‘ s Guide, cited above ； Hruby V J, Al—obeidi F andKazmierski W Biochem J 268 249-262，1990 ； and Toniolo C Int JPeptide Protein Res 35 287-300，1990中；将其全部教导以引用方式并入本文。“α螺旋”在本文中用来指蛋白质的二级结构中常见的基序。α-螺旋是卷曲 的构象，类似于弹簧，其中每个骨架N-H基团向早期的氨基酸四个残基的骨架C = O基 团贡献氢键。典型地，由天然存在的氨基酸形成的α-螺旋将是右旋的，但是左旋构象 也是已知的。“两亲的”是描述具有亲水性和疏水性性能的化合物的术语。两亲性α-螺旋 通常是生物活性肽和蛋白质中通常遇到的二级结构基序，并指的是具有沿着螺旋的长轴 定向的相对的极性和非极性面的α-螺旋。具有许多apoA-I的脂质结合性能的较小的两亲性螺旋肽的实例包括2F，具有 两个苯丙氨酸氨基酸残基的18-氨基酸肽序列(D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F) (Ananthaaramaiah et alJBC.1985 ； 260 10248-10255)。早期研究表明这个序列 显示出强脂质结合并且能够形成稳定的盘状磷脂颗粒。随后的研究继续表明两个另外的 F 残基的并入(总共 4F; D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F),进一步提高 所述肽的脂质结合性能(Ananthaaramaiah et al.Arterioscler Thromb Vasc Biol.2005 ； 25 1325-1331)。归巢分子如本文所用的，术语“归巢”或“选择性归巢”是指特定分子在给予受试者后 相对特异地结合至特定器官或组织中存在的分子。通常，选择性归巢的特征部分在于， 检测比对照器官或组织至少两倍更大的所述分子与器官或组织的选择性结合。在一些实 施方式中，选择性结合比对照器官或组织至少三倍或四倍更大。在肿瘤归巢分子的情况中，这样的分子结合到在特定的癌组织中选择性过度表 达的受体。过度表达是指在肿瘤组织中的表达比正常组织多至少一倍和一倍半。在实施 方式中，与非肿瘤相比，肿瘤中的表达多至少五倍。在本发明的实施方式中，归巢分子连接于靶向特定组织和肿瘤的本发明的HPPS 纳米颗粒的肽。“归巢分子”指的是可以促进本发明的组合物体外或体内靶向组织和/ 或受体的任何材料或物质。所述靶向部分可以是合成的、半合成的、或天然存在的。所 述靶向部分可以为蛋白质、肽、寡核苷酸、或其它有机分子。在一个实施方式中，所述 靶向部分可以为到达细胞表面受体的内源性配体(或其部分)。所述靶向部分可以为抗体 (该术语包括保持结合区或高变区的抗体片段和单链抗体)。可以 用作靶向部分的材料或 物质包括，但不限于，表2中列出的那些物质表权利要求
1.一种非天然存在的肽-脂质纳米支架，包括a)至少一种磷脂；b)至少一种不饱和脂质，优选不饱和固醇酯，进一步优选不饱和胆固醇酯，进一步 优选胆固醇油酸酯；以及C)至少一种肽，所述肽包括能够形成至少一个两亲性α-螺旋的氨基酸序列；其中，使成分a)、b)和c)结合以形成肽-磷脂纳米支架。
2.根据权利要求1所述的肽_脂质纳米支架，进一步包括d)至少一种归巢分子；并且其中，使成分a)、b)、c)以及d)结合以形成所述肽-磷脂纳米支架。
3.根据权利要求2所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种归巢分子共价结合 至所述至少一种磷脂。
4.根据权利要求2所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种归巢分子共价结合 至所述至少一种肽。
5.根据权利要求4所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种归巢分子在所述两 亲性α“螺旋的亲水面与疏水面之间的过渡处或附近在氨基酸处结合至所述肽。
6.根据权利要求5所述的肽-脂质纳米支架，其中，结合至所述归巢分子的所述肽的 氨基酸选自由赖氨酸、半胱氨酸、苏氨酸和丝氨酸组成的组，优选赖氨酸。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种归巢分 子为至少一种活性细胞表面受体配体。
8.根据权利要求7所述的肽-脂质纳米支架，进一步包括e)至少一种活性剂；并且其中，使成分a)、b)、c)、d)以及e)结合以形成所述肽-脂质纳米支架。
9.根据权利要求8所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述肽选自由类A、H、L和M 两亲性α-螺旋，其片段，以及包括所述类Α、H、L和M两亲性α-螺旋的反向肽序列 的肽或其片段组成的组。
10.根据权利要求8所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述肽选自由2F、4F、2F的反 向序列以及4F的反向序列组成的组。
11.根据权利要求8-10中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲 性α “螺旋或肽的长度在6到30个氨基酸之间。
12.根据权利要求11所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲性α-螺旋 或肽的长度在8到28个氨基酸之间。
13.根据权利要求12所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲性α-螺旋 或肽的长度在10到24个氨基酸之间。
14.根据权利要求13所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲性α-螺旋 或肽的长度在11到22个氨基酸之间。
15.根据权利要求14所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲性α-螺旋 或肽的长度在14到21个氨基酸之间。
16.根据权利要求15所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲性α-螺旋 或肽的长度在16到20个氨基酸之间。
17.根据权利要求16所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个两亲性α-螺旋 或肽的长度为18个氨基酸。
18.根据权利要求8-17中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述磷脂选自由 磷脂酰胆碱(优选DMPC (1，2- 二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱)、POPC (1_棕榈 酰-1-油酰基-磷脂酰胆碱)和EYPC(卵黄磷脂酰胆碱))、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰乙 醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇以及前述的组合组成
19.根据权利要求8-18中任一项所述的肽_脂质纳 径在5-50nm之间。
20.根据权利要求19所述的肽-脂质纳米支架， 5-40nm 之间。
21.根据权利要求20所述的肽-脂质纳米支架， 5-30nm 之间。
22.根据权利要求21所述的肽-脂质纳米支架， 5-25nm 之间。
23.根据权利要求22所述的肽-脂质纳米支架， 5-20nm 之间。
24.根据权利要求23所述的肽-脂质纳米支架， 10-15nm 之间。
25.根据权利要求8-24中任一项所述的肽_脂质纳 剂结合至至少一个脂质锚。
26.根据权利要求25所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种活性剂通过酯键 结合至所述至少一个脂质锚。
27.根据权利要求25和26中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一个 脂质锚选自由胆固醇油酸酯部分、胆固醇月桂酸酯部分、植醇部分以及优选油酸酯部分 和不饱和胆固醇酯部分组成的组。
28.根据权利要求8-27中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述细胞表面受体 配体是对于在癌细胞中过度表达的受体的配体。
29.根据权利要求8-27中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述细胞表面受体 配体是对于心血管斑块中过度表达的受体的配体。
30.根据权利要求28所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述细胞表面受体配体是对于 选自由叶酸、Her-2/neu、整联蛋白、EGFR、metastin、ErbB> c_Kit、c_Met、CXR4、 CCR7、内皮素-A、PPAR-δ、PDGFR A、BAG_i、以及TGF β组成的组中的受体的配 体。
31.根据权利要求30所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述整联蛋白受体为ν133。
32.根据权利要求30所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述细胞表面受体配体为叶酸 受体配体。
33.根据权利要求8-27中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，细胞表面受体靶向 特定组织。
34.根据权利要求33所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述组织为肺、皮肤、血液、 的组。米支架，其中，所述纳米支架的直 其中，所述纳米支架的直径在 其中，所述纳米支架的直径在 其中，所述纳米支架的直径在 其中，所述纳米支架的直径在 其中，所述纳米支架的直径在 米支架，其中，所述至少一种活性胰腺、视网膜、前列腺、卵巢、淋巴结、肾上腺、肝脏、乳腺、消化系统、以及肾脏。
35.根据权利要求8所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述归巢分子选自由肽、适 体、抗体以及抗体片段组成的组。
36.根据权利要求35所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述细胞表面受体配体是所述 抗体片段并且包括Fab区。
37.根据权利要求8-36中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述活性剂为亲脂 性化合物。
38.根据权利要求37所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述亲脂性化合物选自由乙 酰苯胺、苯胺、氨基喹啉、二苯甲基化合物、苯并二氮杂草类、苯并呋喃、大麻酯、环 肽、二苯氮杂草类、毛地黄糖苷、麦角生物碱类、类黄酮、咪唑、喹啉、大环内脂、 萘、鸦片剂(或吗啡喃)、噁嗪、噁唑、苯烷基胺、哌啶、多环芳香烃、吡咯烷、吡咯烷 酮、均二苯代乙烯、磺酰脲、砜、三唑、莨菪烷、以及长春花生物碱组成的组。
39.根据权利要求38所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述亲脂性化合物包括至少一 个包含至少10个碳的烃链，其中所述烃链包括至少一个顺式-双键或通过至少一个侧链 支化。
40.根据权利要求38所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述亲脂性化合物包括至少一 个油酸酯部分、胆固醇油酸酯部分、胆固醇月桂酸酯部分或植醇部分。
41.根据权利要求8-36中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述活性剂为包括 亲脂性成分和亲水性成分的分子。
42.根据权利要求8-36中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述活性剂为诊断 剂、成像剂或治疗剂。
43.根据权利要求42所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述活性剂为诊断剂。
44.根据权利要求43所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述诊断剂选自由对比剂、放 射性标记和荧光标记组成的组。
45.根据权利要求44所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述诊断剂为对比剂。
46.根据权利要求45所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述对比剂选自由光学对比 剂、MRI对比剂、超声对比剂、X-射线对比剂和放射性核素组成的组。
47.根据权利要求46所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述对比剂为光学对比剂。
48.根据权利要求46所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述对比剂为MRI对比剂。
49.根据权利要求48所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述MRI对比剂为氧化铁或 镧系元素的碱。
50.根据权利要求49所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述MRI对比剂为镧系元素 的碱。
51.根据权利要求50所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述镧系元素的碱为钆(Gd3)^^ I^l ο
52.根据权利要求42所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述活性剂为治疗剂。
53.根据权利要求52所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述治疗剂为抗癌剂。
54.根据权利要求53所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗癌剂选自由化疗剂、光 动力学治疗剂、硼中子俘获治疗剂或用于放射治疗的放射性核素组成的组。
55.根据权利要求54所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗癌剂为光动力学治疗剂。
56.根据权利要求55所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述光动力学治疗剂选自由卟 啉、卟啉异构体、和扩展的卟啉组成的组。
57.根据权利要求56所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述光动力学治疗剂选自由 SiNc-BOA、SiPc-BOA、和焦脱镁叶绿酸-胆固醇酯(Pyr0-CE)组成的组。
58.根据权利要求54所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗癌剂为化疗剂。
59.根据权利要求53所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗癌剂选自由烷基化剂、 蒽环类药、抗生素、芳香酶抑制剂、双磷酸盐类、环加氧酶抑制剂、雌激素受体调节 剂、叶酸拮抗剂、无机砷酸盐、微管抑制剂、修饰剂、亚硝基脲、核苷类似物、破骨细 胞抑制剂、含钼化合物、类维生素A、拓扑异构酶1抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、表皮生 长因子抑制剂和组蛋白脱乙酰基酶抑制剂组成的组。
60.根据权利要求58所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述化疗剂选自由紫杉醇、环 磷酰胺、二十二碳六烯酸(DHA)-紫杉醇结合物、桦木酸、和阿霉素组成的组。
61.根据权利要求52所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述治疗剂为抗青光眼药、抗 凝剂、消炎药、平喘药、抗生素、抗真菌药或抗病毒药。
62.根据权利要求61所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述治疗剂为抗青光眼药。
63.根据权利要求62所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗青光眼药选自由 β-阻滞剂如噻吗洛尔-碱、倍他洛尔、阿替洛尔、左布诺洛尔、肾上腺素、二新戊酰、 oxonolok乙酰唑胺-碱和醋甲唑胺组成的组。
64.根据权利要求61所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述治疗剂为消炎药。
65.根据权利要求64所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述消炎药为甾族药。
66.根据权利要求65所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述留族药为可的松或地塞米松。
67.根据权利要求64所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述消炎药为非留族药。
68.根据权利要求67所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述非甾族消炎药(NTPiE)选 自由吡罗昔康、吲哚美辛、萘普生、苯基丁氮酮、布洛芬和双氯芬酸组成的组。
69.根据权利要求61所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述治疗剂为平喘药。
70.根据权利要求69所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述平喘药为泼尼松龙或泼尼松。
71.根据权利要求61所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述治疗剂为抗生素。
72.根据权利要求71所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗生素为氯霉素。
73.根据权利要求71所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述抗生素为选自由制霉菌 素、两性霉素B、咪康唑、Acyclovir 组成的组。
74.根据权利要求1-73中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述氨基酸序列包 括正向或反向方向上的脱辅基蛋白的连续氨基酸。
75.根据权利要求74所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述脱辅基蛋白选自由 apoB-100、apoB-48、apoC、apoE 和 apoA 组成的组。
76.根据权利要求8-28中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种活性剂为适体。
77.根据权利要求8-36中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种活性 剂为双链RNA。
78.根据权利要求77所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种活性剂为 SiRNA0
79.根据权利要求1-78中任一项所述的肽-脂质纳米支架，进一步包括一个或多个三 酰甘油。
80.根据权利要求1-78中任一项所述的肽-脂质纳米支架，进一步包括固醇、固醇 酯、或它们的组合。
81.根据权利要求80所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述固醇或固醇酯选自由胆固 醇、胆固醇油酸酯以及不饱和胆固醇酯组成的组。
82.—种药物剂型，包括根据权利要求1-81中任一项所述的非天然存在的肽-脂质纳 米支架。
83.一种制备根据权利要求8-82中任一项所述的非天然存在的肽_脂质纳米支架的方 法，包括在适于形成所述肽_脂质纳米支架的条件下结合成分a)_e)。
84.一种非天然存在的肽_脂质纳米支架，包括a)至少一种磷脂；b)至少一种不饱和脂质，优选不饱和固醇酯，进一步优选不饱和胆固醇酯，进一步 优选胆固醇油酸酯；c)至少一种肽；d)至少一种归巢分子；以及e)至少一种活性剂，所述活性剂包括双链RNA；其中，活性细胞表面受体配体共价结合至所述至少一种肽，并且成分a)、b)、c)、 d)和e)结合以形成肽-磷脂纳米支架。
85.根据权利要求84所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述双链RNA为siRNA。
86.根据权利要求85所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述双链RNA结合至选自由 胆固醇油酸酯部分、胆固醇月桂酸酯部分、植醇部分以及优选油酸酯部分和不饱和胆固 醇酯部分组成的组中的至少一个脂质锚。
87.根据权利要求84-86中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种肽 包括能够形成两亲性α-螺旋的氨基酸序列。
88.根据权利要求84-86中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种肽 为脱辅基蛋白，并且所述活性细胞表面受体配体不是低密度脂蛋白受体配体或高密度脂 蛋白受体配体。
89.根据权利要求8-27中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述细胞表面受体 配体为针对在HIV感染的细胞中表达的受体的配体。
90.根据权利要求89所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述活性剂为siRNA。
91.一种预防或治疗疾病的方法，包括给予治疗量的根据权利要求52-73中任一项所 述的肽-脂质纳米支架，其中，所述疾病是可用所述治疗剂预防或治疗的。
92.根据权利要求52-73中任一项所述的肽-脂质纳米支架在用于预防或治疗疾病中的应用，其中，所述疾病是可用所述治疗剂预防或治疗的。
93.根据权利要求52-73中任一项所述的肽_脂质纳米支架在制备用于预防或治疗疾 病的药物中的应用，其中，所述疾病是可用所述治疗剂预防或治疗的。
94.一种诊断受治疗者体内疾病的方法，包括给予所述受治疗者根据权利要求43-51 中任一项所述的肽_脂质纳米支架。
95.根据权利要求43-51中任一项所述的肽_脂质纳米支架在用于诊断受治疗者体内 疾病中的应用。
96.一种预防或治疗与SR-B 1受体的过度表达相关的疾病的方法，包括给予根据权 利要求1所述的肽-脂质纳米支架，所述肽_脂质纳米支架进一步包括治疗剂，并且其中 所述疾病是可用所述治疗剂预防或治疗的。
97.根据权利要求96所述的方法，其中，所述疾病为癌症，优选乳腺癌。
98.根据权利要求1所述的肽-脂质纳米支架在用于预防或治疗与SR-Bl受体的过度 表达相关的疾病中的应用，所述肽_脂质纳米支架进一步包括治疗剂，并且其中所述疾 病是可用所述治疗剂预防或治疗的。
99.根据权利要求1所述的肽_脂质纳米支架在制备用于预防或治疗与SR-Bl受体的 过度表达相关的疾病的药物中的应用，所述肽_脂质纳米支架进一步包括治疗剂，并且 其中所述疾病是可用所述治疗剂预防或治疗的。
100.根据权利要求98或99所述的应用，其中，所述疾病为癌症，优选乳腺癌。
101.根据权利要求8-36中任一项所述的肽-脂质纳米支架，其中，所述至少一种活 性剂为基因或其功能等效物。
全文摘要
本发明提供了一种非天然存在的高密度脂蛋白样肽-磷脂支架("HPPS")纳米颗粒。更具体地，本发明提供了一种非天然存在的肽-脂质纳米支架，包括(a)至少一种磷脂；(b)至少一种不饱和脂质，优选不饱和固醇酯，进一步优选不饱和胆固醇酯，进一步优选胆固醇油酸酯；以及(c)至少一种肽，所述肽包括能够形成至少一个两亲性α-螺旋的氨基酸序列；其中使成分a)、b)和c)结合以形成肽-磷脂纳米支架。在本发明的实施方式中，细胞表面受体配体被并入HPPS中。在一个实施方式中，细胞表面受体配体共价结合至HPPS纳米颗粒的肽支架。在另一实施方式中，细胞表面受体配体偶联至脂质锚，并通过将脂质锚并入HPPS纳米颗粒的磷脂单层中而呈现在HPPS纳米颗粒的表面上。本发明还提供了一种包括HPPS纳米颗粒的药物剂型以及制备HPPS纳米颗粒的方法。
文档编号A61K49/00GK102027019SQ200880126584
公开日2011年4月20日 申请日期2008年12月12日 优先权日2007年12月12日
发明者张智红, 艾安·科尔宾, 郑岗, 陈涓 申请人:大学健康网络