专利名称：：一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂及其制备方法
技术领域：
：本发明属中药领域，具体涉及一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂及制备方法。
背景技术：
：腰腿痛是人们最为常见的疼痛症候群，给生产、工作、学习和生活带来诸多不便。随着社会生活水平的提高，人均寿命延长，老年骨质疏松性腰痛发病人数不断增长。老年骨质疏松性腰痛是50岁以上老年人群最常见的腰部疾患，在老年人群中的发病率约为25.2%。其发病主要是椎体骨质疏松后，导致椎体骨小梁骨折、腰椎间盘退行性改变、腰椎管狭窄、椎体压縮性骨折等，使相邻的神经根、脊髓等遭受化学性刺激或物理性压迫，从而产生腰痛、一侧或双侧下肢疼痛、麻木等症状。老年骨质疏松性腰痛以持续性腰部钝痛多见，大多先出现腰痛，之后又出现腿痛。其中，伴有腰椎间盘退行性改变、腰椎管狭窄改变者，由于椎管内压力增加、马尾神经缺血、神经根受压，引起马尾神经或神经根症状，出现下肢无力，严重者足下垂，行走拖步；伴有椎体骨小梁骨折、椎体压縮性骨折者，往往缠绵难愈，导致长期慢性腰痛；一些严重的老年骨质疏松性腰痛病人，可出现会阴部麻木、刺痛，大小便失禁等马尾神经受损的表现；胸、腰椎压縮性骨折导致脊椎后弯、胸廓畸形，可使肺活量和最大换气量显著减少，肺气肿发生率可高达40%，出现胸闷、气短、呼吸困难等症状。据美国国家骨质疏松基金会估计，美国全年有0.7亿人患有腰痛，每年新增70万骨质疏松症引起的椎体骨折性腰痛，其中26万由于疼痛接受非手术治疗，15万人次住院治疗。患者为治疗所付出的费用以及不能工作所造成的损失价值约70亿美元。欧洲有关的老年妇女的大样本研究表明椎体压縮性骨折的发病率随年龄的增加而增长，50-54岁为11.5%;55-59岁为14.6%;60-64为16.8%;65-69岁为23.5%;70-74岁为27.2%;75-79岁为34.8%。在我国则有〃五口人家，一人腰痛"之说。随着人口老龄化，用于治疗老年骨质疏松性腰痛的费用不断上升。因此，开发质量稳定、疗效确切、安全价廉、服用方便的中药新药具有很好的经济和社会效益。
发明内容本发明目的在于提供一种疗效确切、安全性高的治疗老年骨质疏松性腰痛的中药复方制剂。中医认为，老年骨质疏松性腰痛的病因主要是"气虚肾亏、血瘀络阻"。本发明以"益气补肾，化瘀通络"为治疗老年骨质疏松性腰痛之法则，遵循"标本兼顾"、"未病先防"的学术思想，采用下述原料药组分制成复方制剂，通过改善腰椎局部微循环、抑制炎症介质、延缓骨质疏松、修复腰神经损伤等预防并治疗老年骨质疏松性腰痛。本发明复方制剂由有效成分与药物载体制成，其特征在于所述有效成分是由下列重量配比范围的原料药组分组成黄芪450250g、淫羊藿350150g、墨旱莲350150g、丹参300100g、怀牛膝300100g、青风藤300100g(生药剂量)。所述的原料药的优选重量配比范围是黄芪400300g、淫羊藿300200g、墨旱莲300200g、丹参250150g、怀牛膝250150g、青风藤250150g(生药剂量)。所述的原料药的更优选重量配比是黄芪350250g、淫羊藿250150g、墨旱莲250150g、丹参200100g、怀牛膝200100g、青风藤200100g(生药剂量)。本发明复方制剂可按常规方法制成各种口服制剂，包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、合剂、散剂等。本发明的进一步目的是提供上述复方制剂的制备方法。本发明复方制剂通过下述方法和步骤制备①按组方重量称取各药材，浸泡lh，煎煮13次，每次0.51.5h，一煎加水1014倍，二、三煎加水610倍，合并煎煮液，滤过，在607(TC温度下，滤液浓縮至相对密度为1.051.30的浸膏。其中，优选煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，优选滤液浓縮至相对密度为1.051.07的浸膏液；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为50%80%，优选加乙醇至浓度为60%;静置过夜，醇沉，滤过，滤液在607(TC温度下回收乙醇，并浓縮至相对5密度为1.351.40的浓浸膏；③上述②浓浸膏在708(TC时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，得本发明药物组分的浸膏粉；按照浸膏粉填充剂崩解剂=12:5:1重量配比(浸膏粉300g，微晶纤维素101是125g，交联羧甲基纤维素纳25g)，取上述③制得的组分，加入上诉比例的填充剂、崩解剂，混匀，采用干法制粒，压制成1000片，片重0.45g。包薄膜衣，制成成品片剂，即得。本发明所述的药物活性组分的制备方法，采用了水提取法并优选了煎煮次数、时间和加水量后提取了黄芪、淫羊藿中皂甙类的化合物、丹参中的酚酸类化合物和丹参素及其它组分中的主要有效成分，然后优选了醇沉的密度和乙醇浓度进行醇沉纯化，最大限度的提取有效成分并去除杂质，在减压低温条件下浓縮、干燥，同时对干燥方法及条件、制剂成型工艺的辅料、制粒方法及条件等进行了考査、筛选，优选出适合于工业化生产的制备工艺。本发明复方制剂能避免中药汤剂服用前临时煎煮，久置易酶败变质及给患者带来很多不方便，根据临床用药特点、保存处方中主要药味的理化性质并结合现代制剂技术，制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂等固体制剂，方便有效的满足了患者的需求。本发明进行了动物实验，结果显示小鼠热板实验，本发明复方制剂2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组、0.25倍剂量组痛阈值在60min和120min均高于对照组，有显著性差异；小鼠耳肿胀实验，本发明复方制剂2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组肿胀抑制率均低于对照组，有显著性差异；细胞学实验，MTT法检测结果表明，本发明复方制剂能明显促进成骨细胞的增殖，与对照组比较，有非常显著性差异(P〈0.01);实时荧光定量PCR反应结果显示，与对照组比较，本发明复方制剂可以促进成骨细胞BMP-2mRNA的表达(P<0.01),促进成骨细胞TypeICollagenmRNA的表达，促进成骨细胞BGPmRNA表达(P〈0.01)。结果证实，本发明复方制剂不仅可以解除老年骨质疏松性腰痛临床症状体征，而且可以通过改善腰椎局部微循环、抑制炎症介质、延缓骨质疏松、修复腰神经损伤等方面预防老年骨质疏松性腰痛，巩固治疗效果，减少复发，体现了"标本兼顾"、"未病先防"的学术思想。具体实施方式实施例1原料组方黄芪450g、淫羊藿350g、墨旱莲350g、丹参300g、怀牛膝300g、青风藤300g。①按组分重量称取药材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh,—煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.051.07的浸膏液，备用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60%。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在607(TC温度下回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.351.40的浓浸膏；(D上述②浓浸膏在6080'C时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；④取上述③制备的活性组分250350g，加入微晶纤维素101120130g、交联羧甲基纤维素纳2030g,混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成片剂，即得。按实施的组分重量及采用上述制备方法所制成的中药片剂，每片重0.45g，每片相当于生药1.75g。生产单位可根据各自的生产规模按此比例放大相应的倍数。实施例2原料组方黄芪400g、淫羊藿300g、墨旱莲300g、丹参250g、怀牛膝250g、青风藤250g。①按组分重量称取药材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.051.07的浸膏液，备用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60%。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在607(TC温度下回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.351.40的浓浸膏；③上述②浓浸膏在6080'C时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；④取上述③制备的活性组分250350g，加入微晶纤维素101120130g、交联羧甲基纤维素纳2030g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，7制成成品片剂，即得。实施例3原料组方黄芪350g、淫羊藿250g、墨旱莲250g、丹参200g、怀牛膝200g、青风藤200g。①按组分重量称取药材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓縮至相对密度为L051.07的浸膏液，备用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60%。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在607(TC温度下回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.351.40的浓浸膏；③上述②浓浸膏在608(TC时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；④取上述③制备的活性组分250350g，加入微晶纤维素101120130g、交联羧甲基纤维素纳2030g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成片剂，即得。按实施的组分重量及采用上述制备方法所制成的中药片剂，每片重0.45g，每片相当于生药1.75g。生产单位可根据各自的生产规模，按此比例放大相应的倍数。实施例4黄芪300g、淫羊藿200g、墨旱莲200g、丹参150g、怀牛膝150g、青风藤150g。①按组分重量称取药材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh,—煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.051.07的浸膏液，备用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60%。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在607(TC温度下回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.351.40的浓浸膏；③上述②浓浸膏在608(TC时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；④取上述③制备的活性组分350250g，加入微晶纤维素101120130g、交联羧甲基纤维素纳2030g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣,制成成品片剂，即得。实施例5黄芪250g、淫羊藿150g、墨旱莲150g、丹参150g、怀牛膝100g、青风藤100g(生药剂量)。①按组分重量称取药材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.051.07的浸膏液，备用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60%。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在607(TC温度下回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.351.40的浓浸膏；③上述②浓浸膏在608(TC时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；④取上述③制备的活性组分350250g，加入微晶纤维素101120130g、交联羧甲基纤维素纳2030g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成成品片剂，即得。实施例6将实施例l、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入糊精，混合均匀后制粒，6065'C干燥，整粒，即得。实施例7将实施例l、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入微晶纤维素、碳酸钙,混合均匀，装入胶囊。实施例8将实施例l、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入羧甲基淀粉钠、瓜耳树胶、藻酸钠等崩解剂，制粒或直接压片。实施例9将实施例l、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入甜菊糖苷、吐温80等辅料，加水至足量，滤过，分装。实施例10本发明复方制剂治疗老年骨质疏松性腰痛有关药理研究(一)本发明复方制剂(简称健腰密骨片)消肿、止痛实验研究1、药物健腰密骨片四种浓度2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组、0.25倍剂量组和生理盐水组比较，按公斤体重折算，剂量相当于临床60KG体重9病人用药量；用药剂量按照人与动物体表换算关系确定《中药药效研究思路与方法》P18-19，《现代医学实验动物学P335》相当于临床等效剂量。用药剂量按照人与动物体表换算关系确定，等倍剂量组用药剂量相当于临床等效剂量。2、实验动物昆明种雄性小鼠，清洁级(复旦大学实验动物科学部，许可证号Scxk沪2003-0003,实验动物质量合格证0019761);体重20士2克；动物数每组小鼠12只；随机分为2倍剂量组(14.6g/Kg体重/日)、等倍剂量组(7.3g/Kg体重/日)、0.5倍剂量组(3.65g/Kg体重/日)、0.25倍剂量组(1.825g/Kg体重/日)、生理盐水组。给药剂量每10g体重给药0.lml，给药3天，末次给药1小时后进行药效实验。①小鼠热板法镇痛试验筛选合格小鼠，将小鼠放在热板上至出现舔足所需时间(s)作为该鼠的痛阈值。凡舔足所用时间小于5s或大于60s或跳跃者，弃之不用。将合格小鼠随机分为7组，再测其痛阈值，作为该鼠给药前的痛阈值。试验前小鼠禁食12h,各组均灌胃给药，给药后30、60、120min分别测小鼠痛阈值。如60s仍无反应，将小鼠取出，其痛阈以60s计算。结果显示，小鼠热板实验痛阈值，2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组、0.25倍剂量组和对照组比较，60min和120min均有显著性差异。各用药剂量组无显著性差异，0.5倍剂量组优于其它治疗组。表l是小鼠热板法镇痛试验结果。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>与对照组比较'P〈0.05，**P<0.01②二甲苯所致小鼠耳肿胀实验末次给药后30min，小鼠右耳涂二甲苯O.lml/只致炎，左耳为对照；15min后脱颈臼处死,沿耳廓基线剪下双耳，用6mm角膜环钻在左右耳相同位置冲下耳片，在电子分析天平上称重(精确到O.Img)，右耳重量减去左耳重量之差值(单位:mg)即为肿胀度，计算各组平均肿胀度并求出肿胀抑制率(%),肿胀抑制率(100%)=(右耳重-左耳重)/左耳重乂100%。结果表明小鼠耳肿胀抑制率，2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组和对照组比较有显著性差异，其中2倍剂量组优于0.5倍剂量组和等倍剂量组。各用药剂量组间无显著性差异。表2是实验小鼠耳肿胀抑制率。表2组别数量时间(lh)对照组100.4796±0.083152倍剂量组100.2075±0.06915"等倍剂暈组100.297±0.1204**0.5倍剂量组100.3064±0.08533"0.25倍剂量组100.3597±0.1466与对照组比较*P<0.05，林P〈0.01(二)本发明复方制剂(简称健腰密骨片)细胞学实验研究清洁级SD大鼠，体重大鼠300士20g(上海市实验动物管理委员会颁发的医学实验动物合格证书，合格证号"沪动合证字152号"；动物实验环境设施等级清洁级；环境设施合格证号"医动字第02-24号")。分组如下(1)一阴性对照组，正常大鼠血清；(2)健腰密骨片l/4倍剂量组大鼠血清(2.1875g/Kg体重/日)；(3)健腰密骨片l/2倍剂量组大鼠血清(4.375g/Kg体重/日)；11(4)健腰密骨片l倍剂量组大鼠血清(8.75g/Kg体重/日)；(5)健腰密骨片2倍剂量组大鼠血清(17.5g/Kg体重/日)；(6)阳性对照组，BMP-2纯化蛋白(50ng/ml)。①MTT法观察对成骨细胞增殖的影响取对数生长期成骨细胞，经常规胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液。计数细胞，调整细胞密度为lX10Vml左右。将细胞移入96孔培养板中，每孔200ml，然后放入37t、5%C02培养箱中培养，第二日吸去孔内的培养液，按上述分组方法分别给药，每组8个复孔，每孔200ul含药血清细胞培养液，之后，再放入37"C、5y。C02培养箱中继续培养，于培养48小时后，取出培养板进行MTT法检测，每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ral)，放入37。C、5%002培养箱中孵育4小时后，弃去上清液，每孔加入DMSO180ul，震摇混匀，使结晶完全溶解，立即上酶标仪测定OD值，波长为490nm，以同时做的单纯培养液为空白对照孔。MTT法检测结果表明健腰密骨片能明显促进成骨细胞的增殖(P<0.01)，其中以l/4倍剂量最明显。表3是MTT法观察对成骨细胞增殖影响。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注*P〈0.01,与正常对照组比较有显著性差异。②实时荧光定量PCR反应检测对成骨细胞中BMP-2、TypeICollagen和BGPmRNA表达的影响弓l物由Genebank数据库中检索出基因全长序列，然后根据引物长度、Tm温度、GC免等因素设计最适合引物并合成。序列如下BMP-2:5'-GATCTGTACCGCAGGCACTC-3,，5'-TTCCCACTCATCTCTGGAAGTT-3，；TypeICollagen:5，-CATTTGCACTGGGTCACACGTA-3，，5,-GAATCTGGCCATGTTTGTGCTC-3';Osteocalcin:5'-CCCTCTCTCTGCTCACTCTGCT-3，，5，-CTTATTGCCCTCCTGCTTGG-3';3-actin:5'-CTGTCCCTGTATGCCTCTG-3，，5'_ATGTCACGCACGATTTCC-3，。将样本cDNA分别进行荧光定量PCR反应。待反应结束后，用RotorGene6.0软件根据标准曲线自动进行绝对定量分析，并计算结果，以每一样本所含目的基因的拷贝数和其e-actin内参基因的拷贝数的比值进行相对比较。实时荧光定量PCR反应结果显示，健腰密骨片可以促进成骨细胞BMP-2mRNA的表达(P<0.01)，其中以1/4倍剂量最明显，1/2倍剂量次之；健腰密骨片可以促进成骨细胞TypeICollagenmRNA的表达，其中以2倍剂量最明显(P<0.01)，1/4倍剂量次之(P〈0.05);健腰密骨片可以促进成骨细胞BGPmRNA的表达(P<0.01)，其中以l/4倍剂量最明显，1/2倍剂量次之。表4是治疗后BMP-2、TypeICollagen和BGPmRNA表达的影响。表4分组BMP-2TypeICollagenBGP正常对照1.088±0.05621.247±0.30231.293±0.329BMP-2组2.66±0.1297*3.988±0.3173.372±0.1863*1/4倍剂量4.916±0.3472*4.452±0.2982*8.244±1.41*1/2倍剂量4.621±0.4326*4.021±0.90535.683±0.518*1倍剂量3.135±0.3491*12.016±2.7535*3.683±0.4561*2倍剂量4.11±0.5694*1.894±0.46284.635±0.6407*注*P〈0.05，与正常对照组比较有显著性差异；*P〈0.01,与正常对照组比较有极其显著性差异。13(三)急性毒性实验昆明小鼠灌胃按最大浓度(7.52g生药/ml)、最大容积(40ml/kg)给药体积给予健腰密骨片溶液，l日内2次给药，连续观察14天，结果显示，未出现明显毒性反应，禾一小鼠死亡。健腰密骨片临床人用量为70g(生药)/60kg/日，经计算，小鼠口服的最大给药量为32.72g干膏粉/kg,S卩600.37g生药/kg，相当于临床人用量(每kg体重)的513倍。权利要求1、一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂，由药物有效成分与药物载体组成，其特征是所述有效成分是由下列重量配比范围的原料药组分组成，生药剂量黄芪450～250g、淫羊藿350～150g、墨旱莲350～150g、丹参300～100g、怀牛膝300～100g、青风藤300～100g。2、按权利要求2所述的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂，其特征是所述的原料药的重量配比范围是，生药剂量黄芪400300g、淫羊藿300200g、墨旱莲300200g、丹参250150g、怀牛膝250150g、青风藤250150g。3、按权利要求3所述的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂，其特征是所述的原料药的重量配比范围是，生药剂量黄萬350250g、淫羊藿250150g、墨旱莲250150g、丹参200100g、怀牛膝200100g、青风藤200100g。4、权利要求1或2或3的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂的制备方法，其特征在于通过下列步骤①按组分重量称取药材，浸泡lh，煎煮13次，每次0.51.5h，一煎加水1014倍，二、三煎加水610倍，合并煎煮液，滤过，在6070。C温度下，滤液浓縮至相对密度为1.051.30的浸膏，备用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为50%80%，静置过夜，醇沉，滤过，滤液在6080'C温度下回收乙醇，并浓縮至相对密度为1.351.40的浓浸膏；③上述②浓浸膏在608(TC时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，得药物活性组分浸膏粉；④取上述③制得的活性组分浸膏粉，加入填充剂、崩解剂，混匀，采用干法制粒，并压制成1000片，片重0.45g，包薄膜衣，制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、合剂或散剂。5、根据权利要求4所述的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂的制备方法，其特征在于所述填充剂为微晶纤维素101，加入量为120130g;崩解剂为交联羧甲基纤维素纳，加入量为2030g。6、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述步骤1的原料药经水浸泡1小时后，提取3次，每次1.5小时，浓縮至相对密度为L351.40后，加入乙醇使含醇量达60%，回收乙醇后的提取物。全文摘要本发明属中药领域，涉及一种治疗老年骨质疏松性腰痛的中药制剂及其制备方法。所述制剂由药材黄芪、淫羊藿、墨旱莲、丹参、怀牛膝、青风藤的水提取物与辅料混合，制粒、压片制成。所述药材通过水浸泡，水煎煮后，合并煎煮液浓缩至密度约为1.05，加乙醇至浓度为60％，放置过夜，醇沉；滤液回收乙醇并浓缩、减压干燥、粉碎成浸膏粉；加辅料混匀，制粒，压片，包薄膜衣，即得。本发明运用益气补肾、化瘀通络的治疗法则，能改善腰椎局部微循环、抑制炎症介质、延缓骨质疏松、修复腰神经损伤，防治疗老年骨质疏松性腰痛，体现了“标本兼顾”、“未病先防”的学术思想。文档编号A61K36/59GK101590109SQ20091000416公开日2009年12月2日申请日期2009年2月13日优先权日2008年9月4日发明者炜侯,琴卞,盛卢,泉周,周重建,唐得志,崔学军,宁张,杞施,李晨光,梁倩倩,段晓堃,江雪琴,王拥军,冰舒申请人:上海中医药大学附属龙华医院