鸡球虫散及其制备方法

专利名称：：鸡球虫散及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种抗鸡球虫病的鸡球虫散及其制备方法。
背景技术：
：鸡球虫病是病原为艾美耳科的原虫寄生虫病，鸡球虫主要寄生于鸡肠道,部分球虫寄生于鸡肝脏。球虫发病以多种类型的球虫乱囊混合感染，及与其他疾病混合感染，诱发其他疾病为特征；球虫乱囊具有高浓度耐药性，交叉耐药性、多重耐药性等特点(参看2009年第03期《中国禽业导刊》中的"鸡球虫病难控制的原因及对策")。球虫病的发生导致肠道出血，肠粘膜损伤，轻者导致鸡营养不良，生长缓慢，重者导致鸡的死亡，给养殖业带来严重的损失。目前鸡球虫病主要以预防为主，其中主要以化学药物为主，但化学药物长期添加具有肝脏和肠毒性，并且容易产生耐药性，也给食品业带来严重的药残，毒素残留等食品安全隐患；由于球虫的生活史比较复杂，不同时期具有不同的抗原，因此没有球虫亚单位疫苗，其弱毒苗容易反强，有潜在的危害(参看2006年第11期《家禽科学》中的"鸡球虫病药物防治存在的问题及对策")。中草药往往含有多种有效成分，由多种中草药原料制作的中药的成分更加复杂，是名符其实的联合用药，可以解决使用化学药物易产生耐药性的缺陷，又中草药为纯天然物质，经精选组方的中药抗球虫红物的安全性高。目前含有青蒿素(青蒿中的主要成分青蒿素有强力抗原虫作用)的用于抗鸡球虫的中药，存在以下局限性产品质量不稳定、高温下不不稳定(青蒿素具有热不稳定性，6(TC以上就分解)，而饲料制粒时的温度在卯。C左右，所以导致该类产品中的青蒿素含量大大降低，用药量大(在词料中的添加比例为12%)，用药成本高的。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种毒性小、抗球虫指数高、用药成本低的抗鸡球虫病的鸡球虫散及其制备方法。本发明所采用的技术方案是本发明所述鸡球虫散包含下列重量配比的原料药青蒿300800份、常山100200份、马鞭草100400份、滑石粉50100份、苦参50100份、e—环糊精2464份。优选的，所述原料药的重量配比为青蒿400份、常山200份、马鞭草200份、滑石粉100份、苦参100份、环糊精64份。本发明所述鸡球虫散的制备方法是按以下步骤进行的(1)取所述重量配比的常山、马鞭草、苦参用600目筛进行超微粉碎，备用；(2)取所述重量配比的青蒿干燥茎叶碎成粗粉，加入35倍石油醚回流提取4次，每次1小时，趁热滤过，合并滤液，减压回流石油醚至浸膏，浸膏加510倍量的70%乙醇热溶，2.5%活性炭回流脱色l小时，浓縮至浸膏，在60'C下干燥得青蒿素；粉碎后以青蒿素与丙酮的重量配比为l:60的比例与丙酮混合；然后匀速逐滴加入到转速为500r/m的饱和e—环糊精中，青蒿素与环糊精的摩尔比为l:1,加完后搅拌48小时，放入4'C冰箱冷藏，析出结晶；抽滤；沉淀物用纯化水洗涤3次，以除去残留主体，于干燥箱中6(TC干燥2小时即得青篙素一P—CD包合物；(3)将步骤(l)、(2)所得粉末与所述重量配比的滑石粉混匀包装即可。本发明的有益效果是本发明所述鸡球虫散的内容物主要由青蒿、常山、马鞭草、滑石粉、苦参、e—环糊精等做原料药制成，其中青蒿含有青蒿素，青蒿素有强力的抗原虫、清热凉血作用，常山含有常山碱，对鸡疟有显著疗效，马鞭草含有马鞭草甙，有清热解毒、截疟杀虫作用，苦参含有苦参碱，具有清热燥湿、祛风杀虫的作用，滑石粉具有清热解暑、祛湿敛疮作用，因此本发明产品具有清热祛湿、杀球虫、抗菌、促生长的功效，对鸡球虫病具有良好的预防作用，且毒性小，特别适用于鸡球虫病；制作中青蒿素被环糊精包被，高温加速试验后，其有效成分没有下降，具有光、热稳定性，因此产品在饲料中的添加量小(在饲料中的添加比例为为0.05%),抗球虫指数高、用药成本低。以下通过实验来阐述本发明所述鸡球虫散的有益效果试验例一、鸡球虫散的主要药效学试验摘要实验选用岭南黄快大鸡进行了饲料添加球虫攻毒试验、球虫的抗药性试验、鸡的生产性能试验和免疫水平试验。选用罗氏308进行了饲料添加球虫攻毒试验。试验结果表明该鸡球虫散对岭南黄快大鸡和罗氏308的抗球虫指数均为有效；攻毒球虫无抗药性；岭南黄快大鸡生产性能与对照组相比有显著提高(p〈0.05)，鸡球虫散对鸡的脏器无任何不良影响。试验目的采用标准的球虫卵囊攻毒试验，和生产性能试验，以ACI和抗药性、生产性能为指标确定鸡球虫散的抗球虫病的能力和球虫对该药的敏感性，以证实该药的抗球虫能力、提高生产性能的能力以及对肠道的无害化。。1鸡球虫散抗鸡球虫的效果1.1试验材料l丄l试验药物受试药物复方中草药添加剂超微粉(按照本发明申请中实施例1所述配方配制的鸡球虫散，由本公司配制)；阳性抗球虫对照药物癸氧喹酯、盐霉素、二硝托胺(由珠海溢盛饲料有限公司提供)试验动物240羽1日龄罗氏308(东莞正大提供)；1500羽1日龄岭南黄快大鸡(由佛山高明种鸡场提供)主要仪器显微镜，细胞计数器，电子天平，电子秤1.2试验方法与结果1.2.1动物分组与给药180只一日龄的罗氏308(东莞正大)，经检测无球虫，于12日龄时，选出144只体重相近的鸡(265±10)g，随机分为8组，(不感染不用药，感染不用药，阳性药及受试药组)；每组6个重复，每个重复4只。其其试验分组及饲喂饲料种类如下表所示(见下表)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>1.2.2实验步骤将鸡按照常规生产管理，自由采食(第12日龄起用各组配制鸡饲料)，饮水，网上养殖，并于第5日龄滴鼻免疫新支、法氏囊三联苗，1.5头份/羽；第11日龄注射免疫禽流感1头份/羽。12日龄时，除空白组外按照预试剂量进行攻毒(每羽经口人工感染1.0X103个艾美尔球虫孢子化卵囊)，于20日龄称重，解剖对肠道病变进行记分，于第19天收集粪便进行球虫计数。1.2.3实验指标于第1220日龄早上空腹重，记录实验期间死亡率，所有宰杀的鸡均进行肠道病变记分，第19天收集粪便进行球虫计数，宰杀时的重量。1.5药效评价标准药效评价指标用下列公式计算。死亡率=(每组因感染球虫致死的鸡数/组内鸡总数)X100%增重率=(每个感染组的平均增重/不感染不给要组的平均增重)X100%病变记分参照Johnson等的标准，根据剖检后肠道病变的严重程度分别计分。病变值参照MerckSharp的标准，即每组实验鸡的病变记分的平均数X10。卵囊计数由每组在感染卵囊后第7天排泄的粪便中，分多点选取新鲜粪便各5克，然后加10ml生理盐水，用研钵轻轻研磨几下，然后加入10ml生理盐水，放入带刻度试管中沉积30分钟，根据沉积物的体积调节生理盐水的量，使其比例为1:2，然后加入饱和食盐水，使其做IO倍稀释，混匀后用McMaster计数室，随机选取5个视野观察计数，最后求平均值。卵囊比值=(健康组或试验组卵囊数/感染不给药组的卵囊数)X100%卵囊值参照角田青的标准，即卵囊比数为01%时，卵囊值为0，2%~25%时为5，26%~50%时为10，51%~75%时为10，76%100%时为40。抗球虫指数(ACI):采用merek公司的标准，即抗球虫指数=(增重百分率+存活率)-(病变值+卵囊值)。如ACI《120为无效；；ACI在120-160为中等有效；ACI在160-180为良好；ACI>180为优秀。同时抗药性的判断标准根据孔繁瑶报道，以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、计算相对卵囊产量(ROP)值3项参数指标判断球虫对药物的抗药性。POAA-(感染用药组GSR-感染不用组GSR)/(不感染不用药组GSR-感染不用药组GSR)xi00%。其中GSR=每组平均末重/每组平均初重。POAA《50，有抗药性；POAA>50，无抗药性。RLS-(感染不用药对照组平均病变记分-感染用药组平均病变记分)/(感染不用药对照组平均病变记分)xl00%。RLS》50,无抗药性；RLS<50，有抗药性。110=感染用药组平均卵囊产量/感染不用药组平均卵囊产量x100。/。。R0P》15,有抗药性；ROP<15，无抗药性。1.2.4实验结果1.2.4.1各给药组抗球虫的效果的评价感染不用药组鸡只在接种孢子化卵囊后第3天，出现精神状态差，采食量减少。第4天开始出现血便。给药组中草药复方0.05%添加组(超0.05%)和癸氧喹酯组第6天出现血粪；其他组均于第5天开始出现血粪。抗球虫药物的抗球虫指数如下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>从上表可见，在平均增重方面，各感染组与不感染组有显著性差异，中草药复方0.05%添加组和癸氧喹酯添加组与感染不用药组有显著性差异。在抗球虫指数方面，中草药复方0.05%添加组药效在抗球虫中为优秀，癸氧喹酯为良好，其余各用要组具有中等的药效。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>从上表可见，感染球虫对中草药复方0.05%添加组没有抗药性，对其他给药组有部分抗药性。2鸡球虫散对鸡生产性能的影响2.1试验材料2丄1受试药物复方中草药添加剂超微粉(按照本发明申请中实施例1所述配方配制的鸡球虫散，由本公司配制)；阳性抗球虫对照药物奎氧喹酯、盐霉素、二硝托胺(由珠海溢盛饲料有限公司提供)。2丄2试验动物1260羽快大型一日龄三黄快大鸡，体重(34+3)g，由佛山高明种鸡场提供。2丄3试验主要仪器电子天平，电子秤。2.2试验方法与结果2.2.1动物分组与给药1260羽快大型一日龄三黄快大鸡(由佛山高明种鸡场提供)，均只体重(34+3)g，随机分为7个处理，每个处理6个重复，每个重复30羽鸡。试验期为7周，分为二个阶段(0-3周和4-7周)其试验分组及饲喂饲料种类如下表所示实验分组及药物添加剂量组别饲料种类复方中草药添加剂超微粉复方中草药添加剂超微粉0.05%+基础曰粮癸氧喹酯癸氧喹酯0.0003%+基础日粮盐霉素盐霉素0.006%+基础日粮二硝托胺球痢灵0.0125%+基础日粮正常对照基础日粮2.2.2试验基础日粮如下表试验基础日粮配方原料基础日粮营养价值小鸡料中大鸡料项目小鸡料中大鸡料玉米5565代谢能28503150豆粕28.519粗蛋白2117.5次粉52.5钙10.8玉米蛋白粉35总磷0.750.5进口鱼粉(62)42赖氨酸1.150.95猪油0.53.20.250,25食盐0.150.2蛋氨酸0.50.45磷酸氢钙1.50.65白石粉11赖氨酸0.20.3蛋氨酸0.150.15预混料11<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注预混料可为每千克配合饲料提供VA1800IU;VD34000IU;VE40mg;VK38mg;VB14mg;VB212mg;VB68mg;VB1240mg;盐酸80mg;泛酸24mg;叶酸2mg;生物素0.2mg;铁30mg;铜6mg;锌50mg;锰60mg;碘0.3mg;中大鸡料添加植酸酶100克。2.2.3饲养管理与免疫程序用笼养育雏，大生产管理方式管理，自由采食、饮水，注意做好保温、通风和及时清理粪便。按如下的免疫程序接种2.2.4测定项目2.2.4.1生产性能的影响(日增重、采食量、料肉比、成活率)每日记录投料量及余料，计算日采食量，每试验阶段始末(1、22、49日龄时)以重复为单位于清晨空腹进行称重，并记录鸡死亡情况，计算平均日增重、料重比、发病率、死亡率。2.2.4.2鸡球虫散对脏器的影响于52日龄时进行每个重复杀一羽尽心病理解剖，观察抗球虫药物对各个脏器的损伤。2.2.5统计分析采用SPSS11.5软件的单因素方差分析进行分析，以P<0.05表示显著性水平。2.2.6试验结果2.2.6.1鸡球虫散对鸡生产性能的影响组别超0.05%癸氧喹酯盐霉素二硝托胺正常对照采食量(g)33.84±0.7233.0±0.4233.29±0.6232.5±0.3532.5±0.70o日增重(g)20.15±0.2719.7±0.4519.82±0.4618.4±0.2019.6±0.54周料肉比％1.68±0.031.67±0.031.68±0.011.77±0.011.66±0.07成活率o/。1.51±0.131.51±0.131.51±0.131.57±01.27±0.20采食量(g)96.57±0.2087.9±0.2889.46±0.1186.5±0.25狄9±0.4310<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>鸡球虫散0.05。/。添加组的全期日均只增重为33g，与正常对照组31.4g及其他给药组有显著性差异。3.鸡球虫散对鸡脏器的影响52日龄解剖，发现阳性对照给药组特别是癸氧喹酯组，其肝脏淤血，呈黑色，整个肠道严重出血，肿胀甚至坏死。其他给药组与正常组无此病变。结语鸡球虫散的抗球虫指数为182.52，为优秀的抗球虫效果药，球虫对其无抗药性，其具有增加鸡平均日增重的作用，对其他生产性能无不良影响，对脏器无不良影响，因此相对其他药物而言，鸡球虫散具有抗球虫能力，对动物没有应急作用。试验例二急性毒性试验摘要观察鸡球虫散口服给药途径，测定鸡球虫散最大给药量试验。结果表明小鼠口服鸡球虫散水混悬液，最大给药量为生药15000.0mg/kg，相当于用量的50倍用量，小白鼠仍未出现死亡，表明中药粉剂鸡球虫散对小白鼠经口LD5O15000.0mg/kg。试验目的观察鸡球虫散口服给予动物后，所产生的毒性反映及死亡情况，或最大给药剂量，或推算临床鸡用量安全倍数，综合评价该药的安全性。l.材料与方法1.1药物复方中草药添加剂超微粉(按照本发明中实施例1所述配方配制的鸡球虫散)，500g袋装，批号20080302，由广东溢多利生物科技股份有限公司提供。1.2动物小白鼠60只，昆明种，雌雄各半，体重均为1822g。由广州军区军事医学研究院实验动物中心提供。1.3分组与药物配制小白鼠购回后正常饲养观察3d，随机分为6组，每组10只。先制备0.2%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液，按1:K稀释法制成5种浓度的鸡球虫散混悬液，最高药物浓度为25%(取鸡球虫散中药粉与0.2%CMC-Na溶液按1:3混合研磨而成)，组间浓度剂量比为1:1.2。1.4半数致死量(LD50)测定小白鼠灌胃给药前禁食6h。在24h内给药3次，每次间隔6h，每次灌胃量为0.2mL/10g体重，最高单次剂量为5000mg/kg。第6组为混悬液溶媒CMC-Na溶液的对照组。给药后按正常饲养并连续7d观察其中毒情况和动物死亡数。按简化寇氏法计算LD50及其95%可信限。2.结果2.1小白鼠在24h内给药3次后连续7d的观察期内，所有小白鼠均未出现明显的中毒症状，也未出现死亡现象。2.2各组动物急性毒性试验观察情况见下表急性毒性试验结果组别单剂量(mg/kg)3次总剂量(mg/kg)动物数死亡数死亡率12411.37233.9100022893.58680.5100033472.210416.6100044166.712500100055000.015000100060010002.3由上表可以看出，当给药总剂量达到15000.0mg/kg时，小白鼠仍未出现死亡，表明中药粉剂鸡球虫散对小白鼠经口LD50>15000.0mg/kg。3.结论根据毒理学试验原则，当受试物的一般急性毒性试验的LD5O10000.0mg/kg时，可不必再进行其他毒性试验。按联合国世界卫生组织(WHO)的五级标准和我国有关急性毒性分级标准，中药粉剂鸡球虫散对小白鼠经口LD50>15000.0mg/kg，表明鸡球虫散属于微毒级(实际无毒级)物质。试验例三、鸡球虫散长期毒性试验资料摘要大鼠连续给生药于0.05%、0.5%和1%高、中、低三种剂量，分别为正常用量的l、5、IO倍的鸡球虫散灌胃12周，停药两周；三种剂量的给药组与给予蒸馏水灌胃的正常组比较，各组大鼠进食量、体重均逐日增长，无明显差异；各组大鼠行为、活动、皮毛、大小便、血液细胞、血液生化(肝、肾功能)无异常变化。各组大鼠主要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺及性腺器官等，病理组织检査未见异常。1目的观察较大剂量、较长时间给予大鼠重复灌胃鸡球虫散12周，对大鼠产生的毒性反应，严重程度及首先出现的症状，毒性反应的靶器官及恢复和发展的情况，确定无毒反应剂量，为临床最大用药剂量提供依据。2材料与方法2.1药物和仪器受试药物鸡球虫散(按照本发明中实施例1所述配方配制的鸡球虫散)，由广东溢多利生物科技股份有限公司提供。电子天平、全自动血液学分析仪、全自动血液生化分析仪、生物显微镜等由华南农业大学兽医学院提供使用。2.2实验动物与分组大(白)鼠，SD系，共选择80只，体重为87.7±3.8g，雌雄各半，由南方医科大学实验动物中心提供，购买后正常饲养一周，在观察健康后进行试验用。将大鼠随机分为4组，每组20只(每组雌雄各10只)，分笼饲养。第l组设为空白对照组(不给药组)，第2、3、4组分别设为高、中、低的不同剂量试验组。2.3给药将"鸡球虫散"中药散剂分别按0.05%、0.5%和1%三种剂量，分别相当于鸡推荐使用量的l倍、5倍和10倍，折算成给药浓度分别为每lkg的鼠料中加入0.5、5g和10g的鸡球虫散。均匀混入基础鼠料中制成条状料，空白对照组喂不含药物的基础饲料。各组均自由饮用自来水。2.4试验的检测指标在连续给药后分别于试验的第30天和第60天，在每组各随机抽检宰杀8只大鼠(公母各4只)，各任取l只为病理组织学检査用。2.4.1—般情况观察每天观察各组大鼠的一般生活状况，如采食、饮水是否异常等。在试验的每10天时，称取各组大鼠的体重和饲料消耗量，求出词料利用率。2.4.2器官系数和含水量取每组8只大鼠的心、肝、脾、肺、肾等五个器官，用滤纸吸干表面后，称取器官湿重，求得器官系数(器官湿重与体重之比)；然后置于9(TC烘箱中烘干至恒重(约34h)，用器官湿重减去干重，得到各器官的含水量。2.4.3血液学指标测定分别采集各组8只大鼠的血液(加入抗凝剂)，利用全自动血液学分析仪测定白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、血小板数(PLT)、血细胞比容(HCT)、中性粒细胞数(MID)和淋巴细胞数(LYM)等指标。2.4.4血液生化指标测定分别采集各组8只大鼠的血液并制备血清，利用全自动血液生化分析仪测定天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酸转氨酶(ALT)、血蛋白质(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、血葡萄糖(GLU)等指标。2.4.5病理组织学检查在试验第30、60天时，每组各宰杀8只大鼠，先剖解肉眼观察，再任取1只大鼠的肝、肺、脾、肾作组织切片，显微观察其组织学变化。2.5数据处理用统计学方法比较试验第30、60天时各试验组与对照组间各指标的差异显著性。3结果3.1试验观察各组大鼠在试验期间的临床观察表现为健康，采食、饮水均正常。各试验组与对照组间饲料利用率的差异较小。高、中、低剂量组、对照组的饲料利用率在各期间依次表现为第110天期间公鼠0.333、0.329、0.337、0.340;母鼠0.329、0.334、0.340、0.338。第1120天期间:公鼠0.339、0.342、0.343、0.348;母鼠0.337、0.340、0.341、0.339。第2130天期间公鼠0.199、0.211、0.208、0.214;母鼠0.124、0.135、0.138、0.129。第3140天期间公鼠0.211、0.217、0.220、0.216;母鼠0.149、0.155、0.146、0.151。第4150天期间公鼠0.177、0.182、0.180、0.177;母鼠0.112、0.119、0,120、0.116。第5160天期间公鼠0.127、0.126、0.134、0.126;母鼠0.117、0.113、0.124、0.120。由结果可见，虽然大鼠在各阶段的饲料利用率数值有变化，这可能是由于各阶段生理特点决定的，但各试验期间内的各组公母大鼠的词料利用率均无明显的差异。3.2器官系数和器官含水量试验期内各组公母大鼠器官系数和器官含水量的测定结果见表1和表2。在试验第30天时，高、中、低剂量组的肝、心、脾、肺、肾的器官系数和器官含水量出现一定程度或轻度的升高或降低变化，但与对照组比较，均表现差异不显著(P>0.05)。第60天时，试验高、中、低剂量组的肝脏器官系数和含水量与对照组比较时，均表现一定程度的升高变化，但差异均不显著(P>0.05)。表l试验第30天和第60天时各试验组的器官系数值(》±^，n=8)试验器官对照组低剂量中剂量高剂量天数(0.5g/kg)(5g/kg)(10g/kg)15<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>和对照组间均无显著性差异(P>0.05)。第60天时，血液学指标中的红细胞数(RBC)和血细胞比容(HCT)在中剂量和高剂量组，与对照组比较均有一定的升高趋势但差异不显著(P>0.05)，其它各指标在试验组和对照组间均无显著性差异。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>3.4血液生化指标的检验大白鼠的血液生化指标值见表4。在试验第30天时，各剂量组的ALT(谷氨酸转氨酶)均表现为轻度降低，但差异不显著(P〉0.05)。第60天时，中、低剂量组的尿素氮(BUN)均表现一定的升高，但差异比较不显著(P>0.05)但高剂量组表现差异显著(P<0.05)。第30、60天时血液生化的其它各指标均无显著性变化。表4试验期内各试验组的血液生化指标(f±s.￡n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注表中同行相同指标的数据后字母相同(a)表示差异不显著(P〉0.05),字母不同(b)表示差异显著(P<0.05),字母不同(c)表示差异极显著(P<0.01)3.5病理学检查肉眼病理学观察结果各组大白鼠各脏器均无异常变化；病理学切片检查表明，大白鼠肝脏的肝细胞在高、中剂量的后期(60天)，出现轻度的肿胀、水泡变性，其它组织与对照组间无明显差异。4结论在鸡球虫散对大白鼠的亚急性毒性试验中，大白鼠按0.05%、0.5%和1%三种剂量，即分别为临床上猪的推荐使用量的1、5和10倍用量，以混饲方式，连续给药60天，通过饲料利用率、器官系数和含水量、血液学指标、血液生化指标、病理组织学检查等检测指标，试验结果表明中药制剂"鸡球虫散"对大白鼠的亚急性毒性较小，无明显的剂量-反应和时间-反应关系，是一种安全的猪用中药伺料添加剂。试验例四鸡球虫散的稳定性试验资料鸡球虫散是一种抗鸡球虫的中兽药。为了考察产品的稳定性，本实验对鸡球虫散(按照本发明申请实施例1配方生产)的3批样品，按照稳定性试验所规定的考察条件，分别对热、光、湿、加速等处理后，进行样品的性状、水分、PH、含量的考察和分析，旨在为客观地评价鸡球虫散产品的稳定性提供依据，现将试验报告结果报告如下l.热稳定性试验1.1方法将3各批次的样品分别置于一清洁赶走的带盖的培养皿中，每批次样品均匀分装成3份，厚度5mm，分别置于4(TC，60°C，8(TC的恒温培养箱中，连续加温处理10天。每天观察温度，IO天后取出，测定各样品各项指标，(性状、PH、水分、含量)。l丄l外观性状观察经各条件处理前后，外观色泽、状态。l丄2水分测定采用烘干法(《中国兽药典》二000五年版附录57页烘干法)。1丄3PH测定取样品l.Og,加水100ml，超声处理20分钟，按PH测定法测定(《中国兽药典》二000五年版附录46页烘干法)。l丄4鉴定精密称取黄花蒿样品粉末1.0g于250ml具塞锥形瓶中，精密量取石油醚(3060°C)60ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)15min，立即用流水冷却至室温；将超声后的石油醚提取液摇匀，滤过，倒入量筒，记录石油醚的体积V。精密量取黄花蒿提取液0.4ml于10ml的具塞刻度试管中，放入不再加热的沸水中挥干，得到含青蒿素的浸膏，加入2ml的95。/。乙醇，溶解残渣，用0.2。/。氢氧化钠溶液定容至10ml，摇匀，置(50士1)"C恒温水浴中微温30min，取出，流水冷却至室温，待液面回复至刻度，用0.22^1111微孔滤膜滤过，即得。对照品溶液的制备精密称取8(TC干燥至恒重的青蒿素对照品100mg，置100ml量瓶中，加入95%乙醇稀释至刻度，得到1mg/ml的青蒿素对照品母液，4"C冰箱保存备用。精密量取青蒿素对照品母液10.0ml于100ml量瓶中，以95%乙醇补充至20ml，用0.2%氢氧化钠溶液定容至100ml，摇匀，置(50士1)"C恒温水浴中微温30min，取出，流水冷却至室温，待液面回复至刻度，用0.22^1111微孔滤膜滤过，即得。空白溶液的制备取20m195。/。乙醇置于100ml量瓶中，用0.2%氢氧化钠溶液定容至100ml，摇匀，置(50土l)'C恒温水浴中微温30min,取出，流水冷却至室温，待液面回复至刻度，用0.22pm微孔滤膜滤过，即得。以空白溶液为参比，在292nm处分别测得青蒿素对照品溶液和供试品溶液吸光度值A标准和A样品，代入青蒿素含量计算公式M(mg/g)=(A样品xVxrx2)/(A标准x3)，其中，A样品为样品测得吸光度值，V为超声后样品石油醚的体积，A标准为0.1mg/ml青蒿素对照品吸光度值，r为转换系数。将上述数据分别代入青蒿素含量计算公式计算各样品中青蒿素含量。1.2热稳定性试验结果(见下表)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>干燥器内维持相对湿度为80%，将干燥器放置于4(TC恒温箱中并每天观察温度及湿度、连续处理10天。处理10天后，按热处理后的各项检查方法，测定各批样品与原始样品的质量比较。3.2湿稳定性试验结果(见下表)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>4.加速保存试验4.1方法为了观察该制剂在加湿条件下进行加速保存稳定性的考察，将以上加湿稳定性试验的样品，继续在相对湿度为80。/。及40'C恒温条件下连续处理45天后再按照热稳定性处理后的各项检查方法测定样品各项指标。4.2加速保存实验结果(见下表)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>5小结5.1由表1试验结果可知，该制剂在热稳定性试验中，在40'C、60'C加热处理10天后，外观性状、薄层鉴定基本上无差异，在8(TC处理10天后，含量也基本上五变化。故可判定在此条件下是稳定的。5.2由表2试验结果可知，该制剂对光稳定性试验在2500LX光照10天后，基本上各项指标无变化，说明该制剂对光基本稳定。5.3该制剂对湿稳定试验是在相对湿度80%，40'C恒温条件下处理10天后，样品测定结果除各批水分明显增加外，薄层鉴定与原样相比基本无差异，应属对湿稳定。5.4该制剂的加速保存试验，是在加湿试验的条件下继续处理45天。测定结果，样品PH无变化，水分明显上身，外观性状显示全部结块。薄层鉴定，与原始样相比，其含量无显著性差异，尚属基本稳定，但应注意吸潮对外观的影响。具体实施例方式实施例1:青蒿400Kg、常山200Kg、马鞭草200Kg、滑石粉100Kg、苦参100Kg、e—环糊精64Kg。制备步骤如下(1)取常山、马鞭草、苦参用600目筛进行超微粉碎，备用；(2)青蒿干燥茎叶碎成粗粉，加入3倍石油醚回流提取4次，每次l小时，趁热滤过，合并滤液，减压回流石油醚至浸膏，浸膏加10倍量70%乙醇热溶，2.5%活性炭回流脱色1小时，浓縮至浸膏，在6(TC下干燥得青蒿素；粉碎后以青蒿素与丙酮的重量配比为1:60的比例与丙酮混合；然后匀速逐滴加入到转速为500r/m的饱和P—环糊精中，青蒿素与环糊精的摩尔比为1:1，加完后搅拌4小时，放入4'C冰箱冷藏，析出结晶；抽滤；沉淀物用纯化水洗涤3次，以除去残留主体，于干燥箱中6(TC干燥2小时即得青篙素一P一CD包合物；(3)将步骤(1)、(2)所得粉末与滑石粉混匀包装即可。实施例2:青蒿300Kg、常山100Kg、马鞭草100Kg、滑石粉50Kg、苦参50Kg、e—环糊精24Kg。制备步骤如下(1)取常山、马鞭草、苦参用600目筛进行超微粉碎，备用；(2)青蒿干燥茎叶碎成粗粉，加入3倍石油醚回流提取4次，每次1小时，趁热滤过，合并滤液，减压回流石油醚至浸膏，浸膏加5倍量70%乙醇热溶，2.5%活性炭回流脱色1小时，浓縮至浸膏，在6(TC下干燥得青蒿素；粉碎后以青蒿素与丙酮的重量配比为1:60的比例与丙酮混合；然后匀速逐滴加入到转速为500r/m的饱和e—环糊精中，青蒿素与环糊精的摩尔比为1:1，加完后搅拌4小时，放入4-C冰箱冷藏，析出结晶；抽滤；沉淀物用纯化水洗涤3次，以除去残留主体，于干燥箱中60'C干燥2小时即得青篙素一e一CD包合物；(3)将步骤(1)、(2)所得粉末与滑石粉混匀包装即可。实施例3:取青蒿800Kg、常山200Kg、马鞭草400Kg、滑石粉100Kg、苦参100Kg、e—环糊精64Kg。制备步骤如下(1)常山、马鞭草、苦参用600目筛进行超微粉碎，备用；(2)青蒿干燥茎叶碎成粗粉，加入5倍石油醚回流提取4次，每次l小时，趁热滤过，合并滤液，减压回流石油醚至浸膏，浸膏加10倍量70%乙醇热溶，2.5%活性炭回流脱色1小时，浓縮至浸膏，在6(TC下干燥得青蒿素；粉碎后以青蒿素与丙酮的重量配比为1:60的比例与丙酮混合；然后匀速逐滴加入到转速为500r/m的饱和P—环糊精中，青蒿素与环糊精的摩尔比为1:1，加完后搅拌8小时，放入4'C冰箱冷藏，析出结晶；抽滤；沉淀物用纯化水洗涤3次，以除去残留主体，于干燥箱中6(TC干燥2小时即得青篙素一P一CD包合物；(3)将步骤(1)、(2)所得粉末与滑石粉混匀包装即可。权利要求1、一种鸡球虫散，其特征在于，它包含以下重量配比的原料药青蒿300～800份、常山100～200份、马鞭草100～400份、滑石粉50～100份、苦参50～100份、β-环糊精24～64份。2、根据权利要求1所述的鸡球虫散，其特征在于，所述原料药的重量配比为青蒿400份、常山200份、马鞭草200份、滑石粉100份、苦参100份、e—环糊精64份。3、一种权利要求1所述的鸡球虫散的制备方法，其特征在于，它是按以下步骤进行的(1)取所述重量配比的常山、马鞭草、苦参用600目筛进行超微粉碎，备用；(2)取所述重量配比的青蒿干燥茎叶碎成粗粉，加入35倍石油醚回流提取4次，每次1小时，趁热滤过，合并滤液，减压回流石油醚至浸膏，浸膏加510倍量的70%乙醇热溶，2.5%活性炭回流脱色l小时，浓縮至浸膏，在60'C下干燥得青蒿素；粉碎后以青蒿素与丙酮的重量配比为l:60的比例与丙酮混合；然后匀速逐滴加入到转速为500r/m的饱和P—环糊精中，青蒿素与环糊精的摩尔比为1:1,加完后搅拌48小时，放入4'C冰箱冷藏，析出结晶；抽滤；沉淀物用纯化水洗漆3次，以除去残留主体，于干燥箱中60'C干燥2小时即得青篙素一P—CD包合物；(3)将步骤(1)、(2)所得粉末与滑石粉混匀包装即可。全文摘要本发明公开了一种毒性小、抗球虫指数高、用药成本低的抗鸡球虫病的鸡球虫散及其制备方法。所述鸡球虫散包含重量配比的青蒿400份、常山200份、马鞭草200份、滑石粉100份、苦参100份、β-环糊精64份；所述鸡球虫散的制备方法是取青蒿干燥茎叶碎成粗粉，加入石油醚回流提取4次，取合并滤液减压回流石油醚至浸膏，浸膏加70％乙醇热溶，2.5％活性炭回流脱色，浓缩至浸膏，在60℃下干燥得青蒿素；粉碎后与丙酮混合；再匀速逐滴加入到饱和β-环糊精中，搅拌冷藏，析出结晶；抽滤；沉淀物用纯化水洗涤于干燥箱中60℃干燥得青篙素-β-CD包合物；再与滑石粉及超微粉碎的常山、马鞭草、苦参粉末混匀包装即可。文档编号A61K33/06GK101579451SQ20091015781公开日2009年11月18日申请日期2009年7月7日优先权日2009年7月7日发明者孟琼华,林林申请人:广东溢多利生物科技股份有限公司