用于缺氧疾病的治疗剂的制作方法

专利名称：用于缺氧疾病的治疗剂的制作方法
技术领域：
相关申请的交叉引用本申请要求2009年4月17日提交的美国临时申请第61/1 ，5 号的优先权。美 国临时申请第61/124，528的全部及其继续申请通过引用并入本申请。发明领域本发明涉及用于缺氧疾病的治疗剂，其包含新的转化的厌氧微生物，所述治疗剂 含有以下药物组合物的组合用于治疗缺氧疾病的药物组合物，其含有作为活性组分的所 述转化的厌氧微生物；以及药物组合物，其含有作为活性组分的、用于增强所述厌氧微生物 在缺氧疾病位置的建群和增殖的厌氧微生物建群和生长增强剂。此外，本发明涉及用于增 强所述转化的厌氧微生物在缺氧环境中的疾病位置的建群和生长的厌氧微生物建群和生 长增强剂。
背景技术：
背景技术：
近些年，作为用于治疗例如恶性肿瘤或缺血性疾病的缺氧环境中的疾病(下文 称为“缺氧疾病”)的方法，例如作为用于治疗实体瘤的方法，使用转化的厌氧微生物作为 基因转运体的方法已经引起了注意。例如，已经提出了使用转化的梭菌(Clostridium) 将基因转运至肿瘤位置的方法(参见例如美国专利第6416754号和第665观49号，以 及美国专利申请公布第2003/0103952号)。此外，已经提出了将转化的长双歧杆菌 (Bifidobacterium(B.) longum)应用于实体瘤的治疗(参见例如 JP A 2002-97144, Yazawa et al. , Cancer Gene Ther. ,7,269-274(2000), Yazawa et al. , Breast Cancer Res. Treat.，66，165-170(2001)) 使用表达载体来产生这些转化的微生物，所述表达载体例如在大肠杆菌和梭菌两 者中复制的穿梭质粒PNTR500F、pCDMOFT等(美国专利第64167M号和第665观49号，以 及美国专利申请公布第2003/0103952号)或在大肠杆菌和双歧杆菌两者中复制的穿梭质 粒pBLES100-S-eCD(JP A 2002-97144)。因为所有这些质粒载体是在大肠杆菌和转化的梭 菌或双歧杆菌两者中复制的穿梭载体，所以用这些质粒载体转化的细菌具有这样的风险， 即引入的基因可能横向转移到除了所述转化的细菌的其他的微生物，至少是兼性厌氧的大 肠杆菌，并且环境风险和实际治疗中的问题是关心的。此外，JP A 2002-97144描述通过将乳果糖腹膜内给予已经给予了长双歧杆菌 (B. longum)的小鼠，可以选择性地使长双歧杆菌在肿瘤组织中增殖。但是，其中描述的转化 体是使用可以被横向转移到其他厌氧大肠杆菌等的质粒载体进行转化的，并且仍然遗留了 关于其在缺氧疾病的治疗中安全和有效的使用的问题。发明概述技术问题在使用转化的厌氧微生物治疗缺氧疾病的方法中，所使用的转化的厌氧微生物必4须是非致病且无毒、仅在缺氧状态中的疾病组织中建群和生长，但是不在非缺氧状态中的 正常组织中建群或生长，以及被引入所述转化的厌氧微生物中的基因不会被横向转移到除 了所述转化的厌氧微生物的致病细菌或者需氧或兼性厌氧细菌。此外，为了使用转化的厌氧微生物治疗缺氧疾病的方法完全表现出其治疗效果， 所使用的转化的厌氧微生物需要不仅在缺氧疾病位置特异性建群，还能增殖到治疗有效 量，并且在治疗期持续存在直到治疗期完成。另一方面，因为有活力的细胞是静脉内给予或 给予到疾病组织中，所以所述转化的厌氧微生物的剂量优选地为尽可能地小，从而降低血 管中的影响和患者的负担，因此，转化的厌氧微生物特异性地在缺氧疾病位置增殖并且通 过必需的最小剂量增殖到治疗有效量是理想的。因此，本发明的目的是提供用于缺氧疾病的治疗剂，在使用转化的厌氧微生物治 疗缺氧疾病的方法中，所述治疗剂是安全且实用的，并且能以小剂量表现出效果。问题的解决方法为了解决以上问题，本发明人已进行大量的研究并且已经改进了穿梭质粒 pBLES100-S-eCD 以构建质粒 pAV001-HU-eCD_M968 (参见 WO 2007-136107)。本发明人通 过从其中移除PUC ori进一步改进了该质粒以构建质粒pBifiCD(参见美国临时申请第 61/1M，5 号)，pUC ori是含有大肠杆菌复制起点的片段。因为该质粒不含有大肠杆菌的 复制起点，所以用该质粒转化的细菌没有在大肠杆菌中复制的风险，即使发生向大肠杆菌 的横向转移。因此其是非常安全的转化的厌氧微生物，并且可以用作缺氧疾病的实用治疗 剂。由该质粒转化的细菌，例如长双歧杆菌105-A/pBifiCD(技术与评价专利微生物保藏国 ^tiif^Bf (National Institute of Technology and Evaluation Patent MicroorganismsDepositary)(下文称为NPMD，〒四2_0818日本千叶县木更津市力、f 鎌足2-5-8，保藏日 期2008年2月19日)登录号NITE BP-491)表现出良好的胞嘧啶脱氨酶(⑶)表达活性， 并且通过将其与前药5-FC联合使用，表现出非常显著的肿瘤生长抑制作用，并且其作为优 良的肿瘤治疗剂是有前途的，所述前药5-FC通过所述CD转变为抗肿瘤物质5-FU。但是，本 发明人已发现另一问题，即该转化的细菌在有机体组织中没有足够的建群和生长能力，并 且为了将对于治疗缺氧疾病足够的量的靶基因转运到例如实体瘤的靶组织，必须给予相对 大量的转化的细菌。因此，从安全性和费用的观点而言，使所述细菌有效地建群和增殖的方 法也是必需的。作为本发明人为了改进含有例如作为活性组分的长双歧杆菌105-A/ pBifi⑶(NPMD登录号NITE BP-491)的药物组合物作为缺氧疾病治疗剂的实用性的大量 研究的结果，已经发现该转化的厌氧微生物与含有作为活性组分的某种类型的糖类的药物 组合物的联合使用显著促进所述微生物在缺氧疾病位置的特异性建群和增殖，此外，可以 维持所述微生物在缺氧疾病位置的增殖并且可以显著增强治疗效果。本发明人还发现通过 联合使用该糖类，即使减少剂量的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物可以与高剂量产 生相同的治疗效果，从而改进作为缺氧疾病治疗剂的安全性。此外，因为这些糖类促进本发 明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物在缺氧疾病位置的建群和生长，所以它们可以 成为优良的厌氧微生物建群和生长增强剂。作为本发明人基于上述发现的进一步研究的结 果，完成了本发明。即本发明涉及5
(1)含有以下组合的缺氧疾病治疗剂药物组合物，其包含作为活性组分的由在厌氧微生物中发挥功能的表达载体所转 化的转化的厌氧微生物，所述表达载体不含有在大肠杆菌中发挥功能的质粒复制单元，和药物组合物，其包含作为活性组分的所述转化的厌氧微生物在缺氧疾病位置的建 群和增殖增强剂，(2)如(1)所述的治疗剂，其中所述表达载体包含1)质粒复制单元，其在除了大肠杆菌的厌氧微生物中发挥功能，和2)蛋白表达单元，其包含编码具有靶活性的蛋白的DNA和包含在所述厌氧微生物 中发挥功能的启动子和终止子的DNA片段，(3)如(2)所述的治疗剂，其中所述具有靶活性的蛋白是对缺氧环境中的疾病具 有治疗活性的蛋白，(4)如( 所述的治疗剂，其中所述对缺氧环境中的疾病具有治疗活性的蛋白是(a)具有抗肿瘤活性的蛋白或(b)具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋 白，(5)如(4)所述的治疗剂，其中所述对缺氧环境中的疾病具有治疗活性的蛋白是(b)具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白，(6)如(1)所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物选自双歧杆菌 (Bifidobacterium) > 乳酸杆菌(Lactobacillus)、肠球菌(Enterococcus)、链球菌 (Streptococcus)禾口梭菌，(7)如(6)所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物是双歧杆菌，(8)如(7)所述的治疗剂，其中所述双歧杆菌选自青春双歧杆菌 (B. adolescentis)、动物双歧杆菌(B. animalis)、婴儿双歧杆菌(B. infantis)、嗜热双歧 杆菌(B. thermophilum)、假长双歧杆菌(B. pseudolongum)、双歧双歧杆菌(B. bifidum)、短 双歧杆菌(B. breve)和长双歧杆菌，(9)如( 所述的治疗剂，其中所述双歧杆菌是长双歧杆菌，(10)如⑶)所述的治疗剂，其中所述双歧杆菌是长双歧杆菌105-A/pBifi⑶(NPMD 登录号 NITE BP-491),(11)如(5)所述的治疗剂，其中所述具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的 活性的蛋白选自胞嘧啶脱氨酶、硝基还原酶和b-葡糖醛酸糖苷酶，(12)如(11)所述的治疗剂，其中所述具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质 的活性的蛋白是胞嘧啶脱氨酶，(13)如(1)所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物的建群和增殖增强剂是至少1种 选自以下的阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、棉子糖和乳果 糖，(14)如(1 所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物的建群和增殖增强剂是葡萄糖 或麦芽糖，(15)如(14)所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物的建群和增殖增强剂是麦芽糖，(16)用于治疗缺氧疾病的厌氧微生物的建群和增殖增强剂，其包含作为活性组分 的至少1种选自以下的阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、棉6子糖和乳果糖，(17)如(16)所述的用于治疗缺氧疾病的厌氧微生物的建群和增殖增强剂，其中 所述活性组分是葡萄糖或麦芽糖，(18)如(17)所述的用于治疗缺氧疾病的厌氧微生物的建群和增殖增强剂，其中 所述活性组分是麦芽糖，(19)如(1)所述的治疗剂，其中所述包含作为活性组分的所述厌氧微生物的建群 和增殖增强剂的药物组合物是用于静脉内给药的制剂，(20)如(19)所述的治疗剂，其中所述活性组分是葡萄糖或麦芽糖，(21)如( 所述的治疗剂，其还包含药物组合物，所述药物组合物包含作为活性 组分的抗肿瘤物质前体，所述抗肿瘤物质前体由(b)具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤 物质的活性的蛋白转变为抗肿瘤物质，以及(22)如所述的治疗剂，其中所述抗肿瘤物质前体是5-氟胞嘧啶。发明的有利效果本发明的用于缺氧疾病的治疗剂没有重组基因在大肠杆菌中复制的风险，并且其 在环境观点和实际治疗中是非常安全的。此外，本发明的转化的厌氧微生物的建群和增殖 增强剂通过促进用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物在疾病位置的特异性建群和增殖 来改善治疗效果，并且能够使所述微生物的剂量降低。缺氧疾病治疗剂中，含有作为活性组 分的本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物的药物组合物和含有作为活性组分 的本发明的厌氧微生物建群和增殖增强剂的药物组合物进行组合，所述缺氧疾病治疗剂作 为可以显著改善转化的厌氧微生物的治疗效果并能够使所述转化的厌氧微生物的剂量降 低的安全的和优良的治疗剂是有前途的。附图简述

图1是显示质粒“pBifi⑶”的图谱的图。图2是显示来自长双歧杆菌Re_105A/pBifi⑶和麦芽糖的联合使用的肿瘤增殖抑 制作用的图。实施方案描述在一实施方案中，本发明提供包含以下药物组合物的组合的缺氧疾病治疗剂药物组合物，其包含作为活性组分的用在所述厌氧微生物中发挥功能并且不包含 在大肠杆菌中发挥功能的质粒复制单元的表达载体所转化的转化的厌氧微生物，和药物组合物，其包含作为活性组分的所述转化的厌氧微生物在缺氧疾病位置的建 群和增殖增强剂。本说明书中涉及的“包含药物组合物的组合的治疗剂”表示治疗剂，其是通过混合 至少两种类型的药物组合物而产生的新的药物组合物，或包含至少两种类型的在治疗中联 合使用的药物组合物的疾病治疗剂。当至少两种类型的药物组合物联合使用时，所述药物 组合物可以同时使用或可以以固定间隔分别使用。本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物是用表达载体转化的厌氧微生 物，所述表达载体是在厌氧细菌中发挥功能，特别是除了大肠杆菌的肠细菌中发挥功能的 质粒载体，所述除了大肠杆菌的肠细菌例如双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、链球菌或梭菌。本 发明的表达载体不含有在除了所述转化的细菌的细菌中发挥功能，特别是在大肠杆菌中发7挥功能的质粒复制单元。迄今报道的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物是由在大肠杆菌和转化的细 菌两者中发挥功能的穿梭载体所转化的，并且它们中没有用仅在非大肠杆菌转化体中发挥 功能的表达载体转化。因此，引入的基因可以被横向转移到除了所述转化的厌氧细菌的致 病细菌或者需氧或兼性厌氧细菌，并且关注环境风险和实际治疗中的风险。另一方面，本发明的转化的厌氧微生物已经用不含有在除了所述转化体的细菌中 发挥功能，特别是在大肠杆菌中发挥功能的质粒复制单元的表达载体所转化，即使发生向 大肠杆菌的横向转移，也没有在大肠杆菌中复制的可能性，并且在环境方面和实际治疗中 是非常安全的。更具体地，在本发明的用于治疗缺氧疾病的厌氧微生物的转化中使用的表达载体 特征在于，例如所述表达载体基本上由以下组成(1)质粒复制单元，其在除了大肠杆菌的 厌氧微生物中发挥功能，和( 蛋白表达单元，其基本上由编码具有靶活性的蛋白的DNA和 含有在所述厌氧微生物中发挥功能的启动子和终止子的DNA片段所组成，并且所述表达载 体不包含在除了所述转化体的细菌中发挥功能，特别是在大肠杆菌中发挥功能的质粒复制 单元。作为所述表达载体具有的在除了大肠杆菌的厌氧微生物中发挥功能的质粒复制 单元，可以使用任何质粒复制单元，只要其在除了大肠杆菌的厌氧微生物中发挥功能，例如 在诸如双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、链球菌或梭菌的肠细菌中发挥功能，并且不在除了所 述转化的细菌的厌氧微生物中发挥功能；质粒复制单元的实例包括在除了大肠杆菌的厌氧 微生物中发挥功能的质粒复制单元，例如在双歧杆菌中发挥功能的质粒复制单元，并且质 粒复制单元的具体实例包括形成自在双歧杆菌中发挥功能的OriV区和R印B基因的pTB6 rep单元及其单核苷酸多态性。此外，作为所述表达载体的蛋白表达单元的启动子和终止子，可以使用任何启动 子和终止子，只要其在厌氧微生物中发挥功能，例如在诸如双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、链 球菌或梭菌的肠细菌中发挥功能；启动子和终止子的实例包括编码组蛋白样DNA-结合蛋 白的基因的、在厌氧微生物中发挥功能的启动子和终止子，例如，编码双歧杆菌来源的组蛋 白样DNA-结合蛋白的基因的启动子和终止子DNA或其单核苷酸多态性。本发明的表达载体还可以包含选择标记活性基因单元。所述选择标记活性不是特 别限定的，只要其能够选择由本发明的质粒载体所转化的厌氧微生物；选择标记活性的实 例包括抗药性标记和营养缺陷型，所述抗药性标记例如壮观霉素抗性、氨苄西林抗性、四环 素抗性、新霉素抗性或卡那霉素抗性，并且壮观霉素抗性是优选的。选择标记活性基因单元的实例包括包含编码表现出壮观霉素抗性活性的蛋白 的DNA的DNA或其单核苷酸变体，及其启动子序列，例如编码粪肠球菌(Enterococcus faecalis)来源的壮观霉素腺苷酸转移酶(adenyltransferase)的DNA(下文称为AAD9盒) 及其单核苷酸多态性。本文涉及的“单核苷酸变体”表示单核苷酸多态性，其中至少1个位点的核苷酸已 被改变(下文称为SNP)，并且不仅包括仅在1个位点的SNP，还包括许多位点的SNP。作为插入表达载体的蛋白表达单元的基因，可以使用任何基因，只要其表达对缺 氧环境中的疾病的具有治疗活性的蛋白；例如，当本发明的缺氧疾病治疗剂用作恶性肿瘤治疗剂时，具有抗肿瘤活性的蛋白或具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋 白，并且只要所述基因不是例如巨大DNA (至少约101Λ)的抑制转化的DNA或对于接受体细 胞有毒的DNA。由所述基因表达的具有抗肿瘤活性的蛋白包括，例如细胞因子，并且细胞因子 的具体实例包括干扰素(IFN)-Ci、β和Y，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，白 介素(IL)-I α、1β、2、3、4、6、7、10、12、13、15 和 18，肿瘤坏死因子(TNF)- α，淋巴毒素 (LT)-i3，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，巨噬细胞移动抑 制因子(MIF)，白血病抑制因子(LIF)，T-细胞活化共刺激因子B7(CD80)和B7_2 (CD86)， KIT配体以及制瘤素M。此外，实例包括血管发生抑制物质，例如内皮抑制素、血管抑制素 (angiostatin)禾口三环(kringle) 1、2、3、4 和 5。这些蛋白的序列对于不同生物是已知的，并且通过利用例如基于所述序列信息的 PCR方法的已知技术来获得本发明中使用的编码具有抗肿瘤活性的蛋白的DNA是可能的。此外，具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白的实例包括胞嘧 啶脱氨酶(下文称为CD)，其是将5-氟胞嘧啶(下文称为5-FC)转变为抗肿瘤活性物质 5-氟尿嘧啶(下文称为5-FU)的酶；硝基还原酶，其是将5-氮杂环丙基-2，4-二硝基苯甲 酰胺(下文称为CB1940转变为抗肿瘤活性烷化剂的酶；1型单纯疱疹病毒胸苷激酶(下 文称为HSV1-TK)，其是将更昔洛韦转变为抗肿瘤活性代谢产物的酶；以及β -葡糖醛酸糖 苷酶，其是将葡糖醛酸化的抗肿瘤活性物质转变为抗肿瘤活性物质的酶，并且具有将抗肿 瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白的优选实例包括CD，其是将5-FC转变为5-FU 的酶。作为编码这样的CD的DNA，可以使用例如，分离自含有编码大肠杆菌来源的CD的 DNA的质粒pAdex 1 CSCD (Riken Gene Bank RDB No. 1591)的DNA，或分离自类似地含有编 码大肠杆菌来源的 CD 的 DNA 的质粒 pMK116(D. A. Mead et al.，Protein Engineering 1 67-74(1986))的 DNA。此外，当本发明的用于缺氧疾病的治疗剂被用作缺血性疾病的治疗剂时，插入本 发明的表达载体的蛋白表达单元的基因可以包括具有血管生成促进活性的蛋白，这对于缺 血性疾病的治疗是有用的。具体实例包括成纤维细胞生长因子2 (FGF2)、内皮细胞生长因子 (ECGF)、血管内皮生长因子(VEGF)和肝细胞生长因子(HGF)。类似地，这些蛋白的序列对于不同生物是已知的，并且通过利用例如基于所述序 列信息的PCR方法的已知技术获得本发明中使用的编码具有血管生成促进活性的蛋白的 DNA是可能的。本发明的用于治疗缺氧疾病的厌氧微生物的转化的表达载体包括任何质粒，只要 所述质粒包含，例如，质粒复制单元，其在除了大肠杆菌的厌氧微生物中发挥功能；和蛋白 表达单元，其包含编码具有靶活性的蛋白的DNA和包含在所述厌氧微生物中发挥功能的启 动子和终止子的DNA片段，并且当转化厌氧微生物时，所述质粒在该厌氧微生物中发挥功 能，但是所述质粒不含有在除了所述转化的细菌的细菌中发挥功能，特别是在大肠杆菌中 发挥功能的质粒复制单元。质粒的实例包括将包含编码具有靶活性的给定蛋白的DNA和包含在所述厌 氧微生物中发挥功能的启动子和终止子的DNA片段的蛋白表达单元引入已经在公布9中报道的穿梭质粒 pBLES 100 (Matsumura et al，，Biosci. Biotechnol. Biochem.， 61，1211-1212(1997))、pAVOOl (TO 2006-57289)、pBRASTAlOl (Tanaka et al. Biosci. Biotechnol. Biochem. ,69 (2) :422-425 (2005)) 、 pDG7、 pEBM3, pECM2, pLP825 等 (Alessandra Argnani et al.，Microbiology，142 :109-114(1996))，并且移除在大肠杆菌 中发挥功能的质粒复制单元而构建的那些。质粒的其他实例包括通过将插入例如pNTR500F、ρ⑶MOFT等(美国专 利第6416754号和第665观49号，以及美国专利申请公布第2003/0103952号)、 pBLES100-S-eCD (JP A 2002-97144)、pAV001-HU-eCD_M968 (W0 2007-136107)的质粒的蛋白表达单元与另一给定的蛋白表达单元进行重组，并进一步从中移除在大肠杆菌中发挥功 能的质粒复制单元而构建的穿梭质粒。本发明的表达载体的具体实例包括包含以下的载体pTB6 rep单元，其包含R印B 基因和OriV区，所述R印B基因和OriV区在双歧杆菌中作为在除了大肠杆菌的厌氧微生物 中发挥功能的质粒复制单元而发挥功能；和作为包含在所述厌氧微生物中发挥功能的启动 子和终止子的DNA片段的编码双歧杆菌来源的组蛋白样DNA-结合蛋白的基因的启动子和 终止子；和作为编码具有靶活性的蛋白的DNA的编码将5-FC转变为5-FU的CD酶的DNA ；以 及作为选择标记活性基因单元的编码粪肠球菌来源的壮观霉素腺苷酸转移酶的DNA(AAD9jS. ) O本发明的表达载体的更多具体实例包括由SEQ ID NO :1的核苷酸序列所示的 pBifiCD。可以按照例如美国临时申请第61/1 ，5 号中的描述来构建在本发明的用于治 疗缺氧疾病的厌氧微生物的转化中使用的表达载体。因此，本发明的表达载体可以通过以下构建(1)构建质粒，其包含例如pUC ori的大肠杆菌复制起点，以及可选的选择标记活 性基因单元，例如AAD9盒(下文称为选择标记质粒)(步骤1)，(2)制备选择标记质粒的线性质粒，将其与例如编码双歧杆菌来源的组蛋白样 DNA-结合蛋白的基因的启动子和终止子的启动子和终止子以及(a)具有抗肿瘤活性的蛋 白或(b)例如包含CD的片段的具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白 (下文称为蛋白表达单元)连接，以构建具有选择标记活性基因单元和蛋白表达单元的质 粒(下文称为选择标记活性蛋白质粒)(步骤2)，(3)制备该选择标记活性蛋白质粒的线性质粒，将其与例如形成自在双歧杆菌中 发挥功能的R印B基因和OriV区的pTB6 rep单元的DNA片段的在除了大肠杆菌的厌氧微 生物中发挥功能的质粒复制单元(下文称为质粒复制单元)连接，以构建具有大肠杆菌复 制起始位点和选择标记活性基因单元、蛋白表达单元和质粒复制单元的质粒(下文称为穿 梭质粒)(步骤3)，以及(4)从该穿梭质粒移除大肠杆菌复制起始位点(下文称为步骤4)。可以按照文献中描述的已知方法进行每个步骤的操作。本发明的表达载体还可以通过以下构建通过标准方法将蛋白表达单元插 入上文提及的各种类型的穿梭质粒，例如穿梭质粒pBLES100(MatSumura et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. ,61,1211-1212 (1997)), pAVOOl (WO 2006-57289)、pBRASTAlOl(Tanaka et al. , Biosci.Biotechnol. Biochem. ,69(2) :422-425 (2005))> pDG7> pEBM3> pECM2> pLP825 φ (Alessandra Argnani et al. , Microbiology, 142 109-114(1996))和 pNTR500F、pCD540FT 等(美国专利第 6416754 号和第 6652849 号，以及 美国专利申请公布第2003/0103952号)，然后类似地通过标准方法移除在大肠杆菌中发挥 功能的质粒复制单元，所述蛋白表达单元包含编码具有靶活性的给定蛋白的DNA和含有在 所述厌氧微生物中发挥功能的启动子和终止子的DNA片段。此外，以与上文的本发明的质粒pBifiCD相同的方式，其中含有大肠杆菌复制起 点的片段pUC ori被从质粒pAV001-HU-eCD-M968(W0 2007-136107)移除，本发明的表达载 体还可以通过以下构建从质粒pNTR500F、pCM40FT (美国专利第64167 号和第665观49 号，以及美国专利申请公布第2003/0103952号)、pBLES100-S-eCD (JP A 2002-97144)等移 除在大肠杆菌中发挥功能的质粒复制单元。此外，本发明的表达载体也可以通过以下构建将插入质粒pNTR500F、 PCM40FT (美国专利第6416754号和第665观49号，以及美国专利申请公布第2003/0103952 号)、pBLES100-S-eCD(JPA 2002-97144)、pAV001-HU-eCD-M968 (WO 2007-136107)等的蛋白表达单元与另一给定蛋白表达单元进行重组，然后从中移除在大肠杆菌中发挥功能的质 粒复制单元。本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物可以通过以下构建按照已知遗 传改造方法，使用上文提及的表达载体转化待转化的给定厌氧微生物。因为本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物在治疗例如实体瘤的缺氧 疾病的试剂中使用，所以该厌氧微生物必须是专性厌氧和非致病的；可以使用例如梭菌或 沙门氏菌(Salmonella)的致病细菌，如果它们成为非致病的，并且可以使用例如乳酸杆菌 的兼性厌氧细菌，如果其被突变为专性厌氧的。优选的实例包括非致病厌氧细菌；非致病的肠细菌是更优选的，其中双歧杆菌是 最优选的。双歧杆菌的实例包括青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜热双歧杆 菌、假长双歧杆菌、双歧双歧杆菌、短双歧杆菌和长双歧杆菌，并且长双歧杆菌是最优选的。这些细菌是商业上可获得的或容易地从保藏机构获得。例如，长双歧杆菌 ATCC-15707、双歧双歧杆菌ATCC-11863、婴儿双歧杆菌ATCC-15697等可以容易地从 ATCC(美国典型培养物保藏中心(The American Type Culture Collection))获得。每种细菌的菌株不是特别限定的，并且长双歧杆菌的菌株的实例包括长双歧杆菌 105-A菌株、长双歧杆菌aE-194b菌株、长双歧杆菌bs_601菌株和长双歧杆菌M101-2菌株， 其中长双歧杆菌105-A菌株是优选的。短双歧杆菌的菌株的实例包括短双歧杆菌标准菌株(日本微生物保藏中心 (Japan Collection of Microorganisms) (JCM) 1192)、短双歧杆菌aS_l 菌株和短双歧杆菌 I-53-8W菌株，其中短双歧杆菌标准菌株和短双歧杆菌aS-Ι菌株是优选的。婴儿双歧杆菌的菌株的实例包括婴儿双歧杆菌标准菌株(JCM1222)和婴儿双歧 杆菌1-10-5菌株，其中婴儿双歧杆菌标准菌株和婴儿双歧杆菌1-10-5菌株是优选的。此外，乳双歧杆菌(B. Iactentis)的菌株的实例包括乳双歧杆菌标准菌株 (JCM1220)。11
本发明的转化的厌氧微生物不是特别限定的，只要其能够在缺氧环境中的组织中 生长并表达具有靶活性的蛋白，而且没有保留的表达载体向除了转化的细菌的细菌的横向 转移的风险，特别是横向转移到致病或需氧或兼性厌氧微生物的风险。本发明的转化的厌氧微生物的优选的实例包括转化的厌氧微生物，所述转化的厌 氧微生物能够在缺氧环境中的肿瘤组织中生长并表达具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿 瘤物质的活性的蛋白。本发明的转化的厌氧微生物的更优选的实例包括形成自能够在缺氧 环境中的肿瘤组织中生长并表达将5-FC转变为5-FU的酶⑶的双歧杆菌的基因转运体，并 且本发明的转化的厌氧微生物的特别优选的实例包括由PBifiCD转化的长双歧杆菌105-A 菌株(长双歧杆菌 105-A/pBifiCD ；NPMD 登录号 NITE BP-491)。可以按照商业实验教科书中描述的方法构建本发明的基因转运体，例如Gene Manual (基因手册)(Kodansha)、Gene Manipulation Experimental Method (基因操作实 验方法)，Ed.作者 Yasuyuki Takagi (Kodansha)、Molecular Cloning (分子克隆)，Cold Spring Harbor Laboratory (1982) ^Molecular Cloning 2nd Edition (分子克隆第 2 片反)， Cold Spring Harbor Laboratory (1989)或Methods in Enzymo 1.(酶学方法)，194 (1991)。本发明的转化的厌氧微生物通过将其与用于促进微生物在靶机体组织中的建群 和增殖的建群和增殖增强剂联合使用，表现出更好的对于缺氧疾病的治疗效果。本发明中可以使用任何厌氧微生物建群和增殖增强剂，只要其能改善本发明的转 化的厌氧微生物在缺氧疾病位置特异性建群和增殖，只要其是安全的并可以静脉内给药。 厌氧微生物建群和增殖增强剂的实例包括糖类，例如阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽 糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、棉子糖和乳果糖。其中，葡萄糖、乳果糖和麦芽糖是优选的，并且麦芽糖是最优选的。包含作为活性组分的本发明的转化的厌氧微生物的药物组合物不是特别限定的， 只要其包含本发明的转化的厌氧微生物。此外，包含作为活性组分的本发明的转化的厌氧 微生物的药物组合物可以包含两种或更多种本发明的转化的厌氧微生物。此外，本发明的 药物组合物或缺氧疾病治疗剂可以与含有除了本发明的基因转运体的、表现出对缺氧疾病 的治疗效果的化合物的药物组合物或治疗剂联合使用。用于治疗缺氧疾病的、含有作为活性组分的本发明的转化的厌氧微生物的药物组 合物形式的实例包括含有所述转化的厌氧微生物的液体试剂或固体制剂。液体试剂可以通 过纯化本发明的转化的厌氧微生物的培养液，按照要求向其添加适当的生理盐水、液体替 换品或医药添加剂，并用其填装安瓿、小瓶等而产生。固体制剂可以通过向液体试剂添加合 适的保护剂，用其填装安瓿、小瓶等，然后冻干或L-干燥而产生，或通过向液体试剂添加合 适的保护剂，将其冻干或L-干燥，然后用其填装安瓿、小瓶等而产生。对于含有作为活性组分的本发明的转化的厌氧微生物的药物组合物的给药方法， 口服给药和肠胃外给药两者都是可以的，但肠胃外给药是优选的，例如可以进行静脉内注 射、皮下注射、局部输注或脑室内给药，并且静脉内注射是最优选的本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物的剂量不是特别限定的，只要其 对于在缺氧疾病位置建群并生长以表达有效治疗剂量的活性蛋白是足够的量，但是从最大 程度地减轻患者在给药中的负担的观点，剂量优选为尽可能地小。当在实际治疗中使用时，用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物的剂量根据疾病的严重程度和患者的体重、年龄或性别适当选择，并且可以视情况根据改善程度增加或减 少。例如，剂量根据所使用的厌氧微生物产生的活性蛋白的有效治疗剂量、所使用的厌氧微 生物产生的活性蛋白的量等适当设定。具体地，在静脉内给药的情况下，为了避免例如由于大量细菌的栓塞风险，优选使 用以尽可能低浓度的注射，将注射分为多次注射或用适当的输液液体稀释注射并且通过连 续输注给药。例如，在成人的情况下，每天一次至多次给予IO6Cfu至IO12Cfu每千克体重的 转化的厌氧微生物细胞，视情况连续或间隔地进行给药，并且持续1天至多天。更具体地， 每成人直接给予ImL至IOOOmL含有104cfu/mL至101(lCfu/mL的转化的厌氧微生物细胞的 制剂，或用适当的液体代替品稀释，并且优选地将其分为1天1次至多次、持续1天至多天 连续给药。此外，在涉及直接对疾病组织直接给药的局部给药的情况下，因为必须要使细菌 细胞在整个疾病组织中尽可能多地建群和增殖，所以给予高浓度注射是理想的，理想地在 疾病组织的多个位置进行给药。例如，在成人的情况下，每天一次或多次给予IO6Cfu至 IO12Cfu每千克体重的本发明的厌氧微生物细胞，视情况连续或间隔地进行给药，并且按照 需要持续1天至多天。更具体地，每成人每天多次直接给予ImL至IOOOmL含有104cfu/mL 至101(lCfU/mL的本发明的厌氧微生物细胞的制剂，并且按照需要持续1天至连续多天。当在治疗期间观察到疾病组织中的细菌已消失，则首先暂停治疗，然后以与上文 相同的方式再次给予细菌。包含作为活性组分的本发明的厌氧微生物建群和增殖增强剂的药物组合物的实 例包括包含所述厌氧微生物建群和增殖增强剂的液体试剂或固体制剂。液体试剂可以通过 以下产生在用于注射的水中溶解所述厌氧微生物建群和增殖增强剂，视情况向其中添加 例如缓冲剂、等渗剂、稳定剂或PH调整剂的适当药物添加剂，进一步灭菌，并且然后装入袋 中或输液瓶中。此外，所述固体制剂可以通过将所述厌氧微生物建群和增殖增强剂与例如 缓冲剂、等渗剂、稳定剂或PH调整剂的适当的药物添加剂混合来产生。当给予该固体制剂 时，通过将其在用于注射的灭菌水、生理盐水等中溶解来进行给药。作为本发明的厌氧微生物建群和增殖增强剂的药物组合物的给药方法，静脉内给 药是最优选的，但是按需要可以通过皮下注射、局部输注、脑室内给药等进行，并且也可以 进行口服给药。本发明的厌氧微生物建群和增殖增强剂的剂量不是特别限定的，只要该剂量是使 本发明转化的厌氧微生物能在缺氧疾病位置特异性建群、增殖为有效治疗量，并且在治疗 期中持续存在直至完成的量，但是其优选地为具有对于患者或疾病组织尽可能小的影响的量。实际治疗中使用的剂量根据患者的体重、年龄或性别适当地选择，并且可以视情 况根据本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物的剂量而增加或减少。具体地，例如，当将含有作为活性组分的麦芽糖的厌氧微生物建群和增殖增强剂 用于成人时，用于静脉内给药的10%麦芽糖溶液以3mL至20mL每千克体重、每天1次进行 给药，并且优选地以5mL至IOmL每千克体重、每天1次进行给药。更具体地，用于静脉内给 药的10%麦芽糖溶液制剂在治疗期以200mL至600mL每成人、每天1次连续给药。本发明的厌氧微生物建群和增殖增强剂在给予本发明的转化的厌氧微生物时，可以作为用于稀释细菌的输注液体进行给药。此外，本发明的用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂可以含有除了本发明的转化 的厌氧微生物或厌氧微生物建群和增殖增强剂的其他组分，只要本发明的效果不受影响。 这些其他组分的实例包括药学上可接受的支持物、赋形剂和稀释剂。当本发明的转化的厌氧微生物是引入了基因的厌氧细菌，所述基因可以表达具有 将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白时，将包含作为活性组分的用于治疗缺 氧疾病的转化的厌氧微生物的用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂与可以由转化的厌氧 微生物所表达的蛋白转变为有效量的抗肿瘤物质的一定量的抗肿瘤物质前体联合使用。该抗肿瘤物质前体可以包含在用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂中，所述药物 组合物或治疗剂含有作为活性组分的本发明的转化的厌氧微生物，但是优选与含有作为活 性组分的本发明的用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物的用于缺氧疾病的药物组合物 或治疗剂联合使用含有所述抗肿瘤物质前体的药物组合物。在本发明中使用的抗肿瘤物质前体不是特别限定的，只要其在前体(前药)状态 对于正常组织具有较少的副作用，并且在转变为抗肿瘤物质后，对于缺氧疾病的治疗靶标 具有高治疗效果，该抗肿瘤物质前体的实例包括5-FC，其是5-FU的前药；CB1945，其被转变 为抗肿瘤活性烷化剂；更昔洛韦，其被转变为抗肿瘤活性代谢物；以及葡糖醛酸化的抗肿 瘤活性物质。因此，当将本发明的用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂与抗肿瘤物质前体联合 使用时，给予本发明的用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂的方法可以与给予含有抗肿瘤 物质前体的药物组合物的方法相同或不同，并且这些给药可以同时进行或在分别的时间进 行；给予含有抗肿瘤物质前体的药物组合物优选地在给予本发明的用于缺氧疾病的药物组 合物或治疗剂后，允许足够的时间以使本发明的转化的厌氧微生物在肿瘤细胞上生长之后 进行。此外，当将本发明的用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂与抗肿瘤物质前体联合 使用时，因为用于治疗缺氧疾病的转化的厌氧微生物仅在缺氧环境中的肿瘤组织中建群和 增殖，并且在那里局部地产生活性蛋白，所以与使用普通抗肿瘤物质前体治疗实体瘤的方 法相比，可以显著抑制副作用，并且抗肿瘤物质前体的剂量可以设定在宽范围内。抗肿瘤物质前体的剂量可以根据联合使用的转化的厌氧微生物在肿瘤组织中的 增殖速率和抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的效率适当选择。以与对于基因转运体的剂 量的相同的方式，可以视情况根据疾病的严重程度和患者的体重、年龄或性别进行选择，并 且可以视情况根据改善程度增加或减少。例如，在实际治疗中，剂量是根据以下适当设定使用的抗肿瘤物质前体和将转变 为的抗肿瘤物质的类型、转变自抗肿瘤物质前体的抗肿瘤物质的有效治疗剂量、所使用的 厌氧微生物产生的具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白的类型以及所 使用的厌氧微生物产生的活性蛋白的量等具体地，例如，当将表达⑶的转化的厌氧微生物与抗肿瘤物质前体5-FC联合给 药时，在确认细菌已在疾病组织中建群和生长，并且细菌已经在血液和正常组织消失后，以 Img/天至IOOmg/天每成人千克体重、每天1次或多次、在治疗期连续给予5-FC。给药方法 优选为口服给药，但是可以进行例如静脉内给药或肛门给药的肠胃外给药。14
本发明涉及的“X和Y的组合”包括X和Y各自在不同配置(configuration)的情 况以及X和Y在单一配置的情况(例如含有X和Y的配置)。当X和Y在不同配置时，X和 Y还可以各自含有另一组分。本发明的用于缺氧疾病的药物组合物或治疗剂可以应用于具有缺氧环境的疾病， 并且优选地应用于不同类型的实体癌。实体癌的实例包括大肠癌、脑瘤、头颈癌、乳腺癌、 肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、胰岛细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、肾细胞 癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、睾丸癌、前列腺癌、睾丸肿瘤、卵巢癌、子宫癌、甲状腺癌、恶性类 癌瘤、皮肤癌、恶性黑色素瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、成神经细胞瘤、维尔姆斯肿瘤(Wilm’ s tumor)、成视网膜细胞瘤、黑色素瘤和鳞癌。此外，在缺氧环境中的其他疾病的实例包括缺血性疾病，例如心肌梗死或闭塞性 动脉硬化，以及下肢缺血性疾病，例如伯格病(Buerger’ s disease)。实施例结合参考实施例和实施例，本发明在下文更具体地进行解释，但是本发明的技术 范围不局限于这些实施例。长双歧杆菌Re-105A/pBifiCD(NITE BP-491)冷冻制剂的产牛将2mL的通过美国临时申请第61/124，528号中所述的方法产生的长双歧杆菌 Re-105A/pBifiCD的培养液倒入2L的培养基(APS-2S-2. 5R培养基)，并在约40°C下厌氧培 养18至21小时，该APS-2S-2. 5R培养基是通过添加葡萄糖、大豆肽(Hinute (商标)SMP)、 盐酸半胱氨酸、泛酸钾、生物素、烟酸、核黄素、盐酸硫胺素、抗坏血酸、碳酸钠、对氨基苯甲 酸、胸苷、硫酸镁、硫酸锰、氯化钠、磷酸二氢钾、氯化铁等来制备。培养完成后，使用装有孔径为0. 8微米的超滤膜(产品号FSOO1K05，Pal 1 Corporation)的滤器，通过过滤来纯化细菌液体，从而得到纯化的细菌液体。将用于注射的水添加到IOOg的甘油从而将总量补足为1L，并且使用装有孔径为 0.2微米的滤膜将其过滤，然后在121°C下高压灭菌20分钟，从而得到10%甘油溶液。将等量的10%甘油溶液添加到纯化的细菌液体，以得到5%甘油制剂溶液，并且 每个30mL容积小瓶容器装入IOmL的5%甘油制剂溶液，填入无菌过滤的氮气，然后密封。随后，使用液氮将小瓶冷冻并在低温冰箱中保存。长双歧杆菌Re-105A/pBifiCD(NITE BP-491)的各种类型糖类的同化作用使用API 50CH 和 API 20A 确认长双歧杆菌 Re_105A/pBif iCD (NITE BP-491)的各 种类型糖类的同化作用。通过标准方法，将菌落悬浮于API 50CH或API 20A培养基中，调整混浊度，然后接 种试剂盒平板，进行培养，并且培养M小时和48小时后通过颜色变化来进行评价。基于48 小时后的结果进行评价。API 50CH和API 20A测试的每个由两个测试员进行两次。对甘油、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇、水杨苷、纤维二 糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、松三糖和棉子糖进行了 API 20A测试，但因为其他糖类没 有包括为测试项，所以未对其他糖类进行测试。基于API 50CH和API 20A最终评价，进行总体评价。
基于对于API 50CH和API 20A中每个的4个测试结果(由两个测试员中的每个 进行两次测试)，进行API 50CH和API 20A最终评价。当API 50CH和API 20A最终评价不同时，因为API 20A是为双歧杆菌设计的试剂 盒，所以使用API 20A评价，并且对于除了 API 20A的那些的测试项，使用API 50CH评价。结果为是单糖的L-阿拉伯糖、D-木糖、半乳糖和葡萄糖，是二糖的麦芽糖、乳糖和 蜜二糖以及是三糖的松三糖和棉子糖显示为阳性，并且是单糖的核糖和果糖以及是二糖的 蔗糖显示为弱阳性。表1中给出测试结果。在表中，(+)表示阳性，(-)表示阴性，并且(w)表示弱阳 性，以及(V)和(WV)表示测试结果中的变异性。API 20A栏中的(NT)表示未进行测试(非测试项)。表1各种糖类的同化作用
权利要求
1.用于缺氧疾病的治疗剂，包含以下药物组合物的组合药物组合物，其含有作为活 性组分的、由在厌氧微生物中发挥功能的表达载体所转化的厌氧微生物，所述表达载体不 含有在大肠杆菌中发挥功能的质粒复制单元；以及药物组合物，其含有作为活性组分的、所 述厌氧微生物在缺氧疾病位置的建群和增殖增强剂。
2.如权利要求1所述的治疗剂，其中所述表达载体包含1)质粒复制单元，其在除了大肠杆菌的厌氧微生物中发挥功能，和2)蛋白表达单元，其包含编码具有靶活性的蛋白的DNA和包含在所述厌氧微生物中发 挥功能的启动子和终止子的DNA片段。
3.如权利要求2所述的治疗剂，其中所述具有靶活性的蛋白是对缺氧环境中的疾病具 有治疗活性的蛋白。
4.如权利要求3所述的治疗剂，其中所述对缺氧环境中的疾病具有治疗活性的蛋白是(a)具有抗肿瘤活性的蛋白，或(b)具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白。
5.如权利要求4所述的治疗剂，其中所述对缺氧环境中的疾病具有治疗活性的蛋白是(b)具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性的蛋白。
6.如权利要求1所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物选自双歧杆菌 (Bifidobacterium) > 乳酸杆菌(Lactobacillus)、肠球菌(Enterococcus)、链球菌 (Streptococcus)禾口梭菌(Clostridium)。
7.如权利要求6所述的疾病治疗剂，其中所述厌氧微生物是双歧杆菌。
8.如权利要求7所述的疾病治疗剂，其中所述双歧杆菌选自青春双歧杆菌 (B. adolescentis)、动物双歧杆菌(B. animalis)、婴儿双歧杆菌(B. infantis)、嗜热双歧 杆菌(B. thermophilum)、假长双歧杆菌(B. pseudolongum)、双歧双歧杆菌(B. bifidum)、短 双歧杆菌(B. breve)和长双歧杆菌(B. Iongum)。
9.如权利要求8所述的治疗剂，其中所述双歧杆菌是长双歧杆菌。
10.如权利要求9所述的疾病治疗剂，其中所述双歧杆菌是长双歧杆菌105-A/ pBifiCD(专利微生物保藏中心(MPMD)登录号NITE BP-491)。
11.如权利要求5所述的治疗剂，其中所述具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质 的活性的蛋白选自胞嘧啶脱氨酶、硝基还原酶和b-葡糖醛酸糖苷酶。
12.如权利要求11所述的疾病治疗剂，其中所述具有将抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤 物质的活性的蛋白是胞嘧啶脱氨酶。
13.如权利要求1所述的治疗剂，其中所述厌氧微生物的建群和增殖增强剂是选自以 下的至少一种阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、棉子糖和乳 果糖。
14.如权利要求13所述的疾病治疗剂，其中所述厌氧微生物的建群和增殖增强剂是葡 萄糖或麦芽糖。
15.如权利要求14所述的疾病治疗剂，其中所述厌氧微生物的建群和增殖增强剂是麦芽糖。
16.厌氧微生物的建群和增殖增强剂，包含选自以下的至少一种作为活性组分阿拉 伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、棉子糖和乳果糖。
17.如权利要求16所述的厌氧微生物的建群和生长增殖增强剂，其中所述活性组分是 葡萄糖或麦芽糖。
18.如权利要求17所述的厌氧微生物的建群和增殖增强剂，其中所述活性组分是麦芽糖。
19.如权利要求1所述的治疗剂，其中所述包含作为活性组分的、所述厌氧微生物的建 群和增殖增强剂的药物组合物是用于静脉内给药的制剂。
20.如权利要求19所述的治疗剂，其中所述活性组分是葡萄糖或麦芽糖。
21.如权利要求5所述的治疗剂，还包含包含作为活性组分的抗肿瘤物质前体的药物 组合物，所述抗肿瘤物质前体由(b)具有将所述抗肿瘤物质前体转变为抗肿瘤物质的活性 的蛋白转变为抗肿瘤物质。
22.如权利要求21所述的疾病治疗剂，其中所述抗肿瘤物质前体是5-氟胞嘧啶。
全文摘要
本发明提供了用于例如实体瘤的缺氧疾病的治疗剂，其包含以下药物组合物的组合用于治疗缺氧疾病的药物组合物，其含有作为活性组分的转化的厌氧微生物；以及药物组合物，其含有作为活性组分的、用于增强所述厌氧微生物在缺氧疾病位置的特异性建群和增殖的厌氧微生物建群和生长增强剂。此外，本发明提供了用于增强转化的厌氧微生物在缺氧环境中的疾病位置的建群和生长的厌氧微生物建群和生长增强剂。
文档编号A61K35/74GK102046190SQ20098012058
公开日2011年5月4日 申请日期2009年4月17日 优先权日2008年4月17日
发明者佐々木贵之, 嶋谷-柴田裕子, 清水瞳, 米仓弘美 申请人:阿内罗药物科学株式会社