专利名称：清肺抑火片的质量控制方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种清肺抑火片的质量 控制方法。
背景技术：
清肺抑火片的主要成分和含量如下黄芩225g 桅子129g 黄柏64g大黄193g 苦参97g 天花粉129g知母97g 桔梗129g 前胡64g制备方法以上九味，桔梗、大黄粉碎成细粉；桅子、知母加水煎煮二次，第一次2 小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量；前胡、苦参、黄柏、黄芩用60%乙醇 加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时；天花粉用25%乙醇加热 回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，合并醇液，回收乙醇，浓缩至适 量。合并上述水、醇浓缩液，继续浓缩至稠膏，加入桔梗等粉末及辅料，混勻，制成颗粒，干 燥；或将合并后的浓缩液喷雾干燥成干膏粉，加入桔梗等粉末及辅料适量，混勻，制成颗粒。 压制成1000片，或包薄膜衣，即得，其中素片每片重0. 6g，薄膜衣片每片重0.61g。功能与主治清肺止嗽，降火生津。用于肺热咳嗽，痰涎壅盛，咽喉肿痛，口鼻生疮， 牙齿疼痛，牙根出血，大便干燥，小便赤黄。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能够定性检测药物成分的 清肺抑火片的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果更加准确的特点。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种清肺抑火片的质量控制方法，其方法的步骤是(1)以桅子苷为对品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中的桅子成分；(2)以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中的黄柏成分；(3)以苦参碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中的苦参成分；(4)以大黄为对照药材、大黄酚、大黄素为对照品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火 片中的大黄成分；(5)以黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法测定清肺抑火片中的黄芩含量。而且，所述薄层色谱法鉴别处方中的桅子的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品，研细，取粉末，加50%甲醇，超声处理， 滤过，滤液作为供试品溶液；②对照品溶液的制备另取桅子苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含4mg的溶液， 作为对照品溶液；③薄层色谱及结果吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2-5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯丙酮甲酸水=5 5 1 1为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10%硫酸乙醇溶液，110°C加热至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色 谱相应位置上是否显相同的颜色斑点，确定供试品溶液中是否含有桅子成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别处方中的黄柏的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品，薄膜衣片除去包衣，研细，取粉末 0. lg，加乙醚，振摇，滤过，弃去乙醚液，残渣加甲醇超声处理，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供 试品溶液；②对照品溶液的制备另取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的 溶液，作为对照品溶液；③薄层色谱及结果吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2-5 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以正丁醇36%乙酸=7 2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫 外光灯下检视，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的荧光斑 点，确定供试品溶液中是否含有桅子成分。而且，所述薄层色谱法鉴别处方中的苦参的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品各，薄膜衣片除去包衣，研细，取粉末 6g，加浓氨试液2ml ；三氯甲烷放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供 试品溶液；②对照品溶液的制备另取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶 液，作为对照品溶液；③薄层色谱及结果吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各3-5 μ 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯丙酮乙酸乙酯浓氨试液=2 3 5 0.2 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应 的位置上是否显相同的颜色斑点，确定供试品溶液中是否含有苦参成分。而且，所述薄层色谱法鉴别处方中的大黄的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品各，研细，取粉末lg，加甲醇，振摇提取， 滤过，滤液作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备另取大黄对照药材，研细，加甲醇5ml，振摇提取，滤过， 滤液作为对照药材溶液；对照品溶液A的制备取大黄酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含 Img的溶液，作为对照品溶液A ；对照品溶液B的制备取大黄素对照品适量，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液B ；③薄层色谱及结果吸供试品溶液7-10 μ 1，对照药材溶液4-6 μ 1，对照品A、B溶 液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 6 2的上 层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于氨蒸气饱和展开缸内，检视在对照品色谱中在与大 黄药材和大黄对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含 有大黄成分。而且，所述高效液相检测的黄芩含量的方法为①色谱及检测条件流动相甲醇水磷酸=55 45 0. 2，流速1. Oml/min, 柱温室温；检测波长315nm，进样量10μ 1 ；②对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml中含0. Img的溶液，即得；③供试品溶液的制备取清肺抑火片样品，研细，混勻，精密称取0.2g细粉，置具 塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足 减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；④测定及结果分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液与供试品溶液各10μ 1， 注入液相色谱仪，测定，即得，本品每片重0. 6g含黄芩以黄芩苷计不得少于6. 47mg。本发明的优点和积极效果是由于原质量标准中没有相应的控制标准，本发明中进行了桅子、黄柏、大黄、苦参、 桔梗的薄层鉴别试验，筛选出重现性好、专属性强、斑点显色清晰、结果易判断的方法纳入 标准中，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确， 质量更加容易控制。
图1为本发明桅子薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为1、样品0512726，2、 样品0512724，3、样品0601740，4、桅子苷对照品，5、桅子阴性样品溶液；图2为本发明黄柏薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为1、样品0512726，2、样 品0512724，3、样品0601740，4、盐酸小檗碱对照品，5、黄柏阴性样品溶液；图3为本发明苦参薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为1、样品0512726，2、样 品0512724，3、样品0601740，4、苦参碱对照品，5、苦参阴性样品溶液；图4为本发明大黄薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为1、样品0512726，2、样 品0512724，3、样品0601740，4、大黄对照药材，5、大黄酚对照品，6、大黄素对照品，7、大黄 阴性样品溶液；图5为本发明桔梗薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为1、样品0512726，2、样 品0512724，3、样品0601740，4、桔梗对照药材，5、桔梗阴性样品溶液；图6为本发明黄芩苷对照品溶液色谱图；图7为本发明黄芩苷阴性样品色谱图；图8为本发明黄芩检测中样品0601740色谱9为本发明黄芩检测中样品0512726色谱图；图10为本发明黄芩检测中样品0512724色谱图。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的， 不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。一种清肺抑火片的质量控制方法，其方法的步骤是(1)采用薄层色谱法，以桅子苷为对照品，鉴别处方中的桅子。①供试品溶液的制备取清肺抑火片三批样品各5片，薄膜衣片除去包衣，研细， 取粉术lg，加50%甲醇10ml，超声处理40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。②阴性样品溶液的制备按处方配比，取除桅子外的其他药材，按原药制备工艺制 片，再按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
③对照品溶液的制备另取桅子苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含4mg的溶液， 作为对照品溶液。④薄层色谱及结果照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸 取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各2-5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以乙酸乙酯丙酮甲酸水=5 5 1 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸 乙醇溶液，110°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同 的颜色斑点，阴性样品溶液无干扰，结果见图1。(2)采用薄层色谱法，以盐酸小檗碱为对照品，鉴别处方中的黄柏。①供试品溶 液的制备取清肺抑火片三批样品各5片，薄膜衣片除去包衣，研细， 取粉末0. lg，加乙醚10ml，振摇15分钟，滤过，弃去乙醚液，残渣加甲醇5ml超声处理15分 钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。②阴性样品溶液的制备按处方配比，取除黄柏外的其他药材，按原药制备工艺制 片，再按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。③对照品溶液的制备另取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的 溶液，作为对照品溶液。④薄层色谱及结果照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验， 吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性样品品溶液各2-5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以正丁醇36%乙酸=7 2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供 试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，结果见下 图2。其中在展开剂的选择上，我们在以前的方法中以苯乙酸乙酯异丙醇 甲醇浓氨试液=12 6 3 3 1、苯乙酸乙酯异丙醇甲醇浓氨试液= 12 6 3 6 2、苯乙酸乙酯异丙醇甲醇浓氨试液=12 6 3 9 3 等不同的展开系统进行展开试验，结果以苯乙酸乙酯异丙醇甲醇浓氨试液= 12 6 3 9 3的展开效果最好，由于苯的毒性大，放弃使用，改用正丁醇36%乙酸 =7 2为展开剂展开，结果斑点清楚、明显，故选此为黄柏的展开系统。(3)采用薄层色谱法，以苦参碱为对照品，鉴别处方中的苦参。①供试品溶液的制备取清肺抑火片三批样品各15片，薄膜衣片除去包衣，研细， 取粉末6g，加浓氨试液2ml ；三氯甲烷30ml放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml 使溶解，作为供试品溶液。②阴性样品溶液的制备按处方配比，取除苦参外的其他药材，按原药制备工艺制 片，再按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。③对照品溶液的制备另取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶 液，作为对照品溶液。④薄层色谱及结果照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸 取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各3-5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以甲苯丙酮乙酸乙酯浓氨试液=2 3 5 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的颜色斑点，阴性样 品溶液无干扰，结果见图3。
其中展开剂的选择我们以甲苯丙酮乙酸乙酯浓氨试液= 2 3 4 0.2、甲苯丙酮乙酸乙酯浓氨试液=2 3 5 0.2等不同的展开系 统进行展开试验，结果以甲苯丙酮乙酸乙酯浓氨试液=2 3 5 0.2的展开效 果最好，斑点清楚、明显，故选此为苦参的展开系统。(4)采用薄层色谱法，以大黄为对照药材、大黄酚、大黄素为对照品，鉴别处方中的大黄。①供试品溶液的制备取清肺抑火片三批样品各5片，薄膜衣片除去包衣，研细， 取粉术lg，加甲醇5ml，振摇提取30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。②阴性样品溶液的制备按处方配比，取除大黄外的其他药材，按原药制备工艺制 片，再按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。③对照药材溶液的制备另取大黄对照药材0. 3g，研细，加甲醇5ml，振摇提取30 分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；对照品溶液A的制备取大黄酚对照品适量，加甲醇制 成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液A ；对照品溶液B的制备取大黄素对照品适量，加 甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液B。④薄层色谱及结果照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验， 吸供试品溶液7-10 μ 1，对照药材溶液4-6 μ 1，对照品A、B溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚(30-60°C)甲酸乙酯甲酸=15 6 2的上层溶液为展开剂， 展开，取出，晾干，置于氨蒸气饱和展开缸内，在对照品色谱中，在与大黄药材和大黄对照品 色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无干扰，结果见图4。其中展开剂的选择以石油醚(30-60°C)甲酸乙酯甲酸=15 5 1、石油 醚(30-60°C)甲酸乙酯甲酸=15 6 2等不同的展开系统进行展开试验，结果以石 油醚(30-60°C )甲酸乙酯甲酸=15 6 2的上层溶液的展开效果最好，斑点清楚、 明显，故选此为大黄的展开系统。(5)采用薄层色谱法，以桔梗对照药材为对照，鉴别处方中的桔梗。对清肺抑火片处方中桔梗做了薄层鉴别，因试验结果不理想，故未列入标准。①供试品溶液的制备取清肺抑火片三批样品各5片，薄膜衣片除去包衣，研细， 取粉末lg，加7%硫酸乙醇水=1 3混合液20ml，加热回流1小时，放冷，用氯仿振摇提 取2次，每次20ml，合并氯仿液，加水30ml洗涤弃去洗液，氯仿液用无水硫酸钠脱水，滤过， 滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。②阴性样品溶液的制备另取缺桔梗的模拟清肺抑火片样品，同原药制备工艺制 成阴性样品溶液。③对照药材溶液的制备另取桔梗对照药材lg，按供试品溶液制备方法制备对照 药材溶液。④薄层色谱及结果照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸 取上述供试品溶液、对照药材溶液、阴性供试品溶液各4 6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以氯仿乙醚=1 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C 加热至斑点显色清晰。试验结果供试品及阴性对照液色谱中，在与对照药材色谱相应的 位置上，均显相同颜色的斑点。即桔梗阴性样品有干扰。因该法专属性不强，故未纳入标准 中，结果见图5。
(6)高效液相检测的黄芩含量①色谱及检测条件色谱柱YMC公司ODS-A柱(6. OmmX 150mm, 5 μ m)；流动相甲 醇-水-磷酸(55 45 0. 2)。流速1. Oml/min ；柱温室温。检测波长:315nm ；进样量 10 μ 1 ；理论板数按黄芩苷计不低于2000。②对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml中含 0. Img的溶液，即得。③供试品溶液的制备取清肺抑火片三批样品20片，薄膜衣片除去包衣，研细，混 勻，精密称取0. 2g细粉，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %乙醇25ml，称定重量，超声处理30 分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。④阴性样品溶液的制备按处方取除黄芩的各味药材，按原药制备工艺制得样品， 再按步骤③供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。⑤测定及结果分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液与供试品溶液各10μ 1， 注入液相色谱仪，测定，即得，检测色谱图见图6、图7、图8、图9、图10，本品每片重0. 6g含 黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计不得少于6.47mg。计算方法为黄芩占处方总量的19. 96%，鉴 于本品为醇提入药，按照国家药典委员会要求(生粉入药按60%转移率计算)，参照《中国 药典》2005年版一部黄芩项下含量限度计算，本品每片含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得 少于 6. 47mg。
权利要求
1.一种清肺抑火片的质量控制方法，其特征在于其方法的步骤是(1)以桅子苷为对品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中的桅子成分；(2)以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中的黄柏成分；(3)以苦参碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中的苦参成分；(4)以大黄为对照药材、大黄酚、大黄素为对照品，采用薄层色谱法鉴别清肺抑火片中 的大黄成分；(5)以黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法测定清肺抑火片中的黄芩含量。
2.根据权利要求1所述的清肺抑火片的质量控制方法，其特征在于所述薄层色谱法 鉴别处方中的桅子的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品，研细，取粉末，加50%甲醇，超声处理，滤 过，滤液作为供试品溶液；②对照品溶液的制备另取桅子苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含^ig的溶液，作为 对照品溶液；③薄层色谱及结果吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2-5μ 1，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯丙酮甲酸水=5 :5:1: 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以10%硫酸乙醇溶液，110°C加热至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应 位置上是否显相同的颜色斑点，确定供试品溶液中是否含有桅子成分。
3.根据权利要求1所述的清肺抑火片的质量控制方法，其特征在于所述薄层色谱法 鉴别处方中的黄柏的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品，薄膜衣片除去包衣，研细，取粉末0.lg，加 乙醚，振摇，滤过，弃去乙醚液，残渣加甲醇超声处理，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶 液；②对照品溶液的制备另取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶 液，作为对照品溶液；③薄层色谱及结果吸取上述供试品溶液、对照品溶液各2-5μ 1，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正丁醇36%乙酸=7 2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下 检视，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的荧光斑点，确定 供试品溶液中是否含有桅子成分。
4.根据权利要求1所述的清肺抑火片的质量控制方法，其特征在于所述薄层色谱法 鉴别处方中的苦参的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品各，薄膜衣片除去包衣，研细，取粉末6g，加 浓氨试液2ml ；三氯甲烷放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶 液；②对照品溶液的制备另取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作 为对照品溶液；③薄层色谱及结果吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各3-5μ 1，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯丙酮乙酸乙酯浓氨试液=2 3 5 0.2为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位 置上是否显相同的颜色斑点，确定供试品溶液中是否含有苦参成分。
5.根据权利要求1所述的清肺抑火片的质量控制方法，其特征在于所述薄层色谱法 鉴别处方中的大黄的方法为①供试品溶液的制备取清肺抑火片样品各，研细，取粉末lg，加甲醇，振摇提取，滤 过，滤液作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备另取大黄对照药材，研细，加甲醇5ml，振摇提取，滤过，滤液 作为对照药材溶液；对照品溶液A的制备取大黄酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img 的溶液，作为对照品溶液A ；对照品溶液B的制备取大黄素对照品适量，加甲醇制成每Iml 含Img的溶液，作为对照品溶液B ；③薄层色谱及结果吸供试品溶液7-10μ1，对照药材溶液4-6μ 1，对照品A、B溶液各 2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 6 2的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置于氨蒸气饱和展开缸内，检视在对照品色谱中在与大黄药 材和大黄对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有大 黄成分。
6.根据权利要求1所述的清肺抑火片的质量控制方法，其特征在于所述高效液相检 测的黄芩含量的方法为①色谱及检测条件流动相甲醇水磷酸=55 45 0. 2，流速1. Oml/min，柱 温室温；检测波长315nm，进样量10μ 1 ；②对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml中含0.Img 的溶液，即得；③供试品溶液的制备取清肺抑火片样品，研细，混勻，精密称取0.2g细粉，置具塞锥 形瓶中，精密加入70 %乙醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失 的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；④测定及结果分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液与供试品溶液各10μ1，注入 液相色谱仪，测定，即得，本品每片重0. 6g含黄芩以黄芩苷计不得少于6. 47mg。
全文摘要
本发明涉及一种清肺抑火片的质量控制方法，步骤是采用薄层色谱法，鉴别清肺抑火片处方中是否含栀子、黄柏、苦参、大黄成分，再以黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法测定清肺抑火片中的黄芩含量。由于原质量标准中没有相应的控制标准，本发明中进行了栀子、黄柏、大黄、苦参、桔梗的薄层鉴别试验，筛选出重现性好、专属性强、斑点显色清晰、结果易判断的方法纳入标准中，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确，质量更加容易控制。
文档编号A61P1/02GK102139040SQ20101010490
公开日2011年8月3日 申请日期2010年2月3日 优先权日2010年2月3日
发明者孔繁娟, 谷翠丽, 靳学海, 高学谦, 高松 申请人:天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂