专利名称：：大鲵低聚糖肽、制备方法及其在化妆品中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种以大鲵(Andriasdavidianus)黏液为原料所制备的低聚糖肽、制备方法及其在化妆品中的应用。
背景技术：
：大鲵(Andriasdavidianus)是我国特有的珍稀特产，属国家二类保护动物。主要分布于长江中上游、珠江中上游及汉水上游的溪流中。上世纪90年代以来，湖南、湖北、陕西及广西都建立了大量的大鲵驯养繁殖企业，仅湖南省就有大鲵驯养繁殖企业35家左右，年繁殖能力已达45万尾。随着养殖规模的发展，大鲵资源的精深加工利用成为一个关系大鲵产业持续发展的紧迫课题。目前，相关报道都是利用大鲵的皮、骨以及肉来进行加工利用，如中国专利号ZL200510136627.0公开了大鲵保健食品及其生产方法；中国专利申请号200510136629.X公开了大鲵美容护肤品及其制备方法，均需要宰杀大鲵，不仅破坏大鲵资源，而且其产品成本较高。大鲵黏液是大鲵皮肤特有的分泌物质，利用塑胶刀片小心刮取，即可收集到大鲵黏液。但迄今为止，还没有关于以大鲵黏液为原料制备出低聚糖肽以及制备方法和其在化妆品中应用的相关报道。
发明内容本发明的目的是提供一种以大鲵(Andriasdavidianus)黏液为原料所制备的低聚糖肽、制备方法及其在化妆品中的应用。本发明的技术解决方案是一种大鲵低聚糖肽，其特征在于分子量小于4000Da，糖链通过GalNAc连接到丝氨酸或苏氨酸上，具有-Galβl-3GalNAcα-Ο-Ser/Thr结构。大鲵低聚糖肽所含氨基酸的摩尔百分含量为天冬氨酸与天冬酰胺11.2%，苏氨酸13.1%，丝氨酸0.2%，谷氨酸与谷氨酰胺12.5%，脯氨酸8.9%，甘氨酸2.4%，丙氨酸8.5%,缬氨酸5.7%，异亮氨酸3.6%，亮氨酸8.0%，酪氨酸3.1%，苯丙氨酸4.7%，组氨酸2.6%，赖氨酸5.3%，精氨酸6.5%，甲硫氨酸2.5%，半胱氨酸1.2%；含糖量为总质量的2060%，相对湿度不大于10%，溶解度为1克/30毫升水。—种上述大鲵低聚糖肽的制备方法，其特征在于按如下步骤进行a.将大鲵黏液在010°C时进行勻浆；b.向勻浆中加入13倍体积pH78的0.010.IM磷酸缓冲液及与勻浆质量比为0.11%的复合酶，酶解1248h；所述复合酶为将海洋碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3322比例混合；C.离心取上清，采用截留分子量为4000Da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；d.通过S印hadexLH-20分子筛层析柱，收集OD28tlnm吸收峰；e.将所收集的液体通过大孔吸附树脂及活性炭后冷冻干燥，制得大鲵低聚糖肽。一种上述大鲵低聚糖肽在制备化妆品中的应用。在所述化妆品基料中掺入总质量0.110%的大鲵低聚糖肽。本发明是以大鲵(Andriasdavidianus)黏液为原料制备低聚糖肽，所得的低聚糖肽具有显著提高单核细胞吞噬细菌的能力，且具有增强单核细胞活力及促进抗体形成的能力。其相对湿度不大于10%，溶解度为1克/30毫升水，可做为活性物质加入到化妆品中，具有较好的相溶性。因其在光谱特性方面还具有抗紫外线能力，对皮肤极为有利。因大鲵(Andriasdavidianus)黏液具有再生性，无需宰杀即可获得，既不危害大鲵的生长繁殖，又可实现大鲵资源的持续利用。图1是本发明实施例时间飞行质谱图。具体实施例方式实施例1:a.收集大鲵黏液，将大鲵黏液在010°C时用勻浆机进行勻浆；b.向所得到的勻浆中加入13倍体积pH78的0.010.IM磷酸缓冲液及与勻浆质量比为0.11%的复合酶，酶解12h48h；所述复合酶为将海洋碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3322比例混合；c.离心取上清，采用截留分子量为4000Da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；d.通过S印hadexLH-20分子筛层析柱(2.5X60100cm)，收集OD28tlnm吸收峰；e.将所收集的液体通过大孔吸附树脂(HPD系列)除盐及活性炭脱色后冷冻干燥，制得大鲵低聚糖肽。该低聚糖肽中氨基酸的摩尔百分含量(摩尔/100摩尔)经HPLC检测为天冬氨酸与天冬酰胺11.2%，苏氨酸13.1%，丝氨酸0.2%，谷氨酸与谷氨酰胺12.5%，脯氨酸8.9%，甘氨酸2.4%，丙氨酸8.5%，缬氨酸5.7%，异亮氨酸3.6%，亮氨酸8.0%，酪氨酸3.1%，苯丙氨酸4.7%，组氨酸2.6%，赖氨酸5.3%，精氨酸6.5%,甲硫氨酸2.5%，半胱氨酸1.2%。含糖量为总质量的2060%。大鲵低聚糖肽时间飞行质谱如图1所示，其m/z为小于4000Da，具有的m/z分布为1172、1378、1436、1551、1694、1866、1980、2081、2201、2534、2929、3133、3325、3553和3907。其相对湿度不大于10%，溶解度为1克大鲵低聚糖肽可溶于30毫升水中。将实施例1制得的大鲵低聚糖肽应用于化妆品中，可以是粉剂、片剂和针剂等商品剂型，使用时与现有的化妆品混合即可。也可以在化妆品的基料中掺入含有总重量0.110%的大鲵低聚糖肽制成化妆品，化妆品基料可以是现有的普通化妆品。应用例1促进免疫功能将实施例1制得的大鲵低聚糖肽按剂量50mg/kg进行皮下注射，经过1周处死小鼠检测，发现其单核细胞吞噬细菌的能力由7个细菌提高到17个，单核细胞活力提高2.48，抗体形成的能力提高2.85倍。应用例2<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注对照组是未进行紫外线损伤照射的小鼠，涂抹食用植物油的小鼠耳指数结果；模型组是进行紫外线损伤照射的小鼠，涂抹食用植物油的小鼠耳指数结果；大鲵低聚糖肽组是进行紫外线损伤照射的小鼠，涂抹大鲵低聚糖肽的小鼠耳指数结果。试验结论涂抹大鲵低聚糖肽的小鼠耳指数(耳片质量/小鼠质量)与未进行紫外线损伤照射的涂抹食用植物油的小鼠耳指数相当，说明紫外照射未对涂抹大鲵低聚糖肽的小鼠耳部皮肤造成损伤，大鲵低聚糖肽具有抗紫外线作用。添加有大鲵低聚糖肽的化妆品亦有较强的抗紫外线作用。权利要求一种大鲵低聚糖肽，其特征在于分子量小于4000Da，糖链通过GalNAc连接到丝氨酸或苏氨酸上，具有-Galβ1-3GalNAcα-O-Ser/Thr结构。2.根据权利要求1所述的大鲵低聚糖肽，其特征在于所含氨基酸的摩尔百分含量为天冬氨酸与天冬酰胺11.2%，苏氨酸13.1%，丝氨酸0.2%，谷氨酸与谷氨酰胺12.5%，脯氨酸8.9%，甘氨酸2.4%，丙氨酸8.5%，缬氨酸5.7%，异亮氨酸3.6%，亮氨酸8.0%，酪氨酸3.1%，苯丙氨酸4.7%，组氨酸2.6%，赖氨酸5.3%，精氨酸6.5%，甲硫氨酸2.5%，半胱氨酸1.2%；含糖量为总质量的2060%，相对湿度不大于10%，溶解度为1克/30毫升水。3.—种如权利要求1或2所述大鲵低聚糖肽的制备方法，其特征在于按如下步骤进行a.将大鲵黏液在010°C时进行勻浆；b.向勻浆中加入13倍体积pH78的0.010.IM磷酸缓冲液及与勻浆质量比为0.11%的复合酶，酶解1248h；所述复合酶为将海洋碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3322比例混合；c.离心取上清，采用截留分子量为4000Da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；d.通过S印hadexLH-20分子筛层析柱，收集OD28tlnm吸收峰；e.将所收集的液体通过大孔吸附树脂及活性炭后冷冻干燥，制得大鲵低聚糖肽。4.一种如权利要求1或2所述的大鲵低聚糖肽在制备化妆品中的应用。5.根据权利要求4所述的大鲵低聚糖肽在制备化妆品中的应用，其特征在于在所述化妆品基料中掺入总质量0.110%的大鲵低聚糖肽。全文摘要本发明公开一种大鲵低聚糖肽、制备方法及其在化妆品中的应用，所制得大鲵低聚糖肽的分子量小于4000Da，糖链通过GalNAc连接到丝氨酸或苏氨酸上，具有-Galβ1-3GalNAcα-O-Ser/Thr结构。制备方法是将大鲵黏液在0～10℃时进行匀浆；向匀浆中加入1～3倍体积pH7～8的0.01～0.1M磷酸缓冲液及与匀浆质量比为0.1～1％的复合酶，酶解12～48h；所述复合酶为将海洋碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3∶3∶2∶2比例混合；离心取上清，采用截留分子量为4000Da以下的超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；通过SephadexLH-20分子筛层析柱，收集OD280nm吸收峰；将所收集的液体通过大孔吸附树脂及活性炭后冷冻干燥，制得大鲵低聚糖肽。文档编号A61K8/64GK101812116SQ201010134998公开日2010年8月25日申请日期2010年3月30日优先权日2010年3月30日发明者佟长青,孔亮,李伟,金桥申请人:张家界金驰大鲵生物科技有限公司