专利名称：一种具有滋肾宁神作用的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物，特别涉及一种具有滋肾宁神作用的药物组合物及其制备方法、检测方法。
背景技术：
失眠是临床常见而又难治的病症，长时间的失眠严重损害患者身心健康。目前大量使用的苯二氮类等镇静催眠药物在治疗失眠的同时也产生一定的依赖性，而中药制剂的镇静催眠作用具有在起效的同时不产生药物依赖性优点。本发明由熟地黄、山药、金樱子、 酸枣仁、首乌藤、女贞子、宽丝子、牛大力、获等、珍珠母、白苟、丹参、制何首乌、黄精、五味子、五指毛桃等十六味中药加工制成，具有滋补肝肾，宁心安神的功效，对治疗肝肾亏损，头晕耳鸣，失眠多梦，怔忡健忘，腰酸遗泄，神经衰弱等有显著的疗效。
发明内容
本发明的目的在于公开一种具有滋肾宁神作用的药物组合物，本发明的另一个目的在于公开该组合物的制备方法，还在于公开该组合物的检测方法。 本发明目的是通过如下技术方案实现的 本发明药物组合物的原料药组成为
熟地黄220-260重量份金樱子180-210重量份首乌藤220-260重量份菟丝子140-160重量份茯苓180-210重量份白芍140-160重量份制何首乌140-160重量份五味子40-60重量份
山药180-210重量份酸枣仁40-60重量份女贞子140-160重量份牛大力380-400重量份珍珠母380-400重量份丹参180-210重量份黄精180-210重量份五指毛桃380-400重量份
本发明药物组合物的原料药组成优选为熟地黄244重量份山药196重量份酸枣仁49重量份菟丝子147重量份珍珠母391重量份制何首乌147重量份五指毛桃391重量份； 本发明药物组合物的原料药组成优选为 熟地黄230重量份山药205重量份酸枣仁42重量份首乌藤225重量份菟丝子155重量份牛大力385重量份
首乌藤244重量份牛大力391重量份白芍147重量份黄精196重量份
金樱子196重量份女贞子147重量份茯苓196重量份丹参196重量份五味子49重量份
金樱子206重量份女贞子158重量份茯苓182重量份
4
珍珠母396重量份白芍156重量份丹参185重量份
制何首乌142重量份黄精208重量份五味子56重量份
五指毛桃382重量份;
本发明药物组合物的原料药组成优选为
熟地黄邪0重量份山药192重量份金樱子190重量份
酸枣仁M重量份首乌藤248重量份女贞子142重量份
菟丝子140重量份牛大力396重量份茯苓201重量份
珍珠母386重量份白芍143重量份丹参200重量份
制何首乌150重量份黄精190重量份五味子46 1■量份
五指毛桃395重量份;
其中所述的酸丨枣仁优选炒酸枣仁，菟丝子优选制菟丝子，白芍优选炒白芍，黄精优
选制黄精。取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂、口服液体制剂、注射剂等药学上可接受的各种剂型。本发明药物组合物的制备方法为取制何首乌粉碎成粗粉，采用干热灭菌法在温度110_130°C的灭菌条件下，灭菌 0. 5-1. 5小时，备用；取处方中除制何首乌外其余熟地黄等十五味原料药，加水煎煮1-3 次，每次加6-10重量倍水，每次煎煮0. 5-2. 5小时，滤过，合并滤液，滤液于90°C下减压浓缩至60°C测得相对密度为1. 18 1.22，浓缩液加85-95%乙醇调节含醇量至80%，静置 20-30h，滤过，滤液回收乙醇，于60°C减压浓缩至25°C测得相对密度为1. 25 1. 30的清膏，将水提醇沉清膏按比例加入制何首乌粗粉，混勻，在65-75°C、-0. 09MPa条件下进行真空干燥，即得。本发明药物组合物的制备方法优选为取制何首乌粉碎成粗粉，采用干热灭菌法在温度120°C的灭菌条件下，灭菌1小时，备用；取处方中除制何首乌外其余熟地黄等十五味原料药，加水煎煮2次，每次加8重量倍水，每次煎煮1. 5小时，滤过，合并滤液，滤液于90°C下减压浓缩至60°C测得相对密度为1. 18 1.22，浓缩液加95%乙醇调节含醇量至80%，静置Mh，滤过，滤液回收乙醇，于 60°C减压浓缩至25°C测得相对密度为1. 25 1. 30的清膏，将水提醇沉清膏按比例加入制何首乌粗粉，混勻，在70°C、_0. 09MPa条件下进行真空干燥，即得。本发明药物组合物的检测方法为照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部正文41页及附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验色谱柱0DS C18色谱柱O50mmX4. 60mm, 5 μ m)；流动相乙腈-0.1%磷酸溶液(14 86);检测波长23011111;流速1.011111^1-1;柱温: 30 0C ；对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇溶解，摇勻，制成每Iml含芍药苷0. Img的溶液；标准曲线的制备取上述对照品溶液依次进样1、2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、10μ 1、 12μ 1、14μ 1、16μ 1、18μ 1、20μ 1测定峰面积。以峰面积积分值㈧对进样量(Hl)进行回归，得回归方程A= 1387. 3m-38. 4(r = 0.9998)；表明芍药苷0. 1 μ g 2. 0 μ g进样量范
5围内与峰面积的线性关系良好；供试品溶液的制备精密移取水提液20-30体积份，减压浓缩至干，残渣加 40-60%乙醇适量使溶解，并转移至50ml量瓶中，加40-60%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0. 008-0. 12体积份，注入液相色谱仪，测定，即得，每日用制剂量含芍药苷不得少于8-12mg。本发明药物组合物的检测方法优选为照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部正文41页及附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验色谱柱0DS C18色谱柱O50mmX4. 60mm, 5 μ m)；流动相乙腈-0.1%磷酸溶液(14 86);检测波长23011111;流速1.011111^1-1;柱温: 30 0C ；对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇溶解，摇勻，制成每Iml 含芍药苷0. Img的溶液；标准曲线的制备取上述对照品溶液依次进样1μ 1、2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、 10μ 1、12μ 1、14μ 1、16μ 1、18μ 1、20μ 1测定峰面积。以峰面积积分值(A)对进样量(m) 进行回归，得回归方程A = 1387. 3m-38. 4(r = 0.9998)；表明芍药苷0. Iyg 2. Oyg进样量范围内与峰面积的线性关系良好；供试品溶液的制备精密移取水提液25体积份，减压浓缩至干，残渣加50%乙醇适量使溶解，并转移至50ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0. 01体积份，注入液相色谱仪，测定，即得，每日用制剂量含芍药苷不得少于9. Omg0本发明所述的重量份与体积份的关系为克/毫升。本发明药物组合物检测方法可以应用于组合物的各种剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、口服液体制剂或注射剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行检测时，所选用样品量可统一折算为日用制剂量为计量单位，每单位制剂可以为每片、每粒、每支或每丸等。本发明根据各味药材的主要化学成分的理化性质及药理作用，设计了四种工艺路线，并对不同工艺路线得到的产物的药理活性进行了评价，考察了不同产物对小鼠自发活动的影响、对阈下剂量戊巴比妥钠作用的影响、对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响，初步选择全方水提醇沉的提取工艺；以安神药效为指标对本方的提取工艺进行筛选，并结合化学指标对筛选所得工艺进行优化，考察提取、浓缩及干燥等条件，同时对芍药苷进行了含量测定，通过上述研究，提高了质量标准的控制水平，使产品质量更有保障。
图1 颗粒的临界相对湿度CRH求算图2 滋肾宁神胶囊HPLC专属性图谱下述实验例和实施例进一步证明但不限于本发明。实验例1本发明药物组合物提取工艺筛选研究1实验材料(1)药品与仪器滋肾宁神丸(批号070505)与熟地黄、白芍(炒)等十六味药材均由广东省潮州市宏兴制药厂提供，地西泮片(广东三才医药集团有限公司，生产批号 20080404)，戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司，批号:WS20051129), ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)(2)实验动物KM种小白鼠，体重18 22g，由广州中医药大学实验动物中心提供， 动物合格证号:0031813 ；0031842 ；0031870。2实验方法(1)滋肾宁神方的不同提取工艺全方水提取全方药物680g，加8倍量水浸泡0. 5h,加热煎煮2次，每次1. 5h,滤过，合并滤液，滤液浓缩至:340mL，即每Iml浓缩液相当于药材量2g，备用。全方醇提取全方药物680g，加5倍量70 %乙醇，加热回流提取2次，每次1. 5h， 滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至约340mL，即每Iml浓缩液相当于药材量2g，备用。全方水提醇沉取全方药物680g，加8倍量水煎煮2次，每次1. 5h，滤过，合并滤液，浓缩至800mL，放冷后加适量乙醇调整至乙醇浓度约为80%，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至340mL，即每ImL浓缩液相当于药材量2g，备用。部分水提部分醇提(以下简称水醇结合)取全方药物680g，其中首乌藤、女贞子、 丹参、制何首乌、五味子和五指毛桃等6味，加5倍量70%乙醇，加热回流2次，每次1. 5h， 滤过，合并滤液，回收至无醇味，即得醇提浓缩液；其余十味加8倍量水煎煮2次，每次lh， 滤过，合并滤液，浓缩至450mL，即得水提浓缩液；混合水提及醇提浓缩液，摇勻，加热浓缩至340mL，即每Iml浓缩液相当于药材量2g，备用。(2)小鼠自主活动实验取KM小鼠132只，18 22g，雌雄各半，随机分为11组，每组12只，分别为空白组、 阳性组、水提高剂量组、水提低剂量组、醇提高剂量组、醇提低剂量组、水提醇沉高剂量组、 水提醇沉低剂量组、水醇结合高剂量组、水醇结合低剂量组、原剂型组。按体表面积折算等效剂量，各提取物高剂量19. 93g .kg—1相当于人用量的40倍，低剂量4. QSg-kg-1相当于人用量的10倍，原剂型组剂量为19. 93g -kg"1,阳性对照组给予地西泮片，剂量为19mg ^kg4, 空白组给予等体积蒸馏水。小鼠每天灌胃给药1次，连续6d。于末次给药后lh，将小鼠置于小鼠自主活动记录仪中适应5min，记录5min内动物的活动次数。结果以无表示，考察各组样本均数间的差异用t检验。结果见表1。表1不同工艺滋肾宁神方对小鼠自主活动的影响
组别η剂量(g . kg1)活动次数空白组9一13. 89土3. 35地西泮片组100.0196. 40+4. 522'水提高组1219.939. 58 ±7. 18水提低组104. 9810. 50±6. 70醇提高组1219.9311. 08±9. 95醇提低组114. 9813.18±9. 22水提醇沉高组1219.938. 50土6. 33"水提醇沉低组124. 987. 33 ±6. Il2'水醇结合髙组1119. 9311.18±7. 79水醇结合低组94. 9810. 44±3. 89原剂型组1119.937.91±7. Ol1)注与空白组比较"ρ< 0. 05，2)p < 0. 01结果表明，滋肾宁神丸原剂型组、滋肾宁神方水提醇沉高、低剂量组与空白组比较，可显著减少小鼠活动次数(ρ < 0. 01或ρ < 0. 05)。提示滋肾宁神方采用水提醇沉工艺能显著减少小鼠自主活动，说明滋肾宁神方采用水提醇沉工艺具有明显镇静作用。(3)睡眠实验阈下剂量戊巴比妥钠睡眠实验小鼠分组和给药同小鼠自主活动试验。于末次给药Ih后，每鼠腹腔注射戊巴比妥钠36mg · kg—1。观察给药后15min内小鼠翻正反射消失达 Imin为入睡指标，记录各组入睡小鼠的只数，即睡眠数，计算入睡率。考察各组样本率间的差异用χ 2检验。结果见表2。表2不同工艺滋肾宁神方对注射阈下剂量戊巴比妥钠的小鼠入睡率(％ )的影响
组别η剂量(g-kg')睡眠数(只)睡眠百分率(％)空白组12—18. 33阳性组120.01912100. OO21水提高组1219. 93541.67水提低组124. 98650.00醇提高组1119. 93436. 36醇提低组124. 98325. 00水提醇沉高组1219.93541.67水提醇沉低组124. 98975. OO21水醇结合髙组1119. 93218. 18水醇结合低组124. 98325.00原剂型组1019. 93440. 00注与空白组比较"ρ< 0. 05，2)p < 0. 01结果表明，滋肾宁神方采用不同提取工艺对注射阈下剂量戊巴比妥钠的小鼠入睡率均有一定的影响，以水提醇沉低剂量组入睡率最大。提示滋肾宁神方采用水提醇沉工艺有较强的中枢神经抑制作用，使小鼠入睡动物数增加，说明滋肾宁神方采用水提醇沉工艺对阈下剂量戊巴比妥钠具有较强的协同作用。阈剂量戊巴比妥钠睡眠实验小鼠分组和给药同小鼠自主活动试验。于末次给药Ih后，每鼠腹腔注射戊巴比妥钠45mg · kg—1，15min翻正反射消失达30s以上为进入睡眠， 以其翻正反射恢复为小鼠的苏醒，其间为睡眠时间，记录各组小鼠的睡眠持续时间。结果以元土s表示，考察各组样本均数间的差异用t检验。结果见表3。 表3不同工艺滋肾宁神丸对注射阈剂量戊巴比妥钠的小鼠睡眠时间(min)的影响 (X 土 S)
权利要求
1.-种具有滋肾宁神作用的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为熟地黄220-260重量份金樱子180-210重量份首乌藤220-260重量份菟丝子140-160重量份茯苓180-210重量份白芍140-160重量份制何首乌140-160重量份五味子40-60重量份山药180-210重量份酸枣仁40-60重量份女贞子140-160重量份牛大力380-400重量份珍珠母380-400重量份丹参180-210重量份黄精180-210重量份五指毛桃380-400重量份c
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为熟地黄244重量份酸枣仁49重量份菟丝子147重量份珍珠母391重量份制何首乌147重量份五指毛桃391重量份。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为山药196重量份首乌藤244重量份牛大力391重量份白芍147重量份黄精196重量份金樱子196重量份女贞子147重量份茯苓196重量份丹参196重量份五味子49重量份熟地黄230重量份酸枣仁42重量份菟丝子155重量份珍珠母396重量份制何首乌142重量份五指毛桃382重量份。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为山药205重量份首乌藤225重量份牛大力385重量份白芍156重量份黄精208重量份金樱子206重量份女贞子158重量份茯苓182重量份丹参185重量份五味子56重量份山药192重量份首乌藤248重量份牛大力396重量份白芍143重量份黄精190重量份金樱子190重量份女贞子142重量份茯苓201重量份丹参200重量份五味子46重量份熟地黄250重量份酸枣仁M重量份菟丝子140重量份珍珠母386重量份制何首乌150重量份五指毛桃395重量份。
5.如权利要求1-4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤 取制何首乌粉碎成粗粉，采用干热灭菌法在温度110-130°C的灭菌条件下，灭菌0. 5-1. 5小时，备用；取处方中除制何首乌外其余熟地黄等十五味原料药，加水煎煮1-3 次，每次加6-10重量倍水，每次煎煮0. 5-2. 5小时，滤过，合并滤液，滤液于90°C下减压浓缩至60°C测得相对密度为1. 18 1.22，浓缩液加85-95%乙醇调节含醇量至80%，静置 20-30h,滤过，滤液回收乙醇，于60°C减压浓缩至25°C测得相对密度为1. 25 1. 30的清膏，将水提醇沉清膏按比例加入制何首乌粗粉，混勻，在65-75°C、-0. 09MPa条件下进行真空干燥，即得。
6.如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤取制何首乌粉碎成粗粉，采用干热灭菌法在温度120°C的灭菌条件下，灭菌1小时， 备用；取处方中除制何首乌外其余熟地黄等十五味原料药，加水煎煮2次，每次加8重量倍水，每次煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液于90°C下减压浓缩至60°C测得相对密度为1. 18 1.22，浓缩液加95%乙醇调节含醇量至80%，静置Mh，滤过，滤液回收乙醇，于 60°C减压浓缩至25°C测得相对密度为1. 25 1. 30的清膏，将水提醇沉清膏按比例加入制何首乌粗粉，混勻，在70°C、_0. 09MPa条件下进行真空干燥，即得。
7.如权利要求1-4所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部正文41页及附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱0DS C18色谱柱θ50πιπιΧ4.60πιπι，5μπι)；流动相乙腈-0. 磷酸溶液(14 86)；检测波长:230nm ；流速1. Oml · min-1 ；柱温:30°C ； 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇溶解，摇勻，制成每Iml含芍药苷0. Img的溶液；标准曲线的制备取上述对照品溶液依次进样1μ 1、2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、10μ 1、 12μ 1、14μ 1、16μ 1、18μ 1、20μ 1测定峰面积，以峰面积积分值㈧对进样量(Hl)进行回归，得回归方程A= 1387. 3m-38. 4(r = 0.9998)；表明芍药苷0. 1 μ g 2. 0 μ g进样量范围内与峰面积的线性关系良好；供试品溶液的制备精密移取水提液20-30体积份，减压浓缩至干，残渣加40-60%乙醇适量使溶解，并转移至50ml量瓶中，加40-60%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0. 008-0. 12体积份，注入液相色谱仪，测定，即得，每日用制剂量含芍药苷不得少于8-12mg。
8.如权利要求7所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部正文41页及附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验色谱柱0DS C18色谱柱θ50πιπιΧ4.60πιπι，5μπι)；流动相乙腈-0. 磷酸溶液(14 86)；检测波长:230nm ；流速1. Oml · min-1 ；柱温:30°C ； 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇溶解，摇勻，制成每Iml含芍药苷0. Img的溶液；标准曲线的制备取上述对照品溶液依次进样1μ 1、2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、10μ 1、 12μ 1、14μ 1、16μ 1、18μ 1、20μ 1测定峰面积，以峰面积积分值㈧对进样量(Hl)进行回归，得回归方程A= 1387. 3m-38. 4(r = 0.9998)；表明芍药苷0. 1 μ g 2. 0 μ g进样量范围内与峰面积的线性关系良好；供试品溶液的制备精密移取水提液25体积份，减压浓缩至干，残渣加50%乙醇适量使溶解，并转移至50ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0. 01体积份，注入液相色谱仪，测定，即得，每日用制剂量含芍药苷不得少于9. Omg0
9.如权利要求1、2、3、4、6或8所述的药物组合物在制备具有滋肾宁神作用的药物中的应用。
10.如权利要求5所述的药物组合物在制备具有滋肾宁神作用的药物中的应用。
11.如权利要求7所述的药物组合物在制备具有滋肾宁神作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种具有滋肾宁神作用的药物组合物及其制备方法，本发明药物组合物由熟地黄、山药、金樱子、酸枣仁、首乌藤等十五味药组成，本发明根据各味药材的主要化学成分的理化性质及药理作用，以安神药效为指标对本方的提取工艺进行筛选，并结合化学指标对筛选所得工艺进行优化，考察提取、浓缩及干燥等条件，同时对芍药苷进行了含量测定，通过上述研究，提高了质量标准的控制水平，使产品质量更有保障。
文档编号A61P25/20GK102247528SQ20101018169
公开日2011年11月23日 申请日期2010年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者张惜强, 李志勇, 杨宝如, 赖怀恩 申请人:广东宏兴集团股份有限公司宏兴制药厂