专利名称：刺楸叶总有效部位的制备方法及其药物应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及刺楸叶总有效部位的制备方法、以其为原料制得的新 药，及其在预防和治疗风湿骨痛疾病中的应用。
背景技术：
刺楸系五加科刺楸属植物Kalopanax septemlobus (Thunb. ) Koidz.，具有祛风、除 湿、通络、止痛、杀虫之功效，临床用于治疗类风湿性关节炎、腰膝疼痛，外用跌打损伤。有报 道刺楸的主要活性成分为皂苷类化合物，其生物活性主要表现在抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗类 风湿以及抗真菌和糖尿病等方面。目前从刺楸中共分离得到45种五环三萜类皂苷化合物， 主要包括单糖链皂苷和双糖链皂苷两类，其主要的皂苷元是常春藤皂苷元、齐墩果酸型皂 苷元、葳严仙皂苷元和pictogenin型皂苷元。此外还含有少量黄酮类化合物、苯丙烷类酚 酸衍生物、挥发油等。虽然国内外学者对刺楸属植物的化学成分及其药理活性研究较为深 入，但对其有效部位的提取纯化及药物应用却涉及甚少。所谓中药现代化就是在继承和发扬我国中医药优势和特色的基础上，充分利用现 代科学技术的理论、方法和手段，借鉴国际认可的医药标准和规范，研究、开发、管理和生产 出以现代化和高技术为特征的安全、高效、稳定、可控的现代中药产品，使中药产业实现大 品种、大企业和大市场，成为具有强大国际竞争力的现代产业和国民经济新的增长点，扩大 我国中药在国际市场上的份额。而要实现这一目标，只能从三个层次入手。中药复方由于 成分过于复杂，药效物质基础研究薄弱，提取纯化难度较大；而单一成分又不具备中医药的 特色，产品副作用大，开发形势艰难，因此从传统中药中提取有效部位的研究就显得尤为重 要，成为中药现代化研究中进展较快的发展方向之一。与原药材相比，它富集了有效物质， 提高了技术含量和疗效，减少了服用剂量，增加了质量控制水平，既体现了中药多成分、多 靶点、多层次产生作用的特点，又保留了原方治疗上的优点，还可以改变中成药“粗、大、黑” 的现状。目前该类研究工作已受到广大医药工作者的重视，并取得了可喜的成果，有许多产 品已投入临床使用。
发明内容
本发明提供一种刺楸叶总有效部位的制备方法及其药物应用，还提供用刺楸叶总 有效部位或与其他药物组方，用药学上可接受的载体或赋形剂制备的新药；还提供其在预 防和治疗抗炎、镇痛、抗类风湿等风湿骨痛方面疾病的应用。本发明刺楸叶总有效部位是从刺楸叶中提取获得的，该总有效部位中总皂苷的含 量彡50%。本发明提供的刺楸叶总有效部位的制备方法包括下列步骤(1)提取用浓度为O 95%的乙醇作溶剂，将原料刺楸叶加入重量4 10倍的 该溶剂中进行回流提取，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩；(2)纯化将该浓缩液加水稀释，离心，取上清液装于已预先处理好的大孔吸附树脂柱中，先用5 10倍树脂柱体积的水洗，再用5 10倍树脂柱体积、浓度为50 95%的 乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇后浓缩，精制，干燥，即得刺楸叶总有效部位。当本发明用于预防和治疗风湿骨痛疾病的药物时，均是安全的。本发明还提供用 刺楸叶总有效部位以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的各种新药。这些新药包括口服 给药制剂、舌下片、栓剂、泡腾片、注射剂等。口服给药制剂包括口服固体制剂、口服液体制 剂。口服固体制剂可以是片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、锭剂等。这些制剂中，除包括本发明总有 效部位外，还可以任选含有药学上可接受的填充剂、助流剂、润滑剂、着色剂、矫味剂等。这 些制剂还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。口服液体制剂可以是溶液、混悬液、乳化液 等。这些制剂中，除包括本发明总有效部位外，还可以任选含有药学上可接受的溶剂、助溶 剂、增溶剂、助悬剂、乳化剂、表面活性剂、矫味剂等。本发明提供的以刺楸叶总有效部位为原料制得的新药不仅包括单方制剂，还包括 在复方制剂中添加刺楸叶总有效部位作为活性成分的药物。本发明提供的刺楸叶总有效部位用于制备治疗风湿骨痛、跌打损伤疾病的药物。本发明的有益效果是(1)本发明提供的刺楸叶总有效部位用于制备治疗风湿骨痛、跌打损伤疾病的药 物，填补了刺楸总有效部位制备领域的空白，运用适合工业化生产的提纯技术从刺楸叶中 分离得到高纯度有效部位，并将其应用到制药领域，实现了该类制剂从药材组方到有效部 位组方的质的飞跃，有效提高了该类制剂的国际市场竞争力。(2)整个工艺过程只以水和乙醇为溶剂，污染小；所用的树脂再生后可数次重复 利用，成本低，易操作；终产物刺楸叶总有效部位纯度高，产品稳定性和均一性良好，易于产 业化生产。
具体实施例方式下列具体的实施例是对本发明进行更加详细的描述，但不对本发明的范围构成任 何限制。实施例1 取刺楸叶3kg，酌予碎断，以30kg 70%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合 并滤液，回收乙醇后浓缩至体积为1L，加水至3L，离心，取上清液过DlOl大孔吸附树脂柱， 柱床体积1L，先用8L水洗，弃去水液，再用7. 5L 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇后浓 缩，精制，干燥，即得刺楸叶总有效部位。所制得的刺楸叶总有效部位中总皂苷含量为62%。实施例2取刺楸叶3kg，酌予碎断，以12kg 95%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合 并滤液，回收乙醇后浓缩至体积为1L，加水至3L，离心，取上清液过AB8大孔吸附树脂柱，柱 床体积1L，先用5L水洗，弃去水液，再用IOL 95%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇后浓缩， 精制，干燥，即得刺楸叶总有效部位。所制得的刺楸叶总有效部位中总皂苷含量为71%。实施例3取刺楸叶3kg，酌予碎断，以24kg水提取2次，每次1. 5小时，滤过，合并滤液，浓 缩至体积为1L，过NKA-9大孔吸附树脂柱，柱床体积1L，先用IOL水洗，弃去水液，再用5L 50%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇后浓缩，精制，干燥，即得刺楸叶总有效部位。所制得
4的刺楸叶总有效部位中总皂苷含量为53%。实施例4刺楸叶总有效部位的含量测定对照品溶液的制备精密称取刺楸皂苷B对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg 的溶液，作为对照品溶液。标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液50、100、200、300、400μ 1分别置具塞试管 中，挥去溶剂，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml，高氯酸0. 8ml，于70°C水浴上加 热15分钟，流水冷却，加冰醋酸5ml，摇勻，以相应的试剂为空白，在550nm波长处测定吸光 度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定取刺楸叶总有效部位粉末，过80目筛，为通过实施例2中制备，取0. 25g，精密 称定，置50ml锥形瓶中，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，洗涤滤渣，合并滤液，蒸干，残 渣加水15ml微热使溶解，移置分液漏斗中，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次15ml，分取 正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并定量转移置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，作 为样品溶液。取样品溶液200μ 1于具塞试管中，按照标准曲线的绘制项下方法，测定吸光 度，从标准曲线上读出供试品溶液中含刺楸皂苷B的浓度，计算，即得。依此方法测定实施 例2所制得的刺楸叶总有效部位中总皂苷含量为71%。实验例5刺楸叶总有效部位的药效学实验，实验中所用刺楸叶总有效部位为实施 例2制得。1.刺楸叶总有效部位对冰醋酸所致小鼠扭体次数的影响小鼠按体重随机分四组。第一组正常对照组，灌胃10ml/kg蒸馏水；第二组为阳性 药组，灌胃200mg/kg芬必得，第三组刺楸叶总有效部位低剂量组，灌胃100mg/kg ；第四组刺 楸叶总有效部位高剂量组，灌胃200mg/kg。每日一次，连续七日，末次给药后1小时，0.6% 冰醋酸腹腔注射，记录出现扭体潜伏期及15分钟内扭体次数，结果见表1。表1.刺楸叶总有效部位对冰醋酸所致小鼠扭体反应的影响 结果表明刺楸叶总有效部位能明显抑制冰醋酸所致小鼠扭体次数。2.刺楸叶总有效部位对大鼠佐剂关节炎的影响(1)实验材料药物雷公藤多甙片为浙江得恩德制药有限公司产品，批号0807105。卡介苗冻干 粉、羊毛脂、液体石蜡为市售。动物Wistar大鼠，雄性，180 200g，动物等级贰级。合格证SCXK-2007_0001。
由吉林大学基础医学院动物实验中心提供。
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分组和给药第一组为正常对照组，灌胃蒸馏水；第二组为模型组，灌胃蒸馏水；第 三组为阳性药组，灌胃雷公藤片300mg/kg ；第四组为观察药高剂量组，灌胃600mg/kg ；第五 组为观察药低剂量组，灌胃300mg/kg。(2)实验方法①弗氏完全佐剂的制备羊毛脂、液体石蜡按1 2研磨均勻，高压灭菌，4°C保存。 使用时加入卡介苗至10mg/ml，边加边研磨，制成弗氏完全佐剂。②方法取雄性大鼠50只，随机分成5组，每组10只。每只鼠测量左右足踝关节 以下体积，重复2次，取均数，作为正常值。除正常对照组外，其余每只大鼠右后足垫皮内注 射0.1ml弗氏完全佐剂。给予弗氏完全佐剂后，开始灌胃给药(lml/100g)，每天1次，连续 5周，在给药后2、7、14、21、28、35日，测量左右后肢踝关节以下体积，足肿胀程度=给药后 足体积-给药前足体积。结果见表2。(3)检测指标取血清，测定TNF- α，NO含量。取右侧足关节做病理检查。结果见 表3和病理检查结果。(4)结果检测指标结果表2结果表明，观察药对大鼠原发性和继发性病变都有明显抑制 作用；表3结果表明，观察药对佐剂关节炎大鼠血清中TNF-α和NO有明显的抑制作用。病理学检查结果光镜观察正常组，踝关节组织学结构正常。模型组软骨面毛糙凹凸不平、缺损，软骨细胞固缩，滑膜组织不同程度增生，滑膜 下明显有大量炎细胞浸润。雷公藤组，部分病变可见不同程度的减轻，少量炎细胞浸润。刺楸叶总有效部位高剂量组滑膜细胞仅轻度增生，且排列整齐、细胞形态规则， 未见炎性细胞浸润，软骨表面光滑。刺楸叶总有效部位低剂量组部分滑膜细胞轻度增生，有极少量炎细胞浸润。软骨 表面尚光滑。病理学结果表明，刺楸叶总有效部位对大鼠佐剂关节炎原发性和继发性病变都有 一定的治疗作用。
表3刺楸叶总有效部位对大鼠TNF- α和NO含量的影响 *p < 0. 05，**p < 0. 01，***p < 0. 00权利要求
一种刺楸叶总有效部位的制备方法，其特征在于包括下列步骤(1)提取用浓度为0～95％的乙醇作溶剂，将原料刺楸叶加入重量4～10倍的该溶剂中进行回流提取，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩；(2)纯化将该浓缩液加水稀释，离心，取上清液装于已预先处理好的大孔吸附树脂柱中，先用5～10倍树脂柱体积的水洗，再用5～10倍树脂柱体积、浓度为50～95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇后浓缩，精制，干燥，即得刺楸叶总有效部位；该总有效部位中总皂苷含量≥50％。
2.如权利要求1所述的刺楸叶总有效部位在制备用于预防和治疗风湿骨痛疾病的药 物中的应用。
全文摘要
本发明提供一种刺楸叶总有效部位的制备方法及其药物应用。属于中药领域。以刺楸叶或根皮为原料，用0％～95％乙醇水溶液回流提取，提取液浓缩后经过适当处理，通过大孔吸附树脂柱，依次以水、50％～95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，精制，干燥，即得刺楸叶总有效部位，总皂苷含量≥50％。本发明方法只需乙醇、水作溶剂进行提取，采用大孔树脂吸附技术分离纯化，终产物刺楸叶总有效部位纯度高，产品稳定性和均一性良好。本发明方法设计合理，低成本、易操作，稳定性好，质控更严格，易于产业化生产。
文档编号A61P29/00GK101926837SQ201010186348
公开日2010年12月29日 申请日期2010年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者刘永宏, 王隶书, 程东岩, 邸琳 申请人:王隶书