专利名称：一种三叶因子3的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种三叶因子3的新用途。
背景技术：
药物成瘾是困扰全球人类健康和社会发展的重大公共卫生和社会问题，严重危害 人类健康，影响家庭安定和社会发展，给社会造成巨大的经济损失。如2007年我国艾滋病 新增感染病例中，约42%患者与药物成瘾和滥用有关。药物成瘾是一种慢性高复发的复杂性脑疾病，其特点表现为从初次用药引起冲动 性觅药进行性发展为强迫性觅药，形成强烈的躯体依赖和精神依赖。长期吸食毒品会引起 机体的功能失调和组织病理变化，伴有嗜睡、感觉迟钝、运动失调及幻觉和妄想等，从而产 生精神类障碍疾病。由于毒品吸食后的成瘾性，使吸食者很难戒除.目前脱毒药物大体上 可划分为弱成瘾性的阿片受体激动剂，如美沙酮等；阿片受体阻断剂，如纳曲酮等；非阿 片类药物，如可乐定、洛非西丁、东莨菪碱、山莨菪碱等；某些调节免疫功能的中药复方。如 果能首先戒除由于药物戒断带来的躯体依赖，可以在很大程度上减轻复吸的可能性。三叶因子3 (TFF3，或肠三叶因子，intestinal trefoil factor (ITF))；或人肠三 叶因子，human intestinal trefoil factor(HITF))是一种抗蛋白酶肽，它通常在小肠杯 状细胞中产生，在正常乳腺上皮和子宫、某些腺体中也有表达。从杯状细胞中表达后分泌入 肠腔(Thim等，Biochemistry，1995年，34，4757)。TFF3在损伤后上皮的恢复中发挥功能 (Mashimo 等，Science, 1996 年，274，262 和 Wong 等，Biochemistry，1995 年，34，4757)，参与 胃肠道黏膜保护和损伤表达后修复具有重要作用，且与肿瘤的发生、发展密切相关。重组TFF3已被建议用于涉及肠易激综合症和其他肠疾病的治疗中(参见，如，美 国专利号 6063755,6316218 等，中国专利号 CN1742996、CN101100690、CN1871033 等)，癌症 (参见，如，CN101152563、CN1655675等)。目前，未见有关将TFF3用于药物成瘾戒毒相关 研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种三叶因子3的新用途。本发明提供了三叶因子3在制备预防和/或治疗药物成瘾的产品中的应用。所述产品为药物。所述药物成瘾为吗啡成瘾和/或阿片类药物成瘾。所述阿片类药物具体指海洛因、杜冷丁、可待因等。所述三叶因子3可为人来源或动物来源或基因工程重组表达的三叶因子3。所述三叶因子3的氨基酸序列为序列表中的序列1。本发明的实验证明在TFF3对吗啡依赖性小鼠催促戒断实验，通过观察急性催促 戒断小鼠跳跃次数和体重下降，反映TFF3在吗啡成瘾戒断的治疗效果，说明TFF3可用于戒 毒的，以开发新的戒毒药物。
图1为给药实验流程图。图2为TFF3给药能显著降低纳洛酮催促戒断吗啡依赖小鼠的跳跃次数。图3为TFF3给药能显著逆转纳洛酮催促戒断后小鼠体重降低。图4为TFF3给药不改变正常小鼠的自发活动。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、TFF3给药对吗啡依赖性小鼠催促戒断的治疗作用1、实验材料、动物重组大鼠的肠三叶因子(重组大鼠TFF3)(购自北京永康佳信生物技术有限公 司，产品批号002010011101，所述重组大鼠的肠三叶因子的氨基酸序列为序列表中的序列 1。)和可乐定(阳性对照，Clonidine公司)，分别溶于0.9%生理盐水，分别腹腔注射给药。盐酸吗啡(青海制药厂)，采用皮下注射方式。实验动物采用雄性昆明种小鼠(购自北京大学医学部实验动物中心，动物许可证 号013056)，小鼠自由摄食饮水，实验时体重约22-25克。小鼠随机分为8组，分为溶媒对照组(Saline+saline+saline)、纳洛酮对照组 (saline+saline+Nal)、TFF3+ 纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal (美国 sigma 公司))、吗啡依赖催促戒断组(Mor+sal ine+Nal)、催促戒断给予0. 0lmg/kg TFF3组 ((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)、 催促戒断给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐定阳性对照 组(Mor+0. 3mg/kg 可乐定 +Nal)，每组 12 只。建立纳洛酮催促戒断吗啡成瘾小鼠实验模型的方法具体如下将小鼠饲养4天 后，在第5天对8组小鼠进行注射给药，溶媒对照组(Saline+saline+saline)、TFF3+纳 洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)和纳洛酮对照组(saline+saline+Nal)均注射 0. 9%生理盐水；吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)、催促戒断给予0. 01mg/kgTFF3组 ((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kgTFF3+Nal)、 催促戒断给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐定阳性对照 组(Mor+0. 3mg/kg可乐定+Nal)分三次给予吗啡，时间间隔为6小时，三次给药剂量分别为 50、50、75mg/kg，每次各组的给药剂量相同；第6天对8组小鼠进行注射给药，溶媒对照组(Saline+saline+saline)、TFF3+ 纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)和纳洛酮对照组(saline+saline+Nal)均 注射0. 9%生理盐水；吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)、催促戒断给予0. 0lmg/kg TFF3 组((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐 定阳性对照组(Mor+0. 3mg/kg可乐定+Nal)分三次给予吗啡，时间间隔为6小时，三次给药剂量分别为75、75、100mg/kg，每次各组的给药剂量相同；第7天对8组小鼠进行注射给药，溶媒对照组(Saline+saline+saline)、TFF3+ 纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)和纳洛酮对照组(saline+saline+Nal)均 注射0. 9%生理盐水；吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)、催促戒断给予0. 0lmg/kg TFF3 组((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐 定阳性对照组(Mor+0. 3mg/kg可乐定+Nal)分三次给予吗啡，时间间隔为6小时，三次给药 剂量分别为100、100、125mg/kg，每次各组的给药剂量相同；第8天对8组小鼠进行注射给药，溶媒对照组(Saline+saline+saline)、TFF3+ 纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)和纳洛酮对照组(saline+saline+Nal)均 注射0. 9%生理盐水；吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)、催促戒断给予0. 0lmg/kg TFF3 组((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐 定阳性对照组(Mor+0. 3mg/kg可乐定+Nal)给予一次吗啡，各组给药剂量均为50mg/kg ；一个半小时后对8组小鼠进行注射给药，溶媒对照组(Saline+saline+saline)、 TFF3+纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)和纳洛酮对照组(saline+saline+Nal) 分别注射0. 9 %生理盐水、0. lmg/kg TFF3、0. 9 %生理盐水；吗啡依赖催促戒断组 (Mor+saline+Nal)、催促戒断给予 0. 01mg/kg TFF3 组((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)、催促 戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. 5mg/kg TFF3 组 (Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐定阳性对照组(Mor+0. 3mg/kg可乐定+Nal) 分别注射 0. 9% 生理盐水、0. 01mg/kgTFF3、0. lmg/kg TFF3、0. 5mg/kg TFF3 和 0. 3mg/kg 可 乐定；半小时后分别称重(BWl)，再对8组小鼠进行注射给药，溶媒对照组 (Saline+saline+saline)、TFF3+纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)和纳洛酮对 照组(saline+saline+Nal)分别注射0. 9%生理盐水、5mg/kg纳洛酮和5mg/kg纳洛酮；吗 啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)、催促戒断给予0.01mg/kg TFF3组((Mor+0. Olmg/ kg TFF3+Nal)、催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)、催促戒断 给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)、催促戒断给予可乐定阳性对照组 (Mor+0, 3mg/kg可乐定+Nal)均注射5mg/kg纳洛酮，分别称重(BW2)后，观察小鼠半小时内 跳跃次数，半小时后再次分别称重(BW3)。给药流程图见图1。1、TFF3给药能显著降低纳洛酮催促戒断吗啡依赖小鼠的跳跃次数观察小鼠半小时内跳跃次数，实验重复三次，实验结果以平均值士标准误差表 示，以t检验统计处理。溶媒对照组(Saline+saline+saline)的跳跃次数为32士22次，纳洛酮对照组 (saline+saline+Nal)的跳跃次数为 39士 17 次，TFF3+纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)的跳跃次数为32士 18次，吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)的跳跃次数 为 188 士 37 次，催促戒断给予 0. 01mg/kg TFF3 组((Mor+0. 0lmg/kg TFF3+Nal)的跳跃次 数为152士40次，催促戒断给予0. lmg/kg TFF3组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)的跳跃次数 为101 士42次，催促戒断给予0. 5mg/kg TFF3组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)的跳跃次数为
599士40次，催促戒断给予可乐定阳性对照组(MOr+0.3mg/kg可乐定+Nal)的跳跃次数为 125士22 次。结果统计见图2，溶媒对照组、TFF3+纳洛酮对照组、纳洛酮对照组的跳跃次数无 显著差异，说明纳洛酮给药、或TFF3和纳洛酮给药均不会显著影响小鼠的跳跃次数。与阴 性对照组(溶媒对照组、TFF3对照组、TFF3对照组)相比，吗啡依赖催促戒断组小鼠跳跃次 数显著增加，说明吗啡依赖催促戒断模型造模成功。与吗啡依赖催促戒断组相比，3个催促 戒断给予TFF3组(0. 01,0. 1,0. 5mg/kg)和可乐定阳性对照组小鼠跳跃次数均下降。其中 0. 1,0. 5mg/kgTFF3给药组小鼠跳跃次数显著低于吗啡依赖催促戒断组。0. 5mg/kgTFF3给 药组小鼠跳跃次数最低，与阳性可乐定相比，无显著差异。结果表明，TFF3减少小鼠跳跃次 数作用与TFF3给药剂量呈相关性，0. 5mg/kg为最佳剂量。2、TFF3给药能显著逆转纳洛酮催促戒断后小鼠体重降低将实验中称重的BW1、BW2和BW3的差值BW1-BW2、BW2-BW3和BW1-BW3进行统计， 实验重复三次，且实验结果以平均值士标准误差表示，以t检验统计处理。溶媒对照组(Saline+saline+saline)的BW1-BW2、BW2-BW3 和 BW1-BW3 分别为 0. 5g±0. 2g，0. Og士0. 2g，0. 5g±0. 2g,纳洛酮对照组(Saline+saline+Nal)的 BW1-BW2、 BW2-BW3 禾口 BW1-BW3 分别为 0. 5g±0. 2g，0. Ig士0. 2g，0. 5g±0. 2g, TFF3+ 纳洛酮对照 组(saline+0. lmg/kgTFF3+Nal)的 BW1—BW2、BW2-BW3 禾口 BW1-BW3 分别为 0. 2g±0. 2g, 0. 3g±0. 2g，0. 5g±0. 2g,吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)的 Bffl—Bff2、BW2-BW3 和 BW1-BW3 分别为 1. 3g±0. 2g，0. 4g±0. lg，1. 7g±0. 2g，催促戒断给予 0. Olmg/kg TFF3 组(Mor+0. Olmg/kg TFF3+Nal)的 BW1-BW2, BW2-BW3 禾口 BW1-BW3 分别为 1. Og士0. 2g， 0. 5g±0. 2g, 1. 5g±0. 2g,催促戒断给予 0. lmg/kg TFF3 组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)的 BW1-BW2、BW2-BW3 和 BW1-BW3 分别为 1. Og士0. 2g，0. 3g±0. 2g, 1. 3g±0. 2g,催促戒断给 予 0. 5mg/kg TFF3 组(Mor+0. 5mg/kg TFF3+Nal)的 BW1-BW2、BW2-BW3 和 BW1-BW3 分别为 0. 4g±0. 2g，0. 2g±0. lg，0. 7g±0. lg，可乐定阳性对照组(Mor+0. 3mg/kg 可乐定 +Nal)的 Bffl-BW2,BW2-Bff3 和 BW1-BW3 分别为 0. 6g±0. 2g，0. 4g±0. 2g，0. 9g±0. 2g。结果统计见图3，溶媒对照组、TFF3+纳洛酮对照组、纳洛酮对照组小鼠体重变化 无显著差异，说明纳洛酮给药、或TFF3和纳洛酮给药均不会显著影响小鼠的体重变化。与 阴性对照组(溶媒对照组、TFF3+纳洛酮对照组、纳洛酮对照组)相比，吗啡依赖催促戒断 组小鼠体重下降显著增加，说明吗啡依赖催促戒断模型造模成功。与吗啡依赖催促戒断组 相比，3个催促戒断给予TFF3组(0. 01,0. 1,0. 5mg/kg)和可乐定阳性对照组小鼠体重下降 均减轻，均显著低于吗啡依赖催促戒断组。0. 5mg/kgTFF3给药组小鼠的体重下降的比率最 低。与阳性可乐定组相比，0. 5mg/kgTFF3给药组小鼠体重下降缓解程度也具有显著性差异。 结果表明，TFF3缓解小鼠体重下降作用与TFF3给药剂量呈相关性，0. 5mg/kg为最佳剂量。3、TFF3给药不改变正常小鼠的自发活动观察5组的小鼠自发活动，实验重复三次，实验结果以平均值士标准误差表示，以 t检验统计处理。溶媒对照组(saline+saline+saline)的穿梭次数为449士52次，纳洛酮对照组 (saline+saline+Nal)的穿梭次数为 435士50 次，TFF3 和纳洛酮对照组(No Mor+TFF3+Nal) 的穿梭次数为381 士40次，吗啡依赖催促戒断组(Mor+saline+Nal)的穿梭次数为385士77
6次，催促戒断给予0. lmg/kg TFF3组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)的穿梭次数为513士90次。实验结果见图4，结果显示，与溶媒对照组相比，纳洛酮对照组 (saline+saline+Nal)、TFF3 和纳洛酮对照组(saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)小鼠自发 活动无显著性改变，与纳洛酮对照组(saline+saline+Nal)相比，TFF3和纳洛酮对照组 (saline+0. lmg/kg TFF3+Nal)小鼠自发活动无显著性改变；与溶媒对照组、TFF3+纳洛酮 对照组、纳洛酮对照组相比，吗啡依赖催促戒断组小鼠自发活动没有显著改变；与吗啡依赖 催促戒断组小鼠相比，催促戒断给予0. lmg/kg TFF3组(Mor+0. lmg/kg TFF3+Nal)小鼠自 发活动无显著改变。证明，TFF3给药对小鼠没有副作用。
权利要求
三叶因子3在制备预防和/或治疗药物成瘾的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述产品为药物。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物成瘾为吗啡成瘾和/或阿 片类药物成瘾。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于所述阿片类药物具体海洛因、杜 冷丁或可待因。
全文摘要
本发明公开了三叶因子3的新用途。本发明提供了三叶因子3在制备治疗药物成瘾的产品中的新用途。本发明涉及了TFF3对吗啡依赖性小鼠催促戒断实验，通过观察急性催促戒断小鼠跳跃次数和体重下降反映TFF3在吗啡成瘾戒断的治疗效果。
文档编号A61K38/17GK101905016SQ201010217968
公开日2010年12月8日 申请日期2010年6月24日 优先权日2010年6月24日
发明者史海水, 孙成玉, 朱维莉, 罗宜孝, 陆林 申请人:北京大学