专利名称：用于预防和治疗心血管疾病的、包括来自棕榈油研磨废弃物的化合物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于预防和治疗心血管疾病的組合物的使用，尤其地，本发明涉及基于从棕桐油废弃物(effluent)获取的提取物获取的組合物，所述组合物包括维生素Ε、 酚类类黄酮及其结合，所述组合物用于预防和治疗心血管疾病、尤其动脉粥样硬化的方法 (means)的准备。
背景技术：
动脉粥样硬化是心血管疾病(CVD)的示例，其需要预防和治疗方面的终身处理 (management)。近来认为动脉粥样硬化是东南亚地区死亡的主要原因，每年该死亡占大约4 百万的致死性病例。这ー特殊疾病以使具有沉积物的动脉内膜硬化和增厚为特征，所述沉积物由脂肪性物质、胆固醇、細胞废物、钙和纤维蛋白組成。因此，如果没有治疗，嵌入动脉壁的、称为斑块或粥瘤的积累物将最终堵塞动脉，并且是心脏病发作、胸痛或中风的主要促进因素 ^contributory factor)。与胆固醇的出现相关的主要载体以及它在动脉中如上所述的损坏性积聚和堵塞的主要来源是低密度脂蛋白(LDL)。一般地，LDL将胆固醇运载至外周组织并相应地穿过内皮細胞，其导致斑块的进一步发展并因此形成动脉壁胆固醇。决定性地，具有大量LDL的病人明显具有高的动脉粥样硬化的风险。根据以上所述，以及意识到通过减少或降低病人LDL的量可显著协助减少动脉粥样硬化发生的事实，多年来基于这ー关键性因素已使科学验证的药物和治疗的发展完成准备工作。正在进行的科学发展包含抑制或降低胆固醇产生的几种化学开发药物和药物组合物；例如，这些药物包含他汀类(statins)。目前，替代性方法还包含消费含有高级抗氧化物的果汁或物质，例如石榴汁。抗氧化物的存在可协助中和自由基损伤。自由基是可损伤细胞物质的高反应性化学物质，并因此造成包含心血管疾病和癌症的主要退行性疾病。此外，以组合物为基础的植物性药材或植物在提供与心血管疾病相关的有效治疗方面也起主要作用。植物提取物中具有有益性能的主要成分包含因治疗和预防一系列胆固醇相关疾病而广泛闻名的抗氧化物，其中植物中抗氧化物的实例包含酚酸和类黄酮。可从植物提取的、具有极大医疗效果的其他植物基础组分或矿物质包含钾、钙和镁，其中所述矿物质公认为预防和管理例如高血压、心血管疾病和糖尿病的机能紊乱。紧接着以上所述，为治疗心血管疾病使用具有抗氧化性能的天然植物提取物而不是合成抗氧化物正发展开来。油棕果是两种主要的植物化学物质、即维生素E (生育酚和生育三烯酚)和类胡萝卜素的示例性优秀来源，所述两种主要的植物化学物质均为脂溶性。已报导的是，棕榈维生素E充当防御氧化应激和动脉粥样硬化过程的有效生物抗氧化物。
本发明的主要目的在于基于植物提取物为制备用于治疗心血管疾病的药剂提供組合物。本发明的其他目的在于为制备用于治疗心血管疾病的安全药物提供組合物，所述組合物包含棕桐油酚类物质和棕榈维生素E。潜在益处在于抑制斑块的形成并因此抑制动脉粥样硬化病变的发展。
发明内容
一种组合物，所述组合物用于制备预防和治疗心血管疾病的药物，所述组合物包括从棕桐油研磨废弃物提取的组分。在本发明的另一方面，提供用于预防心血管疾病的組合物，所述组合物还包括维生素E。进ー步地，本发明涉及治疗有效量的組合物连同或不连同维生素E在制备供给有需要(in need)的个体的、用于预防和抑制个体的心血管疾病的药物中的使用。
当结合附图阅读时，參照以下详细描述可最佳地理解操作方法连同其特征、目标和优点，所述附图中图1显示了可观察的各处理对兔子的血脂谱(plasma lipid profile)的作用(A 总胆固醇，B =LDL-胆固醇，C =HDL-胆固醇，D 甘油三酯)；图2显示了在100天处理后动脉粥样硬化病变的发展(A 纤维斑块，B 脂肪斑块， (:脂纹，0:无病变)。
具体实施例方式本发明涉及基于棕榈酚类物质和维生素E的、对预防和治疗心血管疾病(尤其动脉粥样硬化)的良好治疗效果的鉴定，以及其組合物的生产。从植物液中成功重获富含类黄酮(flavanoid)和酚酸的水溶性粗提物，所述植物液产生自油棕果的研磨。巴拉苏德拉姆(Balasimdram，2006)已报导了棕榈酚类物质提取物在体外和体内系统内的抗氧化活性。在动物和細胞培养模式系统中，这ー提取物经测验并确认具有对抗癌症和动脉粥样硬化的抗氧化性能和有效的防护作用。维生素E防御自由基介导的疾病的潜在作用是许多研究的主題。目前，对棕榈油内维生素E、尤其生育三烯酚的营养和生理特性的兴趣不断増加。流行病学研究已将维生素E和其他抗氧化物的饮食摄入与降低风险的冠心病(林曼(Rimm)等，199 和缺血性中风(邦纳(bormer)等，1995)联系起来、以及与颈动脉厚度的减少(克里切夫斯基 (Kritchevsky)等，1995)联系起来。霍迪斯(Hodis)等(1995)报导了抗氧化维生素减慢冠状动脉动脉粥样硬化的进程，塞瑞奥尔特(Theriault)等^00 发现Δ -生育三烯酚是降低单核細胞上粘附分子和粘着物的内皮表达、因此降低发展动脉粥样硬化危险的最有效的维生素Ε。与对照饮食相比，以下试验显示了棕榈维生素E的内含物显著降低了这些动物内纤维斑块的程度。这ー发现与克里切夫斯基(Kritchevsky)等Q000)的观察一致，他们报导了与精炼、脱色、除臭(RBD)的棕桐油或随机棕桐油相比，包含维生素E和胡萝卜素的红棕桐油导致最不严重的动脉粥样硬化病变发展，并提出胡萝卜素和维生素E可防御动脉粥样硬化。从威尔逊(Wilson)等(1978)的其他研究中也可观察到类似效果，他们发现饮食中添加(w/w)的维生素E造成兔子主动脉和冠状动脉动脉粥样硬化的显著減少。更早的研究(海曼(Haiman)，1960)中还报导了维生素E对胆固醇诱导的动脉粥样硬化的防护作用。另ー方面，ー些研究者(达姆(Dam)，1994)发现维生素E对兔子的血脂參数或动脉粥样化形成没有影响，而其他人报导维生素E改进了一些脂质參数但没有抑制动脉粥样硬化的斑块形成(伊斯梅尔(Ismail)等，2000)。相应地，依照本发明的优选实施例且基于将简短描述的操作实例，棕榈酚类物质単独地(AO)或与维生素E结合地(ACffi)显示出，与CTR和VIT E相比，在AO和AOE组中观察到对动脉粥样硬化病变显著地优良抑制作用。为了这ー发明，通过两种不同方法，即FRAP和ABTS‘ +測量血浆抗氧化能力。从 ABTS' +清除试验获得的结果显示了所有四个组无显著性差异。FRAP试验的结果也无统计显著性，尽管AO组和AOE组的血浆抗氧化能力倾向于比CTR组的血浆抗氧化能力更高。本文将描述基于各个试验获取的方法和結果，所述各个试验用于确定棕桐油植物中所述化合物的有效性。实施本发明的最佳模式操作实例材料和方法1.动物、饮食和试验设计4-5个月大的32只雄性新西兰白兔随机分为4个不同处理组、每组8只动物。将各动物单个收容在不锈钢笼子中，并将其維持在具有12小时光照周期(daylight cycle) 的温度受控房间中(25°C -28°C )。所有动物随机地以致动脉粥样硬化饮食(diet)为食100 天。另外，还为动物提供维生素E、棕榈酚类物质或其结合。四个试验组分类如下1.高脂肪致动脉粥样硬化饮食-対照(CTR)2.高脂肪致动脉粥样硬化饮食+维生素E (VIT E)3.高脂肪致动脉粥样硬化饮食+棕榈酚类物质(AO)。4.高脂肪致动脉粥样硬化饮食+维生素E+棕榈酚类物质(AOE)。致动脉粥样硬化饮食如表1中所示按配方制造。饮食包含来自脂肪的35%的能里。表1配制的兔子致动脉粥样硬化饮食的組合物成分g/kg饮食酪蛋白250.0玉米淀粉200.0右旋葡萄糖193.0纤维素150.0矿物混合物40.0维生素混合物10.0重酒石酸胆碱2.5DL-蛋氨酸3.0胆固醇1.5膳食脂肪150.0使用的膳食脂肪设计为致动脉粥样硬化，并包括饱和脂肪酸67. 1 % (C12:0+C14:0 = 54.9% )、单不饱和脂肪酸15. 7% (C18:l)以及多不饱和脂肪酸12. 0% (表幻。根据它们的甲酷使用气相色谱确定膳食油的脂肪酸組合物(桑德兰姆等，1997)。在VIT E和AOE组的饮食中，富含生育三烯酚的棕榈维生素E用作维生素E来源， 1250mg的这ー维生素E添加至每千克的膳食脂肪中。VIT E颗粒饮食中最终的维生素E含量为237. Omg/kg,而基本的颗粒饮食(喂给CTR和AO组)含50mg/kg的维生素E，其主要来源于饮食配方中使用的油。向AO和AOE组提供棕榈酚类物质，作为它们含1500mg GAE/ L总酚类物质的饮用流体。在饲养试验期间，连续监控动物的食物摄取量、水消耗量和体重増加。在14天的连续持续时间内测试AO和AOE组棕榈酚类物质的消耗量，发现其大约为 150mg GAE/ 日 / 动物。表2 试验饮食中主要脂肪酸的含量(％ )碳的数目膳食脂肪饱和脂肪酸(SFA)67.1412:040.3814:014.5016:09.7218:02.4020:00.14多不饱和脂肪酸^ (PUFA)12.0218:2(n-6)11.8818:3(n-3)0.14单不饱和脂肪酸^ (MUFA)15.6818:l(n-9)15.68在饲养试验结束时，处死所有动物。在处死之前使动物整夜禁食，用卡特敏和舒泰的混合物(O. lmL/kg体重)麻醉动物，并通过心穿刺术取30mL血。在3000g离心20分钟制备血浆，并在分析前将其在-80°C保存。然后，在解剖前使动物服用过量的戊巴比妥钠，从而移除感兴趣的各个器官，例如肝脏、心脏、肺和肾。密切跟踪、解剖动脉系统，并清理动脉系统的粘附外膜组织。接着切开动脉，并在为了量化动脉粥样硬化病变用油红-ο染色前将其保存在10%的福尔马林溶液中。2.致动脉粥样硬化指数的生化分析和測量以下列举的所有试验分析在多数相关实验室中是现行的和标准的。血脂分析根据制造商的规程(protocol)，在罗氏/日立902 (Roche/Hitachi 902)的临床化学自动分析仪上使用酶试剂盒(罗氏诊断有限公司(Roche DiagnosticsGmbH)，曼海姆 (marmheim)，德国)分析血脂(TC、甘油三酯(TG)、HDL-C)。血浆抗氧化状态通过两种方法，即2，2’ -连氮基-双-(3-乙基苯并ニ氢噻唑啉)-6-磺酸阳离子 (ABTS·+)脱色试验和血浆的铁还原能力(FRAP)，测试血浆抗氧化状态。使用雷(Re)等(1999)的、经巴拉苏德拉姆O006)适应性调整的方法測量兔血浆清除ABTS·+的能力。本质上这一试验测量血浆中的抗氧化物清除过硫酸钾氧化ABTS产生的预制(preformed)ABTS‘ +的能力。色彩強烈的ABTS‘ +较稳定，但在抗氧化物存在时，它容易还原为ABTS‘2_。将6分钟后734nm处的吸收损失当做ABTS·+清除活性的量度。使用 6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并ニ氢吡喃-2-羧酸(衍生物)构建标准ABTS·+清除曲线，按照毫克(mg)衍生物当量/mL(mg TE/mL)记录血浆的ABTS· +清除能力。使用费鲁兹(Firuzi)等Q005)的、经巴拉苏德拉姆O006)适应性调整的方法測量血浆的铁还原抗氧化能力。初始的FRAP试验由本西(Benzie)和斯特雷恩(Strain) (1996)开发，作为测量血浆铁还原能力的测试，即通过电子转移机制将三价铁_2，4，6三吡啶-S-三嗪(Fe3+-TPTZ)还原为ニ价铁-2，4，6三吡啶_s_三嗪(Fe2+-TPTZ)的能力。这ー 还原导致具有最大吸收为593nm的强蓝色还原络合物的产生(本西和斯特雷恩，1996)。组织病理学检验采用油红-0染色动脉，通过使用图像分析软件(IDT-解决方案)着手动脉粥样硬化病变的量化。病变的分类如下表3中所示表3 病变表征
权利要求
1.用于制备预防和治疗心血管疾病的药物的組合物，其特征在干，所述组合物包括从棕桐油研磨废弃物中提取的成分。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在干，所述组合物还包括维生素E。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在干，所述组合物包括从棕桐油研磨废弃物提取的酚类物质和类黄酮。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在干，它们可作为具有药物可接受载体的化合物提供。
5.治疗有效量的权利要求1所述的组合物连同或不连同维生素E、在制备供给有需要的个体的、用于预防和抑制个体的心血管疾病的药物中的使用。
全文摘要
本发明提供了预防和治疗心血管疾病的组合物，其中从棕榈油研磨废弃物、尤其从棕榈油果实的研磨植物液获得所述组合物化合物。
文档编号A61P9/10GK102573869SQ201080031377
公开日2012年7月11日 申请日期2010年5月18日 优先权日2009年5月18日
发明者卡里亚纳·桑德拉姆·P.·马尼卡姆, 哈查慈安妮莎哈兹·Hj·慈艾德斯, 拉维加德维·沙姆巴沙穆提, 莫哈末·巴斯利·瓦西德, 谭友爱, 那贞德兰·巴拉苏德拉姆 申请人:马来西亚棕榈油协会