专利名称：一种肾石通的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药的质量控制方法，特别是涉及一种肾石通的质量控制方法，更具体地涉及一种肾石通浸膏或肾石通制剂的质量控制方法。
背景技术：
肾石通颗粒收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第2册中。处方是由金钱草 100g、王不留行(炒)100g、篇蓄60g、瞿麦50g、海金沙40g、丹参40g鸡内金(烫)40g、延胡索(醋制)30g、牛膝30g、木香20g组成。制备工艺为以上十味，海金沙、王不留行装入布袋内，与其余金钱草等八味加水煎煮二次，第一次2. 5小时，第二次1. 5小时，合并煎液，滤过，减压浓缩至相对密度为1. 20 1. 25(75 80°C )的清膏；取清膏1份，加糖粉2份，糊精1份混勻，制成颗粒，在80°C以下干燥。规格每袋装15克。功能主治具有清热利湿、 活血止痛、化石排石的功效，用于肾结石、肾盂结石、膀胱结石、输尿管结石。目前市售肾石通制剂还有肾石通无糖型颗粒，肾石通丸(每袋生药量均为7. 65g)等。肾石通颗粒现执行的部颁标准中只有性状、颗粒剂检查项，无鉴别项目和含量测定项目，制剂质量可控性差。有文献报道肾石通的质量标准。定性鉴别方面，曾有过金钱草、王不留行蓄、 丹参、延胡索和牛膝的薄层色谱研究，已有文献报道大多采用单个化学成分对照品为对照， 开展薄层鉴别。如以槲皮素、齐墩果酸、延胡索乙素为对照，进行金钱草、牛膝、延胡索的鉴别(江西中医学院学报，2001)；以槲皮素、齐墩果酸为对照，进行篇蓄、牛膝的鉴别(西北药学杂志，2005)；以齐墩果酸、王不留行药材，原儿茶醛为对照，进行牛膝、王不留行、丹参的鉴别(时珍国医国药，2008)等。上述鉴别存在特征性不强，效果不佳的缺点槲皮素在金钱草、篇蓄中都有，以此为对照品进行鉴别缺乏特异性，王不留行和箱丨蓄的鉴别效果很差；牛膝的鉴别重复性不好，分离效果也较差；金钱草、丹参、延胡索的鉴别方法也不理想。也有一些文献研究肾石通颗粒的定量控制。如于兰等采用NaNO2-Al (NO3)3- NaOH 比色法，以芦丁为对照品，以510nm为测定波长测定肾石通颗粒中总黄酮含量(西北药学杂志，2005)。然而如图1所示，肾石通颗粒样品在400 600nm波长范围内吸收曲线平坦，没有明显的最大吸收波长。郭亚健等研究报道以NaNO2-Al (NO3) 3"NaOH为显色剂，于400 600nm进行总黄酮含量测定的方法专属性不强，准确性较差(《关于NaNO2-Al (NO3) 3"NaOH比色法测定总黄酮方法的探讨》，药物分析杂志，2005年)，也进一步说明文献中的510nm比色法测定肾石通总黄酮不够理想。最近有一些采用高效液相色谱法(HPLC)对肾石通颗粒制剂的定量控制研究报道，如HPLC法测定肾石通颗粒中槲皮素的含量(安徽医药，2006)，测定山萘素的含量(大理学院学报，2010)，测定中槲皮素与山萘素的含量(中国药业，2010)；另有HPLC测定肾石通颗粒中丹参酚酸类成分的含量，如测定丹参素的含量(曹兆军等，中国药品标准，2007)， 测定原儿茶醛(时珍国医国药，2008)的报道。上述文献中一般测定的都是某一药材中单个成分的含量，很难全面反映10味药材的复方的整体质量情况。肾石通制剂处方中金钱草为方中主药(君药)，用量约占整个处方的1/5，其主要成分为黄酮类物质。另外篇蓄、瞿麦、王不留行和海金沙等多味药材也都富含黄酮类成分， 几种含黄酮药材用量共占整个处方总量的2/3。由于多种药材中含有黄酮类成分，同时黄酮类成分和药效关系密切，可以将其作为控制质量的指标来评价肾石通内在质量，并可用作衡量中间品或成品质量是否达到要求是否稳定的标准。目前尚未有一种能准确测定肾石通制剂中总黄酮含量的方法。亟需一种准确、有效和便捷的总黄酮的含量测定方法，来评价肾石通中间品及成品的总黄酮含量及其稳定性。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种准确、有效、便捷的肾石通制剂的质量控制方法。为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案一种肾石通制剂的质量控制方法，包括以下步骤(1)采用薄层色谱法，以金钱草对照药材为对照，体积比为1 3 1的冰醋酸-水为展开剂，鉴别肾石通中的金钱草；(2)采用薄层色谱法，以木香对照药材为对照，体积比为6 10 1的环己烷乙酸乙酯为展开剂，5%香草醛硫酸溶液为显色剂，鉴别肾石通中的木香；(3)采用薄层色谱法，以丹参素钠对照品为对照，体积比为2 4 1 0.4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，鉴别肾石通中的丹参；(4)采用薄层色谱法，以延胡索乙素对照品为对照，体积比为4 5 1的甲苯-丙酮为展开剂，鉴别肾石通中的延胡索；(5)采用比色法，以三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系为显色剂，芦丁为对照品， 273士2nm为测定波长，测定肾石通中总黄酮的含量。其中采用薄层色谱法，用金钱草药材为阳性对照鉴别金钱草包括以下步骤 a.供试品溶液的制备取肾石通加乙醇浓度为0 95%的乙醇-水混合溶剂超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙醚振摇提取数次，弃乙醚液，再用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加95%乙醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取金钱草药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；c.薄层条件点样于聚酰胺薄膜上，以体积比为2 1的冰乙酸-水为展开剂，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯 365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；采用薄层色谱法，用木香药材为阳性对照鉴别木香包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加水超声提取，离心，上清液浓缩至1/5体积，加乙醇使含醇量达80%，搅拌，离心，取上清液浓缩至干，残渣加水溶解，用60-90°C的石油醚提取3次，合并石油醚液， 挥干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取木香药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；c.薄层条件点样于硅胶G薄层板上，以体积比为8 1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，喷以5%香草醛硫酸溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；采用薄层色谱法，用丹参素钠为阳性对照鉴别丹参包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加水振摇，超声提取，离心，取上清液，加盐酸调节PH至2，用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取丹参素钠对照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，制成对照品溶液； c.薄层条件点样于硅胶G薄层板上，以体积比为25 10 4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，置氨蒸气中熏10分钟，在空气中挥尽板上吸附的氨后，置紫外光灯365nm下检视； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；采用薄层色谱法，用延胡索乙素为阳性对照鉴别延胡索包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加浓氨试液[氨(NH3)浓度25. 0% 观.0% (g/g)]湿润20分钟后，加乙醚振摇提取30分钟后，静置过夜，分取上清液，用30%醋酸提取4次，合并提取液， 用浓氨试液调PH值至10 11，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，用水洗至中性，无水硫酸钠脱水后，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，制成对照品溶液；c.薄层条件点样于硅胶G薄层板上，以体积比为9 2的甲苯-丙酮为展开剂，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；采用比色法，以芦丁为对照，紫外273nm测定肾石通制剂中的总黄酮含量包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加醇浓度为0 100%的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂超声提取，补足重量，摇勻，滤过，滤液作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加醇浓度为0 100%的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂制成每Irnl中含芦丁 0. 8 1. 2mg的溶液，作为对照品溶液；c.测定方法分别量取对照品溶液和供试品溶液，各加入PH5. 5，浓度为0. lmol/L的显色剂三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系；放置30分钟后，在273nm波长下，测定吸光值，计算总黄酮含量(以芦丁计)。在该发明中，肾石通为肾石通浸膏或肾石通制剂，肾石通制剂的剂型为颗粒、片剂、胶囊、微丸或滴丸。本发明发明人通过大量试验摸索，对肾石通制剂方中十味药材均进行了鉴别研究，首次建立了以金钱草药材为对照，木香药材为对照、丹参素钠为对照鉴别肾石通制剂中金钱草、木香、丹参的薄层色谱法，同时改良了延胡索的薄层色谱条件。新建了以芦丁为对照，在紫外273nm测定总黄酮的含量测定方法。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果1.本发明在原有标准的基础上，增加了金钱草、木香、丹参和延胡索的薄层鉴别方法，操作简便，安全，可以准确、快速地进行定性鉴别，专属性强，重现性好；通过新建的总黄酮的含量测定方法，可以全面、准确地反映制剂的质量；从而可以实现对肾石通药品的定性和定量检测，可以有效地控制肾石通产品的质量，防止假冒伪劣产品；2.本发明的质量控制方法能对肾石通制剂进行有效的质量控制，包括中间品肾石通浸膏以及由该配方制成的片剂、胶囊、微丸、滴丸等。
图1为采用NaNO2-Al (NO3) 3"NaOH比色法测定肾石通颗粒中的总黄酮时，待测液在 400 600nm范围内的紫外-可见分光光谱图；图2为本发明中芦丁标准溶液与待测液在200 600nm范围内的紫外-可见分光光谱图；a为芦丁标准溶液；b为待测液；
图3为本发明实施例2-4中测定总黄酮时的标准曲线。
具体实施例方式以下结合附图和具体实施例详细说明本发明。实施例1本发明质量控制方法的方法学验证(1)准确度试验如图2所示，测定肾石通浸膏或肾石通制剂中的总黄酮含量时，芦丁标准溶液与待测液在273nm波长处有共同吸收峰，说明此方法适用于测定肾石通中总黄酮含量，经准确度试验表明，该方法加样回收率可达100. 1%，测定结果可靠，见表1。表1准确度试验结果
权利要求
1.一种肾石通的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤(1)采用薄层色谱法，以金钱草对照药材为对照，体积比为1 3 1的冰醋酸-水为展开剂，鉴别肾石通中的金钱草；(2)采用薄层色谱法，以木香对照药材为对照，体积比为6 10 1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，5%香草醛硫酸溶液为显色剂，鉴别肾石通中的木香；(3)采用薄层色谱法，以丹参素钠对照品为对照，体积比为2 4 1 0.4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，鉴别肾石通中的丹参；(4)采用薄层色谱法，以延胡索乙素对照品为对照，体积比为4 5 1的甲苯-丙酮为展开剂，鉴别肾石通中的延胡索；(5)采用比色法，以三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系为显色剂，芦丁为对照品， 273士2nm为测定波长，测定肾石通中总黄酮的含量。
2.如权利要求1所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(1)包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加乙醇浓度为0 95%的乙醇-水混合溶剂超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙醚振摇提取数次，弃乙醚液，再用乙酸乙酯振摇提取乙酸乙酯液蒸干，残渣加95%乙醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取金钱草药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；c.薄层条件点样于聚酰胺薄膜上，以体积比为2 1的冰乙酸-水为展开剂，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.如权利要求1所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(2)包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加水超声提取，离心，上清液浓缩至1/5体积，加乙醇使含醇量达80%，搅拌， 离心，取上清液浓缩至干，残渣加水溶解，用60-90°C的石油醚提取3次，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取木香药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；c.薄层条件点样于硅胶G薄层板上，以体积比为8 1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，喷以5%香草醛硫酸溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.如权利要求1所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(3)包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加水振摇，超声提取，离心，取上清液，加盐酸调节PH至2，用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取丹参素钠对照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，制成对照品溶液；c.薄层条件点样于硅胶G薄层板上，以体积比为25 10 4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂， 置氨蒸气中熏10分钟后，挥尽板上吸附的氨后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.如权利要求1所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(4)包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加氨质量浓度为25. 0% 28. 0%的浓氨试液湿润20分钟后，加乙醚振摇提取30分钟后，静置过夜，分取上清液，用30%醋酸提取4次，合并提取液，用浓氨试液调pH 值至10 11，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，用水洗至中性，无水硫酸钠脱水后，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，制成对照品溶液；c.薄层条件点样于硅胶G薄层板上，以体积比为9 2的甲苯-丙酮为展开剂，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.如权利要求1所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(5)包括以下步骤a.供试品溶液的制备取肾石通加醇浓度为0 100 %的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂超声提取，补足重量，摇勻，滤过，滤液作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加醇浓度为0 100 %的乙醇-水混合溶剂或甲醇水混合溶剂制成每Iml中含芦丁 0. 8 1. 2mg的溶液，作为对照品溶液；c.测定方法分别量取对照品溶液和供试品溶液，各加入PH5. 5，浓度为0. lmol/L的显色剂三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系；放置30分钟后，在273士2nm波长下，测定吸光值，计算总黄酮含量。
7.如权利要求1-6任一项所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述肾石通为肾石通浸膏或肾石通制剂。
8.如权利要求7所述的肾石通的质量控制方法，其特征在于，所述肾石通制剂的剂型为颗粒、片剂、胶囊、微丸或滴丸。
全文摘要
本发明公开了一种肾石通的质量控制方法。该质量控制方法建立了以金钱草药材为对照，木香药材为对照、丹参素钠为对照鉴别肾石通制剂中金钱草、木香、丹参的薄层色谱法，同时改良了延胡索的薄层色谱条件。新建了以芦丁为对照，在紫外273±2nm测定总黄酮的含量测定方法。本发明在原有标准的基础上，增加了金钱草、木香、丹参和延胡索的薄层鉴别方法，可以准确、快速地进行定性鉴别，专属性强，重现性好；通过总黄酮的含量测定方法，可以全面、准确地反映制剂的质量；从而可以有效地控制肾石通产品的质量，防止假冒伪劣产品；能对肾石通制剂进行有效的质量控制，包括中间品肾石通浸膏以及由该配方制成的片剂、胶囊、微丸、滴丸等。
文档编号A61K36/704GK102166264SQ20111007978
公开日2011年8月31日 申请日期2011年3月30日 优先权日2011年3月30日
发明者叶健文, 杜松, 罗爱勤 申请人:广州汉方现代中药研究开发有限公司