专利名称：一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液。
背景技术：
老年性白内障是老年人很普遍的疾病。据统计资料显示，中国白内障患者中，50 59岁患者占60%，60 69岁患者占80%，而70岁以上患者的患病率则超过90%。在治疗早期老年性白内障的众多药物中，氨碘肽滴眼液是较常用的滴眼液，疗效显著且使用频率高。目前市售的氨碘肽滴眼液是一种由猪全眼球和甲状腺经胰酶和霉菌蛋白酶水解提取而成的生化制剂，含有机碘和谷氨酸、胱氨酸、甘氨酸、天氨酸、冬氨酸、赖氨酸等十八种氨基酸、多肽、核苷酸和多种微量元素等(起主要作用的是碘元素)，该滴眼液的组分中所含的抑菌剂为对羟基苯甲酸类和硫酸庆大霉素。郭好水在研究中发现硫酸庆大霉素属氨基糖苷类类，有肾毒性、耳毒性、神经肌肉毒性和过敏反应等毒副作用，有些毒副作用甚至是不可逆的(《庆大霉素毒副反应及预防》， 医学理论与实践，1995,8(8) :377)。这一点，在市售的硫酸庆大霉素胶囊的说明中也明确标出，近年来革兰阴性杆菌对庆大霉素耐药株显著增多。罗明生、高天惠、宋民宪等学者认为，对羟基苯甲酸酯类的主要作用是阻止霉菌生长，其对革兰氏阴性菌的抑菌效果相对较差。苯乙醇对革兰氏阴性菌有显著的抑菌作用，并能抑制霉菌，对绿脓杆菌有较好的抑菌作用(《中国药用辅料》，北京，化学工业出版社，2006:137)。抑菌剂添加至滴眼液中使用，其目的是防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖。而《中国药典2010年版二部》，北京，中国医药科技出版社，2010 附录215-216)中也新增了抑菌剂效力检查的指导原则，规定滴眼液需以铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉为试验菌进行抑菌剂效力测定。因此，滴眼液中应用的抑菌剂其种类及其使用浓度范围内，应对上述五种菌均起到有效的抑制作用。可见，市售氨碘肽滴眼液的抑菌剂存在用药安全隐患，已无法满足临床需要，因此，如何筛选出合适的抑菌剂已成为本领域急需解决的一个技术难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其中复方抑菌剂为对羟基苯甲酸酯类和苯乙醇，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及其它真菌均有较好的抑菌作用，安全有效。本发明采用的技术方案是一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于所述复方抑菌剂为对羟基苯甲酸酯类和苯乙醇，在含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液中，所述的对羟基苯甲酸酯类浓度 0. 1 0. 4g/L(优选0. 15 0. 3g/L)，所述的苯乙醇浓度为4 5ml/L ；所述对羟基苯甲酸酯类为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯中的一种或两种以上的混合。
进一步，本法所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，每IOOOml氨碘肽滴眼液由下列组分组成甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸酯类0. 1 0. 4g(优选0. 15 0. 3g)，苯乙醇4 5ml，乙醇1 ^il，用于调节氨碘肽滴眼液pH值至5. 5 7. 0的氢氧化钠溶液适量，余量为注射用水；所述甲状腺提取物为哺乳动物的甲状腺在加热条件下依次经胰酶、中性蛋白酶水解得到的提取物，所述眼球提取物为哺乳动物的眼球在加热条件下依次经胰酶、中性蛋白酶水解得到的提取物，所述甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为0. 025 0. 045g，所述眼球提取物的用量以其总固体含量计为35 50g ；所述的哺乳动物优选为猪、牛或羊。所述甲状腺提取物中含有的有机碘，是甲状腺提取物中特有的与氨基酸结合的碘元素，可通过滴定法检测甲状腺提取物中的有机碘百分含量，并根据有机碘百分含量来计算甲状腺提取物的用量，即甲状腺提取物用量=氨碘肽滴眼液中所需有机碘的用量/甲状腺提取物中的有机碘百分含量。这是本领域人员公知的计算方法，本领域技术人员根据组方均可以自行计算得到各原料用量。优选的，所述含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液的组方为每IOOOml氨碘肽滴眼液中含甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸乙酯0. 3g，苯乙醇5ml，乙醇:3ml，用于调节溶液PH值至6.0的氢氧化钠溶液适量，甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为 0. 035g，眼球提取物的用量以其总固体含量计为38g，其余为注射用水。优选的，所述含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液的组方为每IOOOml氨碘肽滴眼液中含甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸丙酯0. 2g，苯乙醇5ml，乙醇anl，用于调节溶液PH值至6.0的氢氧化钠溶液适量，甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为 0. 035g，眼球提取物的用量以其总固体含量计为38g，其余为注射用水。优选的，所述含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液的组方为每IOOOml氨碘肽滴眼液中含甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸丙酯0. 3g，苯乙醇細1，乙醇:3ml，用于调节溶液PH值至6. 5的氢氧化钠溶液适量，甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为 0. 035g，眼球提取物的用量以其总固体含量计为38g，其余为注射用水。本发明所述甲状腺提取物可按以下方法提取得到取哺乳动物甲状腺为原料，所述哺乳动物为猪、牛或羊，原料切碎后与纯化水混合，并用10 %的氢氧化钠溶液调节PH值为8. 0 10. 0，搅拌均勻，先在40 50°C下用胰酶水解2 6小时(优选4小时)；再在 45 55°C下用中性蛋白酶水解2 6小时(优选4小时)，反应结束后反应液离心去除残渣，取上清液加乙醇至乙醇的终浓度为75%，去除沉淀，所得清液过滤，滤液减压浓缩，得到固含量为20 40%、有机碘含量0. 1 0. 3%的甲状腺提取物；所述纯化水的用量为原料质量的2 3倍，所述胰酶的用量为原料质量的1 3%，所述的中性蛋白酶用量为原料质量的0. 1 0. 3%。本发明所述眼球提取物按以下方法提取得到取哺乳动物眼球为原料，所述哺乳动物为猪、牛或羊，原料切碎后与纯化水混合，并用10%的氢氧化钠溶液调节PH值为8. 5 10. 0，搅拌均勻，先在40 50°C下用胰酶水解2 6小时(优选4小时)；再在45 55°C 下用中性蛋白酶水解2 6小时(优选4小时)，反应结束后反应液离心去除残渣，取上清液加乙醇至乙醇的终浓度为75%，去除沉淀，所得清液过滤，滤液减压浓缩，得到固含量为20 30%的眼球提取物；所述纯化水的用量为原料质量的2 3倍，所述胰酶的用量为原料质量的1 3 %，所述的用量为原料质量的0. 1 0. 3%。以上均为本领域人员公知的提取方法，常用于氨碘肽滴眼液的制备中。本发明所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液可按以下方法制备得到按照处方量称取对羟基苯甲酸酯类、苯乙醇、乙醇，完全溶解后与甲状腺提取物和眼球提取物混勻， 加注射用水至接近处方量(通常为处方量的90% )，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液调节溶液PH值至5. 5 7. 0之间，所得溶液加入溶液质量0. 2%的活性炭用于溶液脱色，加热至 100°C，搅拌10 20分钟，最后加注射用水至处方量，搅拌均勻，冷却至室温，除菌过滤，无菌灌装，即得所述含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液。为了保持药物稳定的酸碱度，有利于提高氨碘肽滴眼液的产品稳定性，保证产品疗效，减少对眼部的刺激性，增加患者使用时的顺应性，本发明氨碘肽滴眼液中用氢氧化钠溶液调节溶液PH值至5. 5 7. 0，优选为5. 8 6. 8。本发明针对市售氨碘肽滴眼液中抑菌剂存在的毒副作用及抑菌谱不广等问题，在不添加硫酸庆大霉素使用的基础上，对滴眼液的抑菌剂进行筛选。通过处方的相容性试验， 筛选适用与该种滴眼液体系的抑菌剂，再对其抑菌效力进行研究，结果表明，在滴眼液中抑菌剂的常用浓度范围内，单用一种抑菌剂无法达到同时抑制革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、 真菌的作用。因此，需要筛选一组复合抑菌剂用于该滴眼液。从复合抑菌剂的筛选结果表明，对羟基苯甲酸酯类和苯乙醇联用，能扩大抑菌范围，增强抑菌活性，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌均有较好的抑制作用。与此同时，对筛选出的复合抑菌剂进行抑菌效力验证试验的考察，结果表明对羟基苯甲酸酯类和苯乙醇联用作为复合抑菌剂，完全符合《中国药典2010年版二部》附录的规定，安全有效。本发明具有如下优点本发明提供的一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，通过对羟基苯甲酸酯类与苯乙醇联用协同抑菌，提高抑菌活性，增强抗微生物污染能力，扩大抑菌谱，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌均有较好抑制作用；且经抑菌剂效力试验验证完全符合《中国药典 2010年版二部》附录规定，其安全性和有效性能满足临床需要。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。下列实施例中提取物的制备方法是①甲状腺提取物取125g猪甲状腺，切碎，投入装有250g纯化水的反应器，并用 10%的氢氧化钠溶液调节料液到PH8. 5，搅拌均勻，先在45°C下用总计2g胰酶水解4小时； 再在50°C下用总计0. 2g中性蛋白酶水解4小时，离心去除残渣，取上清液加乙醇至终浓度为75%，去除沉淀，清液过滤，滤液减压浓缩，得到有机碘含量0. 1%、固含量20%的提取物 60g。②甲状腺提取物取125g猪甲状腺，切碎，投入装有250g纯化水的反应器，并用 10%的氢氧化钠溶液调节料液到pH8. 5，搅拌均勻，先在45°C下用总计2g胰酶水解4小时； 再在50°C下用总计0. 2g中性蛋白酶水解4小时，离心去除残渣，取上清液加乙醇至终浓度为75 %，去除沉淀，清液过滤，滤液减压浓缩，得到有机碘含量0. 2 %、固含量40 %的提取物 30g。③眼球提取物的制备方法取125g猪眼球，切碎，投入装有250g纯化水的反应器， 并用10%的氢氧化钠溶液调节料液到PH8. 5，搅拌均勻，先在45°C下用总计2g胰酶水解4 小时；再在50°C下用总计0. 2g中性蛋白酶水解4小时，离心去除残渣，取上清液加乙醇至终浓度为75 %，去除沉淀，清液过滤，滤液减压浓缩，得到固含量20 %的提取物45g。按上述方法多做几次，作为实施例的原料。④眼球提取物的制备方法取125g猪眼球，切碎，投入装有250g纯化水的反应器， 并用10%的氢氧化钠溶液调节料液到PH8. 5，搅拌均勻，先在45°C下用总计2g胰酶水解4 小时；再在50°C下用总计0. 2g中性蛋白酶水解4小时，离心去除残渣，取上清液加乙醇至终浓度为75 %，去除沉淀，清液过滤，滤液减压浓缩，得到固含量30 %的提取物30g。按上述方法多做几次，作为实施例的原料。实施例1
甲状腺提取物中含有的有机碘0.03
眼球提取物中含有的总固体38.0g
对羟基苯甲酸乙酯0.3g
苯乙醇5.0ml
乙醇3ml
氢氧化钠适量
注射用水加至IOOOml取甲状腺提取物(含有机碘0.2%，固含量40% )17. 5g和眼球提取物(固含量 30 % )126. 6g，投入大烧杯中；取对羟基苯甲酸乙酯0. 3g，苯乙醇5. Oml，加乙醇3ml，搅拌使其完全溶解，投入大烧杯中；加注射用水至900ml，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液调节溶液PH值至6. 0 ；加2g的活性炭用于溶液脱色，加热保持100°C，搅拌10分钟。加注射用水至IOOOml量，搅拌均勻，冷却至室温；除菌过滤，无菌灌装，即得到氨碘肽滴眼液。实施例2
甲状腺提取物中含有的有机碘0.03 眼球提取物中含有的总固体38.0g
对羟基苯甲酸丙酯0.2g
苯乙醇5.0ml
乙醇2ml
氢氧化钠适量
注射用水加至IOOOml取甲状腺提取物(含有机碘0.1%，固含量20%)35g和眼球提取物(固含量 20 % ) 190g,投入大烧杯中；取对羟基苯甲酸丙酯0. 2g，苯乙醇5. Oml，加乙醇2ml，搅拌使其完全溶解，投入大烧杯中；加注射用水至900ml，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液调节溶液 PH值至6. 0 ；加2g的活性炭用于溶液脱色，加热保持100°C，搅拌20分钟。加注射用水至 IOOOml量，搅拌均勻，冷却至室温；除菌过滤，无菌灌装，即得到氨碘肽滴眼液。实施例3
甲状腺提取物中含有的有机碘0.03
眼球提取物中含有的总固体38.0g
对羟基苯甲酸丙酯0.3g
苯乙醇4.0ml
乙醇3ml
氢氧化钠适量
注射用水加至IOOOml取甲状腺提取物(含有机碘0.1%，固含量20%)35g和眼球提取物(固含量 20 % ) 190g,投入大烧杯中；取对羟基苯甲酸丙酯0. 3g，苯乙醇4. Oml，加乙醇3ml，搅拌使其完全溶解，投入大烧杯中；加注射用水至900ml，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液调节溶液 PH值至6. 5 ；加2g的活性炭用于溶液脱色，加热保持100°C，搅拌20分钟。加注射用水至 IOOOml量，搅拌均勻，冷却至室温；除菌过滤，无菌灌装，即得到氨碘肽滴眼液。实施例4本发明用于氨碘肽滴眼液的抑菌剂的处方筛选分别称取适量的苯扎氯铵、苯扎溴铵、氯己定、ε -聚赖氨酸、对羟基苯甲酸甲酯、 乙酯、丙酯、月硅酸单甘油酯、苯乙醇至已配制的不含抑菌剂的氨碘肽空白滴眼液中使其含量分别为 0. 05%,0. 05%,0. 02%,0. 1%,0. 1%,0. 04%,0. 03%,0. 1%,0. 5%0 放置，观察添加了抑菌剂的氨碘肽溶液是否澄清，并以其水溶液作对照。结果如下表1抑菌剂处方筛选的配伍禁忌的实验结果
权利要求
1.一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于所述复方抑菌剂为对羟基苯甲酸酯类和苯乙醇，在含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液中，所述的对羟基苯甲酸酯类浓度 0. 1 0. 4g/L，所述的苯乙醇浓度为4 5ml/L ；所述对羟基苯甲酸酯类为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯中的一种或两种以上的混I=I O
2.如权利要求1所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于，每IOOOml氨碘肽滴眼液由下列组分组成甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸酯类0. 1 0. 4g，苯乙醇4 5ml，乙醇1 細1，用于调节氨碘肽滴眼液pH值至5. 5 7. 0的氢氧化钠溶液，余量为注射用水；所述甲状腺提取物为哺乳动物的甲状腺依次经胰酶、中性蛋白酶水解得到的提取物，所述眼球提取物为哺乳动物的眼球依次经胰酶、中性蛋白酶水解得到的提取物， 所述甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为0. 025 0. 045g，所述眼球提取物的用量以其总固体含量计为35 50g。
3.如权利要求2所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于，所述的哺乳动物为猪、牛或羊。
4.如权利要求2所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于，每IOOOml氨碘肽滴眼液中含有甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸乙酯0. 3g，苯乙醇5ml，乙醇 :3ml，用于调节溶液pH值至6. 0的氢氧化钠溶液，甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为0. 035g，眼球提取物的用量以其总固体含量计为38g，其余为注射用水。
5.如权利要求2所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于，每IOOOml氨碘肽滴眼液中含有甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸丙酯0. 2g，苯乙醇5ml，乙醇 anl，用于调节溶液PH值至6. 0的氢氧化钠溶液，甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为0. 035g，眼球提取物的用量以其总固体含量计为38g，其余为注射用水。
6.如权利要求2所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于，每IOOOml氨碘肽滴眼液中含有甲状腺提取物，眼球提取物，对羟基苯甲酸丙酯0. 3g，苯乙醇細1，乙醇 :3ml，用于调节溶液pH值至6. 5的氢氧化钠溶液，甲状腺提取物的用量以其中有机碘的含量计为0. 035g，眼球提取物的用量以其总固体含量计为38g，其余为注射用水。
7.如权利要求2 6所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于所述甲状腺提取物按以下方法提取得到取哺乳动物甲状腺为原料，所述哺乳动物为猪、牛或羊，原料切碎后与纯化水混合，并用10%的氢氧化钠溶液调节pH值为8. 5 10. 0，搅拌均勻，先在 40 50°C下用胰酶水解2 6小时；再在45 55°C下用中性蛋白酶水解2 6小时，反应结束后反应液离心去除残渣，取上清液加乙醇至乙醇的终浓度为75%，去除沉淀，所得清液过滤，滤液减压浓缩，得到固含量为20 40%、有机碘含量0. 1 0. 3%的甲状腺提取物； 所述纯化水的用量为原料质量的2 3倍，所述胰酶的用量为原料质量的1 3%，所述中性蛋白酶的用量为原料质量的0. 1 0.3%。
8.如权利要求2 6所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于所述眼球提取物按以下方法提取得到取哺乳动物眼球为原料，所述哺乳动物为猪、牛或羊，原料切碎后与纯化水混合，并用10%的氢氧化钠溶液调节pH值为8. 5 10. 0，搅拌均勻，先在40 50°C下用胰酶水解2 6小时；再在45 55°C下用中性蛋白酶水解2 6小时，反应结束后反应液离心去除残渣，取上清液加乙醇至乙醇的终浓度为75%，去除沉淀，所得清液过滤，滤液减压浓缩，得到固含量为20 30%的眼球提取物；所述纯化水的用量为原料质量的2 3倍，所述胰酶的用量为原料质量的1 3%，所述中性蛋白酶的用量为原料质量的 0. 1 0. 3%。
9.如权利要求2 6所述的含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，其特征在于氨碘肽滴眼液按以下方法制备得到按照处方量称取对羟基苯甲酸酯类、苯乙醇、乙醇，完全溶解后与甲状腺提取物和眼球提取物混勻，加注射用水至处方量的90%，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液调节溶液PH值至5. 5 7. 0之间，所得溶液加入溶液质量0. 2%的活性炭用于溶液脱色，加热至100°C，搅拌10 20分钟，最后加注射用水至处方量，搅拌均勻，冷却至室温， 除菌过滤，无菌灌装，即得所述含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液。
全文摘要
本发明公开了一种含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液，所述复方抑菌剂为对羟基苯甲酸酯类和苯乙醇，在含有复方抑菌剂的氨碘肽滴眼液中，所述的对羟基苯甲酸酯类浓度0.1～0.4g/L，所述的苯乙醇浓度为4～5ml/L；所述对羟基苯甲酸酯类为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯中的一种或两种以上的混合。本发明通过对羟基苯甲酸酯类与苯乙醇联用协同抑菌，可以提高抑菌活性，增强抗微生物污染能力，扩大抑菌谱，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌均有较好抑制作用；经抑菌剂效力试验证明完全符合《中国药典2010年版二部》附录抑菌剂效力检查法指导原则的规定，其安全性和有效性能满足临床需要。
文档编号A61K47/14GK102204931SQ20111013928
公开日2011年10月5日 申请日期2011年5月26日 优先权日2011年5月26日
发明者方多凤, 王海珍, 马凤森 申请人:杭州海杭生物医药科技有限公司, 浙江工业大学