专利名称：田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及田基黄总黄酮的新用途，尤其是涉及田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的新用途。
背景技术：
肝纤维化是包括肝炎、脂肪肝、酒精肝等在内的大部分肝病发展到肝硬化、肝癌的必经环节。研究表明，肝纤维化患者中的20% 40%最终发展为肝硬化乃至肝癌。国际肝病学术权威Hans Popper教授提出“谁能阻止肝纤维化，谁就能治愈大多数肝病”，因此有效阻断肝纤维化的发生发展，对防治肝硬化和肝癌具有重要意义。然而，由于肝纤维化病理机制的复杂性，目前临床仍缺乏疗效显著、毒副作用小的肝纤维化治疗药物。我国现有各类型肝病患者已超过2亿之众，其中乙肝病毒携带者约9300万，现症感染者约3000万，丙肝病毒携带者约4000万，脂肪肝患者约1. 2亿，每年新增病例超过100 万人，治疗费用达1000亿人民币以上，给社会造成无比沉重的经济负担，也给无数患者和家庭带来了巨大的痛苦。因此，寻找具有显著抗肝纤维化作用的安全药物是当前研究的热点，也是切合当前医疗水平实际的紧要课题。中药因其多靶点作用及毒副作用小的特点，近年已成为国内外防治肝纤维化研究的热点。中药田基黄为藤黄科金丝桃属植物地耳草japonicum Thunb.的全草。始载于《生草药性备要》、《植物名实图考》，为两广(广东、广西)道地药材。性平，味甘淡、微苦辛，入肝、脾经。具清热利湿、解毒、散瘀消肿之功，主治湿热黄疸、泄泻、痢疾、肠痈、 痈疖肿毒、乳蛾、口疮、目赤肿痛、毒蛇咬伤、跌打损伤等，民间和临床上多用于治疗急性黄疸性肝炎，疗效显著。上海长征制药厂自1972年起以田基黄为原料制成田基黄注射液，用于治疗急性黄疸型肝炎，该制剂收载于1977版中国药典，并沿用至今。我们在前期的实验研究中发现田基黄总黄酮口服给药，对胆管结扎所致的大鼠肝纤维化、四氯化碳所致的大鼠肝纤维化、猪血清腹腔注射所致的大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用，且未见毒副作用。
发明内容
本发明的目的是提供田基黄总黄酮的一种新用途，即将田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的用途。本发明的发明人经过大量的研究工作，表明田基黄总黄酮能起到治疗肝纤维化的作用，可用于制备治疗肝纤维化的药物。上述田基黄总黄酮含有黄酮类化合物的总量高于50%。根据本发明所述的田基黄总黄酮的用途的进一步特征，所述的田基黄总黄酮是从中药田基黄O^eric腫japonicum Thunb.)中提取的。本发明对田基黄总黄酮进行抗肝纤维化作用的动物实验。结果表明田基黄总黄酮口服给药，对胆管结扎所致的大鼠肝纤维化、四氯化碳所致的大鼠肝纤维化、猪血清腹腔注射所致的大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用；既能通过阻抑胶原等胞外基质合成、分泌和促进已沉积的胶原纤维重吸收等直接干预肝内胞外基质代谢来发挥其抗肝纤维化作用， 又通过抗炎等作用以减少肝纤维化诱发因素而间接发挥其抗肝纤维化作用，从而从肝纤维化的发生和发展各个方面产生显著作用。提示田基黄总黄酮具有很好的抗肝纤维化作用。本发明的实验证明，田基黄总黄酮不仅具有很好的抗肝纤维化作用，而且在大鼠急性毒性实验中没有表现出毒性反应。动物实验表明当田基黄总黄酮以4. 44g/kg经口灌胃给予SD大鼠14天观察期内，大鼠未见死亡，精神及行为活动状况良好、皮肤被毛清洁、大小便正常，体重增长正常，摄食量亦未见异常，大体解剖亦未见脏器异常。表明田基黄总黄酮安全性高。综上所述，田基黄总黄酮具有很好的抗肝纤维化作用，未见毒副作用，可用于制备治疗肝纤维化的药物，用于临床中肝纤维化的治疗。
图1是肝组织切片HE染色图(X 200)，由上至下分别为正常对照组、模型对照组和田基黄总黄酮组，显示田基黄总黄酮对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化的作用。图2是肝组织切片α -SMA蛋白表达免疫组化染色图(Χ400)，由上至下分别为正常对照组、模型对照组和田基黄总黄酮组，显示田基黄总黄酮对胆总管结扎所致大鼠肝纤维化的作用。图3是肝组织切片HE染色图(X 200)，由上至下分别为正常对照组、模型对照组和田基黄总黄酮组，显示田基黄总黄酮对猪血清致大鼠免疫性肝纤维化的作用。图4是肝组织切片α -SMA蛋白表达免疫组化染色图(Χ400)，由上至下分别为正常对照组、模型对照组和田基黄总黄酮组，显示田基黄总黄酮对猪血清致大鼠免疫性肝纤维化的作用。图5是肝组织切片HE染色图(X 200)，由上至下分别为正常对照组、模型对照组和田基黄总黄酮组，显示田基黄总黄酮对CCl4复合因素所致大鼠肝纤维化的影响。图6是肝组织切片α -SMA蛋白表达免疫组化染色图(Χ400)，由上至下分别为正常对照组、模型对照组和田基黄总黄酮组，显示田基黄总黄酮对CCl4复合因素所致大鼠肝纤维化的影响。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的说明。各实施例中所涉及的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以Wt/Wt、V0l/V0l、Wt/V0l计算，除非另有说明。实施例1 :田基黄总黄酮的制备
取田基黄药材适量，切段，分别以12倍、10倍、8倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液合并，减压浓缩至含田基黄药材0. 5g/ml ；加入到预先准备好的聚酰胺柱上，首先以蒸馏水洗脱至洗脱液颜色色淡，再加60%乙醇洗脱至盐酸-镁粉反应呈阴性为止，收集醇洗液， 浓缩至相对密度为1. 08 1. 10 (60°C)的浓缩液，在进风温度为100 200°C，出风温度为 50 150°C的条件下，喷雾干燥即得田基黄总黄酮。按上述方法，共选用五批田基黄药材进
4行提取，得到五批田基黄总黄酮提取物。 精密称取槲皮苷对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇勻，即得(每Iml中含槲皮苷200 μ g)。精密量取槲皮苷对照品溶液0. 5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、 2. 5ml，分别置IOml量瓶中，各加甲醇至2. 5ml，加5%亚硝酸钠溶液0. 4ml，混勻，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0. 4ml，摇勻，放置6分钟，加氢氧化钠试液，再加水至刻度，摇勻， 放置15分钟，以相应试剂作空白，照紫外一可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2005 年版一部V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。取前述田基黄总黄酮每批约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理 (功率360W，频率35kHz) 10分钟，加甲醇稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液anl，置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，精密量取anl，置IOml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加甲醇至2. 5ml”起，依法测定吸光度，根据标准曲线计算，即得。按干燥品计算，五批田基黄总黄酮中黄酮类化合物含量以槲皮苷(C21H2tlOltl)计，测定结果如表1
表1 五批田基黄总黄酮中黄酮类化合物含量
权利要求
1.田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的田基黄总黄酮中，黄酮类化合物的总含量高于50%。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的田基黄总黄酮是从中药田基黄 {Hypericum japonicum Thunb.)中提取的。
全文摘要
本发明涉及田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的用途。田基黄总黄酮是从田基黄(Hypericum japonicum Thunb.)中提取的有效成分。本发明进一步提供了一种用于治疗肝纤维化的药物组合物，该药物组合物包括有效治疗剂量的作为活性成分的田基黄总黄酮，以及药学上可接受的载体。本发明通过动物实验表明，田基黄总黄酮具有很好的抗肝纤维化作用，未见毒副作用，可用于制备治疗肝纤维化的药物，用于临床中肝纤维化的治疗。
文档编号A61P1/16GK102210725SQ20111015062
公开日2011年10月12日 申请日期2011年6月7日 优先权日2011年6月7日
发明者吴忠, 彭维, 李沛波, 杨翠平, 王永刚, 苏薇薇 申请人:中山大学